1

QUANTIFICAO DE DOENAS DE PLANTAS* por Srgio Almeida de Moraes 1. Importncia A quantificao de doenas de plantas, tambm denominada fitopatometria, visa avaliar os sintomas causados pelos agentes patognicos nas plantas e seus sinais (estruturas do patgeno associadas aos tecidos doentes). A importncia da quantificao das doenas pode ser bem compreendida pelas seguintes frases de autores de textos sobre o assunto: "Diagnose e avaliao de doenas de plantas so duas funes igualmente importantes dos fitopatologistas (JAMES, 1974)". "A medida da intensidade de doenas tem o mesmo papel-chave que a diagnose dentro da fitopatologia (KRANZ, 1988)". "De nada adiantaria conhecer o patgeno de uma doena se no fosse possvel quantificar os sintomas por ele causados (AMORIM, 1995)". 2. Principais objetivos a) Estudar a prevalncia e importncia das doenas na cultura b) Determinar danos ou perdas de rendimento c) Comparar a eficincia de fungicidas d) Determinar a poca de aplicao de fungicidas e) Verificar o efeito de prticas agrcolas no controle f) Avaliar a resistncia de gentipos aos patgenos no melhoramento g) Estudar o progresso da doena ou de epidemias (primeiros sintomas, curvas de desenvolvimento ou evoluo da doena) h) Elaborar modelos de previso de doenas 3. Mtodos de quantificao de doenas

As doenas podem ser quantificadas por mtodos diretos de avaliao dos sintomas e sinais, como a incidncia, severidade, intensidade, e mtodos indiretos, como a determinao da populao do patgeno, sua distribuio espacial, seus efeitos na produo (danos e/ou perdas), a desfolha causada. 3.1. Mtodos diretos A quantificao das doenas baseada na avaliao dos sintomas e sinais, atravs da proporo de tecido doente, sendo realizada pelos seguintes parmetros: :: Incidncia :: Severidade :: Intensidade A Incidncia: o mtodo quantitativo mais comum de medio de doena por ser fcil e rpido, sendo obtido pela da contagem de plantas doentes ou rgos doentes, atravs do nmero e/ou porcentagem (freqncia) de folhas, fololos, frutos, ramos infectados, sem levar em considerao a quantidade de doena em cada planta ou rgo individualmente. Vantagens: facilidade e rapidez de execuo; os resultados obtidos so reprodutveis, independentemente do avaliador; parmetro satisfatrio na fase inicial da epidemia; pode ser usado na elaborao de curvas de progresso da doena. Desvantagens: mtodo pouco preciso para doenas foliares, mostrando uma correlao duvidosa com a severidade em fases avanadas da epidemia. S pode ser usado para doenas que afetam a planta toda (patgenos do solo, causadores de murchas e podrides de razes) ou quando uma nica infeco impede a comercializao (podrides de fruto). As avaliaes de incidncia podem ser feitas de diferentes formas, como nos exemplos a seguir: - Tombamento de plntulas "stand" de plntulas sobreviventes

- Plantas com e sem podrido do colo de A. niger - Contagem do nmero ou % de espigas de milho com carvo - Nmero ou % de frutos de ma com sarna - Nmero ou % de plantas de algodoeiro com murcha de Fusarium - % de fungos patognicos em testes de patologia de sementes - Monitoramento do incio dos sintomas das manchas preta e castanha do amendoim. A primeira pulverizao com fungicida indicada quando 5 a 15 % dos fololos estiverem infectados (independente do nmero de manchas por fololo). Considera-se infectado cada fololo da amostra com pelo menos uma mancha visvel e bem definida (com mais de 1,0 mm de dimetro), sendo recomendado separar as manchas preta e castanha para as avaliaes (Moraes, 1999). B - Severidade: um mtodo quantitativo e qualitativo, que procura determinar a porcentagem da rea de tecido doente (sintomas e/ou sinais visveis), atravs da medio direta da rea afetada, com medidores de rea em computador ou no, chaves descritivas, diagramticas, medio automtica e sensores remotos. Vantagens: mais preciso expressando o dano real causado pelos patgenos; caracteriza melhor o nvel de resistncia a um patgeno, expressa com maior fidelidade a intensidade da doena no campo e os danos causados. Desvantagens: mais trabalhoso e demorado, subjetivo, dependente da acuidade do avaliador e da escala. C Intensidade: um termo mais amplo que pode ser expresso como incidncia ou severidade. Significa o quanto intensa a doena ou quo doente est a planta. A incidncia um parmetro satisfatrio para avaliar a intensidade de doenas, como murchas e viroses, pois a correlao alta entre incidncia e severidade, pelo fato da doena afetar a planta toda.

Para maioria das doenas foliares esta correlao baixa (incidncia de 100% de plantas com ferrugem, no reflete a intensidade real no campo, pois apesar de todas as plantas apresentarem pstulas de ferrugem, a quantidade de pstulas por folha pode ser baixa, causando pouco dano). Ao contrrio da incidncia a intensidade est estreitamente relacionada com a perda de produo. Numa epidemia de doenas foliares deve-se levar em considerao que, quando a incidncia elevada (maioria das plantas com sintomas), a evoluo da doena d-se quase que exclusivamente pelo aumento do nmero e tamanho das leses (severidade). As avaliaes de intensidade/severidade podem ser feitas de diferentes formas: I - Medio direta dos sintomas da doena, atravs da contagem do nmero de leses, medio de seu dimetro, clculo da rea infectada por fololo [Si= No mdio de leses/ fololo x (dimetro mdio das leses/2) x 3,1416] e ndice de infeco (I%=Si x 100 / S total), como nas manchas castanha e preta do amendoim (Moraes, 1987). um mtodo prtico para ensaios de pesquisa com nmero limitado de amostras, por ser muito trabalhoso e demorado. II - Medio visual dos sintomas da doena - os patologistas usam a fotoclula humana (olho) para estimar as intensidades atravs da medio de reas doentes e valores de infeco. Para este tipo de medio deve ser considerada a Lei de Weber-Fechner, segundo a qual, a acuidade visual proporcional ao logaritmo da intensidade de estmulo. Dessa forma descreve 12 graus de intensidade ou severidade das doenas (como mostra a Fig.1): 1 - 0% 2 - 0 3% 3 - 3 6% 7 - 50 75% 8 - 75 87% 9 - 87 94%

4 - 6 12% 10 - 94 97% 5 - 12 25% 11 - 97 100% 6 - 25 50% 12 - 100% de doena Usando esses princpios, as medies visuais da intensidade das doenas podem ser feitas atravs do uso de chaves descritivas, classes de intensidade, diagramas padres (James, 1971) ou escalas diagramticas. a) Chaves descritivas ou classes de severidade da doena so escalas arbitrrias com certo nmero de graus ou notas para quantificar as doenas. A seguir so ilustrados diferentes exemplos de chaves descritivas, simples e mais detalhadas, utilizadas para avaliar algumas doenas foliares da cultura do amendoim.

Escala de notas para a mancha preta do amendoin Onde: 1 = Sem mancha. 2 = Com pouca doena, ou seja, fololos com 0,5 a 3,0% de rea infectada (1 a 10 manchas/ fololo). 3 = Nvel regular de doena, fololos com 6 a 9% de rea infectada (ou 11 a 25 manchas/fololo). 4 = Nvel alto de doena, fololos com mais de 9% de rea infectada (mais de 25 manchas/fololo). Onde: 1 = ausncia de sintomas de verrugose. 2 = baixa severidade - presena de poucas leses em folhas e pecolos. 3 = severidade regular - leses de verrugose evidentes na parte apical das plantas, nos pecolos, nas folhas e nas hastes, que se apresentam moderadamente retorcidos.

4 = severidade alta - leses de verrugose evidentes na planta inteira, com as hastes e os pecolos da parte apical, apresentando-se completamente retorcidos e cobertos pelas leses. b) Escalas diagramticas so representaes ilustradas de plantas ou partes de plantas (padres de comparao), mostrando a rea necrosada ou coberta pelos sintomas e sinais do patgeno, em diferentes nveis de severidade. Exemplos de escalas diagramticas utilizadas para avaliar a mancha preta (Cercosporidium personatum) e a mancha castanha (Cercospora arachidicola) do amendoim so apresentados a seguir. III - Uso da incidncia para estimar valores de intensidade da doena A incidncia um parmetro satisfatrio para avaliar a intensidade de doenas, como murchas e viroses, pois a correlao alta entre a incidncia e a severidade, pelo fato da doena afetar a planta toda. Para a maioria das doenas foliares causadas por fungos e bactrias, esta correlao baixa. Ao contrrio da incidncia a intensidade est estreitamente relacionada com a perda de produo. Numa epidemia de doenas foliares deve-se levar em considerao que, quando a incidncia elevada (maioria das plantas com sintomas), a evoluo da doena d-se quase que exclusivamente pelo aumento do nmero e tamanho das leses (severidade). Para a mancha preta do amendoim (Cercosporidium personatum) ndices de incidncia de 5 a 15% (porcentagem de fololos infectados, com pelo menos uma mancha), indicando baixas intensidades, 0,04 e 0,08 % de rea foliar infectada, podem ser utilizados para indicar o incio da epidemia e a necessidade da primeira pulverizao com fungicida para proteger a cultura, impedindo a progresso rpida da doena. J para estgios avanados da doena a % de fololos infectados tem pouca relao com a intensidade da doena. Como ilustra o grfico acima, a incidncia de 100% de fololos com a mancha preta do amendoim no reflete a intensidade real no campo, pois apesar de

todos os fololos apresentarem manchas, a severidade (% da rea infectada por fololo), pode ser baixa causando pouco dano. IV Medio da rea foliar sadia As dificuldades encontradas nas pesquisas para correlacionar os danos e a intensidade das doenas levaram Waggonner & Berger (1987), a introduzirem um novo conceito baseado na anlise da reduo da produo induzida pelas doenas, em funo da rea foliar sadia e no pela quantificao direta das doenas. Aplicando esse conceito para o amendoim e outras culturas, esses autores verificaram que a durao da rea foliar sadia ("HAD healthy leaf area duration", medida em dias) ou a absoro da radiao solar pela rea sadia ("HAA healthy leaf area absorption", medida em MJ m -2) foram os fatores primrios determinantes da produo dos cultivares. Esse conceito baseia-se em algumas diferenas entre as avaliaes da severidade, pela rea sobre a curva de progresso da doena (ASCPD) e pela durao da rea foliar sadia (HAD): - A severidade avaliada no inicio ou no fim do ciclo pode resultar em ASCPDs iguais. No entanto, a reduo na durao da rea foliar sadia (HAD) ser menor para a severidade avaliada no incio do ciclo (quando a rea foliar menor), do que se a mesma severidade tivesse sido avaliada mais tarde (quando a rea foliar alta); - A diminuio da rea foliar pela desfolha dificulta a interpretao da severidade da doena. Assim, se a severidade avaliada a situao da doena visvel, pode-se concluir que numa epidemia onde a doena provoca a desfolha de todas as folhas infectadas, a severidade ser menor que numa epidemia em que a doena causa leses e no desfolha a planta. Porm, difcil estimar a quantidade e a condio de perda de folhagem causada pela doena ou pela senescncia (desfolha natural); - A severidade e a rea foliar so resultantes de uma situao visvel na cultura. Desse modo, a doena e seu impacto so logicamente analisados

pelas caractersticas presentes e visveis no hospedeiro, ou seja, a quantidade e durao de rea foliar sadia, que ser a responsvel pela quantidade de radiao solar absorvida para o processo de fotossntese e consequentemente para proporcionar a produo. Lopes et al. (1994) propem a quantificao de danos utilizando equaes para determinar as seguintes variveis:- ndice de rea foliar ("LAI leaf area index"), durao da rea foliar ("LAD leaf area duration") e absoro da rea foliar ("LAA leaf area absorption") Para relacionar a curva de progresso da doena e o crescimento deve-se subtrair a rea foliar doente da durao da rea foliar (LAD), atravs da integrao da rea foliar sadia durante o perodo de crescimento do hospedeiro. Esta integrao resulta na durao da rea foliar sadia (HAD). Adaptao semelhante pode ser feita com relao varivel absoro da rea foliar (LAA), para a obteno da absoro da rea foliar sadia (HAA). Pelo exposto, verifica-se que a determinao da HAD e HAA muito mais trabalhosa do que avaliar a intensidade das doenas. A intensidade das doenas uma medida relativa realizada com o auxlio de escalas diagramticas, enquanto que a HAD e a HAA so medidas absolutas que exigem a determinao real da rea foliar, com tcnicas de sensoriamento remoto. V - Medio automtica e sensoriamento remoto So medies feitas atravs de: a) Anlises de imagem por computador trata-se da obteno da imagem de uma amostra com cmara de vdeo, com posterior transferncia desta imagem gerada, para realizar a avaliao das reas sadia e doente, atravs de programas ("softwares") desenvolvidos para quantificao de algumas doenas. Alguns programas foram feitos para o treinamento na quantificao visual de sintomas de diferentes doenas, atravs de diagramas em que se procura

aprimorar a capacidade de determinao das porcentagens de rea foliar doentes. Entre estes esto: DISPRO - Programa computadorizado de treinamento de avaliao de doenas foliares do amendoim, Iowa Univ., EUA, DISTRAIN - Programa computadorizado de treinamento de avaliao da severidade de doenas foliares de cereais, USDA, EUA. QUANT - Software para quantificao de doenas de plantas Autores: Vale, F.X.R; Liberato, J.R.; Fernandes, E.Instituio: Universidade Federal de Viosa, 2003. b) Sensoriamento remoto a quantificao de doenas baseada na radiao refletida das folhagens, atravs de tcnicas que incluem a utilizao de fotografias areas infravermelhas (com diferentes combinaes de filmes, filtros e cmeras) e radimetros de mltiplo espectro, usados para medir a refletncia da folhagem. A radiao refletida das folhagens funo de caractersticas da prpria espcie vegetal estudada e das condies em que se encontram as plantas, mas as pragas e doenas frequentemente so responsveis por muitos fatores que afetam a refletncia. Em geral os tecidos infectados apresentam menor refletncia na regio do infravermelho (comprimento de onda > 0,7 um), quando comparados com tecidos sadios, possibilitando a quantificao pelas diferenas de refletncia. A refletncia uma medida indireta da rea foliar verde, que pode auxiliar na quantificao do efeito do conjunto de patgenos e pragas, sendo til na viabilizao do uso dos novos conceitos de durao da rea sadia (HAD) e absoro da radiao foliar pela rea sadia (HAA). 3.2. Mtodos indiretos de avaliao de doenas A quantificao de determinadas doenas onde os sintomas observados nas plantas so de reduo de vigor, enfezamento ou diminuio da produo torna-se difcil atravs de mtodos diretos. Nestes casos so empregados mtodos indiretos, como a determinao da populao do patgeno, sua

10

distribuio espacial, seus efeitos na produo (danos e/ou perdas), a desfolha causada. a) Indexao e tcnicas sorolgicas - para muitas viroses, a presena do agente causal no est relacionada com a presena de sintomas visveis. Assim, para a avaliao dessas doenas so utilizadas tcnicas como: - Indexao, procedimento utilizado para a deteco de vrus com o auxlio de plantas indicadoras. - Tcnicas sorolgicas, como o teste imuno-enzimtico de alta sensibilidade, conhecido por ELISA, usadas para quantificar as partculas virais presentes no hospedeiro. b) A contagem de indivduos, para o caso de nematides, por mtodos especficos, envolvendo amostragem de solo e razes, serve para orientar as medidas de controle a serem empregadas ou estimar os danos causados por esses organismos. c) A distribuio espacial das doenas causadas por fungos disseminados pelo ar tambm um mtodo indireto, que visa medir a quantidade de esporos presentes na atmosfera capaz de causar infeco, com o auxlio de diferentes armadilhas caa-esporos. Constitui-se numa medida complementar para avaliar a distribuio espacial dos agentes de doena no campo. d) A produo ("Yield" em ingls) obtida, ou seja, a quantidade da colheita de uma cultura, em campos tratados e no tratados ou, com e sem doena, um mtodo indireto de estimar os prejuzos causados pelas doenas. Os sintomas causados por agentes patognicos so considerados injrias, que podem resultar em dano ("damage") e/ou perda ("loss"). Procura-se, assim, determinar o dano, reduo da colheita ocorrida em funo da doena, ou a perda, reduo do retorno financeiro devida ao de agentes patognicos. e) A desfolha outro mtodo indireto de medir as conseqncias das doenas de plantas. Pode ser estimada pela contagem direta nas plantas (folhas que caram e remanescentes na planta) ou por estimativas visuais de porcentagem de desfolha nas plantas ou na rea de plantio. um parmetro usado para

11

algumas doenas foliares, porm deve-se ter cautela para distinguir a desfolha provocada por agentes patognicos e a desfolha natural das plantas (senescncia). Para isso padres de comparao (plantas testemunha) devem ser utilizados e sempre analisados em conjunto com quantificaes diretas das doenas. 4. Etapas da avaliao "A escolha do mtodo de avaliao depende muito do tipo de doena e do objetivo da avaliao". 4.1. Tcnica de amostragem Aps a escolha do mtodo de avaliao, a amostragem uma das etapas fundamentais para que avaliao das doenas seja representativa da populao original, devendo ser feita de maneira criteriosa. Em programas de manejo integrado uma estimativa errada da quantidade de doena, causada pela amostragem incorreta, pode acarretar decises de controle no adequadas, causando perdas na produo. A escolha da tcnica de amostragem depende da distribuio da doena no campo. As principais tcnicas so: :: Amostragem ao acaso doenas com distribuio uniforme no campo. :: Amostragem sistemtica as amostras so coletadas segundo determinados critrios pr-determinados, em funo do tipo de distribuio da doena, da finalidade, etc. 4.2. Tipo e tamanho da amostra O tipo e tamanho da amostra dependem da caracterstica da doena, do objetivo do levantamento (avaliaes em parcelas experimentais, manejo integrado das doenas, caracterizao do nvel de resistncia, etc.) e do modelo de disperso da doena. Devem-se estabelecer previamente alguns critrios, como: - tipo de amostra (folhas, fololos, ramos, planta inteira, frutos, sementes, etc.)

12

- tamanho da amostra (nmero de folhas, ramos, etc. ou pontos de amostragem) - local ou pontos de amostragem (coleta representativa da planta, rea experimental ou da cultura, marcao de plantas ou ramos). - poca de amostragem estdios de crescimento da cultura, em funo da caracterstica de cada doena. - nmero de amostragens durante o ciclo da planta em funo da finalidade, estdio fenolgico da planta, curvas de progresso da doena, etc.