 2º ião traço mais abundante no corpo humano;

 dos elementos traço é o mais abundante no citoplasma;

 reações ocorrem em vesículas ou no espaço extracelular (especialmente, as hidrolases);

 raramente associado intimamente à membrana.

 papel estrutural estende-se desde estruturas filamentosas à organização de cromossomas

(dentro da célula);

 utilização como regulador do DNA apenas nos eucariotas;

 estado de oxidação (cond. fisiológicas): +2 (não redox)

força considerável como ácido de Lewis;

reações de permuta de ligandos podem ocorrer a uma velocidade apreciável

não se hidrolisa, a pH baixo, com formação de hidroxocomplexos (pKa(Zn2+)aq = 8,8)

d10 o que significa:

- não há transições d-d  não há espetroscopia de absorção;

- não apresenta efeitos de campo dos ligandos para um nº de coordenação ou geometrias

específicos  nC e geometria ditados apenas pelo tamanho e carga do ligando;
 nº de coordenação 4, 5 (ou 6);

nº de coordenação é determinado pelo balanço entre a energia de ligação e as

repulsões (estéreas ou eletrónicas) entre L;

 Geometria preferencial: tetraédrica distorcida o que aumenta a acidez de Lewis do Zn

e a acidez da molécula de água coordenada;

 Substratos: moléculas pequenas (H2O, CO2 e CH3CH2OH) ou terminais amino ou

carboxílico de ligações peptídicas;

 Substrato liga-se por:

i) substituição de molécula de H2O;

ii) aumentando o nº de coordenação
Zn exposto ao solvente;

Metal forma ligações inertes com His mas Complexos cineticamente lábeis;

pKa da H2O coordenada menor que o da H2O livre;

pKa ≈ 10 pKa ≈ 7
[Zn(H2O)6]2+ Sist. enzimáticos
 A água coordenada pode:

Anidrase Carboxipeptidase
carbónica

Fosfatase Alcalina
  Zn providencia local de ligação do substrato;

 pKa da água coordenada depende:

do nº de coordenação;
da carga total do complexo;
(nº coordenação ⇩ ⇒ pKa ⇩; Carga + ⇧ ⇒ pKa ⇩ )
Grupos carregados da cavidade proteica afectam o pKa (mais do que o nº de L)

 Baixa barreira de energia na interconversão 4 – 5;

Se a interconversão for rápida (4 ⇔ 5) a catálise é rápida;
 Ligandos do Zn (II)

Proteínas ligam-se através de pelo menos três grupos;

His, Cis-, Glu-, Asp-
4ª e 5ª posição - H2O Ação catalítica
Permitem o acesso ao substrato

Local ativo organizado em vários níveis:

• tipo de ligandos
• distribuição angular dos ligandos à volta do Zn
• distância das ligações
• grupos de saída
• vizinhos mais próximos e vizinhanças do metal (inclui cavidade do local ativo onde se
encontra o Zn2+);
Locais de ligação do zinco nas enzimas
 Enzimas e Proteínas de Zinco
• Zn(II) no centro catalítico (não redox)

Anidrase Carbónica (CA) 30 KDa 3His : 1 H2O

2
Carboxipeptidase (CPA) 34 KDa 2 His : 1 h Glu : 1 H2O

Termolisina 35 KDa 2 His : 1 h2 Glu : 1 H2O

•Zn(II) com função estrutural

Factores de Transcrição TFIIIA:40 KDa n x { 2 His : 2 Cis}

Desidrogenase alcoólica 2 x 40 KDa 2 x { 2 Cis : 1 His : 1 H2O}
2 x { 4 Cis}
•Zn(II) com papel regulador

Hexamero de Insulina 6x6 2 x {3His : nL}

aminopeptidases CPA
CPB
 TERMOLISINA

É uma endopeptidase.
É mononuclear.

O metal coordena:
2 His (His142 e His146)
1 Glu- (Glu166 bidentado)
1 H2O

Transferências de H+ assistidas por resíduos de

nC = 5 His231, Tir, Asp e Glu .
 CARBOPEPTIDASE A

Enzima digestiva, é uma exopeptidase.

O metal coordena:
2 His (His69 e His196)
1 Glu- (Glu72 bidentado)
1 H2O

nC = 5
 Asn144 e Arg145 – via lig. H
com o -COO- do peptídeo;

Tir248 – via lig. H com o

penúltimo NH do péptido;

Arg127 – via lig. H com o O

do grupo C=O do Substrato;

Bolso hidrofóbico: acomoda o resíduo R do terminal C do péptido (contribui para a elevada eficiência da
hidrólise dos terminais hidrofóbicos);
 Na catálise a enzima tem que:

Facilitar o ataque nucleofílico ao grupo C=O do peptídeo:

a. Produzindo um nucleófilo muito reativo (ativando a desprotonação da água);
b. Ativando o grupo C=O (substrato) para o ataque, polarizando-o através do átomo de O;
c. Ambos se houver flexibilidade da esfera de coordenação;

Esta função de activação do substrato exige uma ancoragem firme do ião metálico à enzima e o
Zn2+ forma ligações cineticamente inertes com os resíduos de aa das proteínas;

A função hidrolítica requer uma ligação da molécula de H2O, ao centro metálico, muito lábil
para a troca rápida durante a catálise;
No mecanismo:
 o Zn2+ funciona como “template” para reunir os grupos reativos envolvidos na clivagem da
ligação peptídica (grupo carboxilo do Glu270);

 acidez de Lewis do Zn2+ e o caractér básico geral do grupo COO- do Glu270 baixam o pKa
da H2O ligada que ataca a ligação peptídica a quebrar;

 resíduos de aa fornecidos pela cadeia polipeptídica que rodeia o local activo (Glu270 e
Arg127 são essenciais) são fundamentais na clivagem;

 Estabiliza o intermediário tetraédrico ou o estado de transição;

 Estabiliza o átomo de N da amida para o tornar um bom grupo de saída (intermediário

colapsa após quebra da ligação C-N);
 ANIDRASE CARBÓNICA

Existem nas bactérias (g), nas plantas (b) e nos animais (a);

Geometria do local activo ⋍ tetraédrica distorcida (nC = 4)

Fundamentais em processos como:

 Fotossíntese (captação eficiente de CO2);

 Respiração (eritrócitos, fígado e pulmões nas trocas rápidas de CO2);

(Des)calcificação (formação e degradação de esqueletos contendo carbonatos);

 Controlo de pH (tamponização);
 Rede de H2O
(503 moléculas na AC Humana)

Funções estruturais
e funcionais
Estrutura 2ária e 3ária da AC
Humana

Local Activo

His94 (Ne)
His96 (Ne)
His119 (Nd)
 K1
H2O + CO2 HCO3- + H+ pK a = 6,1

K3 K2

H2CO3

Ativação do CO2 pela

H2O (reação não
catalisada)
MECANISMO DA ANIDRASE CARBÓNICA

A rede de H2O medeia a transferência de H+

- chave na hidrólise

Conectada ao ião zinco pela rede de H2O

e caracteriza a conformação dependente
do pH
• protão transferido indiretamente para a His64 (pela rede de água)  desprotonação da

H2O coordenada (pKa ≃ 7);

• H+ libertado nas moléculas de tampão situadas longe do local;

• o ligando OH- que se mantém no local ativo reage rapidamente e forma o estado de

transição com a formação de ligações de hidrogénio com o CO2 parcialmente ativado;

• forma-se o HCO3-;

• etapa final: o ligando HCO3- muito lábil é rapidamente substituído pela H2O;
 Desidrogenase alcoólica

2 SUB-UNIDADES POLIPEPTÍDICAS : 2 X 2 Zn2+

Domínio catalítico: 1 Zn2+ que também liga ao NAD+ e está coordenado a 2 átomos de S (Cis-),
1 átomo de N (His) e 1 H2O.
Localiza-se num bolso fundo enterrado no interior da proteína, perto da junção dos dois
domínios. Este bolso aloja o substrato e a porção nicotinamida da coenzima.
Centro metálico com carga total “neutra”;
Nº de coordenação: 4 (mesmo no estado de transição);

Domínio estrutural: 1 Zn2+ que está coordenado a 4 átomos de S (Cis-) e está inacessível ao
solvente.
LADH

Local catalítico Local estrutural

Mecanismo proposto:
 O ião Zn2+ não é necessário para a ligação da coenzima;

 Funções do Zn2+ :

- orientar geometricamente o substrato;

- polarizar a ligação C=O do carbonilo (do aldeído);

 As moléculas de álcool ligam-se directamente ao centro metálico pelo átomo de O

com perda de H2O e desprotonação do ligando para formar RO- coordenado;

os tiolatos (ligandos macios) não favorecem a coordenação de um ligando alcóxido

(duro), logo a perda de hidreto para o NAD+ é favorecida porque se forma um RCHO

mais macio.
 LADH

Local de ligação
do
co-factor NAD+
As desidrogenases alcoólicas são
altamente estereoespecíficas e, ligam os
seus substratos através de um local de
fixação de três pontos, estes podem
distinguir entre os dois protões de
metileno da molécula de etanol pró-quiral.
 Enzimas de Zinco Multinucleares e Co-catalíticas

Fosfatase Alcalina

• Dímero 94 kDa;
• Hidrolisa uma grande variedade de ésteres fosfóricos ou transfere grupos fosforilo para
álcoois.
• Atividade óptima a pH 8.
• Cada subunidade tem 2 Zn2+ (local catalítico) e 1 Mg2+ (estrutural).
• Os 2 Zn2+ estão ligados por His e Asp.
• Um dos iões Zn2+ está perto do grupo –OH da Ser.
• O outro Zn2+ estabiliza a carga negativa no grupo de saída (alcóxido).
 Fosfatase Ácida Púrpura

• Hidrolisa monoésteres de ortofosfato numa gama de pH 4,9-6,0.

• Têm um centro metálico binuclear acoplado que exibe uma cor púrpura (Fe3+→Tir).
• Fosfatases ácidas dos mamíferos têm um centro binuclear [Fe3+ - Fe2+] ; os das plantas têm
[Fe3+ - Zn2+] ;
• A enzima é ativa na forma reduzida:
• [Fe3+ - Fe3+(oxidada, inativa) ; Fe3+ - Fe2 + (reduzida, ativa) ].
 Enzimas de Zn Trinucleares

Fosfolipase C – remove ésteres fosfatados dos fosfolípidos. 3 Zn2+

Nuclease P1 – catalisa a hidrólise da cadeia simples de RNA e DNA e remove os grupos

fosfato da posição 5’.

Triesterases de organofosfatos – família de enzimas muito importante na

desintoxicação de herbicidas e gases que atacam o SN.
 “Zinc Fingers” (Dedos de Zinco)

Importância do zinco no crescimento dos organismos e a sua concentração elevada nos órgãos
reprodutores indicam que este ião metálico não participa apenas na catálise de reações de
metabolitos essenciais mas também na transferência segura de informação genética (transcrição
e replicação).

1980

Proteínas de zinco sem actividade enzimática (só existem nos eucariotas) que reconhecem as
sequências de bases do DNA;
Participam na ativação seletiva e controlo regulador da transcrição genética.
TFIIIA
Zn2+ está em 9 “loopings” repetidos aleatoriamente de ≃ 30 aa;
Coordenação do ião metálico com duas Cis desprotonadas e duas His neutras resulta num
enrolamento compacto típico.

Protuberâncias características

Folha b Hélice a

Unidade modular do TF III A

 Nos eucariotas, os “dedos de zinco” representam uma estrutura que
está sempre presente nas proteínas que ligam ao DNA.

Quando as proteínas têm múltiplos “dedos”, cada um liga a sub-locais adjacentes dentro de um
local de reconhecimento maior de DNA:

 motivo simples pode ligar especificamente a uma gama grande de sequências de DNA.

 assegura especificidade porque cada domínio reconhece um conjunto de 4 bases ⇒ as

sequências reconhecidas devem estar numa posição particular na molécula de DNA.
 Proteínas recetoras de hormonas

São capazes de ativar genes apenas depois da ligação das hormonas da tiróide

(glucocorticóides ou outros esteróides)

Apenas um Zn2+ por domínio rodeado por 4 Cis-.

A elevada afinidade de muitas proteínas reguladoras de genes pelo zinco deve-se à tolerância

do Zn2+ a grandes distorções da geometria tetraédrica.

 Zn2+ tem ainda uma função estrutural nos seus complexos com hormonas peptídicas onde

serve para ligar duas ou mais unidades simples em “formas de armazenamento” oligoméricas;

Ex: dimerização da hormona de crescimento humana é induzida pela coordenação (2 His, Glu-) com

dois centros de zinco;

Oligomerização induzida pelo metal, na insulina pancreática, que consiste em duas cadeias

peptídicas pequenas (2 ou 4 Zn2+).

 Transporte e Armazenamento de Zinco

• Proteínas pequenas e ricas em cisteínas – metalotioneínas.

• Zip (15): transporte de Zn2+ extracelular ou de vesículas para o citoplasma;

• ZnT (10): transporte de Zn2+ do citoplasma para o meio extracelular ou

para vesículas;