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Recebido: 30 de julho de 2018 | Aceito: 25 de outubro de 2018

DOI: 10.1111/exd.13814

ARTIGO ORIGINAL

Fibroblastos senescentes na fisiopatologia do melasma

Misun Kim1 | Então Min Kim1 | Soohyun Kwon1 | Parque Tae Jun2,3,4 |
Hee Young Kang1,4

1
Departamento de Dermatologia, Ajou
Faculdade de Medicina da Universidade, Suwon,
Abstrato
Coréia
Tem sido proposto que o melasma é uma doença de fotoenvelhecimento da pele. Os
2
Departamento de Bioquímica e Molecular
fibroblastos fotoenvelhecidos têm sido sugeridos como uma importante fonte de fatores
Biologia, Escola de Medicina da Universidade de Ajou,
Suwon, Coreia melanogênicos que estão envolvidos na regulação da pigmentação. Para investigar se o
3
Pesquisa de Doenças Inflamatórias Crônicas melasma inclui células senescentes, a pele normal lesional e perilesional de 38 pacientes
Center, Escola de Medicina da Universidade de Ajou,
com melasma foi avaliada usando um marcador de senescência celular, p16INK4A. Os
Suwon, Coreia

4
Departamento de Ciências Biomédicas, The
resultados mostraram que a pele dérmica lesional tinha mais células senescentes positivas
Escola de Pós-Graduação, Universidade Ajou, Suwon, para p16INK4A do que a pele perilesional. O impacto dos fibroblastos senescentes foi
Coréia
investigado em um estudo piloto usando intervenção de radiofrequência (RF) para melasma.
Correspondência Hee Mostrou que a terapia de RF diminuiu o número de células senescentes com aumento da
Young Kang, Departamento de Dermatologia,
Ajou University School of Medicine, Suwon, Coréia.
expressão de procolágeno-1, que foram associados à redução da pigmentação epidérmica.
Isso nos leva à especulação de que os fibroblastos senescentes podem contribuir para
E-mail: hykang@ajou.ac.kr
conduzir o melasma e podem ser considerados como um potencial alvo terapêutico.
Informações de financiamento

Ministério da Saúde e Bem-Estar do PALAVRAS-CHAVE

República da Coreia, número do subsídio/prêmio:

melasma, fotoenvelhecimento, radiofrequência, fibroblastos senescentes
HN14C0094; Companhia Viol

1 | INTRODUÇÃO (SAASP) em comparação com fibroblastos normais.[8] Esses SAASP em

clude fatores secretados expressos de forma variável controlando extracel

O melasma é um distúrbio hiperpigmentar adquirido comum devido ao sol produção de matriz lular e também incluem citocinas melanogênicas, como fator de células-

pele exposta. Embora o melasma seja conhecido como pigmentação epidérmica tronco (SCF), fator de crescimento de queratinócitos e fator de crescimento de patócitos

doença, estudos têm sugerido que ela pode ser considerada como uma das he.[9] Além disso, foi demonstrado que o SCF derivado de fibroblastos ou a proteína 2

os fenótipos do fotoenvelhecimento. Estudos imuno-histoquímicos têm relacionada ao frizz (SFRP2) secretada desempenham um papel no desenvolvimento do

demonstrou que o melasma mostra características proeminentes da pele danificada pelo sol melasma.[10,11] Muito recentemente, o

comparado com o da pele normal perilesional; pele lesional mostra em foi demonstrado o papel direto dos fibroblastos senescentes no desenvolvimento do lentigo

elastose solar enrugada, vasculatura e ruptura da membrana basal subjacente ao aumento senil.[12] Essas descobertas levaram à especulação de que

da pigmentação epidérmica.[1–4] Esses achados fibroblastos senescentes podem estar envolvidos na patogênese da

sugerido na pele do melasma, não apenas os melanócitos, mas outros atores, melasma.

especialmente componentes dérmicos, como fibroblastos fotoenvelhecidos ou vas Neste estudo, investigamos se o melasma inclui senes

culatura, provavelmente têm um papel fundamental no desenvolvimento e nas recidivas do cent células. Como os resultados indicam que a pele lesional do melasma contém

melasma.[5] mais células senescentes dérmicas, realizamos ainda um estudo piloto para

Recentemente, foi destacado um papel fundamental dos fibroblastos fotoenvelhecidos examinar se o procedimento de rejuvenescimento da pele visando a derme pode

na determinação do fenótipo de pigmentação da pele envelhecida.[6,7] reduzir a pigmentação do melasma. Esses dados podem fornecer uma nova

Sob irradiação ultravioleta (UV), os fibroblastos tornam-se senes modalidade terapêutica, como terapia direcionada a fibroblastos senescentes

cento e produzir mais proteínas secretadas associadas ao envelhecimento da pele tortas para tratar melasma.

Dermatologia Experimental. 2019;28:719–722. wileyonlinelibrary.com/journal/exd © 2018 John Wiley & Sons A/S. | 719
Publicado por John Wiley & Sons Ltd
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KIM et ai.
720 |

2 | MATERIAIS E MÉTODOS 3 | RESULTADOS

3.1 | A pele lesional do melasma contém mais células

2.1 | Coleta de biópsia
dérmicas senescentes
Foi realizado um estudo retrospectivo envolvendo 38 mulheres com melasma facial com
Amostras de biópsia de pele normal lesional e perilesional de asma 38 mel foram
pele de Fitzpatrick tipo III ou IV (idade média de 45 anos).
avaliadas usando p16INK4A, um marcador de senescência celular.[13] O número de
O diagnóstico foi baseado no exame físico e confirmado por seu
células positivas para p16INK4A foi significativamente maior no der
achados topatológicos. Todos os pacientes foram submetidos a biópsia de pele de 2 mm,
mis da pele lesional do que da pele perilesional (5,58 ± 4,55 vs 2,05 ± 1,71, P < 0,001;
e amostras foram retiradas de áreas normais lesionais e perilesional (geralmente dentro
Figura 1). A maioria das células positivas para p16INK4A foram
de 10 mm da margem da lesão).
observado na derme superficial próximo à junção epidérmico-dérmica

ção, não na derme profunda, sugerindo a influência da irradiação UV

2.2 | Participantes e tratamento por sobre a senescência celular. Não houve alteração no número de células positivas para

radiofrequência (RF) p16INK4A na epiderme da pele lesionada em comparação

para pele normal perilesional (pele lesional: 1,39 ± 2,79 vs perilesional

Foram incluídas três voluntárias com melasma (pele de Fitzpatrick tipo III ou IV, 32-45
pele: 0,79 ± 1,60, P = 0,08). Esses resultados indicam que o melasma em
anos). Os critérios de exclusão foram gravidez
clui o acúmulo de células senescentes na derme.
amamentação/lactação, procedimentos médicos estéticos prévios ou uso de

agentes despigmentantes tópicos nos 3 meses anteriores ao estudo. Um dispositivo de

RF do tipo pulsado bipolar (SYLFIRM™, Viol, Gyeonggi, Coréia) em 3.2 | A redução das células senescentes está associada
uma frequência de 2 MHz e com uma ponta descartável compreendendo 25 não à melhora da pigmentação
microagulhas isoladas foram usadas neste ensaio. Os parâmetros foram definidos
A técnica de radiofrequência tem sido usada como tratamento antienvelhecimento
no nível 2 com uma profundidade de penetração de 1,5 mm. Os indivíduos receberam 5
mento e a lesão eletrotérmica de RF induz uma remodelação dérmica vigorosa e a
sessões de tratamentos de RF a cada 2 semanas. Dor leve e temporária
geração de novo colágeno.[14,15] Além disso, o fracionamento
eritema durante e após o procedimento foram bem tolerados em todos
Foi demonstrado que a terapia de recapeamento a laser diminui a proporção de
participantes. Nenhum evento adverso grave foi encontrado. Os níveis de pigmentação
fibroblastos senescentes na derme envelhecida.[16] Três mulheres voluntárias
da pele foram medidos usando um cromômetro (CR-300; Minolta, Osaka, Japão) e os
com melasma foram submetidas a tratamento de RF fracionada com microagulhamento. Todos
valores de luminosidade são indicados por
indivíduos mostraram melhora clínica após o tratamento de RF em comparação
EU*. As amostras de pele lesional foram coletadas no início e em 12 semanas
com linha de base (Figura 2A). O valor de L* (luminosidade) aumentou desde o
para estudo imunoistoquímico. Este estudo foi aprovado pelo conselho de revisão
linha de base (54,67 ± 6,20 vs 60,87 ± 4,32). A análise histológica revelou que o
institucional do Ajou University Hospital (número IRB: AJIRB-DEV-DE3-15-491).
tratamento com RF mostrou uma redução nas células positivas para p16INK4A

e pareceu reverter a diminuição dependente da senescência em col

resposta lagen, ou seja, houve um aumento na densidade de pro

2.3 | Análise imuno-histoquímica colágeno-1 após o tratamento com RF. Essas mudanças foram associadas a

A coloração imuno-histoquímica foi realizada em 4%

perilesão

fixado em paraformaldeído, embebido em parafina Seções.

Anticorpos contra um marcador de senescência celular, p16INK4A, (Santa

Cruz Biotechnology, Dallas, TX, EUA e procollagen-1 (The

18 NS 18 P < 0,001
Developmental Studies Hybridoma Bank, Iowa City, IA, EUA) foram
positivas
células

usado para detecção de proteínas. A coloração de Fontana-Masson foi por 12 12

INK4A INK4A

Melasma
formado para medir a quantidade de pigmentação de melanina. Os sinais de imagem
ampo
x0,0,05
c/(0,75
mm)
6 positivas/
células
campo
(0,75
mm)
x0,20
6
foram avaliados usando Image Pro Plus Versão 4.5 (Media Cybernetics Co., Rockville, p16
de
Nº p16
de
Nº

MD, EUA). O número de p16INK4A 0

Perilesão Melasma
0
Perilesão Melasma
Epiderme Derme
células positivas na derme dentro de 200 ÿm da epiderme n = 38

junção dérmica foi determinada.

FIGURA 1 A pele lesional do melasma contém mais

2.4 | Estatisticas células senescentes. Biópsias de pele normal lesional e perilesional de melasma
foram avaliadas usando um marcador de senescência celular, p16INK4A. A
A significância estatística foi determinada usando o teste t de Student . A P
barra de escala indica 200 ÿm. A significância estatística foi determinada usando o
valor <0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Todos os resultados são
teste t de Student
apresentado como média ± DP.
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KIM et ai.
(A) (B)
Linha de base 8 semanas 12 semanas
Linha de base 12 semanas
p16INK4A
Procolágeno-1
Fontana
Masson
FIGURA 2 A redução de células senescentes está associada
com melhora da pigmentação. A, Fotografias clínicas dos participantes
em 0, 8 e 12 semanas de tratamento de radiofrequência (RF) fracionada
com microagulhas, mostrando melhora gradual na pigmentação. B, Alterações
no número de células positivas para p16INK4A e expressão de procolágeno-1
e pigmentação de melanina na pele lesionada após tratamento com RF. A barra
de escala indica 200 ÿm
pigmentação diminuída na epiderme, ou seja, Fontana-Masson
coloração demonstrou uma diminuição acentuada na pigmentação da pele lesional
em comparação com os valores basais (Figura 2B). As descobertas acima
foram semelhantes em todos os três indivíduos com graus variáveis.
4 | DISCUSSÃO
O presente estudo demonstrou que o melasma é caracterizado por
acúmulo de células senescentes na derme lesional. o aumento
número de fibroblastos fusiformes p16INK4A positivos é pensado
originar-se da irradiação ultravioleta crônica. Essas descobertas estão de acordo
com as observações anteriores de que o melasma apresenta características de
pele danificada pelo sol e a senescência induzida por UV in vitro, como
o fenótipo dos fibroblastos leva ao aumento da produção dos fatores melanogênicos.
[1–11] As células senescentes foram observadas principalmente
na camada superior da derme, que têm a vantagem de fácil
crosstalk com melanócitos próximos. A memória do porão prejudicada
A brana no melasma também pode contribuir para a interação entre fibroblastos
senescentes e melanócitos epidérmicos.[3,4 ]
servições sugerem que os fibroblastos senescentes podem contribuir para
pigmentação aumentada no melasma, e esse tratamento dérmico direcionado
tortas podem ser consideradas para tratamento de melasma.
Estratégias potenciais em relação ao processo de envelhecimento incluem
interferindo com os efeitos adversos das células senescentes ao atingir o fenótipo
secretor e eliminar as células senescentes.[17] No
presente estudo piloto, o impacto de fibroblastos senescentes na pele de porco
mentação foi sugerida ao reduzir células senescentes com RF
intervenção, que foi associada com pigmentação reduzida. O
remoção de fibroblastos senescentes pode ser devido à remodelação dérmica
ling induzindo uma resposta leve de cicatrização de feridas da terapia de RF; o
721
ÿÿ ÿ |
A RF pode aumentar a porcentagem de fibroblastos em replicação e estes
fibroblastos jovens recém-recrutados produzem ativamente novo colágeno
e também pode modificar o ambiente microambiental da pele para bal
pigmentação normal avançada. De fato, os efeitos de clareamento da pele de
procedimentos antienvelhecimento, incluindo hidroporação de coquetel antienvelhecimento
ou microagulhamento, bem como RF no melasma foram sugeridos anteriormente.
[18–20] Essas observações podem destacar a importância de
o microambiente dérmico na regulação biológica dos melanócitos
atividade. No entanto, deve-se notar que apenas três sujeitos foram
usado para o tratamento de RF e quaisquer conclusões deste trabalho são
necessariamente limitado.
Os principais fatores etiológicos clássicos do melasma incluem influências
genéticas, exposição ao sol e hormônios sexuais femininos.[21] Sob
exposição ao sol, a rede de interações celulares entre
queratinócitos, fibroblastos e talvez a vasculatura e mela
nócitos podem desempenhar um papel no desenvolvimento da hiperepidérmica
pigmentação no melasma. Especialmente, a mudança senescente do
fibroblastos e sua mudança de fenótipo podem contribuir para o
aumento da pigmentação dos melanócitos. A esse respeito, embora
A fórmula de Kligman ainda é um padrão ouro para o tratamento do melasma, o
O microambiente ao redor dos melanócitos é outro alvo importante
para um tratamento mais eficaz do melasma e uma melhor prevenção
as recaídas. O melasma não é mais uma simples doença melanocítica e é
considerado como parte do fotoenvelhecimento.
Em resumo, este estudo mostra que o melasma envolve
acúmulo de fibroblastos na derme e na derme envelhecida incluindo
células senescentes podem ser um alvo terapêutico para o melasma.
RECONHECIMENTOS
Esta pesquisa foi apoiada por uma bolsa da Korea Health
Projeto de P&D de Tecnologia através da Indústria de Saúde da Coreia
Instituto de Desenvolvimento financiado pelo Ministério da Saúde e Bem-Estar da
República da Coreia (HN14C0094) e por uma doação da Viol Co. Ltd.
CONFLITO DE INTERESSES
Os autores declararam não haver interesses conflitantes.
CONTRIBUIÇÃO DO AUTOR
M. Kim, SM Kim e S. Kwon realizaram a pesquisa e analisaram
os dados. TJ Park e HY Kang projetaram o estudo de pesquisa e
escreveu o papel.
ORCID
Hee Young Kang http://orcid.org/0000-0001-8697-4292
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Como citar este artigo: Kim M, Kim SM, Kwon S, Park TJ, Kang
HY. Fibroblastos senescentes na fisiopatologia do melasma. Exp
Dermatol. 2019;28:719–722. https://doi.org/10.1111/
ramal 13814