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INTERNACIONAL ISO
PADRÃO 8655-2
Primeira edição
15/09/2002
Número de referência
ISO 8655-2:2002(E)
ISO 8655-2:2002(E)
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Conteúdo Página
Anexos
A Informações a serem fornecidas pelo fornecedor para o usuário de pipetas e ponteiras de pistão ...................... ......... 9 B Possíveis fontes de erro
ISO 8655-2:2002(E)
Prefácio
ISO (a Organização Internacional de Padronização) é uma federação mundial de organismos nacionais de padronização (órgãos membros da ISO).
O trabalho de preparação de Normas Internacionais é normalmente realizado através de comitês técnicos ISO. Cada órgão membro interessado em
um assunto para o qual tenha sido criado um comitê técnico tem o direito de ser representado nesse comitê. Organizações internacionais,
governamentais e não governamentais, em ligação com a ISO, também participam no trabalho. A ISO colabora estreitamente com a Comissão
Eletrotécnica Internacional (IEC) em todos os assuntos de padronização eletrotécnica.
As Normas Internacionais são elaboradas de acordo com as regras fornecidas nas Diretivas ISO/IEC, Parte 3.
Os projetos de Normas Internacionais adotados pelos comitês técnicos são distribuídos aos órgãos membros para votação.
A publicação como uma Norma Internacional requer a aprovação de pelo menos 75% dos órgãos membros com direito a voto.
Chama-se a atenção para a possibilidade de que alguns dos elementos desta parte da ISO 8655 possam ser objeto de direitos de patente. A ISO não
será responsabilizada pela identificação de qualquer ou todos esses direitos de patente.
A Norma Internacional ISO 8655-2 foi preparada pelo Comitê Técnico ISO/TC 48, Vidraria de laboratório e aparelhos relacionados, Subcomitê SC 1,
Instrumentos volumétricos.
A ISO 8655 consiste nas seguintes partes, sob o título geral Aparelho volumétrico operado por pistão:
— Parte 4: Diluidores
— Parte 5: Dispensadores
O Anexo A constitui uma parte normativa desta parte da ISO 8655. O Anexo B é apenas para informação.
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Introdução
— fornecedores, como base para o controlo de qualidade, incluindo, se for caso disso, a emissão de declarações do fornecedor;
1 Escopo
— requisitos metrológicos,
para pipetas de pistão monocanal e multicanal com deslocamento de ar (tipo A) e deslocamento positivo (tipo D), completas com suas pontas selecionadas
e quaisquer outras peças consumíveis essenciais, projetadas para fornecer seu volume nominal especificado ( Ex).
NOTA Os requisitos gerais e definições de termos de aparelhos volumétricos operados por pistão são fornecidos na ISO 8655-1.
O teste de conformidade (avaliação de tipo) de aparelhos volumétricos operados por pistão é fornecido na ISO 8655-6. Métodos de teste alternativos, como
métodos fotométricos e titulométricos, serão objeto de uma futura Parte 7 da ISO 8655. Para todos os outros testes (por exemplo, garantia de qualidade pelo
fornecedor, garantia de qualidade do equipamento analítico e de medição pelo usuário), consulte a ISO 8655-6 ou métodos de teste alternativos.
Para requisitos de segurança de pipetas de pistão alimentadas eletricamente, consulte IEC 61010-1.
2 Referências normativas
Os documentos normativos a seguir contêm disposições que, através de referência neste texto, constituem disposições desta parte da ISO 8655. Para
referências datadas, alterações ou revisões subsequentes de qualquer uma dessas publicações não se aplicam. Contudo, as partes em acordos baseados
nesta parte da ISO 8655 são encorajadas a investigar a possibilidade de aplicar as edições mais recentes dos documentos normativos indicados abaixo.
Para referências não datadas aplica-se a última edição do documento normativo referido. Os membros da ISO e da IEC mantêm registros das Normas
Internacionais atualmente válidas.
ISO 3696, Água para uso em laboratório analítico - Especificação e métodos de teste
ISO 8655-1:2002, Aparelho volumétrico operado por pistão — Parte 1: Terminologia, requisitos gerais e recomendações do usuário
ISO 8655-6:2002, Aparelho volumétrico operado por pistão — Parte 6: Métodos gravimétricos para determinação de erros de medição
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3 Termos e definições
Para os propósitos desta parte da ISO 8655, aplicam-se os termos e definições dados na ISO 8655-1 e a seguir.
3.1
volume nominal
ÿpipeta de pistão de volume variávelÿ maior volume selecionável pelo usuário e especificado pelo fabricante
NOTA Isto significa que uma pipeta de pistão de volume variável com uma faixa de volume útil (ver ISO 8655-1) de 10 µl 100 µl tem o
volume nominal de 100 µl .
3.2
volume nominal
ÿpipeta de pistão multicanalÿ maior volume selecionável pelo usuário e especificado pelo fabricante por canal
4 Princípio de operação
A ponta de plástico ou vidro é fixada na pipeta do pistão. Com o pistão no limite inferior de aspiração, a ponta é
mergulhado no líquido a ser dispensado como um volume medido. Quando movido para o limite superior de aspiração, o pistão
aspira o líquido. O volume de líquido a ser dispensado é então expelido pressionando ou deslizando o pistão entre
os limites de definição de volume. Algumas pipetas de pistão com deslocamento de ar (ver 5.1, tipo A) possuem um volume de ar extra que
pode ser usado para expelir a última gota de líquido.
5 Projeto
— volume fixo, projetado pelo fabricante para dispensar apenas o seu volume nominal, por exemplo 100 µl ;
— volume variável, projetado pelo fabricante para dispensar volumes selecionáveis pelo usuário dentro de sua especificação
faixa de volume útil, por exemplo, entre 10 µl e 100 µl .
O pistão pode
— possuir um corpo de ar contido entre o pistão e a superfície do líquido (deslocamento de ar – tipo A);
— ou estar em contato direto com a superfície do líquido (deslocamento positivo ou direto – tipo D).
No caso da pipeta de pistão tipo D, o êmbolo ou o capilar, ou ambos, podem ser reutilizáveis (tipo D1) ou
descartável (tipo D2).
5.2 Ajuste
5.2.1 Uma pipeta de pistão deve ser ajustada pelo seu fabricante para a entrega (Ex) do seu volume nominal (ou selecionado
volume, no caso de um modelo de volume variável), para a temperatura de referência padrão de um ar relativo 20 °C ,
umidade de 50% e pressão barométrica de ( 101 kPa 1,01 bar ), usando água grau 3 conforme especificado na ISO 3696.
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Tipo D Tipo A
5.2.2 Algumas pipetas de pistão permitem ajuste pelo usuário quando, por exemplo, for constatado na calibração de rotina que o volume
fornecido não está dentro das especificações. Esse ajuste pelo usuário deverá ser feito de acordo com as instruções do fabricante e por
referência ao método de teste gravimétrico especificado na ISO 8655-6.
Qualquer pipeta de pistão assim ajustada deverá ter evidência clara e visível de que o ajuste inicial foi modificado. Esta informação
também deverá ser registrada em qualquer certificado de conformidade e o procedimento deverá ser incluído no manual de qualidade do
usuário.
5.2.3 Algumas pipetas de pistão são projetadas para ter seu ajuste predefinido de fábrica alterado pelo usuário para que distribuam seu
volume especificado quando usadas com líquidos com propriedades físicas diferentes das da água (ver anexo B para detalhes). Nesses
casos, o projeto deve evitar reajustes não intencionais. Tal ajuste pelo usuário deverá ser feito de acordo com as instruções do fabricante
e por referência ao método de teste gravimétrico especificado na ISO 8655-6, mas usando o líquido selecionado em vez de água.
Se o usuário reajustar a pipeta do pistão, deverá ser indicado de forma clara e inequívoca na parte externa da pipeta do pistão que o
reajuste foi efetuado. O usuário deverá marcar a parte externa da pipeta do pistão com o nome do líquido ao qual o volume nominal agora
se aplica. Esta informação também deve ser registrada em qualquer certificado de conformidade. O procedimento também deve ser
incluído no manual de qualidade do usuário.
O projeto construtivo das pipetas de pistão e os materiais utilizados para sua fabricação devem ser escolhidos de tal forma que qualquer
calor transmitido da mão do usuário para o aparelho durante os períodos de uso ou de teste de acordo com a ISO 8655-6 possa ser
ignorado.
NOTA A transferência de calor das mãos aparecerá como um desvio sistemático de resultados durante a série de testes de acordo com a ISO 8655-6.
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5.4.1 Geral
5.4.1.1 O orifício de distribuição da ponta deve ser moldado de tal forma que seja verificada uma distribuição consistente do líquido a ser medido.
Quando a ponta é tocada contra a parede de um recipiente em operações sucessivas, qualquer quantidade de líquido remanescente dentro ou ao
redor do orifício de distribuição da ponta deve ser consistente.
5.4.1.2 No caso de pontas de pipetas esterilizáveis, os procedimentos de esterilização indicados como apropriados pelo fabricante nas informações
ao usuário ou na embalagem (ver anexo A) não devem afetar negativamente as características metrológicas das pontas, como formato, vedação e
molhabilidade.
NOTA Este requisito pode ser avaliado comparando erros de medição usando pontas que foram e não foram esterilizadas.
5.4.2.1 As pontas de pipetas com deslocamento de ar devem ser peças descartáveis, geralmente feitas de plástico, que cabem no porta-ponteira da
pipeta e evitam o contato do instrumento com o líquido aspirado. Para garantir seu desempenho metrológico devem estar em conformidade com
5.4.1.1, 5.4.1.2, 5.4.2.2 e 5.4.2.3.
5.4.2.2 As pontas para pipetas de pistão com interface de ar devem ser instaladas de acordo com as instruções do fornecedor da pipeta para formar
uma boa vedação entre a ponta e o cone da ponta da pipeta de pistão.
NOTA A variabilidade da quantidade de líquido retido externamente ou uma vedação incompleta contribuirão para uma baixa precisão nos testes de acordo com a ISO
8655-6.
As pontas de pipeta feitas de plástico para pipetas de pistão com interface de ar são projetadas para uso único. Não devem ser limpos para
reutilização, pois as suas características metrológicas deixarão de ser fiáveis.
5.4.2.3 O formato das pontas de pipeta a serem usadas com uma pipeta de pistão multicanal deve ser tão reto que todas as pontas instaladas sejam
posicionadas com eixos paralelos no mesmo plano, a fim de permitir a distribuição uniforme de líquido nos recipientes alvo, por exemplo os poços
adjacentes de uma placa de microtitulação. Os fundos das pontas devidamente instaladas não devem variar no espaçamento dos seus eixos nominais,
nem do seu plano comum em mais de ± 1,0 mm para volumes nominais até 350 µl e ± 1,5 mm para volumes nominais superiores a 350 µl
.
5.4.3.1 As pontas das pipetas de deslocamento positivo devem consistir de um êmbolo e um capilar que se encaixa no porta-ponteira da pipeta.
Vários materiais podem ser usados para o êmbolo, tal como metal ou plástico, e para o capilar, tal como plástico ou vidro. Essas pontas de pipeta
podem ser reutilizáveis ou descartáveis (tanto o êmbolo quanto o capilar são trocados a cada amostragem).
5.4.3.2 O formato e o material do êmbolo e do capilar devem conferir uma boa vedação da ponta, bem como uma ação suave entre o êmbolo e o
capilar, para garantir uma distribuição consistente do líquido.
O teste de tipo dos requisitos de projeto especificados em 5.2 a 5.4 deve satisfazer os requisitos de desempenho metrológico especificados na
cláusula 7 quando a pipeta for testada de acordo com a ISO 8655-6.
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6 Tipo, designação
Designação de uma pipeta de pistão monocanal tipo D1 (deslocamento positivo com êmbolo reutilizável) com volume nominal de 100 µl
:
Designação de uma pipeta de pistão monocanal de volume variável tipo D2 (deslocamento positivo com êmbolo/capilar descartável), faixa de volume
variável de a 20 µl 200 µl :
Designação de uma pipeta de pistão monocanal de volume variável tipo A com interface de ar, faixa de volume variável de a 10 µl 100 µl
:
Designação de uma pipeta de pistão de 8 canais com interface de ar (A) e com volume nominal de 200 µl :
Designação de uma pipeta de pistão de 12 canais com interface de ar (A), faixa de volume variável de 20 µl a 200 µl :
7.1 Geral
O teste de conformidade especificado na ISO 8655-6 avalia o sistema total da pipeta de pistão com sua ponta selecionada ou combinação
de ponta e pistão e seu operador. O teste de conformidade deve ser realizado de acordo com a ISO 8655-6 por uma empresa de testes
ou outro organismo autorizado antes da emissão de um certificado de conformidade.
O ensaio de tipo deve ser realizado pelo fornecedor antes da emissão da declaração de conformidade do fornecedor.
Para testes de conformidade, serão aplicados os erros máximos admissíveis das Tabelas 1 e 2.
Os usuários devem estabelecer uma rotina de testes regulares (ver ISO 8655-1:2002, 7.3) para suas pipetas de pistão usando a ISO
8655-6 ou métodos de teste alternativos (ver nota à cláusula 1) e tendo em conta:
- frequência de uso;
O Anexo B lista os parâmetros que influenciam o desempenho metrológico das pipetas de pistão e recomendações para seu manuseio.
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Para pipetas de pistão com deslocamento de ar (tipo A) com volume fixo e para pipetas de pistão com deslocamento positivo com
êmbolo e capilar reutilizáveis (tipo D1) e com volume fixo, aplicam-se os erros máximos admissíveis da Tabela 1.
Para os erros máximos admissíveis de pipetas de pistão com volumes nominais intermediários entre aqueles indicados em
Tabela 1, serão aplicados os valores absolutos para o volume nominal imediatamente superior.
NOTA Isto significa que o erro sistemático máximo permitido de uma pipeta de pistão com um volume nominal de e 25 µl ±é 0,5 µl
seu erro aleatório máximo permitido é de ± 0,2 µl .
Volume nominal Erro sistemático máximo permitido ± µl 0,05 Erro aleatório máximo permitido
a c
µl ±% b±% ± µl
1 5,0 5,0 0,05
2 4,0 0,08 2,0 0,04
5 2,5 0,125 1,5 0,075
10 1,2 0,12 0,8 0,08
20 1,0 0,2 0,5 0,1
50 1,0 0,5 0,4 0,2
100 0,8 0,8 0,3d 0,3d
200 0,8 1,6 0,3d 0,6d
500 0,8 4,0 0,3 1,5
1.000 0,8 8,0 0,3 3,0
2.000 0,8 16 0,3 6,0
5.000 0,8 40 0,3 15,0
10.000 0,6 60 0,3 30,0
a Expresso como o desvio da média de uma medição dez vezes maior do volume nominal ou selecionado (ver ISO 8655-6:2002, 8.4).
b Expresso como o coeficiente de variação de uma medição dez vezes maior (ver ISO 8655-6:2002, 8.5).
c Expresso como o desvio padrão de repetibilidade de uma medição dez vezes maior (ver ISO 8655-6:2002, 8.5).
d Para pipetas de pistão do tipo D1, os erros máximos permitidos podem ser ± 0,4% .
Para pipetas de pistão de deslocamento positivo com êmbolo e capilar descartáveis (tipo D2) e com volume fixo, o
aplicam-se os erros máximos permitidos da Tabela 2.
Para os erros máximos admissíveis de pipetas de pistão com volumes nominais intermediários entre aqueles indicados em
Tabela 2, serão aplicados os valores absolutos para o volume nominal imediatamente superior.
No caso de pipetas de pistão de volume variável, o volume nominal é o maior volume possível selecionável pelo usuário
que é especificado pelo fabricante. Por exemplo, uma pipeta de pistão com um volume útil variando de 10 µl a 100 µl
tem um volume nominal de 100 µl .
No teste de conformidade, os erros máximos admissíveis para os volumes nominais das Tabelas 1 e 2 aplicam-se a todos
volume selecionável em toda a faixa de volume útil da pipeta de pistão; ou seja, a sistemática máxima permitida
erros de pipetas de pistão de volume variável tipos A e D1 com uma faixa de volume útil de e 10 µl 100
para
µl ± 0,8 µlsão
os erros aleatórios máximos permitidos são ± 0,3 µl para cada volume medido.
NOTA É reconhecido que os erros de medição de volumes intermediários na faixa de volume útil de um volume variável
pipeta de pistão pode ser consideravelmente melhor do que aqueles especificados para o volume nominal da pipeta de pistão.
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Pipetas de pistão repetitivas com volume continuamente selecionável serão consideradas como pipetas de pistão de volume variável.
pipetas do tipo D2 e os erros máximos admissíveis da Tabela 2 serão aplicados.
Os erros sistemáticos e aleatórios máximos permitidos das pipetas de pistão multicanal devem ser iguais ao dobro do
valores especificados na Tabela 1 para pipetas de pistão monocanal. Cada canal da pipeta de pistão multicanal,
considerados de forma independente, devem atender a estas especificações.
No caso de pipetas de pistão multicanal de volume variável, os erros máximos permitidos para o volume nominal
aplicam-se a todos os volumes selecionáveis em toda a faixa de volume útil (consulte 7.4 para obter mais detalhes).
Os erros máximos permitidos sempre se aplicam ao sistema total da pipeta de pistão e da ponta. Ao usar pontas de pipeta
não entregue pelo fornecedor da pipeta, a declaração do fornecedor ou o certificado de conformidade não se aplica. Em tal
casos, a avaliação dos erros máximos admissíveis deve ser realizada utilizando as pontas alternativas com o
método de teste especificado na ISO 8655-6.
Antes da avaliação da conformidade da pipeta de pistão com as pontas alternativas, deve-se verificar se o pistão
pipeta em combinação com as pontas originais está em conformidade com os requisitos metrológicos especificados nesta parte do
ISO 8655.
Os usuários podem testar o desempenho metrológico para procedimentos rotineiros de garantia de qualidade do sistema total de
de acordo com a ISO 8655-6 ou com métodos de teste alternativos (ver nota à cláusula 1).
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8 Marcação
a) volume nominal ou, para pipetas de pistão de volume variável, faixa de volume útil;
Se for caso disso, pode ser aposta uma marca de conformidade na pipeta de pistão.
As seguintes informações devem ser impressas na embalagem de cada unidade comercializável de pontas de pipeta:
O fornecedor deverá indicar, quando apropriado, procedimentos para esterilização das pontas das pipetas.
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Anexo A
(normativo)
Informações a serem fornecidas pelo fornecedor para o usuário de pipetas e ponteiras de pistão
O fornecedor deverá fornecer informações essenciais para o uso adequado do aparelho e seus acessórios (ver ISO 8655-1:2002, cláusula 6). Esta
informação deverá constar da especificação publicada na qual se baseia o contrato de compra, ou nas instruções que acompanham a pipeta de
pistão, ou no certificado de conformidade e deverá ser a seguinte.
c) Uma lista de pontas e seus números de referência, que o fornecedor recomenda para uso com o aparelho, deve ser
Especificadas.
d) Deve ser especificado o método correto de uso, especialmente no manuseio de bolhas de 50 µl e evitando introdução de ar
pequenos volumes de líquido, ou uma referência a esta parte da ISO 8655.
e) Qualquer erro sistemático e aleatório de medição com referência aos procedimentos para seus testes pelo usuário nesta parte da ISO 8655 e na ISO
8655-6 deve ser especificado. Para pipetas de pistão de volume variável, o erro de medição sistemático e aleatório deve ser especificado no
volume nominal, em 50% do volume nominal e em 10% do volume nominal ou no menor volume selecionável.
f) Quaisquer sugestões sobre a base sobre a qual um protocolo mínimo de testes de rotina deve ser estabelecido pelo usuário
ou uma referência a esta parte da ISO 8655 deve ser especificada.
g) Uma indicação de que variações de volume podem resultar da medição de líquidos de diferentes propriedades físicas
deve ser especificado.
h) Devem ser especificadas quaisquer informações relativas ao cuidado, limpeza e esterilização da pipeta de pistão.
i) Mediante solicitação, deverão ser fornecidas informações sobre a interação dos materiais da pipeta de pistão com soluções e solventes orgânicos
e inorgânicos.
j) As recomendações de que as pipetas de pistão sejam sempre armazenadas verticalmente para evitar a entrada de fluido no interior devem ser
Especificadas.
ISO 8655-2:2002(E)
Anexo B
(informativo)
A Tabela B.1 fornece possíveis fontes de erro para pipetas de pistão com interface de ar.
Tabela B.1 — Parâmetros que influenciam, erros resultantes na medição e medidas corretivas
Efeito a
Parâmetro de influência Influenciável por Determinável por
Ritmo e tempo irregulares durante a Técnica uniforme de pipetagem; Os erros máximos permitidos foram
até 1,5%
pipetagem observando as informações do usuário excedidos
0,5% para Usar original ou recomendado 50% Ponta de gotejamento ou erros máximos
Pontas de pipeta com vazamento/mal encaixadas
pontas de pipeta permitidos são excedidos
ISO 8655-2:2002(E)
Bibliografia
Para informações detalhadas sobre possíveis erros de medição consulte as referências [1], [3] ou [4].
[1] ISO/TR 20461:2000, Determinação da incerteza para medições de volume feitas usando o método gravimétrico
método
[2] IEC 61010-1, Requisitos de segurança para equipamentos elétricos para medição, controle e uso em laboratório —
Parte 1: Requisitos gerais
[3] LOCHNER KH, BALLWEG T., FAHRENKROG H.-H. Untersuchung der Meßgenauigkeit von Kolbenhubpipetten mit
Luftpolster. J. LabMed, 20 (7/8), 1996, pp. 430-440 (em alemão)
[4] MICHEL F., SOMMER K., SPIEWECK F. Untersuchungen zur Ermittlung der Meßunsicherheit von
Kolbenhubpipetten mit Volumina von 1 µl 50bis .
µl PTB-Mitteilungen, 105 (6), 1995, pp.
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ICS 17.060
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