UNIVERSIDADE COMUNITÁRIA DA REGIÃO DE CHAPECÓ

ÁREA DE CIÊNCIAS EXATAS E AMBIENTAIS

DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA APLICADA A INDÚSTRIA
PROFESSORA LEIDIANI MÜLLER

AULA PRÁTICA 6 – Análise microbiológica de água

1. INTRODUÇÃO
De acordo com a Portaria Nº 2.914, de 12 de dezembro de 2011 e Portaria GM/MS nº 888 de 4 de maio de 2021
água para consumo humano é a água potável destinada à ingestão, preparação e produção de alimentos e à higiene
pessoal, independentemente da sua origem, apresentado no anexo I os padrões microbiológicos de água para o consumo
humano sendo eles, ausência de coliformes totais e coliformes fecais em 100 mL de amostra.
Essa prática tem como objetivo promover o contato do acadêmico com a INSTRUÇÃO NORMATIVA N° 161,
DE 01 DE JULHO DE 2022 da ANVISA que estabelece as listas de padrões microbiológicos para alimentos, bem como
da PORTARIA nº 888 de 4 de maio de 2021 que trata a respeito da qualidade da água para consumo humano e a
PORTARIA nº 3283 de 4 de dezembro de 2017 que dispõe sobre os procedimentos de controle e de vigilância da
qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade.

2. ANÁLISE DE ÁGUA

Tecnologia de substrato definido (DST) trata-se de um sistema de reagentes que detecta simultaneamente
coliformes totais e Escherichia coli (E. coli) a partir de uma amostra de água. Após a inoculação do DST, uma solução
clara resulta. Apenas coliformes totais podem hidrolisar o substrato Orto-nitrofenil-ß-Dgalactopiranosídeo (ONPG) em
orto-nitrofenol (coloração azul) através da ação da enzima β-galactosidase produzida pelos coliformes totais.
A constatação da presença de Escherichia coli acontece no mesmo frasco, obtida através da ação da enzima β-
glucoronidase, que é caracteristicamente produzida pela Escherichia coli, sobre o substrato 4-metilumbeliferil-β-D-
glucoronídeo (MUG); quando o MUG é degradado, o produto resultante 4-metilumbeliferonaapresenta fluorescência
sob luz ultravioleta (366 nm)

2.1 Equipamentos: Estufa bacteriológica; Bico de bunsen; Cabine de luz UV.

2.2 Materiais e vidrarias: Frasco de vidro com tampa de rosca estéril 250 mL; Reagente Readycult.

2.3 Preparo da amostra

1- Homogeneizar a amostra no mínimo 25 vezes, inclinando o frasco.

2 - Antes da abertura, desinfetar externamente os frascos com etanol a 70%. Deixar secar.

3 - Abrir a embalagem.

4 - Adicionar o reagente Readycult (sachê individual) à 100 mL de amostra, homogeneizar até completa dissolução do
reagente. Solução resultante deve ser incolor/amarelo claro.

2.4 Incubação: Incubar os frascos de vidro a 35 ± 1 °C durante 24 horas.

2.5 Leitura: Realizar a leitura das amostras imediatamente após o período de incubação.

- Cor azul: presença de coliformes totais

- Cor azul/fluorescente na Cabine de luz UV a 366 nm: presença de E. coli

- Incolor/amarelo claro: Ausência de ambos microrganismos

2.6 Resultados

A partir dos dados obtidos na leitura das amostras, expressar os resultados da seguinte forma:

Coliformes totais: E. coli:

PRESENÇA EM 100 mL PRESENÇA EM 100 mL

AUSÊNCIA EM 100 mL AUSÊNCIA EM 100 mL

3. REFERÊNCIAS
BRASIL. PORTARIA GM/MS Nº 888, DE 4 DE MAIO DE 2021. Procedimentos de controle e de vigilância da
qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade, 2021. Disponível em:
https://www.in.gov.br/web/dou/-/portaria-gm/ms-n-888-de-4-de-maio-de-2021-318461562. Acesso em: 30 mai. 2023.

BRASIL. PORTARIA Nº 3283 de 4 de dezembro de 2017. Dispõe sobre os procedimentos de controle e de vigilância
da qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade, 2017. Disponível em:
https://bvsms.saude.gov.br/bvs/saudelegis/gm/2017/prt3283_05_12_2017.html. Acesso em: 30 mai. 2023.

BRASIL. INSTRUÇÃO NORMATIVA N° 161 de 01 de julho de 2022. Estabelece as listas de padrões microbiológicos
para alimentos, 2022. Disponível em:
http://antigo.anvisa.gov.br/documents/10181/2718376/IN_161_2022_.pdf/b08d70cb-add6-47e3-a5d3-fa317c2d54b2.
Acesso em: 30 mai. 2023.

ATIVIDADE
1 – Aplique as técnicas/regras de contagem e mostre os resultados obtidos a partir dos swabs em superfície antes e após
a higienização realizados na aula anterior. (Lembrem-se de fazer os cálculos de acordo com a metodologia)

2 – Ainda a respeito dos swab de superfície em diferentes modos de higienização – observe os resultados obtidos pela
sua equipe e compare com os resultados das demais equipes. Observe se os diferentes métodos de higienização geraram
diferentes resultados, discuta e justifique esses resultados.

3 - Mostre os resultados obtidos a partir dos swabs de mãos. Discuta se o procedimento de higienização das mãos foi
corretamente executado.

4 – Observe as placas de contagem ambiental e aponte os resultados em UFC/cm².min. Demonstre o cálculo e discuta o
resultado obtido, podendo comparar com os resultados obtidos pelos colegas.

5 – Descreva o material utilizados para a coleta de água, os cuidados nos procedimentos e o ponto escolhido pela equipe
para a coleta.