Produto & Produo, vol. 11, n. 1, p. 22 - 29, fev.

2010
Edio Metrologia

Aplicao da Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) para Determinao da

Pureza de Frmacos
Gabriela F. Moreira, D. Sc
gfmoreira@inmetro.gov.br
Andrea Balbo, D. Sc
Carlos A. Achete, Prof.
caachete@inmetro.gov.br
Instituto Nacional de Metrologia , Normalizao e Qualidade Industrial - INMETRO
Diretoria de Metrologia Cientfica e Industrial
Diviso de Metrologia de Materiais
Juliano S. Barin, D. Sc
Wagner Wollinger, M. Sc
wwollinger@inmetro.gov.br
Raquel Nogueira, D. Sc
Celso F. Bittencourt, D. Sc
Janana M. Rodrigues, D. Sc
Instituto Nacional de Metrologia , Normalizao e Qualidade Industrial - INMETRO
Diretoria de Metrologia Cientfica e Industrial
Diviso de Metrologia Qumica

RESUMO

O trabalho aborda um estudo comparativo entre a tcnica de Cromatografia a

Lquido de Alta Eficincia e a tcnica de Calorimetria Exploratria Diferencial,
visando avaliar a aplicao desta para a determinao direta da pureza de frmacos
candidatos a materiais de referncia certificados.

Palavras-chave: DSC, pureza, frmacos.

1 INTRODUO

A qualidade dos medicamentos constitui um fator fundamental para assegurar

a sua eficcia e minimizar a ocorrncia de efeitos indesejados decorrentes da
presena de impurezas e/ou produtos de degradao. Para tanto, diversos
procedimentos so preconizados em compndios oficiais, tais como as
Farmacopeias, para determinar a pureza das matrias-primas utilizadas na
fabricao das diversas formas farmacuticas. Assim, pode-se afirmar que a
determinao da pureza dos princpios ativos essencial e consiste em atividade
laboratorial rotineira no controle de qualidade de medicamentos.
Para este fim, vrias tcnicas analticas tm sido recomendadas nas
Farmacopeias, envolvendo mtodos clssicos e mtodos instrumentais. Nos ltimos
anos, percebeu-se um aumento considervel da utilizao dos mtodos
instrumentais, especialmente da cromatografia a lquido de alta eficincia (CLAE)
(SANDOR GROG, 2005).
Entretanto, os mtodos farmacopeicos para a determinao da pureza de
frmacos por CLAE demandam a utilizao de quantidades significativas dos
materiais de referncia, tanto dos princpios ativos quanto de suas impurezas, o que
torna o procedimento caro e demorado. Convm ainda lembrar que padres de
impurezas nem sempre se encontram disponveis.
Desta forma, a utilizao de uma tcnica que permita a determinao direta
da pureza de frmacos evitando o uso demasiado de materiais de referncia
consistiria em uma alternativa interessante para o controle de qualidade de
medicamentos. Para tanto, dentre o arsenal analtico disponvel atualmente, a
Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) apresenta-se bastante atraente. Alm de
no envolver a utilizao de materiais de referncia para a determinao da pureza,
apresenta outras vantagens, tais como menor tempo de anlise e de preparo da
amostra (MATHKAR, 2009).
A anlise da pureza por DSC uma tcnica bem consolidada, sendo que a
metodologia empregada est descrita na Norma ASTM E 928-03 (Standard test
method for purity by differential scanning calorimetry). O mtodo avalia a pureza do
composto por meio de uma anlise do pico de fuso obtido, aplicando a lei da
depreciao do ponto de fuso de Vant Hoff (que prev a depreciao do ponto de
fuso do composto puro devido presena de impurezas) (A VAN DOOREN, 1984).
A lei assume algumas consideraes, e dessa forma, esta somente vlida
quando: o material fundido uma soluo ideal na qual as impurezas so solveis; o
contedo das impurezas inferior a 2,5 % mol; o processo de fuso ocorre em
condies de quase-equilbrio termodinmico; a capacidade trmica do slido igual
do lquido; as impurezas so insolveis no estado slido; o composto no se
decompe ou no reage com atmosfera e/ou com as impurezas; no existem
transies prximas da temperatura de fuso; a entalpia de fuso independente da
temperatura; o slido totalmente cristalino (A VAN DOOREN, 1984).
Assim, dentro deste contexto, o presente trabalho busca avaliar a utilizao
do mtodo acima descrito, que emprega o DSC, na determinao da pureza de trs
substncias distintas candidatas a material de referncia certificado (MRC); entre
eles captopril, diclofenaco sdico e diclofenaco potssico. Os resultados foram

comparados com aqueles obtidos por CLAE conjuntamente com o mtodo de Karl
Fischer e titulao.

2 OBJETIVO

Avaliar a aplicao da tcnica de Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC)

na determinao da pureza de frmacos candidatos a materiais de referncia
certificados.

3 MTODOS

Materiais as amostras de captopril, diclofenaco sdico e diclofenaco

potssico foram obtidas diretamente de fornecedores de matria-prima para a
indstria farmacutica.
Calorimetria Exploratria Diferencial (DSC) as anlises de DSC foram
conduzidas utilizando o equipamento DSC Q1000 da TA Instruments, com o
acessrio de refrigerao RCS. Antes de iniciar os ensaios, O DSC Q1000
inicialmente foi calibrado utilizando padres de safira, fornecido pelo fabricante, para
calibrao da linha base do equipamento, com correo automtica do atraso
trmico associado ao fluxo de calor. Aps, para a calibrao da constante da clula
do equipamento e da temperatura, foram utilizados padres de ndio e bismuto,
materiais de referncia rasteveis certificados pelo NIST.
As amostras foram analisadas em panelas de alumnio hermticas (TA
Instruments) fechadas e para cada anlise foram utilizados 1 a 3 mg de material
(determinados em uma balana analtica, marca Mettler, modelo UMX5). As anlises
foram realizadas em triplicada aquecendo a amostra com uma taxa de aquecimento
de 0,5 C/min, at atingir a temperatura de 10-15 C acima de sua temperatura de
fuso, sob fluxo de He (50 mL/min).
A metodologia utilizada para a anlise da pureza descrita pela Norma ASTM
E 928-03.
A determinao da pureza pela tcnica de DSC aplica a lei da depreciao do
ponto de fuso, ocasionada pela presena de impurezas, de Vant Hoff, que est
representada na Equao 1.

RT02 1
TS = T0
H F

(1)

Na qual: TS a temperatura observada da amostra; T0 a temperatura de

fuso da amostra pura (100%); a frao molar das impurezas; H o calor de
fuso da amostra pura, e F frao de material fundido, que determinada atravs
da medida das reas parciais do pico de fuso experimental.
A equao anterior pode ser considerada de primeiro grau assumindo a forma
apresentada na Equao 2:

Y = aX + b

onde:

(2)

X=

RT 2
1
, Y = Ts , a = 0
H
F

e b = T0

Normalmente, o grfico obtido de TS versus 1/F no linear. A linearizao

realizada acrescentando uma rea arbitrria (c) rea total do pico, e a cada rea
parcial, conforme mostra a Equao 3.

F=

Apart + c
Atot + c

(3)

Na qual: Apart a rea parcial do pico que representa a frao da amostra

fundida; Atot a rea total do pico de fuso e c a rea adicional.
A norma apresenta dois mtodos para o clculo da pureza do composto a
partir da equao de Van`t Hoff acima apresentada. Sendo que o mtodo
empregado no trabalho foi o Mtodo A, que utiliza para o clculo o Software TA
Universal Analysis 2000 desenvolvido pela TA Instruments.
O software faz a anlise dos dados adquiridos, detecta a linha de base, a rea
e a altura mxima do pico de fuso. Estes dados so utilizados para o clculo dos
valores e nmeros de reas parciais, onde o software divide automaticamente a
curva experimental. Sendo que para anlise do pico foram usadas 50 reas parciais,
que tem uma frao mxima permitida de 50%, sendo o valor da altura de corte da
primeira rea parcial de 0,01%.
O valor de c determinado utilizando a tcnica no linear de mnimos
quadrados. Assim, determinado c, feita a linearizao da curva TS versus 1/F.
Aps, efetua-se o clculo do coeficiente linear e angular da reta aplicando uma
regresso linear. A partir do coeficiente angular determina-se a frao molar das
impurezas presentes em cada amostra.
As anlises foram realizadas em triplicata. As incertezas expandidas foram
calculadas com fator de abrangncia 2,0 correspondentes a 95% de nvel de
confiana.
Cromatografia a lquido de alta eficincia (CLAE) e Karl Fischer a pureza do
composto captopril foi determinada pelo mtodo indireto de balano de massas, em
que os resultados das impurezas so descontados da unidade. Foi utilizada CLAE
para anlise das impurezas orgnicas e titulao pelo mtodo de Karl Fischer para
anlise de gua. A CLAE foi realizada com detector de arranjo de fotodiodos (DAD)
em sistema Shimadzu LC-20, programa LC Solution e colunas C18 (Supelcosil LC18 250 x 4,6 mm, 5 m) e nitrila (Supelcosil LC-CN 150 x 4,6 mm, 5 m).
As amostras foram preparadas em triplicata por gravimetria, sendo injetadas 3
vezes cada amostra. Em cada caso, foram preparadas solues concentradas (500
g/g para captopril) e diludas (2 e 10 g/g, respectivamente). A concentrao de
impurezas orgnicas foi determinada pela razo entre as reas dos picos de cada
impureza na soluo concentrada e a rea do pico de captopril na soluo diluda,
devidamente corrigida pelo fator de diluio (razo entre as concentraes das
solues concentrada e diluda). As incertezas expandidas foram calculadas com
fator de abrangncia em torno de 2, correspondente a 95 % de nvel de confiana.
A determinao da gua das amostras foi feita pelo mtodo de Karl Fischer
em equipamento Metrohm titulador coulomtrico. As impurezas inorgnicas do
captopril foram determinadas por resduo de ignio segundo Farmacopeia

Brasileira. Componentes volteis foram avaliados pelo teste de perda por

dessecao segundo Farmacopeia Brasileira.
Titulao o teor de pureza do diclofenaco sdico e do diclofenaco potssico
foi determinado atravs de estudo interlaboratorial, de acordo com as
recomendaes da OMS, utilizando-se volumetria de oxi-reduo em meio no
aquoso com ponto final potenciomtrico. O material foi ainda caracterizado de
acordo com Farmacopeia Brasileira.
4 RESULTADOS E DISCUSSO
A Figura 1 ilustra o grfico de DSC adquirido para o composto captopril e os
valores encontrados a partir do clculo descrito na metodologia e empregado na
quantificao do teor de pureza do material.
Como pode ser observado na Figura 1, foi verificado durante o clico de
aquecimento do captopril um pico endotrmico bem definido e simtrico,
caracterstico de transio de fase da fuso e que denota uma transio a
temperatura constante, indicando que o processo ocorre no quase-equilbrio
termodinmico. A linha base foi mantida, sugerindo tambm que a capacidade
trmica do material no se modifica durante o processo. Ademais, no ocorre
nenhuma outra transio de fase durante a varredura da temperatura. Sendo assim,
o material apresentou condies ideais para efetuar-se o clculo de sua pureza por
meio de seu pico de fuso obtido atravs da tcnica de DSC.
As Figuras 2 e 3 apresentam as curvas de DSC obtidos para as amostras de
diclofenaco sdico e potssico, respectivamente. Como pode ser observado na
Figura 2, o formato do pico de fuso do composto (pico endotrmico) sugere que o
mesmo instvel prximo ao seu ponto de fuso, pois ocorrem dois eventos (banda
dupla), seguidos de uma alta oxidao do material, o que por sua vez indicado
pelo intenso pico exotrmico logo aps a fuso do composto. J para o diclofenaco
potssico (Figura 3), foi observada uma alta liberao de volteis, indicada pelos
vrios picos endotrmicos e exotrmicos, o que sugere sua degradao durante a
anlise trmica.
Dessa forma, para evitar a oxidao do material devido presena de
oxignio da atmosfera nas panelas utilizadas nas anlises de DSC, as amostras,
tanto de diclofenaco sdico e diclofenaco potssico, foram preparadas e
hermeticamente fechadas em uma cmara de luvas com atmosfera inerte (N2)
controlada, aps foram secas em uma estufa 120 C.
Novos testes foram realizados, porm os mesmos resultados foram
observados, confirmando que os eventos verificados durante a anlise trmica das
amostras correspondem decomposio destas conjuntamente com a transio de
fuso, visto que a temperatura de fuso destes compostos extremamente elevada,
entre 260-280 C.
Contudo, para estes casos, a anlise de DSC no apropriada para a
determinao da pureza, visto que no possvel observar um pico de fuso bem
definido, partir do qual efetuado clculo para estes compostos.

0.5

106.8

102.51C

109.12C

106.6

Fluxo de Calor (W/g)

~
~
~

-0.5

106.4

~
~

~
Pureza: 99.67mol %

~
~
Ponto de fuso: 106.77C (determinado)

~
Depresso: 0.15C

Delta H: 26.41kJ/mol (corrigido)

~ ~

Correo: 9.703%

~
Massa molecular: 217.3g/mol

~
Constante de clula: 1.119

~
Inclinao "Onset": -109.6mW/C

~
Desvio RMS: 0.01C

~
rea Total/rea Parcial

-1.0

-1.5

106.2

Temperature (C)

0.0

106.0

Total Area / Partial Area

-2

-2.0

0
102

104

Exo Up

6
106

10

105.8

108

110
Universal V4.2E TA Instruments

Temperatura (C)

Figura 1 - Curva DSC obtida para a amostra de captopril na faixa de 100-115 C

(taxa de aquecimento de 0,5 C/min, atm He).
0.15

Fluxo de Calor (W/g)

0.10

0.05

0.00

-0.05
160
Exo Up

180

200

220

240

Temperatura (C)

260

280

300
Universal V4.2E TA

Figura 2 Curva DSC obtida para a amostra de diclofenaco sdico na faixa de 180-290 C
(taxa de aquecimento de 0,5 C/min, atm He).

0.50

0.45

Flyuxo de Calor (W/g)

0.40

0.35

0.30

0.25

0.20

0.15

0.10
230

235

240

245

250

255

260

Exo Up

265

270

275

280

285

290

295

300

Universal V4.2E TA

Temperatura (C)

Figura 3 - Curva DSC obtida para a amostra de diclofenaco potssico na faixa de 235-300 C
(taxa de aquecimento de 0,5 C/min, atm He).

A Tabela 1 apresenta os valores de pureza encontrados para o composto

captopril a partir das tcnicas de DSC e CLAE.
Os valores obtidos por DSC e por CLAE mostraram-se equivalentes,
considerando a incerteza de cada medida. Alm disso, a tcnica de DSC apresentou
uma elevada reprodutibilidade e preciso, conforme ilustrado pelos valores de
incerteza obtidos (Tabela 1). Estes resultados, assim, evidenciam o potencial da
tcnica de DSC para a determinao de pureza de materiais.
Tabela 1 - Resultados obtidos para a determinao da pureza do captopril para tcnicas de DSC e
CLAE.

Captopril
Diclofenaco sdico
Diclofenaco
potssico

DSC

CLAE

CLAE

(mol %)

(% m/m)

(mol %)

Mdia

Incerteza*

Mdia

Incerteza*

Mdia

99,650

0,023

99,66

0,33

99,83

No foi possvel realizar anlise devido degradao

trmica da amostra durante a anlise trmica

*Nvel de confiana de 95 %, fator de abrangncia em torno de 2,0

5 CONCLUSO
A tcnica de determinao de pureza por DSC uma tcnica direta, rpida e
bastante precisa. Os resultados apresentados para a anlise de captopril por DSC e
CLAE demonstraram que, para princpios ativos cujo perfil de impurezas
conhecido, a pureza determinada por DSC mostra-se equivalente quela
determinada por CLAE, e, assim, o DSC mostra-se bastante atrativo. Porm, da
mesma forma que acontece com as demais tcnicas analticas, a DSC tambm
apresenta limitaes, no podendo ser empregada para princpios ativos que se
decompem ao fundir (ex.: diclofenacos). Alm disso, para princpios ativos cujo
perfil de impurezas desconhecido, os resultados da DSC podem diferir daqueles
obtidos por CLAE.
ABSTRACT
This work presents a comparative study between the High Performance Liquid
Chromatography and Differential Scanning Calorimetry techniques as absolute
methods of purity determination of materials regarding its application with
pharmaceutical certificate reference materials.
Keywords: DSC, purity, pharmaceuticals.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao apoio financeiro da FAPERJ e da FINEP.
REFERNCIAS
ASTM E 928-03. Standard Test Method for Purity by Differential Scanning
Calorimetry, West Conshohocken, USA, 2003.
A VAN DOOREN, A et al. Purity determinations of drugs with differential scanning
calorimetry (DSC) a critical review. International Journal of Pharmaceutics v. 20, p.
217233, 1984.
Farmacopeia Brasileira. 4. ed. So Paulo: Editora Atheneu. So Paulo, 1988.
MATHKAR, S et al. The use of differential scanning calorimetry for the purity
verification of pharmaceutical reference standards. Journal of Pharmaceutical and
Biomedical Analysis v. 49, n. 3, p. 627631, 2009.
SANDOR GROG. The sacred cow: the questionable role of assay methods in
characterizing the quality of bulk pharmaceuticals. Journal of Pharmaceutical and
Biomedical Analysis,v. 36, n. 5, p. 931937, 2005.