DETERMINAO DE NITROGNIO TOTAL EM AMOSTRAS DE ROCHA PETROLFERA PELO MTODO KJELDAHL / INDOFENOL

Fernanda Nunes Ferreira Bolsista de Inic. Cientfica, Qumica Industrial, UFF Maria Ins Couto Monteiro Orientadora, Qumica Analtica, D. Sc. Llian Irene Dias da Silva Co-orientadora, Fsico-Qumica, M. Sc. Manuel Castro Carneiro Co-orientador, Qumica Analtica, D. Sc.

RESUMO
O mtodo micro Kjeldahl / indofenol foi implementado para determinao de nitrognio total em amostras de rocha petrolfera e de solo, utilizando sistemas de digesto e de destilao por arraste de vapor. Foram realizados estudos da influncia do tempo de digesto, das temperaturas dos poos do bloco digestor, da recuperao de NH3 nas etapas de digesto e destilao e da influncia do Se como catalisador na digesto das amostras. Os resultados obtidos indicaram que os sistemas de digesto e de destilao e o mtodo do indofenol so adequados para a determinao de N Kjeldahl total , e no h necessidade da utilizao do catalisador de Se na etapa de digesto das amostras testadas.

1. INTRODUO 1.1. MTODOS UTILIZADOS PARA DETERMINAO DE NITROGNIO TOTAL Os mtodos mais utilizados para a determinao de nitrognio total so: (a) o mtodo Kjeldahl, que essencialmente um procedimento de oxidao mida e (b) o mtodo de Dumas, que basicamente uma tcnica de oxidao seca (combusto) (KEENEY e BREMNER, 1967). O mtodo Kjeldahl para determinao de nitrognio Kjeldahl total (NKT) tem sido utilizado desde 1883 (YASUHARA e NOKIHARA, 2001). Apresenta como principal vantagem o uso de uma aparelhagem extremamente simples e pouco onerosa. De acordo com Bremner (1965) e Keeney e Bremner

(1967), o mtodo clssico Kjeldahl satisfatrio para a anlise de Ntotal para a maioria dos compostos nitrogenados que ocorrem nos solos e plantas. Entretanto, no apresenta resultados satisfatrios quando esto presentes compostos com ligaes N-N e N-O. Uma frao das espcies N-NO3- e NNO2- pode ser recuperada pelo mtodo clssico Kjeldahl, sendo que a recuperao muito varivel, dependendo da quantidade de gua e de matria orgnica presente no solo. Altas recuperaes foram obtidas com solos orgnicos (BREMNER, 1965). As espcies de N-NH4+fixo (KEENEY e BREMNER, 1967) e Norgnico (BREMNER, 1965) retidas nas camadas interlamelares das amostras superficiais de minerais argilosos e de solos orgnicos so recuperadas quantitativamente pelo mtodo Kjeldahl, porm para subsolos contendo altas concentraes de N-NH4+fixo este mtodo no fornece completa recuperao do N-NH4+fixo nativo. 1.2. MTODO KJELDAHL O mtodo clssico Kjeldahl compreende duas etapas: (1) digesto da amostra para converter Norg. a on amnio (N-NH4+) e (2) determinao do NNH4+ no digerido, aps destilao com lcali. O sulfato de amnio resultante da digesto aquecido com uma base, desprendendo amnia (NH3), e a reao pode ser representada pela equao: NH4+ + OH- NH3 + H2O. A amnia ento recolhida em uma soluo cida, e a espcie N-NH4+ determinada por colorimetria, eletrodo on seletivo ou titulao com soluo padro cida (BREMNER, 1965; YASUHARA e NOKIHARA, 2001). 1.3. DIGESTO DA AMOSTRA PELO MTODO KJELDAHL Na etapa de digesto do mtodo clssico Kjeldahl, a amostra aquecida com cido sulfrico. So utilizados sais (K2SO4 ou Na2SO4) para aumentar a temperatura de ebulio do H2SO4, e catalisadores, tais como Se, Hg ou Cu que promovem um aumento da velocidade de oxidao da matria orgnica (BREMNER, 1965). A temperatura, que controlada pela quantidade de K2SO4 (ou Na2SO4) empregada, um importante fator na digesto do mtodo clssico Kjeldahl. Quando se utilizam baixas concentraes de K2SO4 so necessrias vrias horas de digesto. Com altas concentraes, o tempo de digesto reduzido, diminuindo os perigos inerentes operao. Entretanto, a utilizao de altas concentraes de K2SO4 apresentam a desvantagem da formao de um digerido slido, quando arrefecido temperatura ambiente,

sendo necessrio dissolv-lo com gua antes da destilao. Outra desvantagem a formao de espuma durante a digesto de amostras de solo orgnico e perdas de N, que podem ocorrer quando a temperatura de digesto ultrapassa 400C . Os catalisadores aumentam a velocidade de digesto, quando baixas concentraes so utilizadas, e tm praticamente nenhum efeito quando so utilizadas altas concentraes. Na produo rpida de um digerido claro, os catalisadores so apresentados em ordem decrescente: Se > Hg > Cu. Selnio no significativamente mais eficiente que Hg quando so consideradas as velocidades de clareamento do digerido e converso de Norg. a N-NH4+, mas Se e Hg so consideravelmente mais eficientes que Cu. Uma avaliao crtica da literatura indicou que Se um catalisador seguro e eficiente quando adequadamente utilizado, e perda de N ocorre somente quando usado em excessiva quantidade ou com grande quantidade de K2SO4 ou Na2SO4, e digesto muito prolongada. Considerando-se ambos os efeitos de clareamento do digerido e converso de Norg. a N-NH4+, Hg mais eficiente que Se. Entretanto, dificulta a liberao do NH3 na destilao (BREMNER, 1965). No mtodo utilizado pela FEEMA (1983) para determinao de NKT em guas de abastecimento pblico, despejos industriais e esgotos sanitrios, h somente utilizao de Cu+2 como catalisador, na etapa de digesto da amostra. 1.4. DETERMINAO DA ESPCIE N-NH4+ POR COLORIMETRIA O on NH4+ tem sido determinado por diferentes mtodos, sendo que os mais utilizados so os mtodos espectrofotomtricos: mtodo do indofenol (reao de Berthelot), procedimento de difuso de gs/ indicador cido-base e do reagente de Nessler (VAN STANDEN e TALJAARD, 1997). Para anlise de solos geralmente utilizado o mtodo titrimtrico (BREMNER, 1965).O mtodo do indofenol se baseia na formao do composto azul intenso de indofenol, resultante da reao da amnia com um composto fenlico na presena de um agente oxidante e catalisador (FEEMA, 1983).

2. OBJETIVO Esse trabalho tem como objetivo implementar o mtodo micro Kjeldahl/ indofenol, utilizando sistemas de digesto e de destilao por arraste de vapor para determinao de NKT em amostras de rocha petrolfera e de solo. 3. MATERIAIS E MTODOS 3.1. INSTRUMENTAL Para a digesto das amostras foi utilizado um bloco digestor TE-008/25 com capacidade para 8 provas micro, fornecido pela Tecnal (Piracicaba - SP, Brasil). Foi construdo um sistema de vidro pyrex e utilizado vcuo para suco do SO3, produzido durante a digesto das amostras. Para a destilao do NH3 foi utilizado um destilador modelo TE 036/1 Tecnal, semiautomtico. Para as determinaes da espcie N-NH4+ foi utilizado um espectrofotmetro Perkin-Elmer Lambda 12/1.0 nm (1.3) UV-Vis. Para a medio da temperatura dos poos do bloco digestor, foi utilizado um termopar CONTEMP, Indstria, Comrcio e Servios LTDA modelo IM-01, entrada K(IPTS). 3.2. REAGENTES, SOLUES E AMOSTRAS Todas as solues foram preparadas utilizando reagentes de grau analtico (P.A.). gua destilada e deionizada foi purificada em um sistema Milli-Q. Foram utilizados cido sulfrico e hidrxido de sdio, fornecidos pela Vetec Qumica Fina Ltda.; sulfato de cobre, sulfato de potssio, cloreto de amnio, fenol e nitroprussiato de sdio fornecidos pela Merck; hipoclorito de sdio da Isofar. Foram utilizados trs materiais de referncia certificados de solo, NCS DC 73319, 73321, 73326, fornecidos pelo China National Analysis Center for Iron and Steel (Beijing - China). Foram analisadas duas amostras de arenito 7 e 9. Foram preparadas as seguintes solues - padro para a construo da curva analtica:

Soluo - padro estoque de amnio 100 mg L-1 N-NH4+: dissolveram-se 0,382 g de NH4Cl anidro, previamente seco a 100oC, em gua e diluiu-se para 1000 mL. Soluo - padro intermediria de amnio 10 mg L-1 N-NH4+: foram pipetados 5 mL da soluo estoque de amnio e diludos para 50 mL com gua em balo volumtrico. A soluo foi utilizada imediatamente aps a sua preparao. Solues - padro de amnio 0,1 a 0,5 mg L-1 N-NH4+: foram preparadas solues - padro com concentraes finais de N na faixa de 0,1 a 0,5 mg L-1 em H2SO4 0,036 mmol L-1, diluindo-se adequadamente os padres intermedirios. A soluo foi utilizada imediatamente aps a sua preparao. Quando as solues - padro foram submetidas s etapas de digesto e destilao, foram utilizadas massas iniciais de NH4Cl de 5 a 25 g N. Na etapa de digesto foram utilizadas as seguintes misturas: Mistura de digesto A: sulfato de potssio e sulfato de cobre foram misturados na proporo de 3:1 (em massa) e triturados num gral de gata. Mistura cida digestora A: a soluo foi preparada misturando-se 10 g da mistura de digesto A, 100 mL de gua e 100 mL de H2SO4 concentrado. Mistura de digesto B: foram misturados 100 g de sulfato de potssio, 10 g de sulfato de cobre e 1g de Se, previamente triturados em gral de gata separadamente. A mistura foi homogeneizada em grau de gata. Para a etapa de destilao foram utilizadas as solues de: Soluo de hidrxido de sdio 10 mol L-1: foram pesados 400 g de NaOH e dissolvidos em gua. A soluo foi avolumada com gua a 1000 mL. Soluo de cido sulfrico 0,9 mmol L-1: adicionaram-se 25 mL de H2SO4 concentrado em cerca de 500 mL de gua. Aps arrefecimento da soluo temperatura ambiente, completou-se o volume com gua para 1000 mL. Pipetaram-se 2 mL desta soluo e diluiu-se com gua para 1000 mL. Para a reao colorimtrica foram utilizadas as seguintes solues: Soluo de fenol e nitroprussiato de sdio - foram pesados 5 g de fenol e 0,025 g de nitroprussiato de sdio, dissolvidos em gua e misturados. O volume da soluo foi completado com gua a 100 mL. Soluo de hipoclorito de sdio e hidrxido de sdio - foram dissolvidos 2,5 g de NaOH em um pouco de gua e misturados com uma soluo de

hipoclorito de sdio contendo aproximadamente 0,21% de cloro ativo. A soluo foi avolumada para 100 mL com gua. 3.3. MTODOS 3.3.1. PR-TRATAMENTO DAS AMOSTRAS DE ROCHA PETROLFERA CONTENDO PETRLEO (AMOSTRAS 7 E 9) A Figura 1 apresenta um fluxograma do procedimento para o pr-tratamento das amostras de rocha petrolfera contendo petrleo (amostras 7 e 9).
200g amostra

500 mL n-hexano Tampar bcher, agitar manual e ocasionalmente por 2h. Filtrar. Repetir 4x, usando 300mL de n-hexano Secar ao ar (12 h). Pulverizar (peneira 150 mesh)

Figura 1. Procedimento para o pr-tratamento das amostras de rocha petrolfera contendo petrleo.

3.3.2. DETERMINAO DE NKT A determinao de NKT pelo mtodo micro Kjeldahl foi realizada na ausncia de Se (procedimento A) e na presena de Se (procedimento B) na etapa de digesto das amostras (Figura 2).

Procedimento A Digesto 0,2g amostra

Procedimento B 0,2g amostra

5mL mistura digestora A

2mL H2O/ mg N agitao/ repouso 30 min. 1,1g mistura digestora B + 3mL H2SO4 conc.

Agitao do tubo, aquecimento 150C (1h), aquecimento 400C (2h). Arrefecimento da amostra temperatura ambiente. Destilao da amnia 20mL de gua Conectar o tubo ao destilador Kjeldahl. 10mL NaOH 10 mol L-1 Ligar aquecimento da caldeira, que j foi previamente aquecida at ebulio. Recolhimento do destilado em 20mL de H2SO4 0,9 mmol L-1 Determinao espectrofotomtrica da amnia t4 min.

Transferir o destilado para balo volumtrico de 50 mL. Retirar uma alquota de 2,5mL e transferir para balo volumtrico de 25mL. 2,0mL nitroprussiato de sdio + fenol + 2,0mL NaClO + NaOH Avolumar, homogeinizar, deixar em repouso por 30 min.

Determinao espectrofotomtrica ( = 630 nm)

Figura 2. Procedimento para a determinao de NKT pelo mtodo micro Kjeldahl/ indofenol.

4. RESULTADOS E DISCUSSO 4.1. ESTUDO DA VARIAO DA TEMPERATURA DOS POOS DO BLOCO DIGESTOR COM O TEMPO DE DIGESTO Foi observada a variao de temperatura dos poos do bloco digestor com o tempo de digesto, quando o termostato indicava as temperaturas de 150 e 400oC. Os tempos de estudo foram aqueles utilizados na etapa de digesto (1h a 150oC e 2h a 400oC). A medio da temperatura teve incio quando o termostato indicava que a temperatura desejada tinha sido atingida.

Observaram-se variaes entre 133 a 143oC e 346 a 374oC, quando o boto do termostato indicava que a temperatura atingia 150 e 400oC, respectivamente. Apesar da variao, durante a etapa de digesto, a temperatura no ultrapassou 400oC, evitando assim, perda de nitrognio .
Tabela 1. Temperaturas ( oC) dos poos do bloco digestor ( boto do termostato mantido a 150oC) Tempo (min) No poo 1 2 3 4 5 6 7 8 zero 140 143 143 140 134 138 137 135 15 137 135 136 135 135 136 134 136 30 133 134 135 136 134 135 135 136 45 134 135 134 135 134 136 136 135

Tabela 2. Temperaturas ( oC) dos poos do bloco digestor ( boto do termostato mantido a 400oC) Tempo (min) No poo 1 2 3 4 5 6 7 8 zero 351 369 364 364 362 366 357 368 30 363 367 364 351 349 356 366 363 60 345 351 351 346 361 363 360 363 90 363 353 357 353 354 363 364 374 120 352 348 359 354 362 361 366 374

4.2. ESTUDO DE RECUPERAO DE NH3 APS AS ETAPAS DE DIGESTO E DESTILAO PARA DETERMINAO DE NKT O estudo de recuperao de NH3 aps as etapas de digesto e/ou destilao foi realizado utilizando solues-padro de NH4Cl, nas concentraes finais de 0,1; 0,2; 0,4 e 0,5 mg L-1 N-NH4+em H2SO4 0,036 mM. Foram utilizadas trs condies: (a) solues de NH4Cl submetidas s etapas de digesto e destilao (b) solues de NH4Cl submetidas etapa de destilao e (c) solues de NH4Cl no submetidas s etapas de digesto e destilao.

Recuperaes de100% foram consideradas para as medidas de absorvncia obtidas com as solues-padro no submetidas s etapas de digesto e destilao. Foram realizadas 3 replicatas de cada determinao. Todas as recuperaes obtidas variaram de 100 a 110 %, indicando que no h perdas de NH3 durante as etapas de digesto e destilao.
Tabela 3. Recuperao de NH3 de solues-padro de NH4Cl aps as etapas de digesto e destilao pelo mtodo NKT (n=3) Concentrao de N-NH4+ Recuperao de N-NH4+(%) Medidas de absorvncia* (mg L-1) na soluo final SDI e SDE CDE CDE e CDI CDE CDE e CDI 0,15 + 0,01 0,16 + 0,02 0,16 + 0,04 0,1 110 108 0,32 + 0,01 0,32 + 0,02 0,33 + 0,01 0,2 102 105 0,62 + 0,02 0,62 + 0,02 0,62 + 0,02 0,4 100 100 0,78 + 0,01 0,80 + 0,01 0,81 + 0,02 102 103 0,5
*As medidas de absorvncia foram subtradas das absorvncias das solues-branco SDI- sem digesto CDI-com digesto SDE sem destilao CDE- com destilao

4.3. ESTUDO DA INFLUNCIA DO Se NA DETERMINAO DE NKT Os resultados de NKT obtidos pelo mtodo micro Kjeldahl, adicionando-se ou no o catalisador Se na etapa de digesto das amostras, no apresentaram diferena significativa, quando foi aplicado o teste t-pareado, para um nvel de confiana de 95%. Esse resultado indica que as determinaes podem ser realizadas sem a adio do catalisador Se, contribuindo, assim, para a diminuio da gerao de resduos txicos no laboratrio. Tambm, considerando os resultados do teste F, pode-se afirmar que ambos os procedimentos so igualmente precisos (Tabela 4). 4.4. DETERMINAO DE N TOTAL PELO PROCEDIMENTO DE KJELDAHL Os resultados de NKT (Tabela 4) obtidos na presena e ausncia do catalisador de Se no apresentaram diferena significativa para um nvel de confiana de 95%. Tambm, os resultados de NKT das amostras certificadas NCS DC 73319, 73321 e 73326 no apresentaram diferena significativa dos valores certificados de Ntotal. O mtodo utilizado apresentou boa preciso (RSD < 8%).

Tabela 4.Concentrao de NKT determinado pelo mtodo micro Kjeldahl, em g g-1, com seus respectivos desvios-padro Concentrao de NKT* Amostra Valor certificado de Ntotal Sem selnio Com selnio 647 + 13 (5) 670 + 13 (5) 7 179 + 10 (4) 156 + 14 (3) 9 1846 + 17 (3) 1870 + 54 73319 n.d. 626 + 21 (4) 629 + 24 (4) 640 + 40 73321 400 + 32 (8) 370 + 43 73326 n.d.
Os valores entre parnteses se referem ao n de determinaes n.d. - no determinado * < 150 mesh
o

5. CONCLUSES Apesar da temperatura de digesto variar + 28C, no ultrapassou a temperatura limite de 400C, evitando assim, perda de nitrognio. Os sistemas de digesto e de destilao da Tecnal so adequados para a determinao de nitrognio, apresentando boa preciso (RSD < 8%). As determinaes de NKT nas amostras de rocha petrolfera podem ser realizadas sem adio de Se, um elemento txico ao meio ambiente. As amostras de rocha petrolfera 7 e 9 apresentaram concentraes de Ntotal determinadas pelo mtodo Kjeldahl, de 647 e 179 g g1, respectivamente. BIBLIOGRAFIA Bremner J.M. (1965). Total Nitrogen. Methods of soil analysis Part 2Chemical and Microbiological Properties, number 9 in the series Agronomy, American Society of Agronomy, Inc., Publisher USA, p. 1149-1178. FEEMA (1983). Nitrognio Kjeldahl total (micro Kjeldahl). Manual do Meio Ambiente Volume II Mtodos FEEMA, R.J., MF 421.R2, p.45. Keeney D.R., Bremner J.M. (1967). Use of the Coleman model 29 A analyser for total nitrogen analysis of soils. Soil Science, 104 (5), 358-363. Van Standen J.F., Taljaard R.E. (1997). Determination of ammonia in water and industrial effluent streams with the indophenol blue method using sequential injection analysis. Analytica Chimica Acta, 344, 281-289. Yasuhara T., Nokihara K. (2001). High-throughput analysis of total nitrogen content that replaces the classic Kjeldahl method. Journal of agricultural and food chemistry, 49, 4581-4583.

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