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Rita Maia
Fundamentos da Técnica
• Definição:
Método que combina a especificidade de
um anticorpo com a sensibilidade de um
ensaio simples enzimático.
• Princípio:
Reação Antígeno-Anticorpo
Fundamentos da Técnica
• Componentes:
Anticorpo ou Ag ligado
Enzima ativa
Substrato
Produtos solúveis (cor)
2 Enzyme-linked Ab
Serum Ab
Antigen
Fundamentos da Técnica
1. Direto
Tipos de ELISA
2. Indireto 3. Sanduíche
Tipos de ELISA
4. Competitivo 5. Multiplex
Uso Diagnóstico
O Que é?
Titulação é um método para testar a diluição serial de uma amostra (ex. soro)
Como funciona?
Determina a quantidade relativa de Ac na diluição serial de uma amostra
1. Definir grupos;
2. Ir ao laboratório de Viroses;
Marque tubos
Protocolo da Prática
de dilui o
Controle (+)
Controle ()
Cut off (CO)
Amostra
Adicione 1.000uL
do diluente
(serum diluent)
em cada tubo
Adicione 10uL
de cada amostra em Lembremse de Trocar as ponteiras
seu tubo respectivo
Misture bem
Transfira 100uL
de cada controle
CO e amostra
Lembremse de Trocar as ponteiras
para cada poo
Incube por 30 minutos
37o C
Protocolo da
Aps incubao Prática
Lave 6 vezes Lavagem: coloca o líquido com a Piceta e
com Wash Buffer
remove invertendo a placa de uma só vez.
Na última vez, inverta a placa e bata con firmeza
sobre papel para remover excesso de liquidos
Adiciona 100uL
Conjugado HRP
antiIgGhumano
em cada poo
Cubra a placa
e incube mais
30 minutos
37oC
Protocolo da Prática
Lave 6 vezes
com Wash Buffer
Lavagem: coloca o líquido com a Piceta e
remova invertendo a placa de uma só vez.
Adicione 100uL
TMB em cada Na última vez, inverta a placa e bata con firmeza
poo sobre papel para remover excesso de liquidos
Incube 10 min
em T.A.
Formar uma
colora o AZUL
Adicione 100uL
Stop Solution
em cada poo
Layout
•Utilize primeiro a placa re-utilizável para fazer a mistura inicial das amostras
•Só transfira para a placa de reação final quando for incubar
•Cada grupo utilizará uma fileira da placa com 8 poços
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A
B
C
D
E
F
G
H