Corante ácido ou aniónico

Hematologia – Aula T2
• coloração vermelho laranja
Esfregaços sanguíneos de sangue periférico: • hemoglobina
• Avaliar morfologia eritrocitária • grânulos dos eosinófilos
• Avaliar morfologia leucocitária • proteínas nucleares catiónicas (contribuição
• Avaliar morfologia plaquetária para a coloração do núcleo)
• Contagem leucocitária diferencial
Quando a medula óssea liberta células mais jovens as
Quando se deve fazer estudo do sangue células têm RNA e ficam mais azuladas.
microscopicamente manual?
Neutrófilos – estruturas neutras com afinidade para os
Pela DGS deverá ser efetuado sempre que a clínica
dois corantes
ou qualquer alteração inesperada nas contagens e ou
respetivos índices hematimétricos assim o sugiram, A lâmina depois de corada também tem de ser bem
devendo o mesmo ser objeto de relatório detalhado seca ao ar. Após secagem adequada, a montagem da
com valor para o diagnóstico. lâmina é opcional, se a lâmina for arquivada é melhor
realizar montagem para melhor preservação.
Extensão do sangue periférico
• Sem grandes demoras após colheita
(minimizar artefactos)
• Ajuste do ângulo da lâmina espalhadora de
acordo com a viscosidade/Hct da amostra
o Amostras mais viscosas deve-se
diminuir o ângulo do esfregaço
• A extensão de sangue não deve ser
demasiado fina ou demasiado espessa
• Secagem ao ar, rápida e eficaz
Avaliação da qualidade do esfregaço
Fixação Devemos observar macroscopicamente, avaliando se
• Em metanol 100% 10-20 min foi efetuado um correto espalhamento, e se o
• Só depois da lâmina estar completamente esfregaço tem os seus 3 componentes, cabeça, corpo
seca e franja.
• Se não estiver bem seca pode ocorrer
A distribuição dos leucócitos na lâmina não é regular:
artefacto característico dos conteúdos
nucleares parecerem vazar para o citoplasma • Extremidade com mais neutrófilos e
monócitos
Coloração método do tipo Romanowsky
• Linfócitos tendem a acumular-se no meio da
Tem de ter sempre um corante azul básico e um
lâmina
corante vermelho ácido
• Quando há grandes células imaturas (blastos,
Corante básico ou catiónico promielócitos e mielócitos) acumulam-se mais
nos bordos do que na região central
• coloração azul violeta
• ácidos nucleicos e nucleoproteínas
• grânulos dos basófilos
• coloração ténue dos grânulos dos neutrófilos
Hematopoiese
É o processo de produção das células sanguíneas
(eritrócitos, leucócitos e plaquetas)
Semi-vida das células sanguíneas
Semi-vida dos GR (glóbulos rubros) - 120 dias
Semi-vida das plaquetas - 8 a 10 dias
É constituída pela medula hematopoiética (medula
vermelha – local exato onde ocorre a hematopoiese) e
pela medula amarela (tecido adiposo).
Ao nascimento todas as cavidades ósseas estão
preenchidas por tecido hematopoético, que vais sendo
substituído por tecido adiposo, com o passar dos
anos.

Semi-vida dos leucócitos - variável de acordo com o Ossos longos vão perdendo capacidade
tipo celular: hematopoiética.

• Granulócitos - 8-10h na circulação periférica à

migração para os tecidos (1-2d)
• Linfócitos – anos

A renovação das células é permanente e depende das

necessidades do organismo. Por exemplo, um
indivíduo com uma hemorragia, a medula começa a
trabalhar muito para aumentar a produção de modo a
colocar os eritrócitos cá fora mais rapidamente, por
este motivo podem ser encontrados células mais
imaturas. Adulto:

A medula óssea tem a capacidade de aumentar a Medula óssea hematopoiética (MO vermelha) limitada

produção 5 a 10 vezes. ao esqueleto axial (corpos vertebrais, costelas,

esterno, pélvis, crânio) e às extremidades proximais
Localizações anatómicas dos ossos longos
Só a partir dos 7 meses de vida dentro do útero é que
Fígado e baço mantêm uma capacidade residual para
a medula óssea se torna o principal órgão
hematopoiese.
hematopoiético.
Pode ocorrer hematopoiese extramedular em certas
Após o nascimento, a medula óssea é o órgão
patologias, nomeadamente no baço, fígado, sistema
hematopoiético mais importante, constituindo o único
linfático, entre outros.
foco de hematopoiese, em condições normais.

Histologia da medula óssea

A hematopoiese ocorre no espaço intratrabecular nas
cavidades medulares.

Consiste num padrão de vasos (rede microvascular), nervos,

células hematopoiéticas em vários estadios de maturação,
células do estroma reticuloendotelial e tecido adiposo.

Medula óssea
Localiza-se na cavidade dos ossos longos (nas
crianças e adultos jovens) e do esqueleto axial.

Na rede de osso trabecular tem ilhas hematopoiéticas
e tecido adiposo.
É importante saber a idade para saber se é normal ou
não ter tecido adiposo. Pois à medida que a idade
avança diminui a quantidade de células e aumenta a
quantidade de tecido adiposo.
Espaço vascular
• A microvasculatura da medula óssea é
constituída por uma rede de sinusóides
• A hematopoiese só pode ocorrer no espaço
intersticial entre esses sinusóides, garantindo
a proximidade ao suprimento sanguíneo
Em determinado momento da maturação das células
hematopoiéticas dá-se a sua passagem desde os
cordões medulares para o sangue periférico, através
de aberturas nas células endoteliais da parede
sinusoidal.
Pode, em casos de patologias ocorrer uma infiltração
(neoplásica ou fibrose) e a medula fica com menos
espaço e as células não funcionam como deviam.
Componente extravasculares
Parênquima: componente hematopoiético (células
hematopoiéticas, incluindo células precursoras e
maduras das várias linhas celulares)
Estroma: envolve as células hematopoiéticas da
medula óssea:
Componente celular - adipócitos, fibroblastos, células
endoteliais, células mesenquimatosas, células
reticulares, macrófagos, etc
Secretam moléculas extracelulares, como colagénio,
glicoproteínas (fibronectina, laminina),
glicosaminoglicanos (ácido hialorónico, condroitina), e
glicoproteínas (fatores de de crescimento necessários
para a sobrevivência das células estaminais) que
formam a matriz extracelular.
Comunicação
A comunicação intercelular e com a matriz extracelular
realiza-se por intermédio de moléculas de adesão e
por fatores solúveis (fatores de crescimento, citocinas,
interleucinas… que chegam à medula pela corrente
sanguínea) dando origem a nichos hematopoiéticos.
Estas células, fatores de comunicação criam um
ambiente bom para as células progenitoras
hematopoiéticas sobreviverem, proliferarem e
diferenciarem.
Outras funções da medula óssea:
• Destruição de eritrócitos envelhecidos
• Armazenamento de ferro
A hematopoiese tem origem na célula estaminal
hematopoiética. Esta é uma célula rara com
capacidade de auto-renovação e proliferação ilimitada,
capacidade de diferenciação (pluripotencial) -
capacidade de originar células comprometidas com a Células blásticas
diferenciação. Esta é uma célula pequena, São as primeiras células precursoras que se
mononuclear e irreconhecível a microscopia ótica. conseguem reconhecer morfologicamente.

Estes são os 1º percursores que se conseguem ver:

Células maduras efetoras – eritrócitos, neutrófilos,

monócitos, linfócitos, plaquetas.

A célula progenitora linfoide só pode produzir Fatores de crescimento e citocinas

linfócitos. Já a células progenitora mieloide pode Diferentes fatores de transcrição regulam a
produzir eritrócitos, plaquetas e mieloides sobrevivência células estaminais, enquanto outros
estão envolvidos na diferenciação das diferentes
linhas celulares.

Fatores de crescimento são fundamentais para a

proliferação, diferenciação e melhoram a função das
células maduras

Regulação
O microambiente da medula óssea proporciona
fatores estimulantes e fatores inibidores.

Os fatores estimulantes são sintetizados

bipotentes – diferencia em 2 celulas diferentes
fundamentalmente pelos Macrófagos, Linfócitos T,
unipotentes – diferencia em 1 único tipo de célula Células endoteliais e outras células do estroma.

Parece existir relação entre os fatores e as patologias

hematológicas neoplásicas.

A regulação das células progenitoras medulares e a

manutenção de níveis adequados de células no SP
constitui um processo complexo em que intervêm
fatores medulares e sinais gerados nos tecidos
periféricos com base nas necessidades.

Mielograma Biópsia óssea

Presença de CD34 indica que as células são imaturas. O exame da medula óssea fornece-nos uma avaliação
qualitativa e a contagem diferencial dos diferentes
tipos celulares hematopoiéticos.

A amostra de medula óssea pode ser obtida por

aspiração para citologia ou biópsia para histologia.
Aspirado medular
É um método fácil de executar, barato e que pode
ajudar no diagnóstico, no follow-up e também no
acompanhamento da terapia.
Estudo citológico - estudo morfológico das diferentes
células e contagem diferencial, também efetua a
pesquisa de células ”estranhas” a uma MO normal
(exemplo- células metastáticas)
Local de colheita
Depende da idade, da estrutura corporal…
Normalmente é na crista ilíaca posterior ou a face
anterior do esterno (não em crianças).
Quando pertinente pode proceder-se à colheita:
• na crista ilíaca anterior (espinha antero-
superior), em doentes imobilizados quando
não os conseguimos virar
• na face medial da tíbia, em crianças até aos
18 meses
O esfregaço deve ser feito logo após a colheita.
Limitações do procedimento
Hemofilia - constitui contra-indicação relativa,
obrigando a administração prévia de Fator VIII
Trombocitopenia - o procedimento é contra-indicado
se a quantidade de plaquetas for < 20 x 109/L. Esta
limitação é ultrapassada com transfusão de
concentrado de plaquetas antes do procedimento.
Acesso difícil ao local de colheita.
Biópsia óssea
Este procedimento fornece um fragmento de medula,
sendo este a única forma de avaliar a histologia da
medula.
A realização da biópsia óssea está indicada para
punção seca normalmente em doenças associadas a
fibrose (leucemia de células em cabeleira,
mielofibrose, LMA-M7)
Colheita
A colheita não pode ser efetuada no esterno.
Deve ser realizada na Espinha ilíaca póstero-
superior (doente em decúbito lateral) ou Espinha
ilíaca antero-superior (doente em decúbito dorsal).
Limitações
Hemofilia- constitui contra-indicação relativa,
obrigando a administração prévia de fator VIII
Trombocitopenia - o procedimento é contra-indicado
se a quantidade de plaquetas for < 50 x 109/L
Eritropoiese
Processo regulado de produção de eritrócitos através
de uma sequência ordenada de eventos que levam à
acumulação gradual de hemoglobina no citoplasma e
perda de organelos celulares e de capacidade de
síntese.
Qual o objetivo?
Manter um nível constante de eritrócitos em circulação
para que este consigam assegurar as necessidades
de oxigénio dos tecidos.
Requer mecanismos de regulação que equilibrem a
taxa de produção e a de destruição fisiológica e que
sejam capazes de aumentar a taxa de produção em
condições patológicas.
Diferenciação eritróide
célula estaminal mielóide multipotente – produz
granulócitos, plaquetas e leucócitos
CFU–E – primeiro precursor eritróide • Em circunstâncias normais o reticulócito fica
morfologicamente identificável na na medula óssea 1 a 2 dias mas já com muito
medula óssea pouco RNA
• Quando vai para circulação periférica demora
cerca de 1 a 2 dias até perder todo o seu
RNA.

Maturação
Remodelação membranar para obter as capacidade
típicas do eritrócito com capacidade de trocas gasosas
e uma grande deformabilidade para passar na
microcirculação sem se destruir.

O citoplasma começa a ficar mais

acinzentado e depois rosa devido ao
aumento de hemoglobina e
diminuição do conteúdo de RNA.

Eritrócito maduro
• Célula anucleada
• Disco bicôncavo
• Grande deformabilidade – passa em
microcirculação
• Transporte de oxigénio e de dióxido de
carbono
Ainda no interior da medula óssea, o núcleo é • Vida 100-200 dias
eliminado do citoplasma do eritroblasto dando origem
ao reticulócito.

Quanto mais imaturo mais restos de resíduos de RNA.

Reticulócito
• Ainda contém RNA ribossómico que precipita
e pode ser visualizado utilizando corantes
supravitais (corantes em que as células não
estão fixadas)
• Ainda produz hemoglobina porque ainda tem
algum RNA
Com exceção do período neonatal e ocasionalmente
durante a gravidez, a existência eritroblastos em
circulação não é normal e geralmente indica

hiperplasia eritróide (anemias muito graves) ou

infiltração da medula óssea (fibrose ou tumores
sólidos).

Regulação da eritropoiese
É essencialmente pela eritropoietina (EPO). Esta é
uma hormona reguladora, que atua perante ligação a
recetores específicos na superfície dos progenitores
eritróides medulares, induzindo a maturação e
proliferação, por ativação de fatores de transcrição.

Síntese de EPO:

• Células de revestimento dos capilares

peritubulares do rim (90%)
• Hepatócitos (10%)

O estímulo fundamental para a produção de EPO é a

disponibilidade de O2 para as necessidades
metabólicas dos tecidos.

Ocorre em caso:

• Anemia
• Altitude
• Hemoglobina de alta afinidade (não larga
oxigénio)
• Défice de perfusão renal que afeta a entrega
de oxigénio ao rim