Pesquisa Com Alface Toxicidade Da Agua

UNIVERSIDADE JOS DO ROSRIO VELLANO
MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS
Prof. Guilherme Arajo Lacerda

Bilogo CRBIO 44480/04-D - FUNEDI/UEMG Mestre em Biotecnologia - UNINCOR Doutor em Agronomia/Fisiologia Vegetal - UFLA
Divinpolis - MG 2009
L131m 2009
Lacerda, Guilherme Arajo Manual de aulas prticas em anlises ambientais / Guilherme Arajo Lacerda. Divinpolis : UNIFENAS, Faculdade de Biomedicina, 2009. 58 f.: il.; color. 1. Anlises ambientais. 2. guas. 3. Prticas. 4. Amostragem. I. Lacerda, Guilherme Arajo. II. Universidade Jos do Rosrio Vellano, Faculdade de Biomedicina. III. Ttulo. CDU: 543.3
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MANUAL SIMPLIFICADO SOBRE OS PROCEDIMENTOS DE COLETA DE GUA SUPERFICIAL E DE CONSUMO DOMSTICO
1. INTRODUO O objetivo deste manual contribuir para facilitar o entendimento dos procedimentos de coleta das amostras de gua superficial e de consumo domstico que sero executadas na disciplina Anlise Ambiental. A metodologia de coleta e preservao das amostras de gua est descrita no Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater (1995), publicado pela American Public Health Association. Acrescentamos alguns cuidados simples que auxiliam e facilitam o trabalho no campo.
2. MATERIAL Caixa de isopor (~21 litros); Bolsas trmicas com gel (aproximadamente 5 em cada caixa de isopor) (fig. 2); Tubos para centrfuga (calcular 2 tubos para cada ponto de coleta) (fig. 3); Unidades filtrantes de polipropileno (calcular 5 filtros para cada ponto de coleta (fig. 3); Seringas descartveis sem agulha (fig. 3); Bandeja de isopor para acondicionar os tubos (fig. 4); HNO3 (1:1); Conta gotas; Garrafo com gua deionizada; Canetas para retroprojetor para identificar as amostras; Fita isolante colorida para identificar os tubos para anlise dos ctions e dos nions (2 cores diferentes, pode ser vermelha e amarela); Luvas de borracha; Botas de borracha;
FACULDADE DE BIOMEDICINA - UNIFENAS - DIVINPOLIS
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Embarcao quando em grandes ambientes lnticos ou lticos. 3. MTODOS 3.1 GUA DE CONSUMO DOMSTICO
Figura 1: Fases para o procedimento de coleta de amostra hdrica de residncias (Brasil, 2006)
1. Lavar as mos com gua e sabo;
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2. Limpar a torneira do usurio com um pedao de algodo embebido em lcool; 3. Abrir a torneira e deixar escorrer a gua durante 1 ou 2 minutos; 4. Fechar e flambar a torneira; 5. Abrir novamente a torneira e deixar escorrer por mais 2 ou 3 minutos; 6. Coletar a amostra de gua; 7. Encher com pelo menos de seu volume; 8. Tampar o frasco, identific-lo, anotando endereo, a hora e a data da coleta, o estado do tempo, o nome do coletor, etc; 9. Marcar o frasco com o nmero da amostra, correspondente ao ponto de coleta; 10. Preencher a ficha de identificao da amostra de gua; 11. Colocar o frasco da amostra na caixa de isopor com gelo; 12. Lacrar, identificar e enviar a caixa para o laboratrio.
3.1.1 OBSERVAES IMPORTANTES A. O tempo de coleta e a realizao do exame no deve exceder 24 horas; B. Alm de residncias as amostras podem ser coletadas em hospitais, escolas, torneiras pblicas, etc, o procedimento o mesmo acima; C. Segundo a Cetesb antes da coleta, a torneira pode ser flambada, se necessrio. Entretanto, esse procedimento no muito aconselhvel, pois alm de provocar danos s torneiras, comprovou-se no ter efeito letal sobre as bactrias; D. Atualmente o processo de flambagem opcional. A Cetesb e o Standard Methods recomendam utilizar soluo de hipoclorito de sdio a 100 mg/L e utilizando esse procedimento deve-se remover completamente o hipoclorito, antes da coleta.
3.2 GUA SUPERFICIAL A coleta de gua deve ser no mesmo local da coleta do sedimento de corrente. Em cada ponto coleta-se 2 amostras em tubos separados para anlise dos ctions por ICP/OES e dos nions por cromatografia de ons.
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Deve-se sempre ambientalizar (lavar com a gua do rio) a seringa e os tubos antes de iniciar a filtragem da gua.
3.2.1 Para anlise no ICP/OES 1. Encher a seringa sem o filtro. Anexar o filtro na ponta da seringa (observar detalhe na Fig. 5) e filtrar a gua para o tubo de centrfuga. Repetir essa ao at o volume de 50 mL. (Figs. 5 e 6); 2. Se a gua estiver poluda, principalmente com esgoto domstico ou com muito material em suspenso, o filtro pode entupir. Nesse caso deve-se usar outro (s) filtro (s). Deve-se ter o cuidado de realizar esse procedimento afastado do rosto porque quando o filtro entope, pode ocorrer espirrar a amostra na boca e nos olhos; 3. Adicionar 10 gotas de HNO3 para manter o pH<2 e fechar o tubo; 4. Escreva na tampa e no corpo do tubo o nmero da amostra e passe uma fita colorida (vermelha) ao redor da tampa para identificar os ctions (Figs. 7 e 8); 5. Colocar o tubo na bandeja dentro da caixa de isopor com as bolsas trmicas. (Fig. 9); 6. Fazer um branco (gua deionizada + HNO3) para cada 20 amostras; 7. A seringa e o(s) filtro(s) deve(m) ser descartado(s).
3.2.2 Para anlise no cromatgrafo de ons 1. Repetir os procedimentos 1 e 2; 2. Escreva na tampa e no corpo do tubo o nmero da amostra e passe uma fita colorida (amarela) na tampa para identificar os nions. (Figs. 7 e 10); 3. NO acidificar a amostra; 4. Coloc-lo na bandeja dentro da caixa de isopor com as bolsas trmicas (Fig. 9); 5. A seringa e o(s) filtro(s) deve(m) ser descartado(s); 6. As amostras devem permanecer, obrigatoriamente, refrigeradas at o momento da anlise.
3. OBSERVAES IMPORTANTES
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A. necessrio deixar as bolsas trmicas de gel no congelador da geladeira do hotel todas as noites, ao chegar do campo, para que fiquem congeladas para utilizao na manh seguinte; B. Deve-se sempre usar luvas de borracha para evitar contato da pele com a gua do rio que estiver poludo (Fig. 5); C. Para facilitar o manuseio e o deslocamento das amostras da rea do campo para o laboratrio, as mesmas devem ser acondicionadas, no refrigerador do hotel, na vertical, dentro de sacos plsticos; D. No transporte das amostras do campo at o laboratrio imprescindvel que as bolsas trmicas estejam congeladas para a manuteno da refrigerao at o momento de anlise.
Figura 2: Bolsas trmicas com gel (Cunha e Machado, 2003).
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Figura 3: Material para coleta de gua em cada ponto: 2 tubos para centrfuga, unidades filtrantes e seringa descartvel sem agulha (Cunha e Machado, 2003).
Figura 4: Amostras de gua acondicionadas na bandeja de isopor (Cunha e Machado, 2003).
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Figura 5: Coleta da amostra de gua (observar a posio do filtro entre a seringa e o tubo) Crrego Fazenda Velha Projeto APA SUL RMBH (Cunha e Machado, 2003).
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Figura 6: Coleta de amostra de gua no Crrego Fazenda Velha Projeto APA SUL RMBH (Cunha e Machado, 2003).
Figura 7: Nmero da amostra registrado na tampa e no corpo do tubo (Cunha e Machado, 2003).
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Figura 8: Fita isolante vermelha ao redor da tampa para facilitar a identificao da amostra para anlise dos ctions (Cunha e Machado, 2003).
Figura 9: Amostras acondicionadas na bandeja dentro da caixa de isopor com as bolsas trmicas (Cunha e Machado, 2003).
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Figura 10: Fita isolante amarela ao redor da tampa para facilitar a identificao da amostra para anlise dos nions (Cunha e Machado, 2003).
Referncias Bibliogrficas
BRASIL. Fundao Nacional de Sade. Manual prtico de anlise de gua. 2 ed. rev. - Braslia: Fundao Nacional de Sade, 2006. 146 p.
CUNHA,
F.G.
da;
MACHADO,
G.J.
Manual
simplificado
sobre
os
procedimentos de coleta de gua superficial e de consumo domstico. CPRM: Servio Geolgico do Brasil/DIGEOQ, 2003. 10p.
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Prtica 1. BIOENSAIOS DE TOXIDADE AGUDA COM SEMENTES DE ALFACE (Lactuca sativa L.)
1. INTRODUO As substncias txicas podem afetar o desenvolvimento normal das plantas, principalmente nas suas etapas iniciais como germinao e desenvolvimento de razes. Ao observar e medir o comprimento de razes jovens e comparar estas medidas com um controle pode determinar a presena de compostos qumicos txicos no ambiente. O ensaio pode ser aplicado na avaliao de toxicidade de guas superficiais (lagos e rios) guas potveis, residurias, lixiviados de solo, sedimentos e outras amostras slidas.
2. OBJETIVO Determinar se a amostra hdrica exerce atividade txica sobre a germinao de sementes de alface em relao aos grupos controle.
3. MATERIAL Placas de Petri de vidro de 100 x 15 mm Discos de papel filtro Whatman N0 3 (90 cm dimetro) Sementes de alface ou outra semente pequena Proveta de 100 mL Pipetas Palitos ou pinas Rgua ou paqumetro Frascos para as diluies Amostra a ser testada 3.1 Reagentes e solues Soluo de Zinco 0,001% gua Dura ou Mineral sem gs
4. MTODOS 4.1 Preparo das diluies
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Para realizar a curva de dose resposta, se recomenda preparar um mnimo de 4 a 5 diluies da amostra a ser analisada, de maneira tal a obter valores intermedirios de toxicidade entre 100 a 0%. Para as amostras ambientais se recomenda o uso do fator de diluio de 0,3 a 0,5. O uso do fator 0,3 permite avaliar a toxicidade em intervalos entre 100 a 1% e 0,5% entre 100, 30, 10, 3 e 1%. Ao aplicar o fator 0,5 necessrio utilizar maior nmero de diluies para abranger o mesmo intervalo de concentraes (100; 50; 25; 12,5; 6,3 e 1,5%), entretanto se obtm maior preciso dos resultados. Para fazer as diluies se utiliza gua dura ou mineral. O controle negativo realizado com gua dura ou mineral (com a gua de diluio empregada). Com a finalidade de testar a sensibilidade da semente utilizada, simultaneamente ao teste da toxicidade da amostra, deve ser realizado um controle positivo, utilizando zinco (Zn) como txico referncia. Para o caso de amostras desconhecidas (por exemplo: ambientais), antes de realizar o experimento, recomenda-se fazer um teste preliminar utilizando doses em escala logartmicas (100, 10, 1, 0,1 e 0,01%) que permitam estabelecer intervalo conveniente para obter valores de efeito entre 100, 50 e 0% necessrios para calcular o CE50 ou CI50. 4.2 Bioensaio de toxicidade 1) Colocar em cada placa de Petri um papel de filtro. Etiquetar cada placa com a diluio e amostra correspondente, autor e data de incio e termino do experimento. 2) Saturar o papel de filtro com 4 mL das amostras a serem estudadas, evitando bolhas de ar, com a pina ou palito colocar cada semente no lugar. 3) Cada placa deve conter 20 sementes, que sero repeties. Fechar as placas, passar filme plstico para no ocorrer perda de umidade. 4) Cobrir com papel escuro e incubar por 120 h ou 5 dias a temperatura de 22
0
C.
5) Terminado o tempo de exposio, medir cuidadosamente o comprimento da raiz de cada uma das plntulas correspondente a cada concentrao e controles positivo e negativo.
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6) Quantificar o nmero de sementes que no germinaram e porcentagem de variao do crescimento da raiz. 7) Colocar em um grfico dose-resposta, onde na ordenada coloca-se a porcentagem de inibio e na abscissa a concentrao. 8) Calcular a concentrao que produz 50% de inibio CE/CI50 para cada "end point".
5. FRMULAS
Germinao relativa da semente (%) = Nmero de sementes germinadas na concentrao x 100 Nmero de sementes germinadas no controle Alongamento relativo da radcula (%) = Mdia do alongamento da radcula na concentrao x 100 Mdia do alongamento da radcula no controle ndice de germinao (GI) = (% Germinao da semente) x (% Alongamento da radcula) 100%
5. RESULTADOS 5.1 Bioensaio com as sementes

Semente (comprimento da radcula) CP CN [1] [2] [3] [4] [5]
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Comprimento total
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Comprimento mdio N0 germinadas Germinao semente (%) Alongamento relativo da radcula (%) ndice de germinao (GI) relativa da
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6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ARAJO, A.S.F.; MONTEIRO, R.T.R. Plant Bioassays to Assess Toxicity of Textile Sludge Compost. Scientia Agricola, Piracicaba, v.62, n.3, p.286-290, May/June, 2005.
DUTKA, B. Short-term root elongation toxicity bioassay. Methods for toxicological analysis of waters, wastewaters and sediments. National water research institute (NWRI), Environment Canada. 1989
GREENE, J.C. et al. Protocols for short term toxicity screening of hazardous waste sites. U.S. EPA 600/3-88/029. Corvallis. OR. 1988.
WANG, W. Root elongation method for toxicity testing of organic and inorganic pollutants. Environmental Toxicology & Chemistry, v.6, p.409-414, 1987.
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Prtica 2. DEMANDA QUMICA DE OXIGNIO - DQO
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1. INTRODUO Define-se Demanda Qumica de Oxignio (DQO) como sendo a quantidade de oxignio necessria para oxidar quimicamente o material orgnico e inorgnico contidos na amostra. O parmetro DQO proporciona uma caracterizao do potencial de biodegradabilidade do material orgnico presente em guas residurias, sendo sua determinao importante para facilitar a escolha do processo de tratamento dessas guas. Alm disso, a anlise de DQO tem sido utilizada no monitoramento e controle da carga orgnica de guas residurias. Os mtodos de determinao da DQO podem ser subdivididos em dois grandes grupos: o mtodo do refluxo aberto e os mtodos do refluxo fechado. O mtodo de refluxo aberto pode ser utilizado para uma grande diversidade de guas residurias. Os mtodos de refluxo fechado so mais econmicos no uso de sais metlicos reagentes, mas requerem homogeneizao das amostras contendo slidos para que sejam obtidos resultados reprodutveis.
2. OBJETIVO Determinar a DQO no meio aqutico e estabelecer uma correlao entre a quantidade de matria orgnica presente no meio.
3. MATERIAL 2 Erlenmeyers 250 mL; 1 Placa aquecedora; 1 Suporte para Pipeta graduada de 25 mL com registro; 2 Abraadeiras; 1 Conta gotas; 1 Proveta graduada de 10 mL; 1 Proveta graduada de 100 mL; 2 Pipetas graduadas de 10 mL; 4-5 Prolas de vidro.
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS 3.1.1. Solues e reagentes a) gua destilada;
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b) Soluo de padro de permanganato de potssio KMnO4 0,0125 N; c) Soluo de cido sulfrico H2SO4 (1:3); d) Soluo de oxalato de sdio Na2C2O4 0,0125 N; 4. MTODOS 1) Soluo teste - adicione 100 mL da amostra + 10 mL da soluo de H2SO4 + 10 mL da soluo de KMnO4; 2) Soluo branco adicione 100 mL de gua destilada + 10 mL da soluo de H2SO4 + 10 mL da soluo de KMnO4; 3) Acrescentar as prolas de vidro e deixar em digesto durante 30 min.; Se o KMnO4 descorar (clarear completamente), adicione mais 10 mL de KMnO4; 4) Adicione 10 mL de oxalato de sdio e titule com KMnO4 at atingir uma colorao rsea permanente;
5. FRMULA
PPM = Oxignio Consumido (K1 N1) (K2 N2) X 100

_________________________________________________________________________________________
Volume da amostra
Onde: K1 - KMnO4 volume total gasto na amostra; K2 - KMnO4 volume total gasto no branco; N1 - Na2C2O4 volume total gasto na amostra; N2 - Na2C2O4 volume total gasto no branco. 6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS MATOS, A. T. Apostila de prticas de laboratrio. Disciplina Poluio Ambiental. Departamento de Engenharia Agrcola e Ambiental. Universidade Federal de Viosa, Viosa, Agosto de 2003
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Prtica 3. OXIGNIO DISSOLVIDO NO MEIO AQUTICO
1. INTRODUO O oxignio indispensvel a praticamente todas as formas de vida, mesmo na gua. A concentrao de oxignio dissolvido em um meio aqutico varivel crucial que determina, em grande medida, o desenvolvimento de organismos neste meio. Em sistemas biolgicos para tratamento de efluentes, a medio e, muitas vezes o controle, da concentrao de oxignio dissolvido fundamental para garantir o desenvolvimento dos micro-organismos adequados e assim o funcionamento do sistema de tratamento de efluentes.
2. OBJETIVO Determinar a concentrao de oxignio dissolvido no meio aqutico e relacion-lo aos organismos que podem ou no se desenvolver nessas condies.
3. MATERIAL balo volumtrico de 250mL, pipeta graduada de 10mL; bureta; erlenmeyer 250mL; 3.1 Reagentes e solues NaCl O,1 mol/L; H2SO4 concentrado; Sulfato de mangans MnSO4 325g/L; Iodeto-Azida alcalino (500g NaOH + 150g KI + gua at 1L + 10g NaN3 em 40mL de H20); Amido 2% (2g de amido e 0,2g cido saliclico gua at 100mL), Tiossulfato de sdio Na2S2O3 0,025M (Dissolva 6,205g de
Na2S2O3.5H2O em gua destilada. Adicione 1,5mL de NaOH 6N ou 0,4g de NaOH slido dilua a 1L); Iodeto de Potssio KI03 0,025M, cido Sulfrico H2SO4 6N;
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4. MTODOS 4.1 Influncia da Temperatura 1. Encha at a marca um balo de 250mL com a amostra a temperatura ambiente (mea a temperatura), adicione 1mL de MnS04 e 1mL de reagente azida de sdio. Ao transferir os regentes coloque a ponta da pipeta na superfcie da amostra; 2. Feche o frasco e misture lentamente por inverses sucessivas. Quando o precipitado se formar (aproximadamente metade do volume do frasco), adicione 1mL de cido sulfrico cone; Tampe novamente o frasco e misture por agitaes sucessivas.
- Se necessria faa uma correo para o volume correspondente a 200mL da amostra devido a perdas por deslocamento com reagentes, ao usar volume dos reagentes de 2mL (1mL sulfato mangans e 1mL de azida) e frasco de 300mL use o seguinte volume da amostra para titulao 200x300/(300-2) = 201mL.
- Titule com tiossulfato 0,025M at colorao palha (cuidado para colorao no ficar transparente), adicione ento algumas gotas de amido e continue a titulao at o primeiro desaparecimento da cor azul.
- Calcule o teor de oxignio dissolvido em PPM, de acordo com a seguinte proporo: 1 mL Na2S2O3 = 1 PPM O2 Dissolvido; - Repita todo o procedimento anterior para uma amostra a 4 C.
4.2. Influncia da salinidade - Repita o procedimento 3.1 para uma amostra contendo NaCl 0,1 mol/L a temperatura ambiente;
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination ofWater and Wastewater. Washington, 1998.
BOEHNKE, D. N.; DELUMYEA, R. D. Laboratory Experiments in Environmental Chemistry. New Jersey : P. Hall, 2000.
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Prtica 4. DETERMINAO DA DUREZA TOTAL DA GUA
1. INTRODUO A dureza total calculada como sendo a soma das concentraes ons clcio e magnsio na gua, expressos como carbonato de clcio. A dureza de uma gua pode ser temporria ou permanente. A dureza temporria, tambm chamada de dureza de carbonatos, causada pela presena de carbonatos de clcio e magnsio. Esse tipo de dureza resiste ao dos sabes e provoca incrustaes. denominada temporria porque os bicarbonatos, pela ao do calor, se decompem em gs carbnico, gua e carbonatos insolveis que se precipitam. A dureza permanente, tambm chamada de dureza de no carbonatos, devida a presena de sulfatos, cloretos e nitratos de clcio e magnsio, resiste tambm a ao de sabes, mas no produz incrustaes por serem seus sais muito solveis na gua. No se decompe pela ao do calor. A portaria n 518/2004 do Ministrio da Sade estabelece para dureza o teor de 500 mg/L em termos de CaCO3 como o valor mximo permitido para gua potvel.
2. OBJETIVO
Dosar a dureza total, clcio e magnsio nas guas superficiais afim de se evitar o acmulo de minerais nas tubulaes.
3. MATERIAL
Erlenmeyer 250 mL Pipeta volumtrica 50 mL Proveta 100 mL Suporte universal Funil Bureta 25 mL Bqueres 3.1 Reagentes e solues: EDTA 0,01 M Soluo tampo pH 10 (67,5 g NH4Cl e 570 mL NH4OH diludos para 1 litro);
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Indicador Eriocrome Black T
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Soluo inibidora de Na2S a 5% (usando Na2S 9H2O) 4. MTODOS 1) Transferir 25 mL da amostra p/ Erlenmeyer e completar para 50 mL com gua destilada; 2) Adicione 1 mL do soluo tampo; 3) Adicione 1 mL da soluo inibidora (Na2S) e 1 a 2 gotas do indicador (Eriocrome Black T) e agite; 4) Titule lentamente com soluo EDTA at o matiz vermelho desaparecer e surgir a cor azul.
5. FRMULA
n mols CaCO3 = n mols EDTA Dureza total em mg/L CaCO3 = mL EDTA x 1000 x Fc mL da amostra Notas: 1. A ausncia de um ponto de viragem definido, geralmente, indica a necessidade de adio de um inibidor ou que o indicador est deteriorado; 2. No leve mais de 5 minutos para a titulao, medido aps a adio da soluo tampo; 3. Caso a dureza da gua seja muito baixa, use amostra maior, at 250 mL adicionando proporcionalmente maior quantidade de soluo tampo, do inibidor e do indicador; 4. Se precisar usar o inibidor adicionar 20 gotas (sulfeto de sdio); 5. Fc = fator de correo do EDTA quando houver e for diferente de 1.
6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS BRASIL. Fundao Nacional de Sade. Manual prtico de anlise de gua. 2 ed. rev. - Braslia: Fundao Nacional de Sade, 2006. 146 p.
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Prtica 5. DETERMINAO DA DUREZA CLCIO E DA DUREZA MAGNSIO
1. INTRODUO A dureza da gua definida em termos da concentrao dos ctions clcio e magnsio - geralmente acompanhados dos nions carbonato, bicarbonato, cloreto e/ou sulfeto. A gua que chega at nossas casas, ou s indstrias e at a gua captada diretamente de uma nascente uma soluo de vrios minerais que se dissolvem na gua pela sua passagem pelo solo e encanamentos. Esses minerais, quase que em sua totalidade sais, no comprometem o uso domstico da gua, mas, em algumas situaes, normalmente quando ricas em sais de clcio e magnsio, podem formar alguns sais insolveis desses ctions e provocar incrustaes e entupimentos das tubulaes. Alm disso, a formao desses sais dificulta ou at impede a formao de espumas, dificultando a ao de detergentes e sabes. Nestes casos temos a chamada gua dura. A gua dura um no risco de sade, mas um incmodo por causa do acmulo mineral em dispositivos eltricos e tubulaes - principalmente em indstrias onde a gua utilizada para o resfriamento de caldeiras. 2. OBJETIVO Dosar a dureza clcio e magnsio nas guas superficiais afim de se evitar o acmulo de minerais nas tubulaes.
3. MATERIAL Erlenmeyer 250 mL Pipeta volumtrica 50 mL Proveta 100 mL Suporte universal Funil Bureta 25 mL Bqueres 3.1 Reagentes e solues:
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS EDTA 0,01 M
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Indicador murexida slido (0,2 g murexida e 100 g NaCl modos conjuntamente e peneirados em 40-50 meshes) NaOH 1 N
4. MTODOS 1) Pipete 50 mL da amostra de gua no Erlenmeyer, adicione 2 mL de hidrxido de sdio 1N afim de se elevar o pH de 12 a 13; 2) Agite o conjunto, junte 0,1 a 0,2 g da mistura de indicador de murexida (a soluo ficar rsea); 3) Titule lentamente com soluo EDTA 0,01 M at o surgimento de um leve tom prpuro. Anote o volume de EDTA gasto. 4) Certifique-se de que o ponto estequiomtrico foi atingido, usando 1 a 2 gotas de EDTA 0,01 M em excesso; 5) Calcule a dureza devida ao on clcio, em mg/L, expressa em termos de CaCO3; 6) Calcule a dureza devida ao magnsio pela diferena entre a dureza total.
5. FRMULA
Dureza clcio em mg/L = mL EDTA x 1000 x Fc mL da amostra
A dureza magnsio dada pela expresso: Dureza magnsio = dureza total (Prtica 4) dureza clcio
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Prtica 6. DETERMINAO DE ACIDEZ TOTAL EM GUAS
1. INTRODUO O gs carbnico livre existente em guas superficiais normalmente est em concentrao menor do que 10 mg/L, enquanto que em guas subterrneas pode existir em maior concentrao. O gs carbnico contido na gua pode contribuir significativamente para a corroso das estruturas metlicas e de materiais base de cimento (tubos de fibro-cimento) de um sistema de abastecimento de gua e por esta razo o seu teor deve ser conhecido e controlado. Sabe-se no entanto que a acidez residual obtida poder ser orgnica, ou de sais minerais de metais pesados, ou acidez mineral, dependendo da existncia da acidez carbnica e do pH final.
2. OBJETIVO Dosar a acidez nas guas superficiais devida ao CO2, cidos minerais e sais hidrolisados.
3. MATERIAL Erlenmeyer 250 mL Pipeta volumtrica 50 e 100 mL Proveta 100 mL Suporte universal Funil Bureta 25 mL Bquer 400 mL Chapa aquecedora Vidro de relgio Cronmetro 3.1 Reagentes e solues: Hidrxido de sdio NaOH 0,02 N Soluo alcolica de fenolftalena
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS 4. MTODOS 4.1 Determinao da acidez total das guas
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1) Pipete 100 mL da amostra, transfira para Erlenmeyer de 250 mL e adicione 3 gotas de fenolftalena, como indicador; 2) Titule pelo NaOH 0,02 N, at o surgimento da primeira colorao rosa persistente; 3) Anote o volume de NaOH 0,02 N gasto e calcule a acidez como segue: PPM de acidez (em termos de CaCO3) = volume de NaOH 0,02 N x 10. 4.2 Determinao da acidez carbnica das guas 1) Determine a acidez total conforme item 4.1; 2) Pipete 100 mL da amostra, transfira-os para Erlenmeyer de 250 mL e submeta-os a fervura em chapa eltrica por, exatamente, 3 minutos; 3) Aps isto, retire o Erlenmeyer da chapa, cubra com o vidro de relgio e deixe esfriar (NO AGITE); 4) Aps resfriado (temperatura ambiente), adicione 3 gotas de fenolftalena; 4a) Caso a amostra se colore de rosa ou vermelho, considere a anlise concluda, e toda a acidez anteriormente existente na gua era acidez carbnica; 4b) Se a amostra permanecer incolor, titule-a com NaOH 0,02 N at colorao rsea. Neste caso, calcule a acidez carbnica como se segue: PPM acidez carbnica (em termos de CaCO3) = (volume de NaOH 0,02 N gasto na determinao da acidez total volume de NaOH 0,02 N gasto no subitem 4b) x 10
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Prtica 7. DETERMINAO DE ALCALINIDADE TOTAL EM GUAS
1. INTRODUO A alcalinidade total de uma gua dada pelo somatrio das diferentes formas de alcalinidade existentes, ou seja, a concentrao de hidrxidos, carbonatos e bicarbonatos, expressa em termos de Carbonato de Clcio. Podese dizer que a alcalinidade mede a capacidade da gua em neutralizar os cidos. A medida da alcalinidade de fundamental importncia durante o processo de tratamento de gua, pois, em funo do seu teor que se estabelece a dosagem dos produtos qumicos utilizados. Normalmente as guas superficiais possuem alcalinidade natural em concentrao suficiente para reagir com o sulfato de alumnio nos processos de tratamento. Quando a alcalinidade muito baixa ou inexistente h a necessidade de se provocar uma alcalinidade artificial com aplicao de substncias alcalinas tal como cal hidratada ou Barrilha (carbonato de sdio) para que o objetivo seja alcanado. Quando a alcalinidade muito elevada, procede-se ao contrrio, acidificando-se a gua at que se obtenha um teor de alcalinidade suficiente para reagir com o sulfato de alumnio ou outro produto utilizado no tratamento da gua.
2. OBJETIVO Dosar a alcalinidade nas guas superficiais visando capacidade da gua em neutralizar os cidos e seu tratamento aos ndices adequados.
3. MATERIAL Pipeta volumtrica de 50 mL; Frasco Erlenmeyer de 250 mL; Bureta de 50 mL; 3.1 Reagentes e solues: Fenolftalena; Indicador metilorange; Mistura Indicadora de Verde de Bromocresol/Vermelho de Metila;
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Soluo de cido Sulfrico 0,02 N; Soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1 N.
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4. PROCEDIMENTOS 1) Tomar 50 mL da amostra e colocar no Erlenmeyer; 2) Adicionar 3 gotas da soluo indicadora de verde de
bromocresol/vermelho de metila; 3) Titular com a Soluo de cido Sulfrico 0,02 N at a mudana da cor azul-esverdeada para rseo; 4) Anotar o volume total de H2SO4 gasto (V) em mL. 5. FRMULA
Alcalinidade total em mg/L de CaCO3 = V x 20
Notas: 1. Usar 0,05 mL (1 gota) da soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1 N, caso a amostra apresente cloro residual livre; 2. Utilizar esta tcnica na ausncia de alcalinidade fenolftaleina; 3. Caso haja alcalinidade Fenolftaleina, adicionar, antes da mistura indicadora de verde de bromocresol/ vermelho de metila 3 gotas de Fenolftaleina e titule com H2SO4 0,02N at desaparecer a cor rsea formada. Em seguida continuar no passo b da tcnica; 4. A alcalinidade Fenolftalena s poder ocorrer se o pH da amostra for maior que 8,2; 5. Na impossibilidade de conseguir a mistura indicadora de verde de bromocresol/vermelho de metila, usar o indicador de metilorange. Nesse caso o ponto de viragem no passo 3 da tcnica ser de amarelo para alaranjado; 6. O ponto de viragem quando se usa o indicador verde de
bromocresol/vermelho de metila mais ntido do que quando se usa metilorange;
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7. A frmula acima para ser utilizada quando se usa uma amostra de 50 mL. Quando for usado 100 mL de amostra, o volume (V) passar a ser multiplicado por 10; 8. Fc Fator de correo da soluo titulante.
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS ANLISE DO SOLO Coleta de Amostras
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1. INTRODUO De uma forma geral, a anlise de solo formada por uma corrente: Coleta de Amostras Anlises Laboratoriais Interpretao dos Resultados. Portanto, as responsabilidades pela qualidade das amostras so geralmente do proprietrio, cabendo ao laboratrio analis-las sem questionar como foram coletadas do solo.
2. OBJETIVO Coletar uma pequena quantidade de terra que represente toda uma rea a ser amostrada.
3. MATERIAL Amostras de diferentes tipos de solo
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS 3.1 Ferramentas para coleta
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Figura 11. Diferentes ferramentas utilizadas para coleta de amostras de solo. Sugerem-se as mais comuns nas propriedades rurais: f p reta; g enxado; h balde; i saco plstico. O instrumento a ser utilizado para a retirada da amostra dever satisfazer as seguintes condies: Ser capaz de tomar pequenos, suficientes e iguais volumes de solo de cada local de amostragem para compor a amostra composta que ser enviada ao laboratrio. Ser fcil de limpar. Ser adaptado a diferentes tipos de solo. Ser resistente e durvel. Ser de fcil uso e possibilite uma coleta rpida das amostras. Qualquer que seja o equipamento utilizado na amostragem deve-se tomar o cuidado de retirar da superfcie do solo as plantas e restos vegetais.
4. PROCEDIMENTO DE COLETA 1) possvel tambm a mostrar adequadamente o solo com um enxado ou p reta. Os cuidados e nmero de amostras so os mesmos descritos para as outras ferramentas;
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2) Aps a limpeza superficial do terreno, faa um buraco em forma de cunha na profundidade de 0-20 cm, deixando uma parede vertical. 3) Corte, com o enxado, ou com a p reta, uma fatia de cima at embaixo e transfira para o balde ou saco plstico.
Figura 12. Coleta-se uma amostra de 2-3 cm de solo, a pelo menos 20 cm de profundidade.
Figura 13. Elimina-se as fatias laterais e amostra-se somente o miolo da fatia. 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS COMISSO DE FERTILIDADE DO SOLO DO ESTADO DE MINAS GERAIS. Recomendaes para o uso de corretivos e fertilizantes em Minas Gerais; 4 aproximao. Lavras, 1989. 176p EMBRAPA. Manual de mtodos de anlises de solo. Rio de Janeiro, CNPS,1979.
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Prtica 8. DETERMINAO DO pH E DOS METAIS TROCVEIS DO SOLO
1. INTRODUO A disponibilidade de micronutrientes no solo afetada por fatores, entre eles pH, teor de matria orgnica (MO), quantidade e tipo de argila e de xidos e hidrxidos de Fe e Al, CTC, potencial redox do solo, temperatura e umidade, alm da atividade microbiana. Segundo Shuman (1998), a formao de complexos metlicos com compostos orgnicos, principalmente cidos hmicos e flvicos, diminui a disponibilidade e toxidez de metais pesados para as plantas e reduz sua mobilidade no solo. A capacidade de reteno de metais do solo dinmica e pode ser alterada pelo manejo. Os principais fatores responsveis pelo aumento da capacidade de reteno do solo so: o incremento da matria orgnica com adubao orgnica, adubao verde, cobertura morta e o aumento de pH (Nachtigall et al. 2009).
2. OBJETIVO Determinar o pH, alumnio, magnsio e clcio trocveis de amostras de solo.
3. MATERIAL Pipeta volumtrica de 50 mL; Pipeta de 2 mL; Frasco Erlenmeyer de 250 mL; Bureta de 50 mL; Bquer 250 mL; Peagmetro; 3.1 Reagentes e solues: EDTA 0,025mol/L; Erio-T 0,5%; Tampo pH=10; NaOH 0,025 N; Azul de bromotimol 0,1%; KOH 10%;
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS KCl 1mol/L; Trietanolamina 10%; Murexida;
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4. PROCEDIMENTOS 4.1 Determinao do pH em gua e em HCl 1) Transfira 10 mL de solo seco ao ar para bquer e adicione 25 mL de gua destilada; 2) Transfira 10 mL de solo seco ao ar para outro bquer e adicione 25 mL de KCI 1M; 3) Agite durante 1 minuto e deixe em repouso por 10 minutos, aps esse tempo agite novamente; 4) Faa a leitura do pH, mergulhando o eletrodo no sobrenadante e sem agitao; 5) Interprete os resultados de acordo com a tabela abaixo:
Tabela 1. Tipo de acidez do solo relacionada s condies.

pH H2O > KCl H2O = KCl H2O < KCl H
+
Condio H e Al H e Al
+ + +3 +3
Tipo de Acidez Potencial Ativa* Solos argilosos e interperizados
H2O < KCl H2O = KCl H2O > KCl
absorvidos livres
Altos teores de Al2O3 Fe2O3
(*) A acidez ativa (pH em gua) no fornece a indicao da concentrao total dos cidos no solo, mas fornece uma estimativa da concentrao de H+ na soluo do solo;
4.2 Determinao do alumnio trocvel 1) Transfira 10g de solo seco ao ar para bquer e adicione 100 mL de KCI 1 M, agite durante 5 minutos e deixe em repouso por 12h ou filtre. Esse filtrado ser utilizado para determinao do alumnio, clcio e magnsio; 2) Do extrato obtido pipete 25 mL para erlenmeyer, adicione 3 gotas de azul de bromotimol e titule com NaOH 0,025 N, at viragem para azul;
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Calcule teor de alumnio trocvel pela expresso: meq de Al+3 / 100 g de solo = V . f onde: V = volume (mL) do NaOH 0,025 N consumido; f = fator de correo da soluo de NaOH;
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4.3 Determinao do clcio e magnsio trocveis 1) Pipete 25 mL do extrato obtido com KCl 1M na determinao do alumnio, transfira para erlenrneyer e adicione 2 mL de tampo pH= 10 e 2 mL de trietanolamina 50%; 2) Adicione 0,05 g de Erio-T e titule com EDTA 0,025 M at viragem para violeta, anote o volume (mL) consumido V2. 3) Pipete outra alquota de 25 mL do extrato com KCl 1M e transfira para erlenrneyer, adicione 2 mL de trietanolamina 50% e 2mL KOH 10%; 4) Adicione 0,05 g de murexida e titule com EDTA 0,025 M at viragem para violeta, anote o volume (mL) consumido V1. Calcule os teores de Clcio e Magnsio pelas expresses: meq Ca+2 / 100 g solo = V1 . f meq Mg+2 / 100 g solo = (V2 V1) . f 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS NACHTIGALL, G.R.; NOGUEIROL, R.C.; ALLEONI, L.R.F. Extrao seqencial de Mn e Zn em solos em funo do pH e adio de cama-de-frango. Revista Brasileira de Engenharia Agrcola e Ambiental, v.13, n.3, p.240249, 2009.
SHUMAN, L. M. Effect of organic waste amendments on cadmium and lead in soil fractions of two soils. Communications in Soil Science and Plant Analysis, v.29, p.2939-2952, 1998.
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Prtica 9. BIOACUMULAO DO CIDO BENZICO
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1. INTRODUO O cido benzico (C6H5COOH) um composto aromtico utilizado como germicida na preservao de alimentos, na sntese de corantes e como coadjuvante farmacolgico, tendo ao anti-fngica. A Bioacumulao um processo que ocorre quando poluentes se acumulam em elevadas
concentraes nos organismos, independente do nvel trfico. O processo pode ocorrer de forma direta, efetuada diretamente a partir do meio ambiente, ou indireta, quando ocorre por meio de alimentao. A exposio de um ser vivo aqutico a uma gua contaminada por metais pesados pode provocar a absoro pelo organismo, entrando assim nos seus tecidos, e posteriormente, ao servir de alimento a seres de um nvel trfico mais elevado, contaminar esse outro organismo, fazendo com que o contaminante suba na cadeia alimentar. A contaminao da cadeia alimentar provoca um aumento da concentrao do contaminante a cada nvel trfico, designando-se o processo por bioampliao.
2. OBJETIVO Determinar o coeficiente de partio do cido benzico entre fase aquosa e fase orgnica.
3. MATERIAL Pipeta volumtrica de 5 mL; Erlenmeyer de 250 mL; Bureta de 50 mL; Bquer 100 mL; Funil de separao de 100 mL; Bico de Bunsen; Tela de alumnio; Balana de preciso; Colher de pesagem; 3.1 Reagentes e solues:
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Hexano; NaOH 0,1 N; cido benzico; Fenolftaelina 0,1%.
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4. PROCEDIMENTOS 1) Transfira 25 mL de gua e 25 mL de hexano para funil de separao; 2) Pese 1,2 g de cido benzico e transfira para o funil, agitando por 8 minutos, tomando cuidado para NO AQUECER OS LQUIDOS COM O CALOR DAS MOS; 3) Deixar o funil em repouso at formar as duas camadas; 4) Transferir a camada inferior para um bquer, desprezando a camada de interface entre a fase aquosa e a orgnica; 5) Deixar a fase orgnica no funil; 6) Pipete uma alquota de 5 mL da fase aquosa para erlenmeyer; 7) Adicione ao erlenmeyer 25 mL de gua e uma gota de fenolftalena, aquea at a ebulio e titule com soluo de NaOH 0,1 N at viragem para rosa, anote o volume consumido; 8) Volte ao funil de separao e pipete uma alquota de 3 mL da fase orgnica para um erlenmeyer; 9) Adicione ao erlenmeyer 25 mL de gua e uma gota de fenolftalena, aquea at a ebulio e titule com soluo de NaOH 0,1 N at viragem para rosa, anote o volume consumido; 10) Calcule as concentraes (moI/L) do cido benzico nas fases aquosa (Maq) e orgnica (Morg) de acordo com as expresses: Meq = M/PM Logo M = Meq . PM Se Meq = V . Fc . V Ento tem-se: Mfase = V . N . Fc . PM Onde: Meq = miliequivalente
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS M = molaridade V = volume do NaOH N = normalidade do NaOH Fc = Fator de correo do NaOH PM = Peso molecular do cido benzico
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Nota: - Para calcular as concentraes em mol/L deve-se considerar o V (volume gasto na titulao) em mL por 1000 mL; Ex.: Se foram gastos 2,2 mL na titulao o V = 2,2/1000 = 0,0022
11) Calcule o coeficiente de partio do cido benzico pela expresso:
K = Maq/Morg onde: Maq= molaridade na fase aquosa Morg= molaridade na fase orgnica. 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS VIEIRA, C.A.; SILVA, N.P.; MARTINS, D.F.C. Determinao do coeficiente de partio do cido benzico em diferentes solventes orgnicos. In.: 46 CONGRESSO BRASILEIRO DE QUMICA - Salvador-BA - 25 a 29 de setembro de 2006.
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Prtica 10. REMOO DE COMPOSTOS ORGNICOS VOLTEIS PELO CARVO ATIVO
1. INTRODUO Compostos orgnicos volteis constituem uma classe de poluentes do ar que so predominantemente emitidos na atmosfera pela frota veicular (combusto de combustveis fsseis e perdas evaporativas) e por processos industriais, mas que tambm podem ser gerados naturalmente por processos metablicos de certos tipos de vegetais (DERWENT, 1995 apud
ALBUQUERQUE e TOMAZ, 2003). Os COV tem sido alvos de estudo devido aos impactos ambientais negativos que provocam quando presentes na atmosfera, os quais incluem prejuzos aos seres humanos, animais e plantas. Quando emitidos, os COV participam de reaes fotoqumicas, entre elas a de formao do oznio troposfrico (SEINFELD e PANDIS, 1998; ATKINSON, 2000), poluente que o principal responsvel pelos eventos de ultrapassagem de padres de qualidade do ar no estado de So Paulo (CETESB, 2006).
2. OBJETIVO Determinar a taxa de adsoro do cido actico pelo carvo ativo temperatura ambiente.
3. MATERIAL 01 Pipeta graduada 10 mL; 01 Proveta 50 mL; 01 Pra para pipeta; 10 Erlenmeyers 250 mL; 10 Tampas (rolhas ou similar) para erlenmeyers; 01 Bureta 25 mL; 01 Basto de vidro; 01 Balana de preciso; 01 Esptula; 01 Papel de pesagem; 01 Suporte universal;
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS 02 Garras para suporte; 01 Funil; 05 Papeis filtro ou chumaos de algodo; 3.1 Reagentes e solues CH3COOH 0,4 N; NaOH O,1 N; Fenolftalena 0,1 %; Carvo ativo em p.
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4. PROCEDIMENTOS 1) Em cada um dos cinco erlenmeyers com tampa, e rotulados de 1 a 5, contendo 5 g de carvo ativo, colocar com auxlio de urna bureta, soluo de CH3COOH 0,4 N e gua de acordo com a tabela:
Erlenmeyer V (mL) CH3COOH 0,4 N V (mL) de gua destilada
1 25 25
2 15 35
3 7,5 42,5
4 4 46
5 2 48
2) Agitar cada amostra por 5 minutos, tendo cuidado de mant-Ias na mesma temperatura, segurando o erlenmeyer na parte superior; 3) Filtrar as solues e coletar os filtrados em erlenmeyers rotulados; 4) Pipetar 20 mL de cada filtrado para outro erlenmeyer, adicionar 2 gotas de fenolftalena e titular com NaOH 0,1 N, anotar volume gasto;
CALCULAR: I - A molaridade do CH3COOH nas solues preparadas pela diluio com gua (Concentrao inicial) Mi = 0,4 . VCH3COOH /50 II - A molaridade do CH3COOH nas solues aps a adsoro em carvo (Concentrao final) Mf = 0,1 . Vgasto de NaOH/20 III - A quantidade adsorvida em cada soluo:
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Mads = Mi - Mf IV - A taxa de adsoro para cada soluo: % adsoro = 100. Mads / Mi V - Trace um grfico de % adsoro versus Mi 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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ATKINSON, R. Atmospheric chemistry of VOCs and NOx. Atmospheric Environment, v. 34, p. 2063-2101, 2000.
ALBURQUERQUE, E. L; TOMAZ, E. Concentrao indoor e outdoor de COV selecionados em atmosfera urbana. In: CONGRESSO INTERAMERICANO DE QUALIDADE DO AR, 2003, Canoas. Anais...Canoas, 2003. CDROM
CETESB, Relatrio da qualidade do ar no estado de So Paulo 2005. So Paulo: CETESB, 2006, 140 p.
SEINFELD, J. H.; PANDIS, S. N. Atmpospheric chemistry and physics: from air pollution to climate change, John Wiley and Sons, Inc. USA, 1998, 998 p.
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Prtica 11. MTODO VISUAL SIERP
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1. INTRODUO O ndice de qualidade do ar (IQA) um indicador padronizado do nvel de poluio do ar numa determinada zona, e resulta de uma mdia aritmtica calculada para cada indicador, de acordo com os resultados de vrias estaes da rede de medio da zona (DGA, 2001). Mede sobretudo a concentrao de oznio e partculas ao nvel do solo, podendo contudo incluir medies de SO2,e NO2 (IA, 2009). Os parmetros dos ndices variam de acordo com a agncia ou entidade que os define, podendo haver vrias diferenas. A converso de dados analticos e cientficos num ndice de fcil compreenso permite que a populao em geral tenha um acesso mais fcil e compreensvel da informao. Usualmente disponibilizada em tempo real a evoluo do IQA, especialmente no caso de grandes aglomerados urbanos ou industriais (QUALAR, 2009).
2. OBJETIVO Avaliar diferentes amostras de sedimentos atmosfricos que
representem reas (bairros) da cidade.
3. MATERIAL Garrafa Peti 2 L; Bacia com volume de ~2 L; Papel filtro; Bomba Vcuo;
4. PROCEDIMENTOS 1) Colocar 2 L de gua da torneira na bacia e deixar em contato com o ar na rea (bairro) a ser amostrada por 24 horas; 2) Coletar a gua e transportar ao laboratrio para anlise; 3) Filtrar com o auxlio de uma bomba vcuo e papel filtro afim de se obter todos os sedimentos e partculas presentes na amostra;
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4) Montar um painel com a utilizao de mapas e os resultados dos demais grupos.
NOTAS: - Esta prtica no visa confeco de um relatrio, mas sim a montagem de um painel a partir dos resultados;
5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS DGA, ndice de Qualidade do Ar, Direco Geral do Ambiente, Novembro, Portugal, 2001.
IA, Instituto do Ambiente - Qualidade do Ar - Previso do ndice da Qualidade do Ar. <www2.dao.ua.pt.> Acesso em 16 de Junho de 2009.
QUALAR, <http://www.qualar.org/INDEX.PHP?page=1&subpage=3> Acesso em 16 de Junho de 2009.
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Prtica 12. COLIFORMES EM AMOSTRAS HDRICAS
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1. INTRODUO Coliformes tratam-se de bactrias formadas por grupos de diferentes gneros que incluem os Klebsiella, Escherichia, Serratia, Erwenia e Enterobactria. As bactrias do grupo Coliforme habitam o intestino de animais mamferos, como o homem, e so largamente utilizadas na avaliao da qualidade das guas, servindo de parmetro microbiolgico bsico s leis de consumo criadas pelos governos e empresas fornecedoras que se utilizam desse nmero para garantir a qualidade da gua para o consumo humano. Nesse caso, a presena de um nmero alto de Coliformes na gua significa um nvel elevado de poluio e risco sade pela presena de organismos patognicos. H os Coliformes Totais, que so grupos de bactrias gramnegativas, que podem ou no necessitar de Oxignio - Aerbicas ou Anaerbicas, que no formam esporos, e so associadas decomposio de matria orgnica em geral. H tambm os Coliformes Fecais, tambm chamados de Coliformes Termotolerantes, pois toleram temperaturas acima de 40C e reproduzem-se nessa temperatura em menos de 24 horas. Este grupo associado s fezes de animais de sangue quente. Pelo estudo da concentrao dos Coliformes nas guas pode-se estabelecer um parmetro indicador da existncia de possveis microorganismos patognicos que so responsveis pela transmisso de doenas pelo uso ou ingesto da gua, tais como a febre tifide, febre paratifide, disenteria bacilar e clera.
2. OBJETIVO Determinar o nmero mais provvel (NMP) de coliformes totais, coliformes termotolerantes e Escherichia coli.
3. MATERIAL 9 Tubos de ensaio 9 mL para os meios; 3 Tubos de ensaio 9 mL para as diluies; Ponteiras de 1 mL; Pipeta automtica de 1 mL;
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MANUAL DE AULAS PRTICAS EM ANLISES AMBIENTAIS Tubos de Duhran; Ala de platina; Banho-maria a 44,5 0,2 C; Fonte de luz ultravioleta (UV). 3.1 Reagentes e solues Caldo Lactosado; Meio EC-MUG; Caldo verde brilhante bile a 2%; Soluo salina.
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4. PROCEDIMENTOS 1) Homogenizar as amostras de gua por inverso e, com o auxlio de uma pipeta estril, inocular 10 mL das amostras em 90 mL de soluo salina em uma srie de 3 tubos (fazer triplicata); 2) Em seguida fazer as diluies seriadas decimais em soluo salina: 1 mL em 9 mL nas diluies 10-1 (1:10); 10-2 (1:100) e 10-3 (1:1000); 3) Inocular 10 mL das amostras (diluies) em meio contendo caldo lactosado de concentrao dupla; 4) Transferir 1,0 mL para tubos contendo caldo lactosado em concentrao simples e inocular em 3 tubos (triplicata); 5) Homogeneizar os tubos e incubar a 35-37 C por 48 horas; 6) Aps este perodo observar a turvao e a presena de gs no interior do tubo de Duhran presente no meio ANOTAR OS RESULTADOS; 7) Dos tubos considerados positivos, turvos e com bolhas de gs no interior do tubo de Duhran, TRANSFERIR uma alada para caldo verde brilhante bile a 2%; 8) Incubar os tubos a 35-37 C por 48 horas; OBS.: O teste confirmativo para coliformes totais ser considerado positivo para os tubos que apresentarem formao de gs (CO2); 9) A partir dos tubos positivos de caldo verde brilhante bile a 2%, transferir uma alada para tubos contendo meio EC-MUG, para a confirmao da presena de coliformes termotolerantes e E. coli;
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10) Incubados os tubos em banho-maria a 44,5 0,2 C durante 24 horas. OBS.: Os tubos seram considerados positivos, para coliformes termotolerantes, quando apresentarem a presena de bolhas (CO2) no interior do tubo de Duhran; 11) Determinar a presena de E. coli pela exposio dos tubos luz ultravioleta (UV 600nm) sendo considerados positivos aqueles que emitirem fluorescncia.
CALCULAR:
Os resultados sero expressos como NMP (nmero mais provvel) de bactrias do grupo coliforme e/ou coliformes termotolerantes e/ou E. coli por 100 mL de amostra (CLESCERI et al., 2005).
NOTAS: - Se a gua da amostra a ser coletada conter cloro, inativ-lo previamente com Tiossulfato de sdio 0,1 N; - Caso seja necessrio, em aula prtica, acondicionar as culturas aps os perdos 24 ou 48 horas em geladeira;
5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS CLESCERI, L.S.; GREENBERG, A.E.; A.D., EATON. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 21st Ed. Washington: AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, 2005. 1600p.
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ANEXO 1
COMO USAR O PAQUMETRO Paqumetro Universal o instrumento de medir mais utilizado na prtica cientficas. So construdos de ao inoxidvel temperado e sua escala graduada em milmetros e polegadas (inch = 1" = polegada = 25,4 mm). O cursor provido de uma graduao especial, chamadas de Vernier ou Nnio, que indica o valor da dimenso tomada.
Figura 1. Estruturas bsicas de um paqumetro.
Antes de usar, e aps o uso, deve-se limpar bem o paqumetro para eliminar a sujeira e o p depositado no instrumento, especialmente nas superfcies de medio e nas superfcies de contato da rgua com o cursor. Nunca deve-se forar o paqumetro ao coloc-lo ou retir-lo da pea. Ao medir, usa-se uma presso apropriada e constante, fazendo a leitura sem retirar o instrumento da pea (abre-se o paqumetro antes de retir-lo) sempre que possvel. Cuidado com choques, como por exemplo, de peas sobre o instrumento ou queda do mesmo no cho. Nunca deve-se utilizar os bicos de medio como compasso, riscador, chave inglesa ou martelo. Recomenda-se guardar o instrumento no seu estojo e coloc-lo em lugar seco e sem influncia direta de calor ou sol.
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Uma caracterstica de um instrumento de medio a sensibilidade, que a menor medida que ele pode efetuar. O paqumetro utilizado para fazer medies com rapidez, em peas cujo grau de preciso aproximado at 0,02 mm ou 1/128" (polegadas). Para calcular a aproximao, ou seja, a sensibilidade do paqumetro (em milmetros ou polegadas), divide-se o menor valor da escala fixa (rgua) pelo nmero de divises da escala mvel (Vernier ou Nnio). No sistema mtrico, a escala fixa dividida em intervalos de 1 mm e existe Vernier com 10, 20 e 50 divises. Tem-se, portanto, paqumetros com as seguintes sensibilidades: Vernier com 10 divises: S = 1 / 10 - S = 0,1mm Vernier com 20 divises: S = 1 / 20 - S = 0,05mm Vernier com 50 divises: S = 1 / 50 - S = 0,02mm N sistema ingls de polegadas fracionrias, a menor frao 1/16" e o Vernier tem 8 divises: S = (1/16")/8 - S=(1/16")*(1/8) - S=1/128"
Figura 2. Exemplo de leitura de um paqumetro.
A diferena, entre as divises da escala e do Vernier, de 0,1 que conseguida pela diviso de 9mm em 10 partes iguais. Ao fazer coincidir o trao n 1 do Vernier com o n 1 da escala, teremos deslocado 0,1 no cursor, fazendo coincidir os traos n 2, teremos deslocado 0,2 e assim sucessivamente. Veja exemplo abaixo:
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Figura 3. Outro exemplo de leitura de um paqumetro.
Na escala, temos 3mm e frao de milmetro. Essa frao determinada pelo trao do Vernier (5) que coincide, com o trao da escala, assim teremos 3,5mm.
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ANEXO 2
ROTEIRO PARA RELATRIO DE AULAS PRTICAS Observaes gerais: - o tempo verbal deve ser padronizado num texto. Uma vez passado, sempre passado... - tente usar a terceira pessoa e evitar no nosso experimento, meus resultados pipetamos etc.... preferir no experimento realizado ..... , os resultados obtidos .... - defina os itens do seu relatrio com clareza. Agrupe assuntos semelhantes e separe assuntos no relacionados. Use subitens para organizar melhor os assuntos; - sempre procure numerar os itens para facilitar o acompanhamento da hierarquia dos itens (se a hierarquia for importante, evite marcadores); - use termos tcnicos; - respeite a grafia corretas de nomes cientficos; - padronize a formatao: tamanhos e tipos de letras, tanto no texto quanto nos ttulos; procure usar pargrafos alinhados pelas duas margens (esquerda e direita); mantenha sempre a mesma quantidade de espaos entre pargrafos e ttulos, etc; - no enfeite demais seu relatrio. Ele um texto tcnico e deve ter aspecto profissional. bom ter uma capa com: Nome da Instituio, nome da disciplina, nome do professor, ttulo da prtica (ou prticas), integrantes do grupo e turma, cidade/estado e data. 1. Introduo Um ou dois pargrafos rpidos para contextualizar o assunto de que tratou a prtica e do qual tratar o relatrio. No propriamente um resumo mas uma introduo ao assunto. Apenas informaes relevantes ao trabalho devem ser apresentadas! 2. Objetivo Descrio do objetivo da prtica. Pode haver mais de um objetivo, um mais geral e outro(s) especficos(s). Normalmente os objetivos so apresentados como aes obter, extrair, observar, analisar, caracterizar etc Exemplo: Objetivo geral: Apresentar diferentes tcnicas de extrao de DNA. Objetivo especfico: Extrair DNA genmico de Escherichia coli. 3. Material e Mtodos Descrio do material ( material mesmo e no materiais) e dos procedimentos (que so os mtodos) utilizados na aula. Pode estar subdividido em itens como: Material, Reagentes e solues, Material, Equipamentos, etc. Ou seja, o material pode estar descrito num subitem independente ou pode estar includo na descrio do procedimento.
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Exemplo: Ressuspender o pelete em 50 mL de tampo TE (Tris 10mM, EDTA 1mM, pH=8,0) utilizando pipeta automtica Gilson modelo P200 A composio do tampo TE e o modelo de pipeta utilizado poderiam ser descritos num item anterior descrio do procedimento. O tempo verbal utilizado no material e mtodos pode ser o passado (o que foi feito) ou o infinitivo (ressuspender, pipetar, adicionar, etc). A descrio deve ser sempre no impessoal (ex.: Foi adiconado ou adicionouse ao invs de Eu adicionei ou Adicionamos) 4. Resultados e Discusso Podem estar agrupados em um nico item ou no. Em itens separados, os resultados so primeiro descritos e depois, no item de Discusso, so analisados. A apresentao dos resultados uma das partes mais difceis do relatrio pois voc deve descrever os resultados obtidos sem incluir necessariamente a interpretao desses resultados. Normalmente os resultados so apresentados em figuras, esquemas, tabelas, grficos etc que apresentam legendas prprias (Por exemplo, Figura 1: Representao esquemtica do resultado do fracionamento de DNA genmico de bactria E. coli em gel de agarose 1%. (1) grupo 1; (2) grupo 2 etc etc (a numerao corresponde aos slots do gel que devem estar marcados no esquema). A descrio do que est na figura deve ser apresentada de forma descritiva no texto, por exemplo: Os DNAs genmicos de E. coli cepa tal e tal foram obtidos pela tcnica xyz. Cada grupo realizou seu prprio procedimento segundo as orientaes descritas em material e mtodos ( l que a descrio do procedimento deve ficar). Os resultados do fracionamento do DNA genmico de E. coli esto apresentados na figura 1 e mostraram (ou mostram) a presena de DNA em todas as amostras analisadas. Trs bandas foram facilmente visualizadas, uma mais prxima aos slots e outras duas prximas uma da outra no final do gel, numa regio onde tambm foi observado uma espcie de rastro difuso de material. Voc deve considerar que a pessoa que est lendo o relatrio no conhece o assunto, no fez o procedimento e no tem a menor idia do que est sendo apresentado nos resultados. O segredo ser o mais direto e sinttico possvel, sem omitir nenhum tido de informao que ajude a compreenso dos resultados (QUE CORRESPONDEM A PARTE MAIS IMPORTANTE DO RELATRIO). Nos trabalhos cientficos, a discusso dos resultados feita comparando-se os resultados encontrados com outros j obtidos anteriormente por outros trabalhos. O objetivo da discusso dos resultados mostrar se estes foram os esperados ou no, se atenderam ao objetivo inicial do trabalho ou no, se trouxeram novas informaes ao que j se conhecia ou no, se so suficientes para definir o assunto de que tratam ou se h necessidade de trabalhos complementares e quais so eles. Num relatrio de aula prtica, a discusso deve ser relacionada aos problemas encontrados durante a realizao da prtica e aos seus possveis reflexos nos resultados, assim como providncias para minimizar esses problemas.
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5. Concluso A concluso do relatrio diz respeito diretamente ao seu objetivo. Em suma este item deve dizer se o objetivo foi alcanado ou no. 6. Bibliografia Citar toda a bibliografia consultada; H norma para citao bibliogrfica que pode ser obtida nos artigos cientficos e livros.
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ANEXO 3
TABELA DE PARMETROS DA QUALIDADE DA GUA
Padro para corpo dgua Classes Parmetro Temperatura Dureza Total Acidez pH DBO
5
Padro de lanamento
Unidade C mg/L mg/L
1 500 <10 6a9
2 -
3 -
4 <40
6a9 5(3)
6a9 10(3)
6a9 -
6,5 a 8,5 60(4) <90
mg/L mg/L mg/L Org/100 mL Org/100 mL
DQO OD Coliformes Totais Coliformes Fecais
6 1.000 200
5 5.000 1.000
4 20.000 4.000
2 -
Classificao das guas doces: Classe 1 Abastecimento domstico aps tratamento simplificado; proteo das comunidades aquticas; recreao de contato primrio (natao, esqui aqutico e mergulho); irrigao de hortalias que so consumidas cruas e de frutas que se desenvolvem rentes ao solo, sem ser ingeridas cruas e sem remoo de pelcula; e criao natural e/ou intensiva (aquicultura) de espcies destinadas alimentao humana. Classe 2 Abastecimento domstico, aps tratamento convencional; proteo das comunidades aquticas; recreao de contato primrio, natao, esqui aqutico e mergulho; irrigao de hortalias e plantas frutferas; e criao natural e/ou intensiva (aquicultura) de espcies destinadas alimentao humana. Classe 3 Abastecimento domstico, aps tratamento convencional; irrigao de culturas arbreas, cerealferas e forrageiras; e dessedentao de animais. Classe 4 Navegao comercial; harmonia paisagstica; e usos menos exigentes.
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ANEXO 4
TABELA PARA AVALIAO DA DUREZA DA GUA Tabela: Classificao de guas naturais, de acordo com a concentrao total de sais de clcio e de magnsio, expressa como carbonato de clcio CaCO3 (mg L-1).
Classificao guas moles guas moderadamente moles guas levemente duras guas moderadamente duras guas duras guas muito duras Concentrao como CaCO3 (mg L ) < 50 50 a 100 100 a 150 150 a 250 250 a 350 > 350
-1
Fonte: ROCHA, J.C.; ROSA, A.H.; CARDOSO, A.A. Introduo a Qumica Ambiental. 2 Ed. Porto Alegre: Bookman, 2009. p.82
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ANEXO 5
TABELA PARA AVALIAO DA ALCALINIDADE DA GUA Tabela: A alcalinidade total de uma gua expressa em mg/L de CaCO3 (miligramas por litro de carbonato de clcio). A Tabela abaixo mostra a relao da alcalinidade com a capacidade tampo (UFRRJ, 2009).
Classificao Baixa capacidade tampo Boa capacidade tampo Alcalinidade <10 ppm 20 a 200 ppm
Fonte: UFRRJ. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Liminologia: Alcalinidade. Disponvel em: < http://www.ufrrj.br/institutos/it/de/acidentes/alc.htm> Acesso em 30 de abril de 2009.
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ANEXO 6
TABELA DO NMERO MAIS PROVVEL (NMP) Tabela: ndice NMP e limite de confiana para vrias combinaes de resultados positivos quando so usados trs tubos com as seguintes diluies, 10-1, 10-2 e 10-3.
Combinao de tubos positivos 0-0-0 0-1-0 NMP por grama ou mL <3 3 Inferior <1 limite de 95% Superior 17
1-0-0 1-0-1 1-1-0 1-2-0
4 7 7 11
<1 2 2 4
21 27 28 35
2-0-0 2-0-1 2-1-0 2-1-1 2-2-0
9 14 15 20 21
2 5 5 7 8
38 48 50 60 62
3-0-0 3-0-1 3-1-0 3-1-1 3-2-0 3-2-1 3-2-2 3-3-0 3-3-1 3-3-2 3-3-3
23 39 43 75 93 150 210 240 460 1100 > 1100
9 10 10 20 30 50 80 90 100 300 -
130 180 210 280 380 500 640 1400 2400 4800 -
Referncia: APHA, Compendium of Methods of the Microbiological Examination of Foods. 1992, p. 112.
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ANEXO 7
TABELAS PARA ANLISE DO SOLO CLCIO E MAGNSIO TROCVEIS (Ca2+ e Mg2+)
Nas determinaes de clcio e de magnsio sempre houve consenso com relao unidade. 3 Eram expressos em meq/100 cm ou meq/100 g. Pelo SI as unidades a serem utilizadas so: 3 cmolc/dm - utilizada em todos os Estados, exceto SP. 3 mmolc/dm - utilizada em SP. 3 3 O cmolc/dm e o antigo meq/100 cm tm a mesma grandeza, no sendo, portanto, necessrio qualquer transformao. 3 O mmolc/dm , entretanto, a grandeza dez (10) vezes maior do que ambas. Assim: 3 3 3 1 meq/100 cm = 1 cmolc/dm = 10 mmolc/dm Tabela 1. ndices normalmente utilizados para classificar os teores de clcio e de magnsio Unidades Ca cmolc/dm
3 3
Baixo
2+
Mdio
2+
Alto Mg
2+
Mg
Ca
2+
Ca
2+
Mg
2+
<2 <20
<0,4 <4
2a4 20 a 40
0,4 a 0,8 4,0 a 8,0
>4 >40
>0,8 >8,0
mmolc/dm
Fonte: TOM JR (1997).
ALUMNIO TROCVEL (Al3+)

Da mesma forma que o clcio e o magnsio, os teores de alumnio passaram a ser expressos no SI. Tabela 2. Classificao para os teores de Al Unidades cmolc/dm
3 3 3+
trocvel
Baixo <0,5 <5,0
Mdio 0,5 a 1,5 5,0 a 15,0
Alto >1,5 >15,0
mmolc/dm
Fonte: TOM JR (1997). Interpretar apenas o teor de Al nem sempre suficiente para caracterizar toxidez para 3+ as plantas, pois esta depende tambm da proporo que o Al ocupa na CTC efetiva; Para avaliar corretamente a toxidez por alumnio deve-se calcular tambm a saturao por Al (m). m = (Al + x 100)/t
3 3+
Fonte: TOM JR.; J.B. Manual para interpretao de analises de solo. Guaba, Agropecuria, 1997, 247p.
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