Funcionamento da PCR (Reação em Cadeia da Polimerase)
Introdução
A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é uma técnica amplamente utilizada em
biologia molecular para amplificar segmentos específicos de DNA, permitindo que
pequenas quantidades sejam replicadas milhões de vezes. Esse método é essencial para
diversas aplicações, como identificação genética, diagnóstico de doenças e pesquisas em
biotecnologia (MULLIS; FALOONA, 1987).
Princípios da PCR
A PCR é baseada no processo natural de replicação do DNA. A técnica utiliza uma
enzima conhecida como DNA polimerase, que sintetiza novas fitas de DNA a partir de
um molde, repetindo ciclos de aquecimento e resfriamento para realizar a amplificação
do material genético (SAIKI et al., 1985).
INFOESCOLA.Replicação. Disponível em:
<https://www.infoescola.com/genetica/replicacao/>. Acesso em: [29 set. 2024].
Etapas da PCR
O processo de PCR é composto por três etapas principais:
Desnaturação: A amostra de DNA é aquecida a cerca de 94-98°C, causando a
separação das duas fitas da molécula de DNA (SAIKI et al., 1988).
Anelamento: A temperatura é reduzida para 50-65°C, permitindo que os primers,
pequenas sequências de DNA que delimitam a região a ser amplificada, se liguem às
fitas de DNA (KARL, 1990).
Extensão: A temperatura é ajustada para aproximadamente 72°C, momento em que a
DNA polimerase sintetiza a nova fita de DNA a partir do molde existente (SMITH,
1992).
Esses ciclos são repetidos entre 25 e 40 vezes, resultando em uma grande amplificação
do DNA alvo (MULLIS; FALOONA, 1987).
KHAN ACADEMY. Polymerase Chain Reaction (PCR). Disponível em:
<https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-
pcr-electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr>. Acesso em: 29 set. 2024.
Funcionamento do Termociclador
O termociclador é um equipamento que controla automaticamente a temperatura da
reação em ciclos precisos e repetitivos. Ele é fundamental para o sucesso da PCR, pois
alterna rapidamente entre as três fases de temperatura (desnaturação, anelamento e
extensão). Sua capacidade de aquecer e resfriar as amostras com precisão torna a PCR
um processo eficiente e altamente reprodutível (INNIS; GELFAND, 1990).
BIOMEDICINA PADRÃO. Termociclador Convencional e em Tempo Real .
Disponível em: <httpshttps : //www.biomedicinapad.com .br /2022 /04 /termoc-
converter-e -em -tempo.html>. Acesso em : 29 de set. 2024.
Eletroforese
Após a amplificação pela PCR, a eletroforese é utilizada para analisar os produtos
gerados. A técnica de eletroforese em gel envolve a aplicação de uma corrente elétrica
para mover os fragmentos de DNA através de um gel de agarose. Os fragmentos são
separados de acordo com seu tamanho, permitindo a visualização e verificação do
sucesso da amplificação (SAMBROOK; RUSSELL, 2001).
SPLABOR. O que é Eletroforese? Saiba Mais. Disponível em:
https://www.splabor.com.br/blog/cuba-de-eletroforese/o-que-e-eletroforese-saiba-mais/.
Acesso em: 29 set. 2024.
Conclusão
A PCR revolucionou a biologia molecular ao permitir a amplificação de fragmentos
específicos de DNA de forma rápida e eficiente. O termociclador automatiza o processo
de alteração de temperatura, enquanto a eletroforese auxilia na análise dos produtos
amplificados, confirmando a eficiência da técnica.
Referências Bibliográficas
INNIS, M. A.; GELFAND, D. H. PCR Protocols: A Guide to Methods and
Applications. Academic Press, 1990. Disponível em: [Google
Books](https://books.google.com). Acesso em: 22 set. 2024.
KARL, S. A. Application of polymerase chain reaction in marine biology. Molecular
Marine Biology and Biotechnology, v. 1, n. 1, p. 51-55, 1990. Disponível em: [Google
Scholar](https://scholar.google.com). Acesso em: 22 set. 2024.
MULLIS, K.; FALOONA, F. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-
catalyzed chain reaction. Methods in Enzymology, v. 155, p. 335-350, 1987. Disponível
em: [Elsevier](https://www.elsevier.com). Acesso em: 22 set. 2024.
SAIKI, R. K. et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a
thermostable DNA polymerase. Science, v. 239, n. 4839, p. 487-491, 1988. Disponível
em: [Science Magazine](https://www.science.org). Acesso em: 22 set. 2024.
SAMBROOK, J.; RUSSELL, D. W. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 3. ed.
Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001. Disponível em: [Cold Spring Harbor
Laboratory Press](https://cshlpress.com). Acesso em: 22 set. 2024.
SMITH, K. L. PCR: methods and applications. Genome Research, v. 1, n. 1, p. 1-8,
1992. Disponível em: [Genome Research](https://genome.cshlp.org). Acesso em: 22 set.
2024
