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Jornal de Patologia Comparada 205 (2023) 17e23

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Jornal de Patologia Comparada

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Doença infecciosa

Infecção natural pelo vírus da influenza aviária H5N1, clade 2.3.4.4b,

de ocorrência natural, em três gatos domésticos na América do Norte
durante 2023
Sarah J. Sillman* , Mary Drozd, Duan Loy, Seth P. Harris
Centro de Diagnóstico Veterinário de Nebraska, Faculdade de Medicina Veterinária e Ciências Biomédicas, Universidade de Nebraska-Lincoln, 4040 East Campus Loop
Norte, Lincoln, Nebraska 68583-0907, EUA

informações do artigo abstrato

Historia do artigo: A cepa euroasiática de gripe aviária altamente patogênica (GAAP) H5N1 é um patógeno devastador para aves
Recebido em 19 de maio de 2023 que também tem a capacidade de infectar mamíferos. Este relatório descreve a apresentação, resultados de
Aceito em 4 de julho de 2023
casos clínicos (incluindo hemograma e bioquímica sérica), lesões macroscópicas e microscópicas e detecção de
vírus em três gatos domésticos infectados por HPAI H5N1 dos EUA em 2023. Todos os três gatos apresentaram
Palavras- anormalidades neurológicas e foram sacrificados devido a um mau prognóstico dentro de 2 dias (dois gatos) ou
10 dias (um gato) do início clínico conhecido da doença. A necropsia revelou consistentemente congestão
chave: encefalite
pulmonar e edema, e malácia cerebrocortical com hemorragia também foi observada no gato que sobreviveu
de gatos, vasculite por vírus da influenza aviária
altamente patogênica por 10 dias. Na sua patologia, todos os gatos apresentavam encefalite necrosante e pneumonia intersticial com
congestão pulmonar, edema, vasculite e trombose vascular. Um gato também apresentou necrose multifocal
microscópica no fígado, pâncreas e glândula adrenal. Até onde sabemos, este relatório é o primeiro a detalhar
achados patológicos em gatos naturalmente infectados por GAAP H5N1 durante o surto generalizado na América
do Norte que começou em 2021, e descreve um gato sobrevivendo por 10 dias após o início
da encefalite por GAAP H5N1. © 2023 Os Autores. Publicado pela Elsevier Ltd. Este é um artigo de acesso
aberto sob a licença CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc

No final de 2021, a cepa euroasiática de gripe aviária altamente patogênica (GAAP)
H5N1 foi detectada na América do Norte, iniciando um surto que continua em 2023 e
que afetou pelo menos 60 milhões de aves comerciais e selvagens nos EUA [ 1,2 ]. A
repercussão nas infecções de GAAP H5N1 ocorre em mamíferos terrestres e marinhos
[3]. Durante pandemias anteriores de gripe aviária com H5N1 (A/swan/Alemanha/
R65/06) em 2006 e com H5N6 (A/felino/Coréia/H646/2016) em 2016, os gatos
domésticos eram naturalmente suscetíveis às cepas H5 HPAI [ 4 ,5]. Esses vírus
apresentam diferenças temporais e filogenéticas em comparação com o atual vírus
HPAI H5N1 da linhagem ganso/Guangdong, clado 2.3.4.4, que circula nos EUA desde
2021 [6]. Portanto, há necessidade de continuar a examinar essas infecções transmitidas
por gatos domésticos, especialmente porque os gatos vivem em estreita proximidade
com os seres humanos e, teoricamente, têm um papel na transmissão do vírus da gripe
[7]. As infecções naturais e experimentais por GAAP H5 em gatos resultaram em várias
combinações de lesões, incluindo necrose multifocal das glândulas hepática e adrenal,
conjuntivite, encefalite e/ou pneumonia [5,8e10].
* Autor correspondente.
Endereço de e-mail: sarah.vitosh@unl.edu (SJ Sillman).
No entanto, os relatos de lesões felinas associadas à atual cepa de GAAP que circula
predominantemente na América do Norte (clado H5 da Eurásia 2.3.4.4b com segmentos
de linhagem norte-americanos) são limitados e a variedade de apresentações de casos
clínicos e patológicos para gatos infectados não foi totalmente descrita. . Este relatório
descreve a apresentação dos casos, resultados de hemograma e bioquímica sérica,
lesões macroscópicas e microscópicas e detecção do vírus HPAI H5N1 em três gatos
domésticos em Nebraska, EUA, que foram naturalmente infectados durante o recente
surto norte-americano de H5N1 entre aves domésticas e selvagens. . O relatório
destaca as lesões primárias da infecção e descreve a variação das lesões associadas à
duração da doença.
Em janeiro de 2023, um gato doméstico de pêlo curto, macho, castrado, de 2 anos
de idade (caso 1) foi apresentado a uma clínica veterinária no nordeste de Nebraska
como incapaz de deambular e anorético. O gato foi mantido ao ar livre e estava
desaparecido há alguns dias antes de ser encontrado em estado anormal. Três outros
gatos soltos e ao ar livre foram alojados no local. O exame físico documentou ani
socoria, esclera injetada, nistagmo, perda de propriocepção, tremores, hiperestesia,
pirexia (temperatura corporal 40,6 C; intervalo de referência [RI] 36,7e38,9 C) e uma
frequência respiratória elevada de 70 respirações por minuto (RI 15e42 respirações por
minuto). A glicemia foi

https://doi.org/10.1016/j.jcpa.2023.07.001 0021-9975/©
2023 Os Autores. Publicado pela Elsevier Ltd. Este é um artigo de acesso aberto sob a licença CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
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200 mg/dl (IR 80e120 mg/dl). O gato recebeu tratamento com dexametasona,
ampicilina, gentamicina, maropitant e solução de Ringer com lactato (SLR). No
dia seguinte, o gato teve uma série de cinco episódios convulsivos apesar da
administração de diazepam e foi sacrificado devido à deterioração do seu estado.
Na necropsia, os pulmões estavam difusamente e moderadamente
congestionados e edematosos, e havia derrame transudativo pericárdico leve.
Manchas cinzentas distintas, aleatórias e mais escuras, intercaladas com áreas
de coloração normal, manchavam sutilmente a substância cinzenta cortical
cerebral. Amostras representativas de coração, traqueia, esôfago, pulmão, baço,
fígado, glândula adrenal, músculo esquelético, linfonodo mesentérico, pâncreas,
estômago, pequenos e grandes testículos, rim e cérebro foram fixadas em
formalina tamponada neutra a 10% e processadas para exame histopatológico
de rotina com coloração de hematoxilina e eosina (HE).
Microscopicamente, as lesões eram proeminentes no pulmão e no cérebro,
mas também envolviam múltiplos órgãos viscerais. As secções pulmonares
apresentavam edema pulmonar difuso e grave e congestão vascular associada a
áreas irregulares de pneumonia intersticial leve e vasculite. A pneumonia
intersticial foi caracterizada pela expansão das paredes alveolares por ÿbrina
solta a agregada, ocasionalmente associada a alguns macrófagos e neutrófilos.
Paredes vasculares ocasionais apresentavam necrose ÿbrinóide, invasão por
pequeno número de leucócitos mistos e/ou lúmens ocluídos por trombos de
ÿbrina (fig. 1A). O epitélio bronquiolar era frequentemente parcialmente
desnudado, e células epiteliais autolíticas a agudamente degenerativas eram
esfoliadas nas vias aéreas misturadas com líquido edematoso e muco.
Seções do córtex cerebral, cerebelo, tronco cerebral e campus do
hipopótamo apresentavam meningoencefalite com áreas características de
necrose em forma de cunha e laminares centradas na substância cinzenta
cortical cerebral, hipocampo e núcleos do tronco cerebral (Fig. 2A) que estavam
associadas à vasculite . A vasculite variou desde paredes dos vasos parcialmente
obscurecidas por neutrófilos, linfócitos e/ou restos cariorréticos até necrose
ÿbrinóide ocasional (fig. 2B). Áreas de necrose em forma de cunha continham
grupos dispersos ou agregados de neurônios necróticos caracterizados por
aumento da angularidade e citoplasmática.

Fig. 1. Infecção pelo vírus da influenza aviária de alta patogenicidade H5N1, gato, caso 1. (A) Pulmão. Pneumonia intersticial caracterizada por congestão vascular aguda, edema alveolar e
exsudação de ÿbrina misturada com poucos neutrófilos e macrófagos nos septos e lúmenes alveolares. Trombose (seta). ELE. ÿ400. (B) Fígado. Focos aleatórios multifocais, de tamanho
variável, de necrose aguda (pontas de seta). As áreas necróticas contêm ÿbrina, detritos cariorréticos, eritrócitos e neutrófilos e/ou macrófagos esparsos. Região de hepatócitos normais indicada
para comparação (H). ELE. ÿ200. (C) Córtex adrenal. Grandes focos de necrose aguda aleatória (pontas de seta). Região de células corticais adrenais normais indicadas para comparação (A). ELE. ÿ100.
(D) Pâncreas. Necrose grave, multifocal a coalescente, manifestando-se como extensa perda de células exócrinas pancreáticas e colapso dos lóbulos (pontas de seta). Mistura de leucócitos
inflamatórios e detritos cariorréticos pode ser encontrada no estroma remanescente. Região de células exócrinas pancreáticas normais indicadas para comparação (E). ELE. ÿ100. Detalhe:
vários vasos observados no pâncreas com necrose endotelial, alteração ÿbrinoide e trombose.

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Fig. 2. Infecção pelo vírus da influenza aviária de alta patogenicidade H5N1, gatos. (A) Cérebro, córtex cerebral, caso 1. Área de necrose em forma de cunha com espongiose (delineada por pontas de seta).
Sulco (*). Poucos linfócitos, macrófagos e neutrófilos no espaço meníngeo acima do foco necrótico. ELE. ÿ40. (B) Cérebro, tronco encefálico, caso 1. Vasculite com necrose e alteração ÿbrinoide (seta preta).
Espongiose e neurônios necróticos (seta branca). ELE. ÿ400. (C) Cérebro, córtex cerebral, caso 2. Área de necrose em forma de cunha com malácia e cavitação (delineada por pontas de seta). ELE. ÿ40. (D)
Cérebro, córtex cerebral, caso 2. Área fissurada contendo eritrócitos, neutrófilos, macrófagos e ÿbrina na borda da área malácica. O neurópilo circundante é espongiótico, contendo astrócitos gemistocíticos
(setas). Manguito perivascular de células mononucleares presente. ELE. ÿ200.

eosinofilia e picnose nuclear. O neurópilo adjacente apresentava espongiose leve
a moderada e fragmentos cariorréticos dispersos, células gitter, esferoides,
neutrófilos infiltrando o parênquima e raros nódulos gliais. Havia focos pequenos e
esparsos de necrose de células de Purkinje com espongiose no córtex cerebelar,
mas a maior parte do cerebelo não foi afetada. As leptomeninges apresentavam
inÿamação leve, linfo-histiocítica e neutrofílica, que se estendia até os espaços de
Virchowe-Robin.
O fígado (fig. 1B), a glândula adrenal (fig. 1C) e o pâncreas exócrino (fig. 1D)
apresentavam áreas aleatórias de necrose aguda de tamanho pequeno a médio,
com pequenas quantidades de inflamação supurativa a histiocítica. Os focos
necróticos eram bem circunscritos e associados a detritos cariorréticos e leve
exsudação de ÿbrina, células endoteliais picnóticas e trombose vascular. O
pâncreas apresentava inflamação linfoplasmocítica intersticial leve adicional que
foi considerada um achado não relacionado. Vasos sanguíneos ocasionais no
pâncreas e outros órgãos, incluindo o coração e o trato intestinal, apresentavam
degeneração transmural mínima a leve de pequenos vasos sanguíneos. Os tecidos
linfóides no baço, no linfonodo mesentérico e no trato intestinal apresentaram
depleção linfóide leve. No linfonodo mesentérico, o
os seios medulares continham quantidades moderadas de ÿbrina misturada com
macrófagos e neutrófilos. Dentro de uma seção representativa do rim havia
pequenos grupos de células epiteliais tubulares corticais que apresentavam necrose
coagulativa aguda sem inflamação.
Aproximadamente 24 horas após a apresentação do caso 1, outro gato da
mesma residência, uma fêmea de 8 meses de idade, castrada, Gato Doméstico de
Pêlo Longo (caso 2), tornou-se sonolento e andava em círculos. Hemograma e
bioquímica sérica foram realizados na apresentação inicial e houve hiperalbuminemia
leve (Tabela Suplementar 1). O gato respondeu aos estímulos e foi observado
comendo e bebendo. Para suspeita de exposição a substâncias tóxicas, carvão
ativado foi administrado por via oral e o tratamento diário consistiu em fluidoterapia
intravenosa de LRS, dexametasona e maropitant. Este gato sobreviveu por 10 dias
com sinais neurológicos estáveis, após os quais subitamente ficou deitado
lateralmente com tremores contínuos. O gato foi sacrificado devido a um mau
prognóstico.
Na necropsia, este gato estava ligeiramente abaixo do peso com atrofia
muscular moderada. Havia uma pequena quantidade de líquido com crosta e
sangue ao redor das narinas. Todos os lobos pulmonares estavam difusamente congestionados.

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Durante o processo de remoção do cérebro, aproximadamente 20 ml de líquido
cefalorraquidiano sanguinolento exsudaram do forame magno.
Ao longo do córtex cerebral esquerdo, afetando mais gravemente os lobos occipital
e temporal, havia uma região mal demarcada de malácia com hemorragia focal. Os
giros friáveis e amolecidos eram distintamente amarelos claros (Fig. 3A). No corte
transversal, o foco hemorrágico era uma área de fragmentação parenquimatosa e
fissura com hemorragia (fig. 3B). Amostras representativas de concha nasal,
amígdala, glândula pituitária, bexiga urinária, rim, coração, traquéia, esôfago,
pulmão, baço, fígado, glândula adrenal, músculo esquelético, linfonodo mesentérico,
pâncreas, estômago, intestino delgado, cólon e cérebro foram ÿ fixado em formalina
tamponada neutra a 10% e processado para exame histopatológico de rotina com
coloração HE.
Gemistócito: astrócito reativo
Microscopicamente, o córtex cerebral apresentava áreas de malácia em forma
de cunha a laminares com rarefação variável, cavitação e hemorragia (Fig. 2C).
Essas áreas apresentaram extensa perda de neurópilo; o tecido estava friável e
fragmentado durante o corte. O parênquima rarefeito consistia em uma rede de
pequenos vasos sanguíneos de suporte entre neurópilos escassos e fragmentados,
com extensa perda neuronal e infiltração por abundantes células gitter e astrócitos
misturados com menos neutrófilos, linfócitos e números variáveis de eritrócitos (Fig.
2D ) . . Numerosos astrócitos gemistocíticos estavam espalhados por todo o córtex
e eram mais densos em torno dos focos de malácia. Havia manguitos perivasculares
mononucleares ocasionais, de tamanho pequeno a moderado, em todo o cérebro,
que eram proeminentes perto de áreas malácicas, com manguitos mínimos a leves
no cerebelo e no tronco cerebral. O tronco cerebral e as meninges cerebelares
continham poucos linfócitos e macrófagos. Havia uma câmara de digestão ocasional
na substância branca do tronco cerebral.
O pulmão apresentava pneumonia intersticial semelhante ao caso 1, com adição de
mais macrófagos povoando os septos alveolares, trombose vascular menos
evidente e alguns focos de hiperplasia leve de pneumócitos tipo II. O interstício
miocárdico continha alguns aglomerados aleatórios de linfócitos.
Em abril de 2023, uma gata doméstica de pêlo curto, castrada, de 6 meses de
idade (caso 3) foi apresentada a uma clínica veterinária no centro de Nebraska por
dificuldade de deambulação, letargia e anorexia. Este animal residia ao ar livre e
era um dos nove gatos presentes no local. Ao exame físico, havia secreção mucóide
moderada pelas narinas e temperatura corporal de 39,5°C (IR 36,7e38,9°C).
O hemograma estava dentro dos limites normais. A bioquímica sérica revelou
apenas anomalias ligeiras, nomeadamente hiperglicemia,
Fig. 3. Infecção pelo vírus da influenza aviária de alta patogenicidade H5N1, gato, caso 2. (A) Hemisfério cerebral esquerdo e cerebelo. Área distinta de malácia marcada por descoloração amarela (delineada
por pontas de seta) e um foco hemorrágico vermelho bem demarcado (seta). (B) Corte transversal do cérebro ao nível do foco hemorrágico com área seccionada de malácia com fragmentação de neurópilos,
fissura e hemorragia (demarcada por pontas de seta).
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diminuição do nitrogênio ureico e da creatinina no sangue, hiperproteinemia,
hiperglobulinemia, hiperbilirrubinemia e hiperlipasemia (Tabela Suplementar 1).
Apesar do tratamento de suporte com metronidazol, amoxicilina-ácido clavulânico,
emodepside/prazi quantel tópico, atropina e fluidoterapia subcutânea, o gato
continuou a declinar e foi sacrificado 1 dia após a apresentação.
Num período de 2 semanas em torno deste caso, quatro gatos adicionais morreram
nas instalações, mas não estavam disponíveis para avaliação post-mortem.
Na necropsia do caso 3, todos os lobos pulmonares estavam manchados de
vermelho com atelectasia irregular ou hiperinsuflação. Edema pulmonar grave foi
observado no corte. Amostras representativas da glândula tireóide, bexiga urinária,
medula óssea, rim, coração, traqueia, esôfago, múltiplos lobos pulmonares, baço,
fígado, músculo esquelético, linfonodo, pâncreas, estômago, intestinos delgado e
grosso e cérebro foram fixadas em 10 % de formalina tamponada neutra e
processada para exame histopatológico de rotina com coloração HE.
Histologicamente, as lesões cerebrais foram semelhantes aos casos 1 e 2, com
áreas de inflamação em forma de cunha, mais comumente localizadas no córtex
cerebral. No entanto, áreas de inflamação de células gliais e mononucleares com
linfócitos mistos, plasmócitos e macrófagos eram mais extensas e numerosas do
que as observadas em casos anteriores e frequentemente apresentavam restos
celulares mais abundantes, neurônios e células gliais degenerados e satelitose
neuronal (figs. 4A e C). Os manguitos de células inflamatórias compostos por
linfócitos, plasmócitos, macrófagos e neutrófilos expandiram os espaços de
Virchowe-Robin, e os vasos mais gravemente afetados apresentaram invasão
leucocitária na parede vascular, escassas quantidades de necrose ÿbrinoide e
necrose de células endoteliais (fig. 4B ) . O neuropilo adjacente apresentava
espongiose moderada com gliose moderada e neurônios dispersos e agudamente
necróticos. Nos pulmões, as vias aéreas distais continham líquido edematoso
proteico abundante misturado com ÿbrina frouxamente disposta (Fig. 4D) e os
septos alveolares estavam obscurecidos por trombos de ÿbrina ou levemente
espessados por hipertrofia de pneumócitos.
Tecidos e esfregaços dos três casos foram processados para reação em cadeia
da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) para determinar a presença
ou ausência da cepa H5 da Eurásia de GAAP seguindo protocolos fornecidos pela
Rede Nacional de Laboratórios de Saúde Animal do Departamento de Agricultura
dos EUA. (USDA NAHLN). O RNA foi extraído conforme descrito usando o kit de
isolamento de RNA viral MagMAX 96 (AM 1836; Applied Biosystems,
www.thermoÿsher.com) com o processador de partículas magnéticas KingFisher
Flex (Thermo Fisher Scientific, www.thermoÿsher.com) .
Cadeia de polimerase de transcrição reversa quantitativa em tempo real
Neurópilos: compreende o que é substância cinzenta
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Fig. 4. Infecção pelo vírus da influenza aviária de alta patogenicidade H5N1, gato, caso 3. (A) Cérebro, córtex cerebral. Área discreta de inflamação em forma de cunha com necrose neuronal associada. ELE.
ÿ40. (B) Cérebro em maior ampliação. Inÿamação linfo-histiocítica cortical cerebral envolvendo meninges e regiões perivasculares. ELE. ÿ200. Detalhe: espongiose associada, necrose neuronal, gliose e
vasculite ÿbrinoide. (C) Tronco cerebral. Gliose localizada e satelitose neuronal. ELE. ÿ400. (D) Pulmão. Pneumonia intersticial com trombose vascular focalmente extensa, congestão vascular localizada e
exsudação de ÿbrina. ELE. ÿ200.

(rRT-PCR), que tem como alvo o gene influenza M 14, foi realizada
utilizando o sistema 7500 FAST Real-time PCR System (Applied
Biosystems) e H5 AM/EA 2014 e os reagentes AgPath-ID OneStep RT
PCR (Applied Biosystems ) de acordo com o protocolo dos Laboratórios
Nacionais de Serviços Veterinários (NVSL) do USDA fornecido aos
laboratórios NAHLN do USDA. Um valor limite do ciclo (Ct) de 45 foi
considerado um resultado negativo. Para o caso 1, uma apresentação
aguda, o rRT PCR detectou o vírus da gripe aviária (AI) e o subtipo H5
no cérebro (AI Ct 12.26, AI H5 Ct 12.38), um esfregaço nasal profundo
post-mortem (AI Ct 35.30, AI H5 Ct 38,34) e fígado (AI Ct 19,20, AI H5 Ct trogen, www.thermoÿsher.com), usado na diluição de 1:1000. Os
19,87). Uma amostra fecal do gato também foi testada, mas a IA não foi
detectada. Swabs nasais foram coletados dos três gatos vivos (gato do
caso 2 e dois gatos clinicamente normais) 7 dias após a morte do caso
1, e IA não foi detectada nessas amostras. Para o caso 2, uma
apresentação crônica, IA com subtipo H5 foi detectada por PCR no
cérebro (AI Ct 30,10, AI H5 Ct 31,31) e fígado (AI Ct 33,90, AI H5 Ct
34,12). Um esfregaço nasal profundo obtido na necropsia não detectou
IA. Para o caso 3, um caso agudo, foi detectada IA com subtipo H5 no
cérebro (AI Ct 17,88, AI H5 Ct 17,06). Amostras não negativas foram encaminhadas para oforam
e conÿrmado como clado Eurasiano 2.3.4.4b H5N1 HPAI. Um resumo
dos resultados é fornecido na Tabela Suplementar 2.
A imunohistoquímica para o vírus influenza A foi realizada em cortes
de 4 mm de tecidos embebidos em parafina e fixados em formalina,
previamente avaliados e descritos com HE. As lâminas foram
desparafinadas e imunomarcadas usando um corante químico
imunohistoquímico automatizado (Benchmark Ultra IHC/ISH System;
Roche Diagnostics, https://diagnostics-roche.com). O anticorpo primário
foi um anticorpo nucleoproteico do vírus influenza A de coelho (Invi
controles positivo e negativo para marcação do vírus influenza consistiram
em uma lâmina contendo tecido positivo conhecido (pulmão de animal
infectado experimentalmente) e lâminas de amostras de teste tratadas
com um anticorpo irrelevante (imunoglobulina policlonal de coelho
normal), respectivamente. Após a desparafinização, as lâminas foram
incubadas com uma solução de condicionamento celular a 95°C por 64
min, e a incubação do anticorpo primário foi por 28 min com aquecimento
desligado. A incubação de anticorpos secundários e a marcação
imunológica USDArealizadas
NVSL com reagentes comerciais utilizando os protocolos reco

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corado com hematoxilina por 4 min, coberto com lamínula e examinado por
microscopia óptica quanto à imunorreatividade.
No caso 1, houve rara marcação imunológica positiva em miócitos cardíacos,
células epiteliais tubulares da medula renal, uma célula descamada em um
bronquíolo e células cromafins adrenais. Houve imunomarcação multifocal ocasional
das células epiteliais do córtex adrenal e das células cerebelares de Purkinje e
células granulares associadas a áreas de necrose. As células epiteliais pancreáticas
exócrinas e ductais e as células ganglionares do plexo mioentérico dos intestinos
delgado e grosso apresentavam marcação imunológica multifocal frequente. Houve
marcação frequente, multifocal a generalizada e intensa de neurônios e células
gliais associadas a áreas de necrose e inÿamação no tronco cerebral, córtex
cerebral e hipocampo.
No caso 2, houve rara marcação imunológica de células granulares cerebelares,
células gliais do córtex cerebral e células esporádicas nas áreas malácicas de
morfologia vaga, que poderiam ser células gitter ou neurônios degenerados.
No caso 3, houve rara marcação de células epiteliais tubulares renais medulares.
Houve imunomarcação frequente e intensa do tecido neural semelhante ao caso 1,
mas sem localização do antígeno viral nas células de Purkinje ou na camada de
células granulares do cerebelo.
Os vírus da influenza A foram sequenciados diretamente das amostras e
analisados conforme descrito [11]. Os dados da sequência completa do genoma
obtidos para duas das três amostras foram consistentes com vírus recombinantes
do clado H5 da Eurásia 2.3.4.4b com segmentos de idade da linhagem norte-
americana. A sequência parcial do caso 1 foi geneticamente semelhante a outras
sequências de vírus detectadas em aves selvagens no alto centro-oeste dos EUA
durante a primavera de 2023. (A sequência do caso 1 está depositada no GISAID
[https://gisaid.org ] como EPI_ISL_17821929.) Uma sequência de alta qualidade
obtida do caso 3 foi consistente com o genótipo B3.2, que tem sido o genótipo
predominante nos EUA desde agosto de 2022. (A sequência do caso 3 está
depositada em GISAID [https://giasaid . org] como EPI_ISL_17821770.)
Outras tentativas de sequenciamento realizadas nas amostras do caso 2 não
tiveram sucesso.
A distribuição de vírus e lesões em outros gatos infectados com GAAP H5N1
foi descrita em casos naturais e experimentos controlados [4,5,8,10,12,13]. Esses
relatórios detalham uma doença sistêmica fulminante e altamente fatal, com necrose
e inÿamação em múltiplos órgãos e sinais clínicos relacionados principalmente aos
sistemas respiratório e nervoso. A necrose hepática, adrenal e pancreática,
pneumonia e encefalite nos presentes casos foram comparáveis às lesões
produzidas por cepas circulantes anteriores de H5N1. No entanto, a vasculite e a
trombose vascular nos três gatos afetados, particularmente nos casos agudos, eram
distintas e faziam parte de um padrão discriminatório de alterações teciduais para
GAAP H5N1 em gatos domésticos entre estes casos diagnósticos. Embora a
vasculite tenha sido mencionada em um relatório anterior [8] e o hipertrofia endotelial
descrita em infecção experimental [12], os detalhes histológicos das anormalidades
vasculares em infecções felinas são escassos. Como a GAAP H5N1 pode causar
infecção maciça de células endoteliais e linfendoteliais durante a disseminação
sistêmica em gatos mestiços inoculados intestinalmente, a doença vascular pode
desempenhar um papel na patogênese [12]. Por exemplo, no caso 1, foi observada
trombose vascular evidente nos pulmões, intestinos, fígado e pâncreas, e variações
de vasculite foram observadas em órgãos, incluindo alterações ÿbrinóides e
leucocistoclásticas mínimas. Embora os focos de necrose possam ser devidos à
infecção viral direta de células parenquimatosas e neurônios, como demonstrado
em estudos anteriores que caracterizam a distribuição do antígeno do vírus [4,12],
as áreas de necrose em forma de cunha em todo o córtex cerebral nesses gatos
afetados foram sugestivas. da lesão isquêmica causada por dano vascular como
um fator que contribui para a doença. O edema, a exsudação de ÿbrina e a trombose
nos pulmões destes gatos deram suporte ao dano endotelial. Os autores
classiÿcaram o padrão histológico da lesão pulmonar nesses gatos como intersticial
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Jornal de Patologia Comparada 205 (2023) 17e23
pneumonia, mas reconhecem que o dano alveolar difuso (DAD) é um subtipo de
padrão histológico que pode resultar de dano direto às células endoteliais e para o
qual as infecções pelo vírus influenza são uma causa conhecida [14]. Nestes três
gatos, os autores não observaram membranas hialinas ao longo das superfícies
dos alvéolos, uma característica fundamental do DAD [14]. Portanto, a exsudação
de ÿbrina e subsequente expansão histiocítica (caso 2) dos septos alveolares foi
semanticamente relatada como pneumonia intersticial. A infecção experimental de
gatos inoculados intratraquealmente com H5N1 produziu lesões histológicas de
DAD, mas o relatório não detalhou os componentes do padrão de lesão [9]. Outros
relatos de lesões pulmonares de GAAP H5N1 variaram de pneumonia
broncointersticial, não complicada ou complicada com Aelurostrongylus sp. infecção
[4,10,13], até pneumonia intersticial de composição vaga com trombose capilar e/
ou edema e congestão vascular [5,8]. Portanto, este relatório acrescenta clareza
ao tipo de lesões pulmonares GAAP H5N1 que ocorrem em gatos domésticos com
infecções recentes e não complicadas em condições naturais.
Entre estes casos, o cérebro foi a melhor amostra de diagnóstico, apresentando
os valores mais baixos de PCR Ct quando vários tipos de amostras foram testados.
As amostras de cérebro usadas para teste vieram de áreas selecionadas
aleatoriamente. Os autores propõem que uma amostra aleatória do córtex cerebral
seja suficiente para o teste, dada a distribuição das lesões observadas e o
abundante sinal do genoma do vírus encontrado neste local. Outros órgãos, como
fígado e pulmão, poderiam ser amostras diagnósticas viáveis se o cérebro não
estiver disponível. Swabs nasais profundos podem ser utilizados para diagnóstico
se a doença for aguda, mas não são confiáveis se a cobertura da mucosa nasal for
inadequada ou se o gato apresentar sinais clínicos há vários dias, e certamente se
há 7 dias ou mais (caso 2). Embora tenha sido documentado em infecção
experimental que os gatos podem transmitir outras cepas de H5N1 por via retal
[13], as amostras fecais do gato com alta carga viral e lesões de múltiplos órgãos
(caso 1) não apresentaram nenhum vírus detectável nas fezes obtidas do reto. na
necropsia. Em apoio à excreção limitada e à fraca transmissibilidade do vírus aos
seres humanos a partir de gatos infectados, não foram documentados casos
humanos de H5N1 em pessoas em contacto com estes gatos, incluindo cuidadores
e veterinários. Além disso, as galinhas confinadas nas dependências dos casos 1 e
2 e sem contato direto com gatos infectados permaneceram saudáveis.
Relatos anteriores de infecção por GAAP H5N1 em gatos domésticos
documentam infecções agudas, com gatos naturalmente infectados morrendo
dentro de 1 a 4 dias após o início da doença [8,10] e infecções experimentais de
gatos não vacinados terminando 7 dias após a infecção [9,10,12,13 ,15]. Em outras
circunstâncias, a duração da doença era desconhecida [4]. Até onde sabemos, este
relato é novo, pois descreve um gato doméstico com encefalite por GAAP H5N1
que morreu 10 dias após o início da doença e com extensas lesões malácicas (caso
2). Este relatório expande o nosso conhecimento sobre a gama de lesões da
infecção por GAAP H5N1 em gatos domésticos e apoia os resultados de que o
dano endotelial, a vasculite e a trombose vascular também são características
importantes da sua patogênese.
Financiamento
Este trabalho foi parcialmente ÿfinanciado com fundos iniciais através do
Centro de Diagnóstico Veterinário da Universidade de Nebraska-Lincoln.
Agradecimentos
Agradecemos aos Laboratórios Nacionais de Serviços Veterinários por
fornecerem sequências e análises de vírus, em particular ao Dr. Kris Lantz e Mary
Lea Killian. Agradecemos à Dra. Kelly Bockmann, à Dra. Bailee Bang e ao Dr. Brad
Johnson pela sua assistência na coleta de amostras e no relato dos resultados
clínicos desses casos. Agradecimentos especiais ao Dr. J.
Dustin Loy pela revisão técnica deste manuscrito. Os autores
Machine Translated by Google
SJ Sillman, M. Drozd, D. Loy et al.
Agradecemos imensamente aos técnicos e funcionários do Centro de Diagnóstico
Veterinário pelo seu trabalho diligente e contribuições no processamento destes
casos.
Declaração de interesses conflitantes
Os autores não declararam conÿitos de interesse em relação ao
pesquisa, autoria ou publicação deste artigo.
Apêndice A. Dados suplementares
Dados complementares a este artigo podem ser encontrados online em
https://doi.org/10.1016/j.jcpa.2023.07.001.
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