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Artigo original CED

Dermatologia Clínica e Experimental

Papel dos fatores derivados de fibroblastos na patogênese do melasma

JW Byun,1 IS Park,2 GS Choi1 e J. Shin1
1 2
Departamento de Dermatologia, Hospital Inha, Escola de Medicina da Universidade INHA, Incheon, Coréia; e de Departamento de Patologia, Escola Universitária INHA
Medicina, Incheon, Coréia

doi:10.1111/c.12874

Resumo Fundo. Os melanócitos hiperativos presentes na pele do melasma estão confinados à epiderme, mas a
ablação epidérmica para tratar a pigmentação do melasma pode levar à recorrência e agravamento da
doença. A função dos melanócitos é regulada por interações entre melanócitos e células vizinhas, como
queratinócitos e fibroblastos.
Como a pele do melasma geralmente mostra alterações dérmicas após a exposição à luz solar, levantamos
a hipótese de que os fibroblastos danificados pelo sol podem desempenhar um papel crucial na gênese do
patógeno do melasma.
Mirar. Neste estudo, o papel melanogênico de fibroblastos de cultura primária da pele do melasma humano
foi investigado.
Métodos. Nós exploramos se fibroblastos cultivados primários de tecido de melasma têm uma função
melanogênica em melanócitos epidérmicos humanos cultivados e pele artificial. O perfil de citocinas
derivadas de fibroblastos e seu efeito sobre os equivalentes epidérmicos pigmentados foram investigados.

Resultados. Fibroblastos da lesão de melasma e da pele perilesional aumentaram a melanogênese em

cultura de melanócitos epidérmicos humanos e em pele artificial.
Os fibroblastos da lesão de melasma e da pele perilesional secretaram mais fator de crescimento nervoso
(NGF)-b do que aqueles na pele normal da nádega, e também aumentaram a melanogênese e o nível de
expressão de NGF-b em cultura de melanócitos epidérmicos humanos e pele artificial.

Conclusões. Esses resultados sugerem que os fibroblastos podem desempenhar um papel na melanogênese
e na patogênese do melasma.

Introdução Embora a hiperpigmentação epidérmica seja a principal característica

histopatológica do melasma, a remoção da epiderme por peeling
Melasma é uma lesão crônica hiperpigmentada que se manifesta em
químico ou laser pode resultar em agravamento ou recorrência
áreas expostas ao sol. Sua distribuição está relacionada aos nervos
frequente. O melasma mostra elastose solar proeminente em
trigêmeos. Os principais fatores etiológicos do melasma incluem
comparação com a pele não lesada, sugerindo que a ativação dos
fatores genéticos, exposição à radiação ultravioleta (RUV) e hormônios
melanócitos pode se desenvolver por alterações dos fibroblastos
sexuais. No entanto, os mecanismos moleculares envolvidos na
dérmicos sobrejacentes causadas pela RUV.1 A membrana basal
patogênese e melanogênese do melasma não são bem compreendidos.
desorganizada e os melanócitos pendentes na lesão resultante do
aumento da expressão de metalopeptidase-2 da matriz parecem ser
um aspecto característico de melasma.1,2 Portanto, levantamos a
A característica histopatológica do melasma é o aumento da
hipótese de que os fibroblastos dérmicos desempenham um papel
melanina em todas as camadas epidérmicas.1
importante na patogênese do melasma.

Correspondência: Dr Jeonghyun Shin, Departamento de Dermatologia, Inha

University Hospital, 27, Inhang-ro, Jung-gu, Incheon, 400-711, Korea E-mail: Fibroblastos humanos secretam várias citocinas melanogênicas,
mikie2001@hanmail.net incluindo Dickkopf-1, fator de células-tronco (SCF), fator de crescimento

Conflito de interesse: os autores declaram não ter conflito de interesse.
Aceito para publicação em 28 de setembro de 2015
de hepatócitos (HGF), fator de crescimento nervoso (NGF), fator de
necrose tumoral (TNF)-a e interleucina (IL)-1a.
3,4
Estudos anteriores de histopatologia mostraram que

ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609 601
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Fibroblastos de melasma têm potencial melanogênico JW Byun et al.
O SCF e o receptor p75 NGF (p75NGFR) estão aumentados na
derme das lesões de melasma.5,6 Demonstramos anteriormente
que a exposição repetida de fibroblastos à RUV levou a
alterações senescentes e secreção de SCF, sugerindo que
danos crônicos à luz ultravioleta induzem funções melanogênicas
em fibroblastos. 7 No entanto, ainda não foi estudado se os
fibroblastos nas lesões de melasma têm efeitos melanogênicos
nos melanócitos da epiderme sobrejacente.
No presente estudo, investigamos os efeitos sobre a
melanogênese de fibroblastos de cultura primária de lesões de
melasma e de pele protegida do sol perilesional e não lesional.
Métodos
Este estudo foi aprovado pelo conselho de revisão institucional
do Hospital Universitário de Inha, e todos os pacientes
forneceram consentimento informado por escrito.
Pacientes
Espécimes de biópsia de pele foram obtidos de três mulheres
coreanas com melasma. Três espécimes de biópsia por punção
de 2 mm foram retirados de uma lesão, pele perilesional (10 mm
de distância da margem da lesão) e pele normal nas nádegas de
cada paciente sob anestesia local.
coloração histológica
Os espécimes foram corados imunohistoquimicamente com um
kit comercial (ABC Kit; Vector Laboratories, Bur lingame, CA,
EUA), seguindo as instruções do fabricante. Foram utilizados os
seguintes anticorpos primários: policlonal antihumano SCF, anti-
NGF, anti p75NGFR, anti-tirosina quinase receptor A de alta
afinidade (TrkA) (todos Abcam Inc., Cambridge, MA, EUA) e anti-
NKI-beteb (Santa Cruz Biotechnology Inc, Santa Cruz, EUA).
Experimentos de controle preliminares foram realizados para
definir a diluição ideal de cada anticorpo primário. Os tecidos
foram embebidos em cera de parafina e processados para
coloração histológica com hematoxilina e eosina (H&E), Fontana-
Masson (FM), ácido periódico-Schiff e Verhoeff-van Gieson (VvG)
para observar a distribuição de melanina e alterações dérmicas
no espécimes de pele.
Culturas primárias de fibroblastos
Os fibroblastos foram derivados da derme nos espécimes de
biópsia. Fibroblastos humanos primários foram cultivados em
602 Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609
culturas em monocamada em meio Eagle modificado por
Dulbecco com alto teor de glicose suplementado com 10% de
soro fetal bovino, 1% de L-glutamina, 1% de penicilina e 1% de
estreptomicina a 37 °C em uma atmosfera umidificada com 5% de CO2.
Os fibroblastos foram subcultivados usando métodos de rotina e
as células das passagens 3 a 6 foram usadas para os
experimentos.
Tratamento do meio condicionado por fibroblastos de
pacientes com melasma
Os melanócitos epidérmicos humanos (doador neonatal de
pigmentação escura; HEMn-DP) (cat. no. C-202-5C; Invitro gen,
Carlsbad, CA, EUA) foram usados na passagem 3 ou 4.
As células HEMn foram cultivadas com meio condicionado por
fibroblastos (FCM) por 96 h com um controle negativo, controle
positivo (hormônio estimulante de a-melanócitos; a-MSH) e cada
FCM. Todos os experimentos foram repetidos pelo menos três
vezes.
MelanoDerm cocultivado com fibroblastos de cultura
primária
Usamos um modelo comercial in vitro de epiderme humana
(equivalente epidérmico humano de pigmentação média da pele
do Leste Asiático) chamado MelanoDerm (MatTek Corp., Ashland,
MA, EUA) para cocultura. Os tecidos MelanoDerm foram
colocados no topo da monocamada confluente da cultura de
fibroblastos. A cada 2 dias, os tecidos MelanoDerm foram
transferidos para culturas de fibroblastos confluentes recém-
preparadas em meio de manutenção MelanoDerm fresco com
cada tipo de FCM. Os tecidos MelanoDerm foram colhidos após
14 dias de tratamento. Todos os experimentos foram repetidos
pelo menos três vezes.
Ensaio de conteúdo de melanina
O ensaio do teor de melanina foi realizado usando as células
HEMn e as amostras MelanoDerm. A absorvância foi medida a
470 nm em um leitor de microplacas (SpectroMax 250; Molecular
Devices, Sunnyvale, CA, EUA ou ELx800; Bio-Tek, Inc. Winooski,
VT, EUA) usando uma curva padrão gerada a partir de melanina
sintética (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EUA).
Análise de matriz
Neste estudo, usamos um kit de matriz de fator de crescimento
(Quantibody Human Growth Factor Array-1; RayBio tech, Inc.,
Norcross, GA, EUA) para identificar novos fatores melanogênicos
secretados por fibroblastos derivados de lesões de melasma. Os
fatores de crescimento e citocinas de
ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas
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Fibroblastos de melasma têm potencial melanogênico JW Byun et al.
interesse foram os seguintes: fator básico de crescimento de
fibroblastos (bFGF), SCF, NGF, neurotrofina (NT)-3, HGF, 1a,
IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-a. Os ensaios foram realizados de
acordo com as instruções do fabricante. Os dados foram
extraídos e analisados com software de análise de microarray
(GenePix, ScanArray Express, ArrayVision; todos Molecular
Devices Corp., Sunnyvale, CA, EUA).
análise de Western blot
Os tecidos MelanoDerm foram solubilizados em volumes
apropriados de reagente de extração de proteínas de mamíferos
(M-PER; Pierce Biotechnology, Rockford, IL, EUA) contendo
uma mistura de inibidores de protease e inibidores de fosfatase
(todos Roche, Mannheim, Alemanha). As proteínas em cada
extrato foram separadas por um filtro centrífugo a 14.000 g, 10
min (MWCO 3000; Amicon; Merck Millipore, Billericia, MA, EUA)
e medidas usando um kit de ensaio de proteína BCA (Pierce,
Rockford, IL, EUA).
Experimentos de controle preliminares foram realizados para
definir a diluição ideal de cada anticorpo primário.
Foram utilizados os seguintes anticorpos primários: anti-SCF
humano (1 lg/mL), anti-NGF humano (1: 500), anti p75NGFR
(1: 400), anti-TrkA (1: 1000) e anti-b actina ( 1 : 200) (todos
Abcam Inc.), com um kit ABC (Vector Laboratories), seguindo
as instruções relevantes do fabricante. Os complexos antígeno-
anticorpo foram detectados usando um sistema de detecção de
western blotting (West-OneTM; iNtRON Biotech, Inc, Seongnam,
Coréia do Sul).
Análise PCR de transcrição reversa em tempo real
A expressão de genes específicos de melanócitos no tecido
Melano Derm foi examinada usando PCR de transcrição reversa
em tempo real. As sequências de primers do fator de transcrição
associado à microftalmia (MITF) são mostradas na Tabela 1.
Análise estatística
As diferenças nos resultados foram avaliadas quanto à
significância usando o teste t de Student e ANOVA, seguido
por um teste de comparação múltipla, como o teste de Duncan.
Todas as análises foram realizadas usando o software SPSS (v12.0; SPSS
Tabela 1 Primers para análise de PCR de transcrição reversa em tempo real.
Primeiro Direção
Sequência 50 ?30
MITF-M Avançar TCCGTCTCTCACTGGATTGGTG
Reverter CGTGAATGTGTGTTCAATGCCTGG
ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas
Inc. Chicago, IL, EUA). P < 0,05 foi considerado estatisticamente
significativo.
Resultados
Achados histopatológicos do melasma
A coloração H&E mostrou que a melanina epidérmica na pele
lesional era maior do que na pele perilesional e nádega saudável
(Fig. 1a-c), enquanto a coloração FM revelou uma capa de
melanina sobre os núcleos de queratinócitos e um aumento na
deposição de pigmento na lesão em comparação com
perilesional e pele da nádega (Fig. 1d-f).
A coloração PAS mostrou ruptura da membrana basal ao redor
dos melanócitos pendentes na lesão (Fig. 1g), enquanto a
coloração VvG de lesões de melasma mostrou um aumento no
número de fibras elásticas espessas, altamente onduladas e
mais fragmentadas do que aquelas encontradas na pele
perilesional e da nádega (Fig. . 1j–l).
Para examinar se o aumento da melanogênese nas lesões
de melasma está associado à expressão acentuada de SCF e
NGF, examinamos sua expressão por meio de imuno-
histoquímica. Encontramos alta expressão de SCF e NGF em
fibroblastos dérmicos na pele lesional e perilesional, enquanto
havia apenas coloração fracamente positiva na derme das
nádegas (Fig. 1m–r). A epiderme, especialmente na camada de
células basais e próximo aos melanócitos, também mostrou
expressão aumentada de p75NGFR na pele lesional e
perilesional (Fig. 1s-u).
Meios condicionados por fibroblastos da pele com melasma
aumenta a melanogênese
Queríamos determinar os efeitos dos fatores derivados de
fibroblastos de cada FCM na melanogênese e na viabilidade
celular do HEMn. O tratamento com FCM da lesão e áreas de
pele perilesional aumentou o conteúdo de melanina do HEMn
(Fig. 2). Esses resultados sugerem que os fatores derivados
de fibroblastos lesionais e perilesionais têm um efeito estimulador
na melanogênese do HEMn. Por outro lado, a FCM da nádega
pareceu diminuir a melanogênese em comparação com o
controle.
Os fibroblastos da pele exposta ao sol secretam mais
citocinas melanogênicas do que os da pele protegida do sol
Determinar os fatores envolvidos no fibroblasto
pigmentação induzida, medimos quantitativamente os níveis de
citocinas conhecidas derivadas de fibroblastos da FCM.
A matriz de quanticorpos mostrou um aumento em IL-1a, IL-6,
Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609 603
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Fibroblastos de melasma têm potencial melanogênico JW Byun et al.

(a) (b) (c)

(d) (e) (f)

(g) (h) (eu)

(j) (k) (eu)

(m) (n) (o)

(p) (q) (r)

(s) (t) (em)

eu PL B

604 Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609 ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas
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Fibroblastos de melasma têm potencial melanogênico JW Byun et al.

Figura 1 As amostras foram coradas histológica e imuno-histoquimicamente conforme descrito em Métodos. Houve um aumento (a-c) de
melanina epidérmica (hematoxilina e eosina, ampliação original de 9.100) e (d-f) deposição de pigmento (Fontana-Masson, ampliação original
de 9.200) na pele lesional em comparação com a pele perilesional. (g-i) A membrana basal foi rompida em torno das células pendentes na pele
lesional (periódico-ácido-Schiff, ampliação original 9 400). (j-l) A pele do melasma mostrou números significativamente aumentados de fibras
elásticas espessas e altamente onduladas em comparação com a pele perilesional e da nádega (coloração de Verhoeff-van Geison, ampliação
original 9 40). (m–r) Alta expressão de SCF e NGF foi observada em toda a epiderme em lesões em comparação com pele perilesional e nádegas.
Na derme, os fibroblastos da lesão e da pele perilesional apresentaram marcação aumentada para fator de células-tronco (SCF) e fator de
crescimento nervoso (NGF), enquanto havia apenas algumas células positivas na derme da nádega. (s–u) A epiderme da pele lesional e
perilesional, especialmente na camada de células basais e perto dos melanócitos, mostrou expressão aumentada de p75NGFR (ampliação original
9.100; inserção, 9.400). L, lesão; PL, perilesão; B, nádega.

(a) P (b) P

P
P P
P
P P
P
P

Figura 2 Os melanócitos epidérmicos humanos foram cultivados com cada meio condicionado por fibroblastos (FCM) e o hormônio estimulante
de a-melanócitos sintético (a-MSH) (10 nmol/L) foi usado como controle positivo. (a) FCM lesional aumentou a melanogênese e a viabilidade de
melanócitos epidérmicos humanos neonatais (HEMn), enquanto FCM lesional e perilesional aumentou o conteúdo de melanina de HEMn; (b) a
FCM lesional também aumentou a sobrevida dos melanócitos. *P < 0,05, **P < 0,01. Cada experimento foi repetido pelo menos três vezes.

IL-10, TNF-a, SCF, NGF-be NT-3 em FCM lesional comparado com
FCM de nádegas. Os níveis de TNF-a e HGF foram aumentados na
FCM lesional em comparação com a FCM da pele perilesional. NGF-
b e NT-3 foram significativamente aumentados no FCM da pele
exposta ao sol em comparação com aqueles da pele protegida do
sol (Fig. 3).
fibroblastos. A incubação de melanócitos MelanoDerm com o
marcador de melanoma NKI-beteb mostrou intensidade de
coloração mais forte na pele lesional e perilesional do melasma do
que no controle ou na pele das nádegas (Fig. 4c).
A expressão do fator de células-tronco, do fator de crescimento do nervo e
do receptor do fator de crescimento do nervo p75 é aumentada em
Tecido MelanoDerm

Fibroblastos da pele exposta ao sol aumentam a

melanogênese no MelanoDerm
Usamos tecidos MelanoDerm para examinar se
os fibroblastos podem aumentar a melanogénese em condições
semelhantes às in vivo. MelanoDerm cocultivado com fibroblastos
lesionais mostrou um aumento na pigmentação em comparação
com o controle não tratado (Fig. 4a).
Os tecidos MelanoDerm co-cultivados com fibroblastos lesionais e
perilesionais também mostraram um aumento significativo no nível
de mRNA de MITF em comparação com aqueles co-cultivados com
fibroblastos de controle e nádegas.
De fato, a adição de fibroblastos nas nádegas pareceu diminuir a
melanogênese em comparação com o controle (Fig. 4b).
Os achados histopatológicos revelaram que o pigmento de
melanina estava aumentado na camada basal do tecido Melano
Derm cocultivado com lesão e perilesional
Para determinar se o aumento da melanogênese em MelanoDerm
estava associado à expressão acentuada de fatores de crescimento,
investigamos a expressão de SCF, NGF e p75NGFR por meio de
imuno-histoquímica e ensaios de western blot. O SCF mostrou
aumento da coloração positiva em toda a epiderme inferior nos
tecidos MelanoDerm cocultivados com fibroblastos lesionais e
perilesionais em comparação com aqueles cocultivados com
fibroblastos de controle e nádegas. O NGF e seus receptores
p75NGFR e TrkA estavam aumentados na camada de células
basais do tecido MelanoDerm cocultivado com fibroblastos lesionais
e perilesionais (Fig. 4c).
A análise de Western blot mostrou que o nível de proteína de
NGF e de seu receptor p75NGFR foi aumentado no tecido
MelanoDerm cocultivado com fibroblastos em comparação com o
MelanoDerm controle, sugerindo que os fibroblastos humanos
secretam NGF e induzem NGFR

ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609 605
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Fibroblastos de melasma têm potencial melanogênico JW Byun et al.

**
** (P = 0,000)
IL-1ÿ IL-6 IL-8 IL-10 TNF-ÿ
(P = 0,001) ** (P =
** (P = 0,001) * (P = 0,016)
* (P = 0,017) 0,001) ** (P = 0,000)
50 45 000 60 000 800 70
40 000 700
50 000 60
40 35 000
600 50
30 000 40 000
500
30 25 000 40
30 000
mL
pg/
400
mL
pg/ mL
pg/ mL
pg/
mL
pg/

20 000 30
20 300
15 000 20 000
200 20
10 10 000 10 000
100 10
5000
0 0 0 0
0
PL B eu PL B eu PL B eu PL B
eu PL B eu

* * SCF ** (P = 0,001)
bFGF HGF NGF-ÿ NT-3 ** (P = 0,001)
(P = 0,034) (P = 0,013) ** (P = 0,003) * (P = 0,012)

70 16 50 500 ** (P = 0,001) 300 ** (P = 0,001

60 14 250
40 400
12
50 200
10 30 300
40 mL
pg/
150
mL
pg/ mL
pg/

8
mL
pg/ mL
pg/

30 20 200
6 100
20 4 10 100 50
10 2
0 0 0
0 0
eu PL B eu PL B eu PL B
eu PL B eu PL B

Figura 3 Os resultados da matriz de quanticorpos mostraram que a secreção de interleucina (IL)-1a, IL-6, IL-10, fator de necrose tumoral (TNF)-a, fator de
células-tronco (SCF), fator de crescimento nervoso (NGF)-b e neurotrofina (NT)-3 foram significativamente aumentados em fibroblastos primários derivados
de lesões de melasma. A secreção de TNF-a e fator de crescimento de hepatócitos (HGF) foi maior em fibroblastos primários derivados de lesões de
melasma do que naqueles de pele perilesional. Das 10 citocinas derivadas de fibroblastos estudadas, NGF-b e NT-3 foram significativamente aumentados
tanto no meio condicionado de fibroblastos (FCM) lesional quanto perilesional em comparação com o FCM de nádega (*P < 0,05).

expressão. No entanto, TrkA não foi detectado. O nível de proteína tecido cocultivado com fibroblastos derivados de melasma também
SCF foi ligeiramente aumentado em tecido Melano Derm mostraram aumento da melanogênese, enquanto os fibroblastos
cocultivado com fibroblastos lesionais derivados da pele da nádega protegida pelo sol inibiram a
(Fig. 4d). melanogênese nos tecidos HEMn e MelanoDerm.
Esses resultados sugerem que os fibroblastos podem desempenhar
um papel importante na patogênese do melasma.
Discussão
Um estudo imuno-histoquímico recente sugeriu que a expressão
Neste estudo, comparamos os fibroblastos da pele do melasma de HGF, KGF e SCF fotoenvelhecida e relacionada a fibroblastos
exposta ao sol com os da pele protegida do sol, mas tocada. A está envolvida na formação de distúrbios pigmentares epidérmicos,
imunohistoquímica mostrou que o número de fibroblastos como o lentigo solar.8 O UVB estimula os fibroblastos a liberarem
expressando SCF e NGF estava aumentado na derme da pele HGF, KGF, SCF e fator básico de crescimento de fibroblastos.7 ,9
lesional e perilesional, mas havia pouca positividade na derme da Um estudo muito recente
nádega. A epiderme da pele lesional e perilesional, especialmente mostraram que o acúmulo de melanina nos atinócitos basais e o
a camada de células basais e áreas próximas aos melanócitos, tamanho e número de cristas rete foram significativamente
mostrou expressão aumentada de p75NGFR. aumentados quando o tecido MelanoDerm foi incubado com
fibroblastos tratados com UV.10 Até onde sabemos, o estudo atual
A FCM da pele com melasma aumentou a melanogênese e a é o primeiro a mostrar que fibroblastos de melasma humano lesões
sobrevivência celular de HEMn cultivados in vitro. MelanoDerm podem induzir

Figura 4 A cocultura MelanoDerm com fibroblastos da lesão e da pele perilesional mostrou aumento da melanogênese. (a) No dia 14, os tecidos MelanoDerm
cocultivados com fibroblastos lesionais e perilesionais mostraram pigmentação aumentada em comparação com aqueles cocultivados com fibroblastos
de controle e nádegas. (b) O conteúdo de melanina e o mRNA do fator de transcrição associado à microftalmia (MITF) foram aumentados no tecido
MelanoDerm co-cultivado com fibroblastos lesionais e perilesionais. Os valores indicam a média de três experimentos independentes. (c) Os melanócitos
epidérmicos tiveram intensidade de coloração mais forte em tecidos MelanoDerm co-cultivados com fibroblastos lesionais e perilesional (NKI-beteb;
ampliação original 9 200). *P < 0,05, **P < 0,01. Em tecidos MelanoDerm cocultivados com fibroblastos lesionais e perilesionais em comparação com
aqueles cocultivados com fibroblastos de controle e nádegas, a coloração para fator de células-tronco (SCF) foi ligeiramente aumentada em toda a
epiderme, enquanto a coloração para fator de crescimento nervoso (NGF), p75NGFR e alta tirosina quinase o receptor de afinidade (Trk)A foi
especialmente aumentado na camada de células basais. (d) Os níveis das proteínas NGF e p75NGFR foram aumentados em tecidos Melano Derm co-
cultivados com fibroblastos lesionais e perilesionais em comparação com aqueles co-cultivados com fibroblastos de controle e nádegas.
O nível de proteína SCF foi aumentado apenas em tecidos MelanoDerm cocultivados com fibroblastos lesionais, enquanto TrkA, o outro receptor de NGF,
não foi detectado a nível de proteína nos tecidos MelanoDerm. Cada experiência foi realizada pelo menos em triplicado.

606 Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609 ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas
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Fibroblastos de melasma têm potencial melanogênico JW Byun et al.

(a)

(b)
P

P P

P P

(c)

ELE

NKI-beteb

SCF

NGF

p75NGFR

TrkA

(d)

ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609 607
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Fibroblastos de melasma têm potencial melanogênico JW Byun et al.

aumento da melanogênese em melanócitos humanos e função melanogênica, e pode desempenhar um papel

alterações semelhantes ao melasma na epiderme pigmentada importante na patogênese do melasma.
reconstruída.
Para determinar os principais fatores envolvidos na
Reconhecimentos
pigmentação induzida por fibroblastos, investigamos as
diferenças nos níveis de citocinas secretadas pelos fibroblastos. Esta pesquisa foi apoiada por uma Bolsa de Pesquisa da
NGF-b e NT-3 foram significativamente aumentados na FCM Universidade de Inha.
da pele do melasma exposta ao sol em comparação com a
pele da nádega protegida pelo sol. A UVB estimula
queratinócitos e fibroblastos a liberar bFGF, HGF, SCF e
O que já se sabe sobre este tópico?
citocinas pró-inflamatórias, incluindo IL-1a, IL-6 e 9.
a. nes Adicionalmente, potente citoqui pró-inflamatório TNF- • As principais características histopatológicas do
como TNF-a e IL-1a podem regular positivamente a expressão melasma são deposição de melanina, principalmente
da neurotrofina NGF-b, NT-3, NT-4 e p75 Com base na nas camadas basal e suprabasal, e elastose solar na
receptor (p75NTR) in vivo. 11 imunohis derme.
Nos resultados toquímicos da pele do paciente e do tecido • Fibroblastos humanos secretam várias citocinas
MelanoDerm em nosso estudo, o aumento da expressão de melanogênicas, incluindo Dickkopf-1, SCF, HGF, NGF,
NGF parece ser característico da pele exposta ao sol. TNF-a e IL-1a.
A família NT consiste em quatro proteínas relacionadas
estrutural e funcionalmente: NGF, NT-3, NT-4 e fator
neurotrófico derivado do cérebro.12 Os NTs exercem seus
efeitos ligando-se a duas classes de receptores transmembrana; O que este estudo acrescenta?
os Trks (TrkA, B e C) e p75NTR. Os melanócitos humanos
• Este é o primeiro estudo que demonstra o papel
normais expressam todos os NTs e seus receptores, exceto
patogênico dos fibroblastos do melasma humano em
TrkC.13,14 O nível de expressão de p75NTR é regulado
um modelo de pele
positivamente por uma variedade de estímulos, incluindo
artificial. • Fibroblastos de lesões de melasma
UVR.15 NGF é conhecido por estar aumentado na pele
aumentaram a melanogênese de melanócitos
fotoenvelhecida,15 e NGF exógeno e endógeno e Os NTs
epidérmicos humanos cultivados e
desempenham um papel importante no controle da migração,
aqueles em pele artificial. • Fibroblastos de lesões de
viabilidade e diferenciação dos melanoblastos.16 In vitro, o
melasma secretam mais citocinas melanogênicas, como NGF-b.
NGF é quimiotático para os melanócitos e estimula a formação
de dendritos de melanócitos.17,18 O NGF também tem efeitos
mitogênicos nas células endoteliais,19 portanto, o aumento de
pequenas vasos da derme em lesões de melasma4 podem ser
associada ao aumento de NGF. Referências
Como este estudo incluiu apenas alguns pacientes, mais
1 Kang WH, Yoon KH, Lee ES et al. Melasma:
estudos são necessários para confirmar os resultados.
características histopatológicas em 56 pacientes coreanos.
Planejamos expandir nosso estudo para verificar essas Br J Dermatol 2002; 146: 228–37.
observações preliminares e confirmar o papel da sinalização 2 Lee DJ, Park KC, Ortonne JP e outros. pendente
do NGF no desenvolvimento do melasma. melanócitos: uma característica do melasma e como
pode ocorrer. Br J Dermatol 2012; 166: 684-6.

Conclusão
Nossos dados mostram que os fibroblastos da pele lesional e
perilesional do melasma aumentam a melanogênese em
melanócitos epidérmicos humanos e pele humana artificial.
Esse resultado pode estar relacionado ao aumento da secreção
de citocinas pró-inflamatórias e fatores melanogênicos por
fibroblastos fotodanificados, incluindo NGF. Como os
fibroblastos de nádegas protegidos pelo sol inibem a
melanogênese, esses achados podem estar associados à
exposição crônica à luz solar. Portanto, os fibroblastos fotodanificados têm uma
3 Imokawa G. Regulação autócrina e parácrina de
melanócitos na pele humana e em distúrbios pigmentares.
Pigment Cell Res 2004; 17: 96–110.
4 Yamaguchi Y, Itami S, Watabe H et al.
interações epiteliais na pele: o aumento da expressão de
dikkopf1 por fibroblastos palmoplantares inibe o crescimento e
diferenciação de melanócitos. J Cell Biol 2004; 165: 275-85.
5 Kang HY. O fator de células-tronco dérmicas e o c-kit são
superexpressa no melasma. Br J Dermatol 2006; 154:
1094-9.

608 Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609 ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas
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Fibroblastos de melasma têm potencial melanogênico JW Byun et al.
6 Bak H, Lee HJ, Chang SE et al. Expressão aumentada de
receptor do fator de crescimento nervoso e endopeptidase neural
na pele lesional do melasma. Dermatol Surg 2009; 35: 1244–
50.
7 Shin J, Kim JH, Kim EK. A exposição repetida de fibroblastos
humanos à RUV induz a secreção do fator de células-tronco
e senescência. J Eur Acad Dermatol Venereol 2012; 26: 1577–
80.
8 Kovacs D, Cardinali G, Aspite N et al. Papel dos fatores de
crescimento derivados de fibroblastos na regulação da
hiperpigmentação do lentigo solar. Br J Dermatol 2010; 163: 1020–7.
9 Kondo S, Sauder DN, Kono T et al. Diferencial
modulação de interleucina-1 alfa (IL-1 alfa) e interleucina-1
beta (IL-1 beta) em queratinócitos epidérmicos humanos
por UVB. Exp Dermatol 1994; 3: 29–39.
10 Salducci M, Andre N, Guere C et al. Fatores secretados por
fibroblastos envelhecidos irradiados induzem lentigo
solar em epiderme reconstruída pigmentada. Pigment
Cell Melanoma Res 2014; 27: 502–4.
11 Segal RA. Seletividade na sinalização de neurotrofinas: tema e
variações. Annu Rev Neurosci 2003; 26: 299–330.
12 Botchkarev VA, Yaar M, Peters EM et al. Neurotrofinas na biologia
e patologia da pele. J Invest Dermatol 2006; 126: 1719–27.
13 Pincelli C, Yaar M. Fator de crescimento do nervo: sua importância
na biologia cutânea. J Investig Dermatol Symp Proc 1997;
2: 31–6.
ª 2016 Associação Britânica de Dermatologistas
14 Marconi A, Stomach MC, Bonnet-Duquennoy M et al.
Expressão e função de neurotrofinas e seus receptores em
melanócitos humanos. Int J Cosmet Sci 2006; 28: 1–7.
15 Peacocke M, Yaar M, Mansur CP et al. Indução do receptor
do fator de crescimento nervoso em melanócitos
humanos cultivados. Proc Natl Acad Sci USA 1988; 85: 5282-6.
16 Yaar M. Neurotrofinas na pele. In: Neurotrofinas e a crista neural
(Sieber-Blum M, ed). Boston e Londres: CRC Press, 1999;
117–40.
17 Brenner M, Audiência VJ. Modificando a pigmentação da pele –
abordagens através da bioquímica intrínseca e
agentes exógenos. Drug Discov Today Dis Mech 2008; 5:
e189–99.
18 Yaar M, Grossman K, Eller M et al. Evidência de efeitos
parácrinos mediados por fator de crescimento nervoso na
epiderme humana. J Cell Biol 1991; 115: 821–8.
19 Raychaudhuri SK, Raychaudhuri SP, Weltman H et al.
Efeito do fator de crescimento nervoso na biologia celular
endotelial: proliferação e expressão de moléculas de
adesão em células endoteliais microvasculares dérmicas humanas. Arco
Dermatol Res 2001; 296: 291–5.
Dermatologia Clínica e Experimental (2016) 41, pp601–609 609