Bioclin

TRIGLICRIDES LQUIDO ESTVEL

K055
INSTRUES DE USO
FINALIDADE Mtodo para a determinao dos Triglicrides. Teste enzimtico colorimtrico, somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO DE AO
Triglicrides + H2O Glicerol + ATP Glicerol 3 Fosfato + O2 2H2O2 + 4 Aminoantipirina + p-clorofenol Glicerol + cidos Graxos Glicerol-3-Fosfato + ADP Fosfato Dihidroxiacetona + H2O2 Peroxidase Cromgeno cereja + 4 H O
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AMOSTRAS Soro obtido livre de hemlise (para evitar resultados falsamente elevados) ou plasma colhido com EDTA ou heparina. O analito estvel durante 3 dias entre 2 e 8 oC e 30 dias a 10 oC negativos. O sangue deve ser colhido aps um jejum de 12 a 14 horas. As amostras lipmicas devem ser previamente diludas com Cloreto de sdio a 0,85%, na proporo 1:2. DESCRIO DO PROCESSO PREPARO DO REAGENTE DE TRABALHO Misturar nove (9) partes do Reagente N 2 com uma (1) parte do Reagente N 3. O Reagente de Trabalho estvel 21 dias entre 2 e 8 C. TCNICA Marcar 3 tubos de ensaio: B (Branco), A (Amostra), P (Padro) e proceder como a seguir: Branco Amostra Reagente No 1 Reagente de Trabalho 1,0 mL Padro 10 L 1,0 mL Amostra 10 L 1,0 mL

O H2O2, 4 Aminoantipirina e p-clorofenol na presena da peroxidase d origem a um composto de cor cereja cuja intensidade de cor proporcional concentrao de Triglicrides. REAGENTES Reagente N 1 - Padro - conservar entre 2 e 8 C. Contm: Triglicrides 100,0 mg/dL (1,13 mmol/L), cido Benzico 20,47 mmol/L; Reagente N 2 Reagente Enzimtico 1 - conservar entre 2 e 8 C. Contm: Tampo Pipes pH 7,0 (100 mmol/L), Cloreto de Magnsio 15 mmol/L, 4-cloro fenol 5 mmol/L, Lipase Lipoprotica 2500 U/L, Glicerol quinase > 1500 U/L, Peroxidase > 1000 U/L, Colato de sdio 2,7g/L; Reagente N 3 Reagente Enzimtico 2 - conservar entre 2 e 8 C. Contm: 4-Aminoantipirina 0,9 mmol/L, ATP 1,5 mmol/L, Azida Sdica 15,38 mmol/L, Glicerol-3-Fosfato Oxidase > 4000 U/L, Genapol 1,8g/L. APRESENTAO Reagentes K 055-1 K 055-2 Reagente N 1......................3 mL.......................3 mL Reagente N 2.......................2 x 45 mL..................4 x 45 mL Reagente N 3..............................2 x 5 mL ....................4 x 5 mL EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAIS Espectrofotmetro ou colormetro, banho-maria 37 C, relgio ou cronmetro, pipetas, tubos de ensaio. Encontram-se no mercado especializado de artigos para Laboratrios de Anlises Clnicas. CONDIES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE A temperatura de armazenamento dever ser de 2 a 8 C. O transporte em temperaturas entre 15 e 30C no dever exceder a 72 (setenta e duas) horas. Manter ao abrigo da luz e evitar umidade. CUIDADOS ESPECIAIS 1 - Somente para uso diagnstico in vitro; 2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos; 3 - A gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentes contaminantes; 4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam gua alcalina, ons diversos e agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma significativa os resultados; 5 - O nvel de gua no banho-maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio; 6 - Determinar o fator periodicamente e a cada lote do produto; 7 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os critrios de biossegurana de acordo com a legislao vigente.

Homogeneizar bem e colocar em banho-maria 37oC por 10 minutos. Ler a absorbncia da Amostra e do Padro em 500 nm (490-540 nm), acertando o zero com o Branco. A cor estvel por 30 minutos. DESCRIO DOS CLCULOS Triglicrides ( mg/dL ) = Absorbncia da amostra x 100 Absorbncia do padro Como a reao segue a Lei de Lambert-Beer, o Fator de calibrao pode ser usado. Fator de calibrao = Concentrao do padro ( 100 mg/dL ) Absorbncia do padro mg/dL = Absorbncia da amostra x Fator de calibrao Os resultados sero expressos em mg/dL. A reao linear at 900 mg/dL. Para amostras com valores acima de 900 mg/dL ou densidade ptica acima de 0,8, diluir a amostra com Cloreto de sdio 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio. LIMITAES DO PROCESSO Deve-se evitar a exposio do Reagente de Trabalho luz direta. Substncias redutoras como o cido ascrbico, mesmo em baixas concentraes, e amostras ictricas com bilirrubina acima de 5 mg/dL interferem na metodologia, levando a resultados falsamente diminudos. Algumas substncias como o lcool, contraceptivos orais e estrgenos elevam os valores de Triglicrides. VALORES DE REFERNCIA Os valores de referncia em mg/dL, para o presente mtodo, foram obtidos atravs da determinao de Triglicrides em populaes sadias do sexo masculino e feminino. Soro: menor que 160 mg/dL

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Para converter os valores de mg/dL em mmol/L ( SI ) multiplicar por 0,0113. Estes valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio dever criar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao atendida. DESEMPENHO DO PRODUTO CONTROLE DE QUALIDADE Exatido RECUPERAO A anlise de recuperao foi feita com 05 determinaes de amostras. As exatides foram calculadas, e se encontraram em boa concordncia com os valores de referncia, obtendo uma recuperao entre 97 e 102%. COMPARAO DE MTODOS E ESPECIFICIDADE METODOLOGICA O Kit de Triglicrides Lquido Estvel Bioclin foi comparado com outro mtodo para dosagem de Triglicrides comercialmente disponvel. Foram realizadas 20 anlises e os resultados foram avaliados. O coeficiente de regresso linear: Y = 0,989 + 0,997 X e coeficiente de correlao 0,997. Com estes resultados pode-se concluir que o kit apresenta boa especificidade metodolgica. Preciso REPETITIVIDADE Foram realizadas 20 dosagens sucessivas com trs amostras, obtendo-se os seguintes resultados: Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Concentrao Mdia (UI/mL).............139,65...............166,50.............161,50 Desvio Padro (UI/mL)........................4,66...................7,64.................6,64 Coeficiente de Variao (%)................3,34..................4,60.................4,11 REPRODUTIBILIDADE Foram realizadas 20 dosagens durante 03 dias consecutivos com trs amostras, obtendo-se os seguintes resultados: Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Concentrao Mdia/3dias (UI/mL)...........144,01...........168,82.........162,63 Desvio Padro (UI/mL)................................3,87...............2,75.............1,75 Coeficiente de Variao (%).......................2,68..............1,63..............1,08 SENSIBILIDADE A sensibilidade foi calculada a partir de 20 determinaes de uma amostra de concentrao 0 (zero) de Triglicrides. A mdia 3,10 mg/ dL com Desvio Padro de 0,72 mg/dL. A sensibilidade, que indica o Limite de Deteco do Mtodo, corresponde a 4 vezes o Desvio Padro = 2,88 mg/dL. LINEARIDADE A reao linear at concentrao de 900 mg/dL. Para amostras com valores acima de 900 mg/dL diluir a amostra com Cloreto de Sdio 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelo fator de diluio.

ESPECIFICIDADE As enzimas Lipoprotena Lipase (Triacilglicerol-proteina acilhidrolase E.C.3.1.1.34), Glicerol Quinase (ATP:glicerol 3fosfotransferase E.C.2.7.1.30.) e Glicerol 3-Fosfato Oxidase (snGlicerol-3-fosfato:Oxignio 2-xido Redutase E.C. 1.1.3.21.) so altamente especficas ao Triglicrides e produtos da sequncia de reaes, tornando assim a metodologia especfica para a determinao deste analito. SIGNIFICADO DIAGNSTICO Os triglicrides, constituintes das vrias lipoprotenas, so encontrados em diferentes concentraes e tm grande importncia na classificao e fenotipagem das hiperlipoproteinemias. Nas vrias patologias em que ocorre hiperlipidemia, os Triglicrides somente no se encontram elevados no Tipo IIa. So verificados valores aumentados em vrias patologias como no diabetes, doenas cardiovasculares, pancreatite, sndrome nefrtica, uremia, hipotireoidismo, alcoolismo crnico. Em processos de triagem, a dosagem dos Triglicrides, Colesterol, a prova de refrigerao srica e outros parmetros podem fornecer dados consistentes classificao e fenotipagem das hiperlipoproteinemias. CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE Deve ser prtica rotineira do Laboratrio Clnico o uso de soro controle para checar a preciso e exatido das dosagens. Deve ser de 5% o erro mximo permitido em relao aos valores pr-estabelecidos para os controles. NMERO DE TESTES K 055-1= 100 testes / 10 mL de amostra / 1,0 mL de Reagente de Trabalho. K 055-2= 200 testes / 10 mL de amostra / 1,0 mL de Reagente de Trabalho. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1-BUCOLO, G.; DAVID, H., Clin. Chem., 1973, 476. 2 - TONKS, D. B., Quality Control in Clinical Laboratories, 1983. 3 - MC GOWAN, M. W.; ARTISS, J. D.; STRANDBERGH, D. R.; ZAK, B., Clin. Chem., 1983, 29-538. 4 - TRINDER, P.; Ann. Clin. Biochem, 1969, 6-24. GARANTIA DE QUALIDADE Antes de serem liberados para o consumo todos os reagentes BIOCLIN so testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidade dos reagentes assegurada at a data de validade mencionada na embalagem de apresentao, desde que armazenados e transportados nas condies adequadas. DADOS DO FABRICANTE QUIBASA QUMICA BSICA Ltda Rua Teles de Menezes, 92 Santa Branca CEP 31565-130 Belo Horizonte MG Brasil Tel.: (31) 3427.5454 Fax (31) 3427.2999 e-mail bioclin@bioclin.com.br CNPJ: 19.400.787/0001-07 Indstria Brasileira ATENDIMENTO AO CONSUMIDOR Servio de Atendimento ao Cliente Tel.: 0800 315454. E-mail: sac@bioclin.com.br Nmero de registro na ANVISA: 10269360130 Reviso: Maro/06