Roteiro de Aula Prática: Técnicas de pipetagem

Prática Profissional Extensionista: Ciência e Tecnologia Laboratorial

Professora Drª Juliana Cristine Rovani Rodrigues

Normas e regras de Biossegurança:

 Conhecer o local e a forma de utilização dos equipamentos de segurança.

 Trabalhar com atenção, calma e seriedade.
 Realizar somente os experimentos indicados em aula; previamente elaborados pelos
professores. O laboratório didático não é local para experimentação ao acaso.
 Ler atentamente os roteiros de aulas e os rótulos dos reagentes.
 Não é permitido fumar e ingerir qualquer tipo de alimento.
 Utilizar jaleco e sapatos fechados.
 Utilizar óculos de segurança durante atividades que apresentem riscos.
 Comunicar aos professores qualquer acidente pessoal e danos nos materiais ou
aparelhos.
 Não se aventurar a realizar um experimento ou utilizar um equipamento sem o prévio
conhecimento da técnica e dos prováveis riscos.
 Permanecer no seu local de trabalho e manter uma postura profissional coerente com
o ambiente.

1. Objetivo: Aprender a transferir pequenos volumes com precisão por meio da técnica
de pipetagem.

2. Materiais e Métodos:
Béquer (1 unidade)
Pipetas graduadas (10 mL) (1 unidade)
Pêra de sucção ou pipetador (1 unidade)

Pipetas automáticas (1 mL) (1 unidade de cada)

Ponteiras para pipetas automáticas (1 mL)
Recipiente para descarte de ponteiras

Papel absorvente
Tubos de ensaio (3 unidades)
Estante para tubos de ensaio
Eppendorfs (3 unidades)
Caneta permanente (1 unidade)

 Reagente
Solução com corante

É importante, antes do início do trabalho, verificar se as vidrarias estão limpas e livres de

qualquer avaria.

3. Procedimentos Experimentais:
 Pipetagem com pipetas graduadas

1. Numerar os tubos de ensaio de 1 a 3.

 Tubo de ensaio 1:
2. Introduzir o pipetador ou pêra de sucção (pêra de borracha) na pipeta graduada de 10
mL.
3. Introduzir a ponta da pipeta na solução com corante. Manter a pipeta na posição
vertical
4. Aspirar a solução com corante até a marca de 10 mL da pipeta.
5. Remover a ponta da pipeta da solução com corante e limpar com papel ou gaze.
Segurar a pipeta na posição vertical e no tubo de ensaio 2, você deverá esvaziar
vagarosamente o conteúdo da pipeta até o menisco inferior tocar a marca do volume
desejado 10 mL.

 Tubo de ensaio 2:
6. Introduzir a ponta da pipeta de 10 mL na solução com corante.
7. Aspirar a solução com corante até a marca de 10 mL da pipeta.
8. Remover a pipeta na solução corante.
9. Limpar com papel ou gaze.
10. Segurar a pipeta na posição vertical e no tubo de ensaio 2, você deverá esvaziar
vagarosamente o conteúdo da pipeta até o menisco inferior tocar a marca do volume
desejado 8 mL.

 Tubo de ensaio 3:
11. Introduzir a ponta da pipeta de 10 mL na solução com corante.
12. Aspirar a solução com corante até a marca de 10 mL da pipeta.
13. Remover a pipeta na solução corante.
14. Limpar com papel ou gaze.
15. Segurar a pipeta na posição vertical e no tubo de ensaio 3, você deverá esvaziar
vagarosamente o conteúdo da pipeta até o menisco inferior tocar a marca do volume
desejado 5 mL.
Exemplo:

 Pipetagem com pipetas automáticas ou micropipetas:

1. Numerar de 1 a 3 os tubos eppendorfs.

2. Introduzir a ponteira correspondente na ponta da pipeta automática. Importante
conferir o volume da pipeta.
3. Colocar a ponta da ponteira na solução e aspirar o líquido acionando o 1º estágio da
pipeta (1000 uL = 1 mL).
4. Remover a pipeta da solução e limpar com papel ou gaze.
5. Segurar a pipeta na posição vertical.
6. Ao acionar o 2º estágio da pipeta automática, transferir a solução para o tubo
eppendorf 1.
7. Aspirar 500 uL = 0,5 mL da solução de corante do eppendorf 1.
8. Remover a pipeta da solução e limpar com papel ou gaze.
9. Segurar a pipeta na posição vertical. Ao acionar o 2º estágio da pipeta automática,
transferir a solução para o tubo eppendorf 2.
10. Aspirar 250 uL = 0,25 mL da solução de corante do eppendorf 2.
11. Remover a pipeta da solução e limpar com papel ou gaze.
12. Segurar a pipeta na posição vertical. Ao acionar o 2º estágio da pipeta automática,
transferir a solução para o tubo eppendorf 3.

Questões a responder:
1. Dentre as pipetas graduadas de vidro e volumétrica, aponte qual é considerada
mais precisa e exata para medir volumes pequenos de solução. Justifique sua
resposta.

2. Para pipetagem de volumes em microlitros, identifique qual dos instrumentos são

recomendados para a pipetagem dessas soluções. Descreva o passo a passo para
uma micropipetagem eficiente e redução de erros durante o preparo de soluções.

3. Pipetas e micropipetas auxiliam na transferência de pequenos volumes da solução.

Quanto ao preparo de solução, defina e exemplifique os seguintes conceitos:
soluto, solvente e solução