O Tratamento Crônico Com Vortioxetina Melhora A Capacidade de Resposta A Um Estresse Agudo Que Atua Através Do Hipocampo Ventral em Um Glicoc

O tratamento crônico com vortioxetina melhora a capacidade de re…stresse agudo que atua através do hipocampo ventral em um glicoc 15/05/2021
2021 10:02
Página 1
Manuscrito aceito
Título: O tratamento crônico com vortioxetina melhora o

responsividade a um estresse agudo agindo através do ventral
hipocampo de uma forma dependente de glicocorticóides
Autores: Paola Brivio, Giulia Corsini, Marco Andrea Riva,

Francesca Calabrese
PII: S1043-6618 (18) 31626-8

DOI: https://doi.org/10.1016/j.phrs.2019.02.006
Referência: YPHRS 4167
Aparecer em: Pesquisa Farmacológica
Data de recebimento: 23 de outubro de 2018

Data de revisão: 4 de fevereiro de 2019
Data de aceitação: 4 de fevereiro de 2019
Como citar este artigo: Brivio P, Corsini G, Riva MA, Calabrese F, Crônico
O tratamento com vortioxetina melhora a capacidade de resposta a um estresse agudo agindo através de
https://translate.googleusercontent.com/translate_f Página 1 de 25
O tratamento crônico com vortioxetina melhora a capacidade de re…stresse agudo que atua através do hipocampo ventral em um glicoc 15/05/2021 10:02
o hipocampo ventral de uma forma dependente de glicocorticóides, Pesquisa Farmacológica

(2019), https://doi.org/10.1016/j.phrs.2019.02.006
Este é um arquivo PDF de um manuscrito não editado que foi aceito para publicação.
Como um serviço aos nossos clientes, estamos fornecendo esta versão inicial do manuscrito.
O manuscrito passará por revisão, composição e revisão da prova resultante
antes de ser publicado em sua forma final. Observe que durante o processo de produção
podem ser descobertos erros que podem afetar o conteúdo e todas as isenções de responsabilidade legais que
aplicam-se à revista pertinente.
Página 2
O tratamento crônico com vortioxetina melhora a capacidade de resposta a um estresse agudo agindo através da região ventral
hipocampo de uma forma dependente de glicocorticóides.
Paola Brivio 1 ; Giulia Corsini 1 ; Marco Andrea Riva 1 e Francesca Calabrese 1
1 Departamento de Ciências Farmacológicas e Biomoleculares, Università degli Studi di Milano, Milão, Itália
* Autor para correspondência: Dra. Francesca Calabrese
Departamento de Ciências Farmacológicas e Biomoleculares
Università di Milano, Via Balzaretti 9, 20133 Milão, Itália
Telefone: + 39-02 50318277; Faxe: + 39-02 50318278
E-mail: francesca.calabrese@unimi.it
MANUSCRITO ACEITO
Página 3
Resumo gráfico
Abstrato
A vortioxetina é um novo antidepressivo multimodal aprovado em 2013 pela Food and Drug Administration e pela
Agência Europeia de Medicamentos para o tratamento do transtorno depressivo maior (MDD). Ele combina a modulação de
atividade dos receptores de serotonina com a inibição do transportador de serotonina (SERT). Neste estudo, pretendemos estabelecer o
efeito do tratamento crônico com vortioxetina (5mg / kg duas vezes / dia) na modulação dos mecanismos neuroplásticos, bem como
atividade do eixo hipotálamo hipofisário adrenal (HPA) em condição basal e em resposta a um desafio agudo. Nós
descobriram que a administração prolongada de vortioxetina aumentou significativamente a expressão total de Bdnf na região dorsal e ventral
hipocampo de ratos machos adultos e afetou a modulação induzida por estresse dos genes iniciais imediatos Arc e
Zif268, principalmente na sub-região ventral. Além disso, também descobrimos que, dentro desta área do cérebro, o tratamento crônico com drogas foi
capaz de modular a responsividade aos glicocorticóides em nível genômico, aumentando a translocação do glicocorticóide
receptor (GR) no compartimento nuclear em resposta ao estresse agudo. Curiosamente, este efeito foi espelhado pelo
MANUSCRITO ACEITO
regulação positiva de diferentes genes responsivos de GR.
Tomados em conjunto, nossos dados sugerem que a exposição repetida à vortioxetina tem como alvo específico o hipocampo ventral por
melhorando a capacidade de lidar com condições estressantes. Além disso, sua capacidade de facilitar a função do eixo HPA pode fornecer um
indicação do uso desse medicamento em pacientes caracterizados por resistência aos glicocorticóides.
Página 4
Palavras-chave: antidepressivos, vortioxetina, Bdnf, receptor de glicocorticóide
MANUSCRITO ACEITO
1 Abreviaturas : VTX, vortioxetina; TDM, transtornos depressivos maiores; 5-HT, serotonina; SERT, transportador de serotonina;
GABA, ácido gama aminobutírico; Bdnf, fator neurotrófico derivado do cérebro; IEG, genes iniciais imediatos; Arco, atividade
proteína associada ao citoesqueleto regulado; Zif268, resposta de crescimento inicial 1; cFos, proto-oncogene Fos; PF, pré-frontal
córtex; dHip, hipocampo dorsal; vHip, hipocampo ventral; GR, receptor de glicocorticóide; HPA, hipófise hipotalâmica
ad-renal; VEH, veículo; ASS, estresse agudo de natação; RT-PCR, reação em cadeia da polimerase em tempo real; Gadd45 β , parada de crescimento
e proteína induzível por danos no DNA; Fkbp5, proteína 5 de ligação a FK506; FoxO1, proteína O1 da caixa forkhead; Nr4a1, nuclear
subfamília 4 do receptor, membro do grupo A 1; Sgk-1, quinase 1 regulada por soro / glicocorticóide; Dusp1, ativado por mitogênio
proteína quinase fosfatase 1; P11, S100A10; ANOVA, análise de variância; PLSD, Fisher's protegido pelo menos significativo
diferença.
Página 5
1. Introdução
Vortioxetina (1- [2- (2,4-dimetil-fenilsulfanil) -fenil] -piperazina, bromidrato) (VTX) é um novo multimodal
antidepressivo aprovado para o tratamento do transtorno depressivo maior (TDM). Ele combina a modulação de
atividade dos receptores de serotonina (5-HT) com a inibição do transportador 5-HT (SERT). Em particular, VTX é um 5-HT 1A
agonista do receptor, um agonista parcial do receptor 5-HT 1B , antagonista dos receptores 5-HT 3 , 5-HT 7 , 5-HT 1D e um inibidor de SERT [1].
Além disso, o fármaco pode exercer sua atividade por meio da modulação dos circuitos cerebrais, devido à sua capacidade de regular
sistemas de ácido norepinefrinérgico, dopaminérgico, colinérgico, histaminérgico, glutamatérgico e gama aminobutírico [2-7].
A evidência clínica mostrou a eficácia da droga em melhorar o humor e déficits cognitivos [8-15] em pacientes deprimidos,
e estudos pré-clínicos demonstraram que a vortioxetina é eficaz na normalização de déficits cognitivos, ansiedade e
comportamentos semelhantes aos depressivos, após administrações agudas [3,4,16-19] e crônicas [19,20].
Em níveis moleculares, o desenvolvimento de TDM tem sido associado a alterações de fatores neurotróficos e relacionados
sinalização [21-23], que também representam um alvo das terapias antidepressivas [23]. Em particular, o papel do
neurotrofina O fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) na etiologia e no tratamento do TDM tem sido amplamente
investigados [24], com os níveis séricos de BDNF sendo mais baixos em pacientes deprimidos [25], enquanto uma regulação positiva de sua expressão
foi encontrado em cérebros post-mortem de pacientes tratados em comparação com a contraparte não tratada [26,27]. Além disso, também
A desregulação do eixo HPA é uma característica fundamental dos transtornos do humor [28,29], com estudos mostrando que essa alteração pode persistir
apesar da recuperação [30,31] e pode prever a recorrência do distúrbio [32].
Nessas bases, é importante investigar o impacto de novos medicamentos antidepressivos sobre esses sistemas que representam
jogadores-chave do MDD. Além disso, nosso objetivo foi estabelecer não apenas os efeitos do tratamento crônico com vortioxetina per sè
mas também sua influência na resposta a um estresse agudo, o que pode ser sugestivo de uma capacidade de enfrentamento aprimorada
sob condições desafiadoras.
Em particular, avaliamos a expressão de Bdnf, dos genes precoces imediatos (IEGs) Citoesqueleto Regulado por Atividade
MANUSCRITO ACEITO
Proteína associada (Arc), resposta de crescimento inicial 1 (Zif268) e proto-oncogene Fos (cFos) em ratos tratados cronicamente
com vortioxetina e depois exposto a um desafio agudo. Além disso, a fim de avaliar o efeito do medicamento no HPA
eixo, nos concentramos no mecanismo genômico do receptor de glicocorticóide (GR) medindo seus níveis de proteína no
compartimento nuclear e os níveis de mRNA dos genes regulados por GR.
Página 6
As análises foram conduzidas nas principais áreas do cérebro implicadas nos transtornos do humor: o córtex pré-frontal (PFC), a região dorsal
parte do hipocampo (dHip), envolvida no processamento de informações espaciais e contextuais [33] e a região ventral
hipocampo (vHip), a sub-região mais relacionada ao comportamento emocional [34].
MANUSCRITO ACEITO
Página 7
2. Métodos
2.1. Animais
Ratos Sprague Dawley machos adultos (Charles River, Itália), com idade de 10 semanas (320-340 gr), foram trazidos para o laboratório dois
semanas antes do início do experimento. Os animais foram alojados com comida e água disponíveis gratuitamente e foram
mantido em um ciclo claro / escuro de 12 horas em condições constantes de temperatura (22 ± 2 ° C) e umidade (50 ± 5%). Todo animal
os experimentos foram realizados conforme autorização do Ministério da Saúde nº 1252/2015-PR em total concordância
com a legislação italiana sobre experimentação animal (DL 26/2014) e aderente à recomendação da UE (Conselho da CEE
Diretiva 2010/63). Todos os esforços foram feitos para minimizar o sofrimento dos animais e reduzir o número de animais utilizados.
2.2. Tratamento farmacológico e procedimento de estresse
Os ratos foram tratados com solução salina (VEH) ou vortioxetina (16-18 animais para cada grupo) (fornecido por H. Lundbeck,
Copenhagen) na dose de 5 mg / kg (ip) duas vezes ao dia por 14 dias [3]. Conforme descrito anteriormente [35-37], vinte e quatro horas
após a última administração do medicamento, metade dos animais foram deixados sem perturbação em suas gaiolas caseiras (simulação) (7-9 ratos para cada
grupo de tratamento), enquanto a outra metade foi exposta a um estresse agudo (7-9 ratos para cada grupo de tratamento)
consistindo em estresse de natação de 5 min (ASS). Para tanto, os animais foram colocados individualmente em um balde com água na sala.
temperatura (25 ° C) profunda o suficiente para não tocar o fundo. Após 5 min, eles foram secos com uma toalha e
voltaram para sua jaula. Os ratos foram sacrificados 15 minutos após o final da sessão de estresse e córtex pré-frontal e
ambos os hipocampos dorsal e ventral foram dissecados, congelados em gelo seco e armazenados a - 80 ° C para análises posteriores.
Especificamente, o córtex pré-frontal (definido como sub-regiões Cg1, Cg3 e IL correspondentes às placas 6-10 de acordo com
o atlas de Paxinos e Watson [38]) foi dissecado de cortes de 2 mm de espessura, enquanto o dorsal e o ventral
hipocampo (respectivamente placas 25-33 e placas 34-43 de acordo com o atlas de Paxinos e Watson) foram dissecados
MANUSCRITO ACEITO
de todo o cérebro. O hemisfério esquerdo foi considerado para proteínas, enquanto o direito foi considerado para RNA.
2.3. Preparação de RNA e análise de expressão gênica por PCR quantitativo em tempo real.
O RNA total foi isolado por uma única etapa de extração de isotiocianato / fenol de guanidínio usando isolamento de RNA PureZol
reagente (Bio-Rad Laboratories, Itália) de acordo com as instruções do fabricante e quantificado por espectrofotometria
Página 8
análise. Após a extração de RNA total, as amostras foram processadas para reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR)
para avaliar Bdnf total, Arc, cFos, Zif268, parada de crescimento e proteína induzível por dano de DNA (Gadd45 β), ligação de FK506
proteína 5 (Fkbp5), proteína O1 da caixa Forkhead (FoxO1), Subfamília de receptor nuclear 4 Grupo A Membro 1 (Nr4a1),
Soro / quinase 1 regulada por glicocorticóide (Sgk-1), proteína quinase fosfatase 1 ativada por mitogênio (Dusp1) e
Níveis de mRNA de S100A10 (P11). Uma alíquota de cada amostra foi tratada com DNase para evitar a contaminação do DNA. RNA era
analisado pelo instrumento TaqMan qRTPCR (sistema de tempo real CFX384, Bio-Rad Laboratories, Itália) usando o iScriptTM
kit RT-PCR de uma etapa para sondas (Bio-Rad Laboratories, Itália). As amostras foram executadas em formatos de 384 poços em triplicado como
reações multiplexadas com um controle interno de normalização (36B4). As sequências de iniciadores (Tabela 1) utilizadas foram adquiridas em
Eurofins MWG-Operon and Life Technologies.
A ciclagem térmica foi iniciada com uma incubação a 50 ° C por 10 min (retrotranscrição de RNA) e, em seguida, a 95 ° C por 5 min
(Ativação da polimerase TaqMan). Após essa etapa inicial, foram realizados 39 ciclos de PCR. Cada ciclo de PCR consistia em
aquecer as amostras a 95 ° C por 10 s para permitir o processo de fusão e depois por 30 s a 60 ° C para o recozimento e
reações de extensão. Um método de limite de ciclo comparativo foi usado para calcular a expressão relativa do gene alvo.
2.4. Extração de proteínas e análise de western blot.
A análise de Western blot foi usada para investigar os níveis de proteína GR. Os tecidos foram homogeneizados manualmente usando um vidro
oleiro de vidro em um tampão frio de pH 7,4 contendo sacarose 0,32 M, EGTA 0,1 mM, solução HEPES 1 mM na presença de
um conjunto completo de inibidores de proteases (Roche) e fosfatases (Sigma-Aldrich). O homogenato total foi
centrifugado a 2.500 rpm por 10 min a 4 ° C para obter o pellet correspondente à fração nuclear, que foi re-
suspenso num tampão (HEPES 20 mM, ditiotreitol 0,1 mM, EGTA 0,1 mM) com inibidores de protease e fosfatase.
O sobrenadante foi ainda centrifugado a 10.000 g por 15 min a 4 ° C para obter o pellet correspondente ao
fracção de membrana que foi ressuspensa no tampão. O sobrenadante coletado correspondeu ao citosólico
fração. A pureza das frações obtidas foi mostrada na figura suplementar 1. O teor de proteína total foi medido
MANUSCRITO ACEITO
de acordo com o procedimento de ensaio de proteína de Bradford (Bio-Rad Laboratories), usando albumina de soro bovino como uma calibração
padrão. Quantidades iguais de proteína foram executadas sob condições redutoras em géis de SDS-poliacrilamida a 10% e, em seguida,
transferido eletroforeticamente para membranas de nitrocelulose (Bio-Rad Laboratories). As manchas foram bloqueadas (GR: 5%
albumina de soro bovino em TBS + sodioazyde 0,2%; β actina: 10% de leite desnatado) e, em seguida, incubado com o primário
Página 9
anticorpos resumidos na Tabela 2. As membranas foram então incubadas por 1 h em temperatura ambiente com o
anticorpo secundário (ver Tabela 2).
Os imunocomplexos foram visualizados por quimioluminescência usando o Western Lightning Plus ECL (PerkinElmer) e o
Sistema de imagem Chemidoc MP (Bio-Rad Laboratories). Os resultados foram padronizados usando β -actina como proteína de controle,
que foi detectado avaliando a densidade da banda a 43 kDa.
2,5. Análise estatística
Os efeitos do estresse e / ou do tratamento farmacológico foram analisados com a análise de variância bidirecional
(ANOVA) como fatores independentes. Quando apropriado, outras diferenças foram analisadas por Fisher's Protected Least
Diferença significativa (PLSD). As análises estatísticas completas estão resumidas na Tabela suplementar 1. Significância
para todos os testes foi assumido p <0,05. Os dados são apresentados como média do erro padrão (SEM). Para maior clareza gráfica, os resultados são
apresentado como porcentagem média de Veículo / Simulação.
MANUSCRITO ACEITO
Página 10
3. Resultados
3.1. O tratamento crônico com vortioxetina regula positivamente a expressão total de Bdnf na região dorsal e ventral
hipocampo.
A fim de abordar o impacto do tratamento crônico com vortioxetina na plasticidade neuronal, investigamos a expressão de
Bdnf, um fator neurotrófico que desempenha um papel crucial na plasticidade cerebral e resiliência celular [39-41]. As análises foram
conduzida em condições de repouso ou após um estresse agudo, a fim de verificar se a vortioxetina é capaz de modular
a capacidade de resposta da neurotrofina ao desafio agudo.
No córtex pré-frontal, encontramos um efeito significativo da exposição ao estresse (F 1,32 = 62,089, p <0,001) com mRNA Bdnf total
os níveis aumentaram significativamente pela exposição ao estresse agudo, independentemente do tratamento com vortioxetina (veículo: + 50%,
p <0,001 vs VEH / Sham; vortioxetina: + 43%, p <0,001 vs VTX / Sham) (Fig.1a).
Ao contrário, a expressão do Bdnf total foi afetada apenas pelo tratamento tanto na região dorsal (Fig.1b) quanto na região
hipocampo ventral (Fig.1c) (F 1,34 = 10,213, p <0,01; F 1,31 = 10,636, p <0,01 respectivamente). Na verdade, vortioxetina
a administração regulou positivamente os níveis de mRNA de Bdnf total (dHip: + 26%, vHip: + 31%; p <0,05 vs VEH / Sham), enquanto estresse agudo
não produziu nenhum efeito significativo em ratos controle, bem como em animais tratados cronicamente com vortioxetina.
3.2. O tratamento com vortioxetina modula a expressão de IEGs principalmente no hipocampo ventral
A influência do tratamento com vortioxetina na ativação neuronal após o desafio agudo foi investigada por
medir a expressão dos IEGs Arc, cFos e Zif268, conhecidos por estarem implicados na resposta rápida e transitória
a estímulos evocados por plasticidade [42].
No córtex pré-frontal (Fig. 2a, b, c), encontramos um efeito significativo da exposição ao estresse em todos os genes considerados (Arco:
F 1,33 = 105,706, p <0,001; cFos: F 1,30 = 39,061, p <0,001; Zif268: F 1,33 = 97,383, p <0,001). Também encontramos um efeito significativo
do tratamento para Arc (F 1,33 = 7,351, p <0,05), mas não para cFos e para Zif268, enquanto a interação tratamento X estresse foi
não estatisticamente significativo para todos os três IEGs. Assim, independentemente do tratamento com vortioxetina, o quadro agudo
MANUSCRITO ACEITO
desafio aumentou significativamente Arc (veículo: + 195%, p <0,001 vs VEH / Sham; vortioxetina: + 221%, p <0,001 vs
VTX / Sham) (Fig.2a), cFos (veículo: + 212%, p <0,001 vs VEH / Sham; vortioxetina + 597%, p <0,001 vs VTX / Sham)
(Fig.2b) e Zif268 (veículo: + 147%, p <0,001 vs VEH / Sham; vortioxetina: + 177%, p <0,001 vs VTX / Sham) (Fig.2c)
níveis de mRNA. Além disso, a regulação positiva do Arc observada após o ASS em grupos pré-tratados com veículo é maior do que o
modulação encontrada em ratos tratados com VTX (-22%, p <0,05 vs VEH / ASS).
Página 11
Um efeito semelhante foi encontrado no hipocampo dorsal (Fig. 2d, e, f), onde a análise ANOVA de duas vias revela
efeito significativo da exposição ao estresse (Arc: F 1,34 = 9,534, p <0,01; cFos: F 1,34 = 104,649, p <0,001; Zif268: F 1,33 = 17,188,
p <0,001). Na verdade, a expressão de todos os IEGs foi significativamente regulada positivamente pelo desafio agudo em ratos cronicamente
tratados com veículo e vortioxetina (Arc: veículo: + 48%, p <0,05 vs VEH / Sham, vortioxetina: + 69%, p <0,05 vs
VTX / Sham; cFos: veículo: + 254%, p <0,001 vs VEH / Sham, vortioxetina: + 316%, p <0,001 VTX / Sham; Zif268: veículo:
+ 37%, p <0,05 vs VEH / Sham, vortioxetina: + 50%, p <0,01 vs VTX / Sham).
No hipocampo ventral (Fig. 2g, h, i), a modulação dos IEGs parece ser mais heterogênea. Em particular, agudo
a exposição ao estresse aumentou significativamente os níveis de Arc mRNA apenas em ratos tratados com veículo (+ 168%, p <0,001 vs VEH / Sham), como
indicado pelo efeito significativo do estresse (F 1,32 = 14,076, p <0,01) e da interação (F 1,32 = 6,516, p <0,05) enquanto Zif268
foi especificamente regulado para cima (+ 55%, p <0,001 vs VTX / Sham) após o desafio agudo apenas em ratos tratados com vortioxetina
(estresse: F 1,33 = 13,974, p <0,01; interação tratamento X estresse: F 1,33 = 8,079, p <0,01). Consequentemente, os níveis de mRNA de
Zif268 em grupos de vortioxetina expostos a ASS foi significativamente diferente daquele medido em ratos VEH / ASS (+ 28%,
p <0,05 vs VEH / ASS).
Conforme mostrado na Fig. 2h, e de forma semelhante ao que foi encontrado em PFC e dHip, os níveis de mRNA de cFos foram significativamente afetados por
estresse (F 1,34 = 100,369, p <0,001). De acordo com esses resultados, a exposição ao estresse agudo aumentou a cFos
expressão tanto no veículo (+ 442%, p <0,001 vs VEH / Sham) e em ratos tratados com vortioxetina (+ 277%, p <0,001 vs
VTX / Sham), com o efeito encontrado nos primeiros grupos sendo maior do que o observado no segundo (-21%, p <0,05 vs
VEH / ASS).
3,3. A vortioxetina crônica facilita a translocação do receptor de glicocorticóide para o
núcleo após um desafio agudo.
Uma vez que, conforme descrito acima, descobrimos que a vortioxetina modula a expressão de Bdnf e a indução de estresse dos IEGs
principalmente no hipocampo ventral, investigamos mecanismos dependentes de glicocorticóides especificamente neste cérebro
região. Sabe-se que a ativação do eixo HPA pode afetar a função neuronal, modulando a translocação de GR para
MANUSCRITO ACEITO
o compartimento nuclear, onde o receptor modula a transcrição do gene por meio da ligação com GR selecionado
elementos responsivos na sequência de DNA [43]. Portanto, a fim de investigar se o tratamento crônico de VTX pode influenciar
a localização e / ou translocação de GR após a exposição ao estresse agudo, avaliamos os níveis de proteína do receptor em
todo o homogenato, bem como nos compartimentos nuclear e citosólico. Embora não tenhamos observado nenhuma estatística
mudança significativa dos níveis de GR no homogenato (Fig.3a), os níveis de proteína GR foram significativamente afetados pelo estresse no
Página 12
compartimento nuclear (F 1,28 = 4,735, p <0,05). O efeito do estresse agudo na translocação de GR parece ser principalmente
impulsionado pela vortioxetina, uma vez que apenas este grupo mostra um aumento significativo dos níveis de GR nuclear após o desafio
(+ 48%, p <0,05 vs VTX / Sham), um efeito que foi acompanhado por uma tendência de redução dos níveis de GR no citosol (-
29%, p> 0,05) (Fig.3c). Na Fig. 3d, as mudanças mediadas pelo desafio agudo nos níveis nuclear e citosólico
compartimento foram expressos como porcentagem de ratos sham, destacando que o tratamento crônico com vortioxetina parece
facilitar a translocação de GR no núcleo em resposta ao estresse agudo.
Para testar a possibilidade de que a translocação diferente pode ser devido à disponibilidade de hormônio, também medimos o
expressão das isozimas 11 β- hidroxisteróide desidrogenases (11 β -HSD) 1 e 2, mas não encontramos nenhuma diferença
(dados não mostrados).
3.4. A vortioxetina promove a transcrição de genes responsivos de GR após o estresse de AS
Uma vez que no compartimento nuclear o GR regula a transcrição do gene, medimos os níveis de mRNA de diferentes GR-
genes responsivos, a saber Gadd45 β, FoxO1, Fkbp5, Sgk1, Dusp-1, Nr4a1 e P11 no vHip (Fig4), dHip e PFC
(quadro complementar 2 a / b).
Curiosamente, descobrimos que a translocação aumentada de GR no núcleo do hipocampo ventral de rato, observada após
a exposição ao estresse em ratos tratados com vortioxetina foi refletida por uma regulação positiva da expressão de genes específicos. Dentro
em particular, os níveis de mRNA Gadd45 β (Fig4a), FoxO1 (Fig.4b) e Fkbp5 (Fig4c) foram aumentados pelo desafio agudo
apenas em animais cronicamente pré-tratados com vortioxetina (+ 21%, p <0,05 vs VTX / Sham; + 19%, p <0,05 vs VTX / Sham;
+ 62%, p <0,01 vs VTX / Sham respectivamente). Esses efeitos foram confirmados pela análise ANOVA de dois fatores. Na verdade, nós
encontraram efeito significativo do estresse (F 1,31 = 6,381, p <0,05) para Gadd45 β ; uma interação significativa de tratamento X estresse
(F 1,34 = 10,738, p <0,01) para FoxO1, enquanto em relação a Fkbp5 um efeito significativo de estresse (F 1, 34 = 10,473, p <0,01) e de
a interação tratamento X estresse (F 1,34 = 4,485, p <0,05).
Diferentemente, o estresse afetou a expressão de Sgk1 (F 1,34 = 151,120, p <0,001) (Fig.4d) e Dusp-1 (F 1,34 = 313,549,
MANUSCRITO ACEITO
p <0,001) (Fig.4e). Na verdade, descobrimos que a exposição ao estresse produziu um aumento significativo em ambos os veículos (Sgk1: + 156%,
p <0,001 vs VEH / Sham; Dusp1: + 321%, p <0,001 vs VEH / Sham) e ratos tratados com vortioxetina (Sgk1: + 164%, p <0,001 vs
VTX / Sham; Dusp1 + 292%, p <0,001 vs VTX / Sham).
Como mostrado na Fig. 4f, os níveis de mRNA de Nr4a1 foram significativamente regulados para cima pelo desafio agudo (VEH: + 72%, p <0,001 vs
VEH / Sham; VTX: + 29% p <0,05 vs VTX / Sham) independentemente do pré-tratamento, conforme indicado pelo significativo
Página 13
efeito de estresse (F 1,34 = 18,023, p <0,001). Além disso, conforme indicado pela análise ANOVA de duas vias (tratamento: F 1,34 = 4,201,
p <0,05), os níveis de mRNA de Nr4a1 foram significativamente regulados para cima como consequência do tratamento com vortioxetina (+ 43%, p <0,05
vs VEH / Sham). Nenhum efeito significativo do tratamento e do desafio agudo foi encontrado na expressão de P11
(Fig.4g).
Pelo contrário, o pré-tratamento com vortioxetina não influenciou o aumento de Gadd45 β,
expressão devido à exposição ao estresse em dHip e PFC (tabela complementar 2 a / b).
MANUSCRITO ACEITO
Página 14
4. Discussão
Neste estudo, fornecemos evidências sobre a capacidade do tratamento crônico com o novo antidepressivo vortioxetina para
modular a plasticidade neuronal e a capacidade de resposta a um estresse agudo de uma maneira específica da região.
Descobrimos que o tratamento crônico com vortioxetina aumentou os níveis de expressão do gene Bdnf tanto na região ventral quanto na dorsal
hipocampo, em linha com a evidência bem aceita mostrando que, quando administrados cronicamente, os antidepressivos,
caracterizada por diferentes perfis farmacológicos, tem um impacto positivo na plasticidade neuronal [41,44-48] através do
modulação de moléculas-chave, como a neurotrofina Bdnf, com especificidade anatômica [41,44,45,49-51]. Como um
por exemplo, a agomelatina atua sobre o Bdnf principalmente no hipocampo [49], a fluoxetina aumenta sua expressão na região ventral
área tegmental e no córtex pré-frontal [50], enquanto a duloxetina modula preferencialmente a neurotrofina
expressão no córtex frontal e pré-frontal [51]. Além disso, foi demonstrado que a vortioxetina normalizou o
comportamento do tipo depressivo e a redução do BDNF observada em animais expostos ao paradigma do estresse crônico leve
[52] e aumento da concentração plasmática de BDNF em pacientes deprimidos [53].
De acordo com observação anterior mostrando que as neurotrofinas, como moduladoras da transmissão sináptica e da plasticidade,
pode desempenhar um papel fundamental também na resposta do cérebro em uma situação dinâmica após um tratamento farmacológico [35-37],
mostramos que a vortioxetina crônica também é capaz de afetar a capacidade de resposta neuronal em situações estressantes, o que pode conter
implicações translacionais importantes por meio de um aprimoramento do enfrentamento e da resiliência do cérebro. Em particular, nossos resultados
sugerem que a influência da vortioxetina na resposta ao estresse é especificamente observada no hipocampo ventral, a
estrutura que desempenha um papel relevante nos transtornos de ansiedade e humor [34].
De fato, de acordo com dados anteriores que mostram uma regulação positiva de Arc no PFC de ratos tratados com duloxetina e expostos
ao estresse de natação [54], aqui descobrimos que a exposição ao desafio agudo aumentou significativamente a expressão de todos
os IEGs considerados independentemente do pré-tratamento no hipocampo dorsal e no córtex pré-frontal.
Por outro lado, no hipocampo ventral VTX modulou a resposta ao estresse, impedindo o aumento do arco e por
induzindo a expressão de Zif 268. Na verdade, o ligeiro aumento da regulação dos níveis de ARNm de Arc induzido por VTX por si, que tem
MANUSCRITO ACEITO
também foram observados após o tratamento com o antipsicótico lurasidona na mesma região do cérebro [55] e no
hipocampo de ratos alimentados cronicamente com ração contendo VTX [56], provavelmente impediu um possível aumento devido
à exposição ao estresse agudo. Pelo contrário, destacamos a capacidade da droga de aumentar a resposta ao
desafio na expressão de Zif268, indicando que este fator de transcrição, regulado por neurotransmissores e trófico
Página 15
substâncias [57], podem organizar a reação aos estímulos após a administração crônica de antidepressivos neste
sub-região do cérebro.
A seletividade anatômica dos efeitos VTX pode ser devido, pelo menos em certa medida, aos receptores 5-HT 1A que são modulados por
VTX e são altamente enriquecidos nas sub-regiões CA1 [58] e CA3 [59,60] do hipocampo ventral, bem como no
aumento dos níveis extracelulares de serotonina devido ao tratamento com VTX observado especificamente em vHip [3,4].
Em seguida, a fim de avaliar se a responsividade ao estresse de HPA pode ser modulada pelo tratamento farmacológico,
investigamos os mecanismos do receptor genômico de glicocorticóides especificamente no vHip. Curiosamente, descobrimos que
a vortioxetina induziu a translocação de GR para o núcleo em resposta ao estresse, sugerindo que a ativação do
a via genômica pode ser facilitada em animais tratados cronicamente com o antidepressivo. Este efeito foi acompanhado por
uma diminuição concomitante do receptor no compartimento citosólico, possivelmente através da dissociação do
proteínas chaperonas. Esses resultados estão de acordo com estudos anteriores que mostram que as drogas antidepressivas modulam
atividade dos receptores de glicocorticóides por interferir em diferentes níveis [61] e que, em particular, desimipramina e duloxetina
o tratamento é capaz de aumentar os níveis de receptores de glicocorticóides nucleares [35,62]. Na verdade, foi demonstrado que
desimipramina, testada em cultura de células, aumentou o GR no núcleo e potencializou o GR induzido por dexametasona
translocação [62], enquanto o tratamento crônico com duloxetina é capaz de regular o GR nuclear em resposta ao estresse em ratos inteiros
hipocampo [35]. Curiosamente, o aumento da translocação não é devido a mudanças no metabolismo da corticosterona, uma vez que
não observaram alterações na expressão de 11 β -HSD1-2.
O efeito da vortioxetina na translocação nuclear de GR foi associado a um aumento da expressão de alguns GR-
genes responsivos, como Gadd45 β , Nr4a1, FoxO1 e Fkbp5, que podem contribuir para o conjunto de resposta rápida de enfrentamento
em movimento pelo estresse agudo. Curiosamente, nem todos os genes responsivos a GR investigados pareciam ser modulados no
da mesma forma, sugerindo que a translocação de GR não é suficiente para ativar sua transcrição e que outros cofatores,
como por exemplo o BDNF [63], podem participar na sua modulação funcional em resposta a estímulos externos [64].
Além disso, foi demonstrado que as modulações dos diferentes genes alvo de GR são variáveis dependendo da natureza
e duração do estímulo, tipo de célula, sexo, idade (revisado em [65]).
MANUSCRITO ACEITO
Entre os genes cuja expressão induzida por estresse foi significativamente modulada pela vortioxetina crônica, Gadd45 β é um
gene precoce imediato da atividade neuronal que promove a proliferação de progenitores neurais no hipocampo adulto e
pode controlar os mecanismos epigenéticos agindo como DNA demetilase [66], enquanto o fator de transcrição N4ra1 é
implicado na plasticidade neuronal dependente da atividade do hipocampo e na formação da memória [67]. Com relação ao FoxO1,
Página 16
está envolvido na regulação da homeostase celular e na resistência ao estresse oxidativo [68] e descobriu-se que é
modulado no córtex pré-frontal de rato pela administração crônica de duloxetina, enquanto Fkbp5 é uma importante co-chaperona para
O GR e seus níveis de mRNA são regulados positivamente pelo estresse crônico e restaurados pela duloxetina no hipocampo ventral [69].
Curiosamente, a infinidade de processos regulados por esses fatores potencialmente amplia o efeito que a vortioxetina pode
produzir modulando-os, aumentando o benefício potencial que eles podem resultar.
Em resumo, nossos dados indicam que a modulação observada em animais tratados com vortioxetina após o estresse pode ter um
impacto nas respostas rápidas a uma experiência desafiadora nas regiões do cérebro envolvidas em processos emocionais, como
o hipocampo ventral, que está comprometido na depressão [70]. Além disso, nossos resultados sugerem que a vortioxetina
o tratamento facilitando a função do eixo HPA pode ser particularmente eficaz em pacientes caracterizados pelos chamados
resistência a glicocorticóides [61,71].
MANUSCRITO ACEITO
Página 17
Informação sobre o autor
Paola Brivio, Giulia Corsini, Marco Andrea Riva e Francesca Calabrese: Departamento de Farmacologia e
Ciências Biomoleculares, Universita 'degli Studi di Milano, Via Balzaretti 9, 20133 Milão, Itália
Contribuições do autor
FC e MAR foram responsáveis pelo conceito e design do estudo
PB e GC realizaram e analisaram a análise molecular.
PB realizou o tratamento farmacológico e expôs o animal ao protocolo de estresse.
A análise e interpretação dos dados foram feitas por PB, FC e MAR.
PB redigiu o manuscrito e FC e MAR revisaram criticamente o manuscrito.
Todos os autores revisaram criticamente o conteúdo e aprovaram a versão final para publicação.
Conflito de interesses
O autor MAR recebeu remuneração como palestrante / consultor da Lundbeck, Otzuka, Sumitomo Dainippon
Pharma e Sunovion, e ele recebeu bolsas de pesquisa da Lundbeck, Sumitomo Dainippon Pharma e
Sunovion.
Agradecimentos
Paola Brivio foi apoiada pelo ciclo XXXI do doutoramento em Ciências Farmacológicas Experimentais e Clínicas,
Departamento de Ciências Farmacológicas e Biomoleculares, Universita 'degli Studi di Milano
Referências
1 Bang-Andersen B, Ruhland T, Jorgensen M, Smith G, Frederiksen K, Jensen KG, Zhong H, Nielsen SM, Hogg S, Mork A,
Stensbol TB. Descoberta de 1- [2- (2,4-dimetilfenilsulfanil) fenil] piperazina (lu aa21004): Um novo composto multimodal para o
tratamento do transtorno depressivo maior. J Med Chem 2011; 54: 3206-3221.
2 Pehrson AL, Sanchez C. Modulação serotonérgica da neurotransmissão do glutamato como estratégia para o tratamento da depressão
e disfunção cognitiva. CNS Spectr 2014; 19: 121-133.
MANUSCRITO ACEITO
3 Mork A, Pehrson A, Brennum LT, Nielsen SM, Zhong H, Lassen AB, Miller S, Westrich L, Boyle NJ, Sanchez C, Fischer
CW, Liebenberg N, Wegener G, Bundgaard C, Hogg S, Bang-Andersen B, Stensbol TB. Efeitos farmacológicos de lu aa21004: A
novo composto multimodal para o tratamento de transtorno depressivo maior. J Pharmacol Exp Ther 2012; 340: 666-675.
4 Pehrson AL, Cremers T, Betry C, van der Hart MG, Jorgensen L, Madsen M, Haddjeri N, Ebert B, Sanchez C. Lu aa21004,
um novo antidepressivo multimodal, produz aumentos seletivos regionalmente de vários neurotransmissores - uma microdiálise de rato e
estudo de eletrofisiologia. Eur Neuropsychopharmacol 2013; 23: 133-145.
5 Stahl SM. Modos e nós explicam o mecanismo de ação da vortioxetina, um agente multimodal (mma): Bloqueio 5ht3
os receptores aumentam a liberação de serotonina, norepinefrina e acetilcolina. CNS Spectr 2015; 20: 455-459.
6 Stahl SM. Modos e nós explicam o mecanismo de ação da vortioxetina, um agente multimodal (mma): Modificação
efeitos a jusante da serotonina na liberação de glutamato e gaba (ácido gama-aminobutírico). CNS Spectr 2015; 20: 331-336.
Página 18
7 Stahl SM. Os modos e nós explicam o mecanismo de ação da vortioxetina, um agente multimodal (mma): Enhancing
liberação de serotonina combinando a inibição do transportador de serotonina (5ht) com ações em receptores 5ht (5ht1a, 5ht1b, 5ht1d, 5ht7
receptores). CNS Spectr 2015; 20: 93-97.
8 Henigsberg N, Mahableshwarkar AR, Jacobsen P, Chen Y, Thase ME. Um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo 8-
semana de ensaio da eficácia e tolerabilidade de doses múltiplas de lu aa21004 em adultos com transtorno depressivo maior. J Clin Psychiatry
2012; 73: 953-959.
9 Alvarez E, Perez V, Dragheim M, Loft H, Artigas F. Um estudo de referência ativo duplo-cego, randomizado, controlado por placebo
de lu aa21004 em pacientes com transtorno depressivo maior. Int J Neuropsychopharmacol 2012; 15: 589-600.
10 Boulenger L., Olsen. Eficácia e segurança da vortioxetina (lu aa21004), 15 e 20 mg / dia: Um randomizado, duplo-cego,
estudo controlado por placebo, referenciado à duloxetina, no tratamento agudo de pacientes adultos com transtorno depressivo maior. 2014; 29: 138-
149.
11 Katona C, Hansen T, Olsen CK. Um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo, referenciado à duloxetina, de dose fixa
comparando a eficácia e segurança de lu aa21004 em pacientes idosos com transtorno depressivo maior. Int Clin Psychopharmacol
2012; 27: 215-223.
12 Montgomery SA, Nielsen RZ, Poulsen LH, Haggstrom L. Um estudo randomizado duplo-cego em adultos com depressão maior
distúrbio com uma resposta inadequada a um único curso de inibidor seletivo da recaptação da serotonina ou recaptação da serotonina-noradrenalina
o tratamento com o inibidor mudou para vortioxetina ou agomelatina. Hum Psychopharmacol 2014; 29: 470-482.
13 Jacobsen PL MA, Serenko M., Chan S, Trivedi MH. Um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo da eficácia
e segurança de vortioxetina 10 mg e 20 mg em adultos com transtorno depressivo maior. J Clin Psychiatry 2015; 76: 575-582.
14 Mahableshwarkar AR, Jacobsen PL, Chen Y, Serenko M, Trivedi MH. Um estudo randomizado, duplo-cego, referenciado à duloxetina
estudo comparando a eficácia e tolerabilidade de 2 doses fixas de vortioxetina no tratamento agudo de adultos com DMD.
Psychopharmacology (Berl) 2015; 232: 2061-2070.
15 McIntyre RS, Lophaven S, Olsen CK. Um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo de vortioxetina em cognitivo
função em adultos deprimidos. Int J Neuropsychopharmacol 2014; 17: 1557-1567.
16 Jensen JB, du Jardin KG, Song D, Budac D, Smagin G, Sanchez C, Pehrson AL. Vortioxetina, mas não escitalopram ou
duloxetina, reverte o comprometimento da memória induzido pela depleção central de 5-ht em ratos: Evidência para modulação direta do receptor de 5-ht. EUR
Neuropsychopharmacol 2014; 24: 148-159.
17 du Jardin KG, Jensen JB, Sanchez C, Pehrson AL. A vortioxetina, de maneira dependente da dose, reverte os déficits induzidos pela depleção de 5-ht
no trabalho espacial e na memória de reconhecimento de objeto: Um papel potencial para o agonismo do receptor 5-ht1a e o antagonismo do receptor 5-ht3. EUR
Neuropsychopharmacol 2014; 24: 160-171.
18 Mork A, Montezinho LP, Miller S, Trippodi-Murphy C, Plath N, Li Y, Gulinello M, Sanchez C. Vortioxetina (lu aa21004), a
novo antidepressivo multimodal, aumenta a memória em ratos. Pharmacol Biochem Behav 2013; 105: 41-50.
19 Guilloux JP, Mendez-David I, Pehrson A, Guiard BP, Reperant C, Orvoen S, Gardier AM, Hen R, Ebert B, Miller S,
Sanchez C, David DJ. Potencial antidepressivo e ansiolítico do antidepressivo multimodal vortioxetina (lu aa21004) avaliado
por resultados comportamentais e de neurogênese em camundongos. Neuropharmacology 2013; 73: 147-159.
20 Wallace A, Pehrson AL, Sanchez C, Morilak DA. A vortioxetina restaura a aprendizagem de reversão prejudicada pela depleção de 5-ht ou
estresse crônico intermitente pelo frio em ratos. Int J Neuropsychopharmacol 2014; 17: 1695-1706.
21 Nestler EJ, Barrot M, DiLeone RJ, Eisch AJ, Gold SJ, Monteggia LM. Neurobiologia da depressão. Neuron 2002; 34: 13-25.
22 Pittenger C, Duman RS. Estresse, depressão e neuroplasticidade: uma convergência de mecanismos.

Neuropsychopharmacology 2008; 33: 88-109.
23 Levy MJF, Boulle F, Steinbusch HW, van den Hove DLA, Kenis G, Lanfumey L. Fatores neurotróficos e neuroplasticidade
vias na fisiopatologia e tratamento da depressão. Psychopharmacology (Berl) 2018; 235: 2195-2220.
24
MANUSCRITO ACEITO
Castren E, fator neurotrófico derivado do cérebro Kojima M. em transtornos de humor e tratamentos antidepressivos. Neurobiol Dis
2017; 97: 119-126.
25 Molendijk ML, Spinhoven P, Polak M, Ônibus BA, Penninx BW, Elzinga BM. Concentrações séricas de bdnf como periféricas
manifestações de depressão: evidências de uma revisão sistemática e meta-análises em 179 associações (n = 9484). Psiquiatria Mol
2014; 19: 791-800.
26 Chen B, Dowlatshahi D, MacQueen GM, Wang JF, Young LT. Imunorreatividade bdnf hipocampal aumentada em indivíduos
tratados com medicação antidepressiva. Biol Psychiatry 2001; 50: 260-265.
27 Dunham JS, Deakin JF, Miyajima F, Payton A, Toro CT. Expressão do fator neurotrófico derivado do cérebro do hipocampo e
seus receptores nos cérebros do consórcio Stanley. J Psychiatr Res 2009; 43: 1175-1184.
Página 19
28 de Kloet ER, Joels M, Holsboer F. Estresse e o cérebro: da adaptação à doença. Nat Rev Neurosci 2005; 6: 463-475.
29 Holsboer F. A hipótese do receptor de corticosteróide da depressão. Neuropsychopharmacology 2000; 23: 477-501.
30 McKay MS, Zakzanis KK. O impacto do tratamento na atividade do eixo hpa na depressão maior unipolar. J Psychiatr Res
2010; 44: 183-192.
31 Reppermund S, Zihl J, Lucae S, Horstmann S, Kloiber S, Holsboer F, Ising M. Comprometimento cognitivo persistente em
depressão: O papel da psicopatologia e da regulação do sistema hipotálamo-hipófise-adrenocortical (hpa) alterada. Biol Psychiatry
2007; 62: 400-406.
32 Zobel AW, Nickel T, Sonntag A, Uhr M, Holsboer F, Ising M. Resposta de cortisol no teste combinado de dexametasona / crh como
preditor de recidiva em pacientes com depressão em remissão. Um estudo prospectivo. J Psychiatr Res 2001; 35: 83-94.
33 Kheirbek MA, Drew LJ, Burghardt NS, Costantini DO, Tannenholz L, Ahmari SE, Zeng H, Fenton AA, Hen R. Diferencial
controle da aprendizagem e ansiedade ao longo do eixo dorsoventral do giro denteado. Neuron 2013; 77: 955-968.
34 Fanselow MS, Dong HW. As estruturas do hipocampo dorsal e ventral são funcionalmente distintas? Neuron 2010; 65: 7-19.
35 Molteni R, Calabrese F, Cattaneo A, Mancini M, Gennarelli M, Racagni G, Riva MA. Capacidade de resposta ao estresse agudo do
a neurotrofina bdnf no hipocampo do rato é modulada pelo tratamento crônico com o antidepressivo duloxetina.
36 Fumagalli F, Calabrese F, Luoni A, Bolis F, Racagni G, Riva MA. Modulação da expressão de bdnf por tratamento repetido
com o novo antipsicótico lurasidona sob condição basal e em resposta ao estresse agudo. Int J Neuropsychopharmacol
2012; 15: 235-246.
37 Fumagalli F, Calabrese F, Luoni A, Shahid M, Racagni G, Riva MA. O potenciador do receptor ampa org 26576 modula
transcrição induzida por estresse de isoformas bdnf em hipocampo de rato. Pharmacol Res 2012; 65: 176-181.
38 Paxinos G, Watson C. O cérebro de rato em coordenadas estereotáxicas. 1998
39 Calabrese F, Molteni R, Riva MA. Propriedades anti-stress de medicamentos antidepressivos e suas implicações clínicas. Pharmacol
Ther 2011; 132: 39-56.
40 Luoni A, Macchi F, Papp M, Molteni R, Riva MA. A lurasidona exerce propriedades antidepressivas no estresse crônico leve
modelo através da regulação de mecanismos sinápticos e neuroplásticos no córtex pré-frontal de ratos. Int J Neuropsychopharmacol
2014; 18
41 Castren E, Hen R. Neuronal plasticity and antidepressant actions. Trends Neurosci 2013; 36: 259-267.
42 Okuno H. Regulação e função dos genes iniciais imediatos no cérebro: além dos marcadores de atividade neuronal. Neurosci Res
2011; 69: 175-186.
43 Datson NA, van der Perk J, de Kloet ER, Vreugdenhil E. Identificação de genes responsivos a corticosteroides em ratos
hipocampo usando análise serial da expressão gênica. Eur J Neurosci 2001; 14: 675-689.
44 Berton O, Nestler EJ. Novas abordagens para a descoberta de medicamentos antidepressivos: além das monoaminas. Nat Rev Neurosci
2006; 7: 137-151.
45 Schloss P, Henn FA. Novos insights sobre os mecanismos da terapia antidepressiva. Pharmacol Ther 2004; 102: 47-60.
46 Kozisek ME, Middlemas D, Bylund DB. Fator neurotrófico derivado do cérebro e seu receptor quinase b relacionado à tropomiosina em
o mecanismo de ação das terapias antidepressivas. Pharmacol Ther 2008; 117: 30-51.
47 Wang JW, Dranovsky A, Hen R. O quando e onde de bdnf e a resposta ao antidepressivo. Biol Psychiatry
2008; 63: 640-641.
48 Duman RS, Li N. A hipótese neurotrófica de depressão: papel da sinaptogênese nas ações do receptor nmda
antagonistas. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 2012; 367: 2475-2484.
49
MANUSCRITO ACEITO
Calabrese F, Molteni R, Gabriel C, Mocaer E, Racagni G, Riva MA. Modulação de moléculas neuroplásticas no cérebro selecionado
regiões após administração crônica do novo antidepressivo agomelatina. Psychopharmacology (Berl) 2011; 215: 267-275.
50 Molteni R, Calabrese F, Bedogni F, Tongiorgi E, Fumagalli F, Racagni G, Riva MA. Tratamento crônico com fluoxetina up-
regula a expressão celular bdnf mrna em regiões dopaminérgicas de rato. Int J Neuropsychopharmacol 2006; 9: 307-317.
51 Calabrese F, Molteni R, Maj PF, Cattaneo A, Gennarelli M, Racagni G, Riva MA. O tratamento crônico com duloxetina induz
mudanças específicas na expressão de transcritos bdnf e na localização subcelular da proteína neurotrofina.
Página 20
52 Lu Y, Ho CS, McIntyre RS, Wang W., Ho RC. Efeitos da vortioxetina e fluoxetina no nível do cérebro derivado
fatores neurotróficos (bdnf) no hipocampo de ratos depressivos induzidos por estresse leve e imprevisível crônico. Brain Res Bull
2018; 142: 1-7.
53 Sagud M, Nikolac Perkovic M, Vuksan-Cusa B, Maravic A, Svob Strac D, Mihaljevic Peles A, Zivkovic M, Kusevic Z, Pivac
N. Um estudo prospectivo e longitudinal das concentrações de serotonina plaquetária e fator neurotrófico derivado do cérebro no plasma.
depressão: efeitos do tratamento com vortioxetina. Psychopharmacology (Berl) 2016; 233: 3259-3267.
54 Molteni R, Calabrese F, Mancini M, Racagni G, Riva MA. Modulação basal e induzida por estresse de atividade regulada
proteína associada ao citoesqueleto (arco) no cérebro de rato após tratamento com duloxetina. Psychopharmacology (Berl) 2008; 201: 285-292.
55 Calabrese F, Luoni A, Guidotti G, Racagni G, Fumagalli F, Riva MA. Modulação da plasticidade neuronal após crônica
administração concomitante do novo antipsicótico lurasidona com o ácido valpróico estabilizador do humor. Psicofarmacologia (Berl)
2013; 226: 101-112.
56 Li Y, Abdourahman A, Tamm JA, Pehrson AL, Sanchez C, Gulinello M. A reversão dos déficits cognitivos associados à idade é
acompanhada por aumento da expressão gênica relacionada à plasticidade após a administração crônica de antidepressivos em camundongos de meia-idade.
Pharmacol Biochem Behav 2015; 135: 70-82.
57 Knapska E, Kaczmarek L. Um gene para a plasticidade neuronal no cérebro de mamíferos: Zif268 / egr-1 / ngfi-a / krox-24 / tis8 / zenk?
Prog Neurobiol 2004; 74: 183-211.
58 Henke PG. Via do hipocampo para a amígdala e desenvolvimento de úlcera por estresse. Brain Res Bull 1990; 25: 691-695.
59 Tanaka KF, Samuels BA, Hen R. Expressão do receptor de serotonina ao longo do eixo dorsal-ventral do hipocampo de camundongo.
Philos Trans R Soc Lond B Biol Sei 2012; 367: 2395-2401.
60 El Mansari M, Lecours M, Blier P. Efeitos da administração aguda e sustentada de vortioxetina no sistema de serotonina em
o hipocampo: estudos eletrofisiológicos no cérebro de ratos. Psychopharmacology (Berl) 2015; 232: 2343-2352.
61 Pariante CM, Miller AH. Receptores de glicocorticóide na depressão maior: Relevância para a fisiopatologia e tratamento. Biol
Psychiatry 2001; 49: 391-404.
62 Pariante CM, Pearce BD, Pisell TL, Owens MJ, Miller AH. Translocação independente de esteróide do receptor de glicocorticóide
pelo antidepressivo desipramina. Mol Pharmacol 1997; 52: 571-581.
63 Lambert WM, Xu CF, Neubert TA, Chao MV, Garabedian MJ, Jeanneteau FD. Sinalização de fator neurotrófico derivado do cérebro
reescreve o transcriptoma de glicocorticóide via fosforilação do receptor de glicocorticóide. Mol Cell Biol 2013; 33: 3700-3714.
64 Simons SS, Jr. Cofatores do receptor de glicocorticóide como alvos terapêuticos. Curr Opin Pharmacol 2010; 10: 613-619.
65 Arango-Lievano M, Jeanneteau F. Timing and crosstalk of glucocorticid signaling with cytokines, neurotransmitters and
fatores de crescimento. Pharmacol Res 2016; 113: 1-17.
66 Ma DK, Jang MH, Guo JU, Kitabatake Y, Chang ML, Pow-Anpongkul N, Flavell RA, Lu B, Ming GL, Song H. Neuronal
O gadd45b induzido por atividade promove a desmetilação epigenética do DNA e a neurogênese adulta. Science 2009; 323: 1074-1077.
67 Hawk JD, Abel T. O papel dos fatores de transcrição nr4a na formação da memória. Brain Res Bull 2011; 85: 21-29.
68 Nemoto S, Finkel T. Redox regulação de proteínas forkhead através de uma via de sinalização dependente de p66shc. Ciência
2002; 295: 2450-2452.
69 Guidotti G, Calabrese F, Anacker C, Racagni G, Pariante CM, Riva MA. O receptor de glicocorticóide e a expressão de fkbp5 é
alterado após exposição ao estresse crônico: Modulação por tratamento com antidepressivos. Neuropsychopharmacology 2013; 38: 616-627.
70 Castren E. É química do humor? Nat Rev Neurosci 2005; 6: 241-246.
71 Bamberger CM, Schulte HM, Chrousos GP. Determinantes moleculares da função e do tecido do receptor de glicocorticóide
sensibilidade aos glicocorticóides. Endocr Rev 1996; 17: 245-261.
MANUSCRITO ACEITO
Página 21
Legenda da imagem:
Fig 1: Análise dos níveis totais de mRNA de Bdnf no córtex pré-frontal (PFC) (painel b), dorsal (dHip) (painel b) e ventral
hipocampo (vHip) (painel c) de ratos cronicamente tratados com vortioxetina e expostos ao estresse agudo de natação (ASS).
Os dados são expressos como uma porcentagem de Veículo / Simulação (definido em 100%) e representam a média ± SEM de 7-9
determinações independentes. * p <0,05, *** p <0,001 vs VEH / Sham; ### p <0,001 vs VTX / Sham (ANOVA de duas vias com
PLSD de Fisher).
Fig 2: Análise dos níveis de ARNm Arc (painel adg), cFos (painel beh) e Zif268 (painel cfi) no córtex pré-frontal
(PFC), hipocampo dorsal (dHip) e ventral (vHip) de ratos cronicamente tratados com vortioxetina e expostos ao
estresse agudo de natação (ASS).
determinações independentes. * p <0,05, *** p <0,001 vs VEH / Sham; ## p <0,01, ### p <0,001 vs VTX / Sham; § p <0,05 vs
VEH / ASS (ANOVA de dois fatores com PLSD de Fisher).
Fig 3: Análise dos níveis de proteína GR em todo o homogenato (painel a), nas frações nuclear (painel b) e citosólica de
hipocampo ventral (vHip) de ratos cronicamente tratados com vortioxetina e expostos ao estresse agudo do nado (ASS).
Os dados são expressos como uma porcentagem de Veículo / Simulação (definido em 100%) (painel abc) ou de animais Simulados (painel d) e
representam a média ± SEM de 5-9 determinações independentes. # p <0,05 vs VTX / Sham (ANOVA de dois fatores com Fisher
PLSD).
Fig 4: Análise dos genes responsivos de GR Gadd45 β (painel a), FoxO1 (painel b), Fkbp5 (painel c), Sgk-1 (painel d), Dusp1
(painel e), Nr4a1 (painel f) e P11 (painel g) no hipocampo ventral (vHip) de ratos tratados cronicamente com
vortioxetina e exposto ao estresse agudo de natação (ASS).
determinações independentes. * p <0,05, *** p <0,001 vs VEH / Sham; # p <0,05, ## p <0,01, ### p <0,001 vs VTX / Sham (dois-
forma ANOVA com PLSD de Fisher).
MANUSCRITO ACEITO
Página 22
Figura 1
Figura 2
MANUSCRITO ACEITO
Página 23
Fig 3
MANUSCRITO ACEITO
Página 24
Fig 4
MANUSCRITO ACEITO
Página 25
um gene Primer para frente Primer reverso Probe
Bdnf tot AAGTCTGCATTACATTCCTCGA GTTTTCTGAAAGAGGGACAGTTTAT TGTGGTTTGTTGCCGTTGCCAAG
Arco GGTGGGTGGCTCTGAAGAAT ACTCCACCCAGTTCTTCACC GATCCAGAACCACATGAATGGG
cFos TCCTTACGGACTCCCCAC CTCCGTTTCTCTTCCTCTTCAG TGCTCTACTTTGCCCCTTCTGCC
Zif268 GAGCGAACAACCCTACGAG GTATAGGTGATGGGAGGCAAC TCTGAATAACGAGAAGGCGCTGGTG
Fkbp5 GAACCCAATGCTGAGCTTATG ATGTACTTGCCTCCCTTGAAG TGTCCATCTCCCAGGATTCTTTGGC
FoxO1 GAGTGGATGGTGAAGAGTGTG GGACAGATTGTGGCGAATTG TCAAGGATAAGGGCGACAGCAACAG
Sgk-1 GACTACATTAATGGCGGAGAGC AGGGAGTGCAGATAACCCAAG TGCTCGCTTCTACGCAGC
Dusp1 TGTGCCTGACAGTGCAGAAT ATCTTTCCGGGAAGCATGGT ATCCTGTCCTTCCTGTACCT
P11 AGAGTGCTCATGGAAAGGGA AGCTCTGGAAGCCCACTTTT ATAATGAAAGACCTGGACCAGTGC
36B4 TTCCCACTGGCTGAAAAGGT CGCAGCCGCAAATGC AAGGCCTTCCTGGCCGATCCATC
b) Gene Número de acesso ID do ensaio
Gadd45 β BC085337.1 Rn01452530_gI
Nr4a1 BC097313.1 Rn01533237_m1
Tabela 1: a) Sequências de primers e sondas diretas e reversas usadas em análises de PCR em tempo real e adquiridas da Eurofins MWG-Operon.
b) Sondas adquiridas da Life Technologies, que não divulgaram a sequência.
Proteína Anticorpo primário Anticorpo secundário
GR 1: 500 (Thermo Scientific), 4 ° O / N Anti Rabbit, 1: 2000, RT 1h
β -ACTIN 1: 10000 (Sigma), RT 1h Anti-mouse, 1: 10000, 1h RT
Tabela 2: Condições de anticorpos usadas nas análises de western blot. (O / N: durante a noite; RT: temperatura ambiente)
MANUSCRITO ACEITO

O Tratamento Crônico Com Vortioxetina Melhora A Capacidade de Resposta A Um Estresse Agudo Que Atua Através Do Hipocampo Ventral em Um Glicoc

Enviado por

Dados do documento

Título original

Direitos autorais

Formatos disponíveis

Compartilhar este documento

Compartilhar ou incorporar documento

Opções de compartilhamento

Você considera este documento útil?

Este conteúdo é inapropriado?

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

O Tratamento Crônico Com Vortioxetina Melhora A Capacidade de Resposta A Um Estresse Agudo Que Atua Através Do Hipocampo Ventral em Um Glicoc

Enviado por

Direitos autorais:

Formatos disponíveis

O tratamento crônico com vortioxetina melhora a capacidade de re…stresse agudo que atua através do hipocampo ventral em um glicoc 15/05/2021

Título: O tratamento crônico com vortioxetina melhora o

Autores: Paola Brivio, Giulia Corsini, Marco Andrea Riva,

PII: S1043-6618 (18) 31626-8

Aparecer em: Pesquisa Farmacológica

Data de recebimento: 23 de outubro de 2018

o hipocampo ventral de uma forma dependente de glicocorticóides, Pesquisa Farmacológica

hipocampo de uma forma dependente de glicocorticóides.

Paola Brivio 1 ; Giulia Corsini 1 ; Marco Andrea Riva 1 e Francesca Calabrese 1

* Autor para correspondência: Dra. Francesca Calabrese

Departamento de Ciências Farmacológicas e Biomoleculares

Università di Milano, Via Balzaretti 9, 20133 Milão, Itália

Telefone: + 39-02 50318277; Faxe: + 39-02 50318278

Palavras-chave: antidepressivos, vortioxetina, Bdnf, receptor de glicocorticóide

apesar da recuperação [30,31] e pode prever a recorrência do distúrbio [32].

sob condições desafiadoras.

compartimento nuclear e os níveis de mRNA dos genes regulados por GR.

hipocampo (vHip), a sub-região mais relacionada ao comportamento emocional [34].

2.2. Tratamento farmacológico e procedimento de estresse

Eurofins MWG-Operon and Life Technologies.

2.4. Extração de proteínas e análise de western blot.

anticorpo secundário (ver Tabela 2).

que foi detectado avaliando a densidade da banda a 43 kDa.

2,5. Análise estatística

apresentado como porcentagem média de Veículo / Simulação.

a capacidade de resposta da neurotrofina ao desafio agudo.

p <0,001 vs VEH / Sham; vortioxetina: + 43%, p <0,001 vs VTX / Sham) (Fig.1a).

a estímulos evocados por plasticidade [42].

+ 37%, p <0,05 vs VEH / Sham, vortioxetina: + 50%, p <0,01 vs VTX / Sham).

p <0,05 vs VEH / ASS).

3,3. A vortioxetina crônica facilita a translocação do receptor de glicocorticóide para o

núcleo após um desafio agudo.

facilitar a translocação de GR no núcleo em resposta ao estresse agudo.

(dados não mostrados).

3.4. A vortioxetina promove a transcrição de genes responsivos de GR após o estresse de AS

(quadro complementar 2 a / b).

a interação tratamento X estresse (F 1,34 = 4,485, p <0,05).

VTX / Sham; Dusp1 + 292%, p <0,001 vs VTX / Sham).

Pelo contrário, o pré-tratamento com vortioxetina não influenciou o aumento de Gadd45 β,

expressão devido à exposição ao estresse em dHip e PFC (tabela complementar 2 a / b).

[52] e aumento da concentração plasmática de BDNF em pacientes deprimidos [53].

os IEGs considerados independentemente do pré-tratamento no hipocampo dorsal e no córtex pré-frontal.

uma diminuição concomitante do receptor no compartimento citosólico, possivelmente através da dissociação do

não observaram alterações na expressão de 11 β -HSD1-2.

e duração do estímulo, tipo de célula, sexo, idade (revisado em [65]).

produzir modulando-os, aumentando o benefício potencial que eles podem resultar.

resistência a glicocorticóides [61,71].

Informação sobre o autor

FC e MAR foram responsáveis pelo conceito e design do estudo

PB e GC realizaram e analisaram a análise molecular.

PB realizou o tratamento farmacológico e expôs o animal ao protocolo de estresse.

A análise e interpretação dos dados foram feitas por PB, FC e MAR.

PB redigiu o manuscrito e FC e MAR revisaram criticamente o manuscrito.

Departamento de Ciências Farmacológicas e Biomoleculares, Universita 'degli Studi di Milano

22 Pittenger C, Duman RS. Estresse, depressão e neuroplasticidade: uma convergência de mecanismos.

29 Holsboer F. A hipótese do receptor de corticosteróide da depressão. Neuropsychopharmacology 2000; 23: 477-501.

38 Paxinos G, Watson C. O cérebro de rato em coordenadas estereotáxicas. 1998

Neuropsychopharmacology 2007; 32: 2351-2359.

70 Castren E. É química do humor? Nat Rev Neurosci 2005; 6: 241-246.

VEH / ASS (ANOVA de dois fatores com PLSD de Fisher).

vortioxetina e exposto ao estresse agudo de natação (ASS).

um gene Primer para frente Primer reverso Probe

Bdnf tot AAGTCTGCATTACATTCCTCGA GTTTTCTGAAAGAGGGACAGTTTAT TGTGGTTTGTTGCCGTTGCCAAG