CUIDADOS COM O SISTEMA DE HPLC

Contaminação na tubulação do sistema HPLC pode ocasionar

desvio e instabilidade na linha de base de um cromatograma.
Através da limpeza dos tubos do sistema antes ou após o seu uso
ou ao término das operações diárias o equipamento terá um melhor
rendimento.
Após longo período de uso, o filtro de entrada de solventes pode
entupir devido a contaminações vindas do próprio solvente utilizado. Isto pode
causar bolhas e/ou problemas na vazão do solvente.
Essa mesma contaminação pode adentrar os cabeçotes da bomba,
as “check valves”, injetores, filtros e ir gradualmente contaminando a coluna,
causando instabilidade/desvio na linha de base.

Para Limpeza de Contaminação:

Para contaminações fracas, passe isopropanol ou metanol no
sistema (1mL/min por, no mínimo, meia hora).
Caso a contaminação persista, passe solução de 10% (no máximo)
de ácido nítrico (1mL/min por, no mínimo, meia hora).

ATENÇÃO:
1. Tire a coluna antes de iniciar o procedimento de limpeza;
2. Retire todo o solvente orgânico da tubulação com água antes de
passar o ácido. Inclusive substitua o frasco de descarte por um
limpo. As mistura de álcool com ácido pode explodir;
3. Após a limpeza com ácido limpe novamente a tubulação com
água.
4. Não descarte o álcool e o ácido no mesmo local.

Para Limpeza de Solventes Tamponados

Quando utilizar solventes que formem cristais ao secar, cuide para
que o mesmo não permaneça parado no sistema por muito tempo. Caso isso
aconteça, o sistema poderá entupir e/ou danificar os pistões da bomba.
Se o sistema não for ser utilizado com tampão por um bom tempo,
limpe a linha com água e depois o deixe com metanol ou isopropanol.
Sempre quando substituindo os solventes de tamponados para
orgânicos, ou vice-versa, faça a seguinte seqüência:
Solução tampão Þ Água ultrapura Þ Isopropanol Þ Solvente orgânico

Para Limpeza de Solventes com Íons Halogênios

Solventes tamponados com íons halogênios (tais como KCl, NaCl,
NH4Cl) ou solventes que possam produzir tais íons através de reações, estes
devem ser retirados totalmente e imediatamente do sistema após uso. Isto
porque eles podem corroer a tubulação.
Utilize água ultrapura para limpeza.
Telefone: (11) 3864-1411 Fax: (11) 3872-9749 e-mail: servico@sinc.com.br
Para Troca de Solventes
Quando for trocar de solventes leve em conta os seguintes pontos:
1) Coloque uma conexão-união no lugar da coluna.
2) Verifique a miscibilidade entre os solventes envolvidos. Sempre troque
os solventes na ordem de miscibilidade.
3) Retire o filtro de entrada do solvente a ser trocado, enxágüe-o com o
novo solvente a ser utilizado. Purgue um pouco a linha.
4) Coloque o filtro de entrada no novo solvente e deixe passar um pouco
dele pela tubulação para retira o solvente anterior.
5) Repita o processo 2, 3 e 4 até que tenha colocado o solvente a ser
utilizado para análise
6) No caso de detectores muito sensíveis a variação da fase móvel
(Índice de Refração, Eletroquímico, Condutividade etc.) execute a
seqüência com atenção para que os mesmos não demorem mais para
estabilizar.
7) Antes de conectar a coluna, verifique que o solvente que está nela
seja miscível com o solvente que está na tubulação.
8) Caso os solventes envolvidos sejam tamponados, passe água
ultrapura para limpar a tubulação antes de entrar com o novo solvente.
9) Tenha sempre o cuidado de não passar solvente orgânico em uma
tubulação com solvente tamponado ou vice-versa, pois resíduos e
cristais de difícil limpeza poderão se formar.

ATENÇÃO:
1. Algumas colunas requerem procedimentos especiais para
substituição de seu solvente de armazenagem pelo de trabalho.
LEIA SEMPRE O MANUAL DA COLUNA!
2. Outra dica importante para preservação da coluna refere-se ao
choque de pressão. Sempre ao iniciar o bombeamento do fluxo
no sistema, suba vagarosamente o fluxo (de 0,2 em 0,2
ml/min, sempre aguardando estabilizar a pressão para subir
mais um pouco), até atingir o fluxo do método.

Para Solução de lavagem da agulha

O ideal para esta solução é que seja o mesmo solvente da diluição
da amostra. Caso a fase móvel contenha solução tampão, recomenda-se
conter de 90 a 100% de água para limpeza da agulha. Se a diluição da amostra
for uma solução tampão, utilize-a sem o sal na solução da lavagem da agulha.
Para amostras muito viscosas, deve-se enxaguar bem a agulha.

Cuidados com a Fase móvel

Utilizar somente solventes graus HPLC;
Filtrar a fase com filtro de 0.45 micra para remover quaisquer
partículas;

Telefone: (11) 3864-1411 Fax: (11) 3872-9749 e-mail: servico@sinc.com.br

 Sempre sonique a fase móvel preparada antes de utilizá-la, para
ajudar na exclusão das microbolhas e ar dissolvido;

Quais Solventes não devo passar no sistema?

Se houver peças (tubulações, conexões, válvulas) no sistema que
sejam de PEEK (um material plástico, cor marrom claro, maleável, Poli-eter-
eter-cetona), NÃO devemos utilizar: Ácido Sulfúrico concentrado, Ácido Nítrico
concentrado, Ácido Dicloroacético, Acetona, Tetrahidrofurano (THF),
Diclorometano, Clorofórmio e Dimetil sulfóxido (DMSO).
Se no seu sistema tiver desgaseificador, verificar no manual deste a
lista de solventes que danificam a câmara de desgaseificação, evitando a
utilização destes.

Quando o Sistema For Ficar Parado por Longo Tempo

Neste caso, execute a limpeza do sistema, passando por último
Metanol. Ponha papel alumínio nas conexões abertas e nos filtros de entrada.

Telefone: (11) 3864-1411 Fax: (11) 3872-9749 e-mail: servico@sinc.com.br