METAIS COM ATIVIDADE REDOX

• Ferro (Fe)

• Cobre (Cu)

• Manganês (Mn)

• Vanádio(V)

• Crómio(Cr)

• Molibdénio (Mo)

• Tungsténio (W)

• Níquel (Ni)

• Cobalto (Co)
Encontra-se desde as bactérias até ao Homem;

Participa numa grande variedade de sistemas e funções biológicas;

Encontra-se complexado com diferentes ligandos:

Fe porfirínico
Fe não porfirínico

Metaloproteínas de ferro
 Transporte de O2

 Armazenamento de O2

 Armazenamento e captação de ferro

 Transporte de electrões
 4,2 g Fe/70 kg (60 ppm)

Músculos: 180 ppm

Ossos: 3-380 ppm

Sangue: 447 mg/L

Soro: 3-5mg/L

Tóxico > 200 mg Fatal > 7 g

Hepcidina: responsável pela homeostase do Fe

• absorção ativa ou passiva (dissolução, reacções redox ou complexação);

• transporte seletivo;

• processos no interior da célula (incorporação numa proteína);

• eliminação do metabolismo por excreção ou por armazenamento temporário;

Aparecimento de uma atmosfera oxidante deu origem a muitas espécies
tóxicas.
O2

-e- +e- pKa ˜ 4,7

O2 - + H+
HO2
- H+
-e- +e-
+ H+
+ H+
O22- HO2- H 2 O2 pKa ˜ 11,6
- H+ - H+ (1ª etapa)
-e- +e-
+ 3H+ pKa ˜ 10
[O2- + O-] H2O + OH

-e- +e-
+ 2H+ + 2H+
2 O2- 2 OH- 2 H2O pKa ˜ 15,7
- 2H+ - 2H+ (1ª etapa)
 Fe(III) Exterior

Membrana

Fe(III)
Enzimas Fe(II)
Ferritina
de Ferro livre
tampão

Incorporação Proteínas reguladoras de

no Hemo Ferro

Proteínas
reguladoras Controlos DNA (RNA)
Enzimas e proteínas porfirínicas
hémicas
 PROTEÍNAS NÃO HÉMICAS
Função Exemplos Distribuição
Ferritina Tecidos animais
Armazenamento e
Transferrina Soro do sangue
Transferência de Fe
Siderocromos Bactérias
Transporte de O2 e Hemeritrina Moluscos marinhos
Oxigenação Pirocatecase Bactérias
Rubredoxina (Fe) Bactérias
Ferredoxinas
2Fe-2S Mitocôndria,
Transferência de 3Fe-4S Cloroplastos, Bactérias
electrões (Fe/S) 4Fe-4S
Adrenodoxina Cortéx adrenal
Hidrogenase Bactérias
Nitrogenase Bactérias
Transferrina (80 kDa)
Transporta o ferro no soro para os reticulócitos, na medula óssea.

2 Fe3+ / molécula e 2 CO32-; saiem 3H+

Ligandos*: 2 Tir-;
His;
h1 Asp-

Geometria ⋍ octaédrica

*h2 CO32- liga o metal

à proteína (lig. H)
Transferrina:
 Ferritina (440 kDa)
(baço, fígado e medula óssea)

Apoferritina: esfera vazia de proteína com um núcleo com cristais de ferro

micelar ([Fe9O9(OH)8(H2PO4)]);

4300 a 4500 átomos de Fe/molécula

Funções:
1. Deposição de ferro (Fe2+ → Fe3+)

2. Mobilização de ferro (Fe3+ → Fe2+) com ligandos

especiais ou com ferriductase
Ferritina
 Maior parte no citoplasma, restante em organelos.
 1mg/L ferritina = 120 mg Fe stock/kg de peso

Hemossiderina
 Formada pela degradação de ferritina dos lisossomas
 6 canais

8 canais
Asp- e Glu-
 PROTEÍNAS DE Fe/S
Transporte de electrões numa larga gama de potenciais redox negativos (-600 a 0 mV;
excepção HiPIP + 350 mV):
•cadeia respiratória
•ciclo de Krebs
•oxidação da xantina e de aldeído (XO – Mo+Fe/S)
•redução do sulfito a sulfato
•fotossíntese,
•Fixação de N2

Aparecem isoladas ou em conjunção com outros cofactores;

Raramente encontradas no espaço extracelular;
Centro de ferro geometria tetraédrica distorcida;
Fe nos centros de Fe/S são exclusivamente de alto spin;
• Proteínas foram reconhecidas em locais de catálise redox e não-redox:
Hidrogenases e Nitrogenases
Enzimas do tipo aconitase

• Sensores de Ferro

• Centro 4Fe-4S encontrado na endonuclease reparadora do

DNA parece ter apenas uma função estrutural e polarizante;

Estas proteínas são solúveis em H2O e na membrana

Fazem parte de linhas condutoras de electrões em domínios de enzimas

muito complexas
 RUBREDOXINA (ocorrem nas bactérias)

FeS0(Cis)4

PM ≈ 6 kDa; 54 aa

Promove a transferência de um electrão (Fe2+ → Fe3+);

Estabiliza a forma trivalente do catião;

FERREDOXINAS-2Fe

Fe2S2(Cis)4

Forma oxidada: diamagnética

2 Fe3+
Forma reduzida: paramagnética
Fe3+-Fe2+
Proteínas Rieske (+ 280 mV): são encontradas na mitocôndria com os citocromos (complexos bc1),
cloroplastos (complexos b/f);

Têm 2 centros de Ferro muito diferentes (coordenação assimétrica: 1Fe está ligado a 2 ligandos de
His)

1
c
t

na
ci

r a
emb
c m
t
ci Potencial baixo
Potencial alto
 FERREDOXINA-3Fe

Fe3S4(Cis)3

Estados de oxidação estáveis 0 e +1

Estão em equilíbrio com uma forma lábil [4Fe-4S]

FERREDOXINA-4Fe

Fe3S4(Cis)4

Estados de oxidação estáveis +1 e +2

Aconitase*: o Fe lábil está coordenado com moléculas de água

*rearranjo 1,2 de um grupo OH

O agregado reativo é o Fe4S4 que é capaz de
perder um Fe e formar o Fe3S4 que é inativo.

Pode ser um controlo do ciclo de Krebs relacionado

com a disponibilidade de ferro
FERREDOXINAS-4Fe

Fe4S4(Cis)4 ou 2x [4Fe-4S]

HIPIP (proteína de ferro de alto potencial) – só

um centro cubano; +350 mV

8Fe-Fd (dois centros 4Fe-4S); - 400 mV

Cubano

Eº' Estado de HIPIP Fd-8Fe Composto

oxidação Modelo

+ 500 mV
(FeII)1(FeIII)3 Oxidada (Super- [Fe4S4(SR4)]-
-oxidada) HIPIP
paramagnético
- e- + e- - e-
0 (FeII)2(FeIII)2 [Fe4S4(SR4)]2-
Reduzida Oxidada
diamagnético
+ e- - e- + e
-
8Fe-Fd
(FeII)3(FeIII)1 (Super- Reduzida [Fe4S4(SR4)]3-
-500 mV -reduzida)
paramagnético
 Hemeritrina (Fe-O-Fe)
Transporte de O2 nos invertebrados marinhos (crustáceos, moluscos, artrópodes ou vermes
marinhos);
Proteína octamérica; 113 aa; 13,5 kDa;
A adição oxidativa do O2 forma derivados peróxido e hidroperóxido;

2 Fe2+ spin alto (incolor) 2 Fe3+ baixo spin (violeta avermelhado)

 HEMOPROTEÍNAS
Transporte de O2
Hb; Mb

Ativadoras do O2
Cit. c oxidase
Peroxidases
(ROOH + AH2 → ROH + A + H2O)
Catalases
(2 H2O2 → O2 + 2 H2O)
Dioxigenases (SH + O2 → SHO2)
Monooxigenases, hidroxilases
(SH + DH2 + O2 → SOH + D + H2O)

Transferência de electrões
Citocromos a, b, c,
 CARACTERÍSTICAS DAS PORFIRINAS

 Anel planar estável;

 Desprotonado  apto a complexar metais (mesmo os lábeis);
 Ligações p conjugadas essenciais para a reatividade;
 Configurações de baixo spin;
 Substituintes diferentes  propriedades diferentes;
 H3C CH3
H3C CH3

8 1
HOOCH2CH2C CH=CH2
HOOCH2CH2C CH2CH3
N N 7 2
N N
Fe
Fe
N N
N N
HOOCH2CH2C CH3 6 3
HOOCH2CH2C CH3

5 4
H3C CH=CH2
H3C CH2CH3
Fe-Protoporfirina IX
Mb, Hb, peroxidases Fe-Mesoporfirina
(citocromo c)

Banda Soret
p-p*
 Propriedades dos complexos Fe-porfirina
• Facilmente oxidado pelo O2;

• Energias dos estados de alto-spin e baixo-spin próximas, dependentes da proteína e dos

ligandos axiais;

• Substituintes orgânicos diferentes  uma grande variedade de porfirinas  grande variedade

de funções;

• Substituintes são reativos  exemplo cit. c

• Complexo: uma nova unidade cooperativa;

• Potenciais redox dependem dos ligandos;

• Grupos hemo: reguladores celulares de Fe livre;

PROTEÍNAS TRANSPORTADORAS DO O2
MIOGLOBINA (Mb) – armazenamento de O2 nos músculos

Grupo heme está ligado à globina através de

interacções não covalentes, hidrofóbicas e de
uma ligação covalente com uma His proximal da
cadeia polipeptídica.

153 aminoácidos – 7 hélices a e 6 segmentos não helicoidais

HEMOGLOBINA (Hb) – Transporta O2, CO2 e H+

4 subunidades a2b2 (globinas)

 Transporte de O2

Hemoglobina (Hb)
Fe3+ baixo spin

Interacção M-L fraca porque o ajuste é incompleto (estado entático);

Fe2+ alto spin
 Raio covalente grande

4 e- desemparelhados que favorece a rápida ligação do 3O2

dz2 + p*y → ligação  dxz + p*x → ligação p
 Proteína tem duas estruturas quaternárias em equilíbrio

Tensa – T (interacções entre as subunidades impedem a His proximal de se

deslocar para o plano do anel  menor constante de ligação ao O2)

Relaxada – R (após Hb(O2)2 os constrangimentos estruturais relaxam e a

ligação do O2 às subunidades que faltam é facilitada)
Efeito de Bohr KMb/O2=[MbO2] / [Mb][O2]

KHb/O2= [HbO2] / [Hb][O2]2.8

Afinidade Hb-O2 diminui se:

-  pH do sangue
-  CO2 no sangue
-  temperatura

 metabolismo   temperatura corpo

  CO2  pH

CO2 + H2O  H2CO3  H+ + HCO3-

 metabolismo   consumo O2
  produção CO2

Tecidos
 CO2  pH

 afinidade Hb-O2   libertação O2 (efeito Bohr)

Órgãos respiratórios
 CO2  pH

 afinidade Hb-O2   captação O2 (efeito Haldane)

Hr

Hc

azul
PROTEÍNAS DE TRANSPORTE DE ELETRÕES
 Catálise
Citocromos (pigmentos da célula)
Hemoproteínas que atuam nas cadeias de transferência de eletrões, processo associado à dupla
redox Fe(II) / Fe(III).

O centro de ferro tem a sua esfera de coordenação saturada.

Eº variáveis dependendo dos ligandos axiais e do ambiente de coordenação (lig. H, distribuição da

carga electrostática e distorção geométrica)

Classificação espectroscópica: a (>570 nm), b (555-560 nm), c (548-552 nm)

Função: cadeia respiratória (mitocôndria), fotossíntese (cloroplastos) entre outros;

 Ligandos axiais
Cit a3 His /
Cit b5 His/His
Cit c His (N)/Met(S)
Cit f His/NH (lig. peptídica)
Cit P450 Cis-/

A transferência de eletrões tem 3 variáveis:

Energia, ou seja, o potencial redox;
Espaço, ou seja, a direcionalidade;
Tempo, ou seja, a velocidade da reação.
O principal obstáculo à rápida transferência de eletrões são as diferenças
geométricas entre a forma oxidada e a forma reduzida;

EFEITO DE TÚNEL
 Esquema da estrutura do citocromo c

Ligações covalentes à proteína

dFe-S não altera

com est. de oxid.
(estado entático)

No plano e baixo spin (Fe2+ e Fe3+)

Potencial redox varia com L axiais e ambiente de coordenação;
Cadeia de transferência de eletrões

Cit a = agente de transf. e- + 2 Cu Cit. C oxidase

Cit. a3 = coordena e reduz o O2
PROTEÍNAS ATIVADORAS DO O2
 Citocromo P450

Componente de hidroxilases (monooxigenases);

Ocorre como um complexo com uma proteína Fe/S e uma redutase que catalisa a
hidroxilação de um substrato pelo O2;

Fundamental no metabolismo de esteróides e xenobióticos.

Biossíntese de moléculas sinalizadoras.
5. Ataque do O ao RH para dar ROH
(radicais como intermediários) 1. Ligação do substrato orgânico

2. Redução do Fe3+ a Fe2+ a.s.

4. Redução do Fe-O2 a FeO (via NADH ou NADPH)

3. Ligação do O2 para formar Fe3+ b.s.

(com lig. de H à à cadeia lateral de Thr)
 Canal de H2O

(P)Fe3+__ OH2
5. Ataque do O ao RH para dar ROH
(radicais como intermediários) 1. Ligação do substrato orgânico

2. Redução do Fe3+ a Fe2+ a.s.

4. Redução do Fe-O2 a FeO (via NADH ou NADPH)

3. Ligação do O2 para formar Fe3+ b.s.

(com lig. de H à à cadeia lateral de Thr)
 No ponto 4:
a clivagem requer 2 equivalentes de oxidação

Complexo muito reativo que pode ser FeV=O-2 ou FeIV-O-∙

Abstração de H Torna a
ao substrato ligar-se a S

+ O2, 2H+, 1e-

[FeII(Por2-)]0 [O-II=FeIV(Por∙-)]∙+
- H2O

Estado de oxidação +4 é raro

mas bioquimicamente muito ⇨ e- não estão emparelhados
importante
 PEROXIDASES

40 kDa; estado fundamental contém Fe(III) alto spin (S=5/2, orbitais d meio preenchidas,
estrutura fora do plano); ligando axial His.

• a-oxidação controlada dos ácidos gordos durante o crescimento das plantas

• acoplamento das tirosinas e respetiva iodação (hormonas da tiróide);

• oxidação do cit. c pela citocromo c peroxidase;

O ambiente proteico diferente deve ser responsável pela diferença de reatividade:
Cit. P450 – espécies radicais rapidamente reagem para originar produtos oxigenados;
Peroxidases – a dissociação de reagentes pode levar à “fuga” de produtos na forma de radicais
livres;
Dador mais fraco
CATALASES

 Estão normalmente em vesículas porque muitas das reações que se dão

nestes locais fechados produzem H2O2;

 O grupo hemo está oculto num bolso profundo possivelmente para prevenir
a fuga de intermediários ainda mais reativos, HO. ou O2-.;

 Só são efetivas com peróxidos pequenos e só atuam em meio aquoso;