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Introdução A Imunologia - Cap1 PDF
Introdução A Imunologia - Cap1 PDF
Captulo 1
Imunologia
Antnio Teva
Jos Carlos Couto Fernandez
Valmir Laurentino Silva
1. Introduo Imunologia
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Algumas das clulas-filhas retomam ao estado de repouso, tornando-se clulas de memria, que podem sobreviver por vrios anos. Estes linfcitos de
memria representam uma grande proporo das clulas do sistema imunitrio.
A outra prognie do linfcito virgem ativado diferencia-se em clulas efetoras,
que sobrevivem apenas alguns dias, mas que, durante este perodo, executam
atividade que resultam em defesa.
Outra classe de clulas linfoides, chamada de clulas matadoras naturais ou clulas natural killer (NK), desprovida de receptores antgenoespecficos, sendo parte do sistema imune inato. Essas clulas circulam no
sangue como grandes linfcitos, com diferentes grnulos citotxicos, e so
capazes de reconhecer e matar algumas clulas anormais, tais como clulas
tumorais e clulas infectadas por vrus. E parecem ser importantes na defesa
contra biopatgenos intracelulares na imunidade inata.
2.2. Os rgos linfoides e a rede linftica
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A expresso tecido linfoide associado mucosa (MALT = mucosalassociated lymphoid tissue) uma descrio geral para os tecidos linfoides no
encapsulados, que existem nas regies subjacentes s mucosas. Os MALTs se
distribuem anatomicamente e seus componentes individuais incluem:
Anel de Waldeyer - Anel de estruturas linfoides que circunda a
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Os linfcitos so as nicas clulas do organismo que expressam receptores altamente diversificados para o antgeno, o que permite o reconhecimento
de uma grande variedade de substncias estranhas. Essa diversidade gerada
durante o processo de desenvolvimento dos linfcitos T e B, a partir de clulas
precursoras. O desenvolvimento dos linfcitos T alfa beta (ab) e gama delta
(gd) segue estgios sequenciais, consistindo na recombinao somtica e expresso dos genes do TCR, proliferao celular, seleo induzida pelo antgeno
e aquisio de fentipos de capacidade funcional. Essas clulas se originam de
precursores do fgado fetal ou da medula ssea de adultos e completam o seu
desenvolvimento no timo. As clulas T em desenvolvimento no timo so
chamadas de timcitos. A maioria dos timcitos imaturos no expressa o TCR
ou os correceptores CD4 e CD8 e migram atravs do crtex, onde os eventos
de maturao ocorrem quando expressam pela primeira vez o TCR e iniciam a
maturao em clulas CD4 ou CD8.
Os nveis de proliferao e apoptose so extremamente altos nos timcitos
corticais, onde cerca de 95% morrem antes de chegar regio medular do
timo. O resultado desse processo seletivo a restrio ao MHC prprio e a
tolerncia a muitos autoantgenos. A diferenciao funcional e fenotpica em
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Os linfcitos T respondem aos antgenos peptdicos, que so expostos pelas clulas apresentadoras de antgenos (APCs). O incio desta resposta requer o reconhecimento especfico do antgeno pelas clulas T, a
adeso estvel das clulas T s APCs e a transduo dos sinais ativadores.
Cada um desses eventos mediado por molculas distintas, expressas pelas
clulas T. As molculas de MHC e os peptdeos formam um complexo na
membrana plasmtica das APCs. O receptor que reconhece esse complexo
peptdeo-MHC o TCR (Figura 2), que distribudo clonalmente, ou
seja, os clones de linfcitos que apresentam diferentes especificidades expressam distintos TCRs. Os sinais bioqumicos, que so acionados na clula
T pelo reconhecimento do antgeno, no so transduzidos pelo TCR, mas
por protenas no variveis chamadas CD3 e dzeta (z), que esto ligadas de
forma no covalente ao receptor do antgeno para formar o complexo TCR.
Portanto, nas clulas T, o reconhecimento do antgeno basicamente realizado por dois grupos de molculas: um receptor para o antgeno altamente
varivel, o TCR, e protenas sinalizadoras no variveis (CD3 e cadeia z).
Outras molculas acessrias funcionam como molculas de adeso para estabilizar a ligao das clulas T s APCs, permitindo que o TCR mantenha
ntimo contato com o antgeno durante o tempo suficiente para a transduo
dos sinais necessrios ativao dessas clulas.
As clulas T que expressam o TCR d pertencem a uma linhagem
distinta das clulas T restritas ao MHC. A percentagem das clulas T d
muito varivel nos diferentes tecidos das diferentes espcies, normalmente no
excedendo mais do que 5%. Elas no reconhecem os antgenos peptdeos
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O antgeno (do grego anti,contra e gen, gerar) qualquer substncia solvel, celular ou particulada que pode ser especificamente ligada por
um anticorpo ou por um receptor de antgeno de clula T. Os antgenos
possuem duas propriedades: a da imunogenicidade, que a capacidade
de induzir uma resposta imune especfica, e a da antigenicidade, que a
capacidade de interagir com os linfcitos T ou linfcitos B j sensibilizados.
Assim, todas as substncias imunognicas so tambm antignicas. As molculas que desencadeiam a resposta imune so chamadas de imungenos.
Pequenas substncias qumicas no so capazes de estimular uma resposta
e, portanto, recebem o nome de hapteno. Para ter capacidade de induzir
uma resposta imune, o hapteno ligado a uma macromolcula, que
chamada de carreadora. O complexo hapteno-carreador, ao contrrio do
hapteno livre, pode atuar como um imungeno.
4.1. Determinante antignico
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Quando uma Ig usada como Ag, ela tratada como qualquer outra
protena estranha e faz desencadear uma resposta de Ac. Pode ser produzido
Ac anti-Ig que reconhea aminocidos caractersticos do isotipo do Ac injetado. Tambm possvel gerar Acs que reconhecem diferenas no Ac de
membros da mesma espcie e tal fenmeno se deve variao gentica ou
polimorfismo. Tais variantes allicas so chamadas de alotipos e representam
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Todo organismo multicelular possui algum sistema de defesa que distingue agentes infectoparasitrios e elimina-os do hospedeiro. Mais ainda, os
grandes vertebrados tm um sistema imune mais evoludo que pode discriminar
o que estranho e fazer uma resposta seletiva para o mesmo. A vantagem de
tal imunidade especfica a rpida adaptao do sistema imune aos agentes
patognicos que so mais frequentemente encontrados no meio ambiente local. Esta capacidade conseguida atravs do complexo principal de
histocompatibilidade, cujos produtos desempenham um papel no reconhecimento intercelular e na discriminao entre o prprio e no prprio. A identificao das molculas do complexo principal de histocompatibilidade (MHC)
aconteceu pela investigao da sua funo na resposta imunolgica aos tumores, na rejeio de transplantes de pele e no controle da resposta imune.
7.1. Estrutura das molculas do MHC
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Muitas bactrias importantes nas doenas infecciosas humanas se multiplicam nos espaos extracelulares do organismo, e a maior parte dos
patgenos intracelulares se dissemina de uma clula para outra atravs dos
fludos extracelulares. A resposta imune humoral conduz destruio dos
microrganismos extracelulares e seus produtos, como, por exemplo, as
toxinas; alm de tambm prevenir ou diminuir a disseminao das infeces
intracelulares, atravs da neutralizao desses agentes. Os anticorpos tambm facilitam o reconhecimento de microrganismos por clulas fagocitrias,
permitindo que assim sejam ingeridos e digeridos, como ativam o sistema
complemento, potencializando a opsonizao, recrutando clulas inflamatrias para o local da infeco e lisando certos microrganismos pela formao dos poros em suas membranas (Figura 16).
Figura 16. Alguns mecanismos efetores da resposta mediada por anticorpos
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Contudo, o principal mecanismo contra uma infeco viral estabelecida atravs de uma resposta celular via CD8+ citolticos especficos, que destroem as
clulas infectadas, estimulam a ao de enzimas intracelulares que degradam
genomas virais e secretam citocinas com ao de interferon.
As bactrias extracelulares causam doena de duas maneiras: induzindo
reao inflamatria que resulta na destruio tecidual no local da infeco e
produzindo toxinas, que possuem diversos efeitos patolgicos. Estas podem
ser endotoxinas (componentes da parede celular bacteriana) ou exotoxinas
(ativamente secretadas pelas bactrias). Portanto, as respostas imunes contra
bactrias extracelulares visam eliminar a bactria e o efeito de suas toxinas.
O principal mecanismo de imunidade inata a fagocitose por neutrfilos,
moncitos e macrfagos, mas a resistncia destas bactrias fagocitose e a sua
digesto um determinante na virulncia. A ativao do sistema complemento
na ausncia do anticorpo importante, pois a produo de C3b opsoniza a
bactria e favorece a fagocitose. O MAC lisa diretamente a bactria e os
subprodutos do complemento (fragmentos menores), que participam da resposta inflamatria recrutando e ativando leuccitos. A imunidade humoral especfica a principal resposta protetora contra essas bactrias e consiste do
reconhecimento de antgenos proteicos por clulas CD4+ Th2, apresentados
via MHC de classe II. Os anticorpos especficos, alm de neutralizarem bactrias e suas toxinas, impedindo sua ligao s clulas alvo, ativam o sistema
complemento potencializando suas aes.
Quanto s bactrias que sobrevivem no interior de clulas hospedeiras,
as mais patognicas so aquelas que sobrevivem no interior dos macrfagos,
como as microbactrias. Por serem praticamente inacessveis aos anticorpos, sua
eliminao requer mecanismos diferentes daqueles observados para bactrias
extracelulares. O principal mecanismo de imunidade inata contra essas bactrias
atravs da fagocitose, mas estas podem ativar diretamente ou indiretamente
clulas NK, que promovem uma defesa precoce contra bactrias intracelulares
antes da resposta especfica. A principal resposta especfica contra essas bactrias a resposta celular, com atuao de clulas Th1 (CD4+ e/ou CD8+)
que estimulam os macrfagos a produzirem diversas substncias bactericidas.
Desta maneira, as clulas CD4+ Th1 e CD8+ Th1 atuam em conjunto na
resposta celular contra bactrias intracelulares e o mecanismo exercido por uma
pode complementar o da outra. importante salientar que a ativao de
macrfagos tambm pode causar leso tecidual, manifestada pela reao de
hipersensibilidade tardia (DTH ou HT), assim como as observadas nas infeces virais e em outros agentes infectoparasitrios.
Em termos muito genricos, os anticorpos so mais eficazes contra os
parasitos extracelulares e os CTLs, contra os intracelulares. Em outras palavras, as citocinas produzidas pelas clulas T CD4+ podem ser importantes
na determinao do resultado da infeco, uma vez que as clulas Th1 e
Th2 possuem um perfil de citocinas contrastante e de contrarregulao,
mostrando que o papel das clulas Th1 e Th2 na determinao do resultado
da infeco sugere que as respostas das clulas Th1 levem morte dos
patgenos intracelulares e que as respostas das clulas Th2 eliminem os
patgenos extracelulares. Todavia, isto muito mais uma simplificao didtica do que o quadro real.
O tipo de resposta que conferir maior proteo depende da natureza
e da fase evolutiva do parasito. Por exemplo, o anticorpo por si s, ou
combinado com o complemento, pode danificar alguns parasitos extracelulares,
mas ser sempre melhor quando atuando com uma clula efetora. Diferentes
mecanismos efetores atuaro em uma nica infeco contra os diferentes estgios do ciclo de vida do parasito. Assim, na malria, os anticorpos contra as
formas livres bloqueiam sua capacidade para invadir novas clulas, mas as
respostas mediadas por clulas impedem o desenvolvimento da fase heptica
nos hepatcitos. A imunidade protetora na malria no se correlaciona simplesmente com os nveis de anticorpos e pode at ser induzida na ausncia deles.
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tuberculose e toxoplasmose em pacientes com AIDS, os quais possuem nmeros reduzidos de clulas T CD4+.
Em algumas infeces parasitrias, o sistema imunitrio no consegue
eliminar o parasito, mas reage isolando o organismo com clulas inflamatrias.
O hospedeiro reage ao antgeno localmente, o que estimula a liberao de
citocinas, que por sua vez recrutam as clulas de defesa para o local afetado.
Na esquistossomose, a formao do granuloma outro exemplo da reao do
hospedeiro contra o parasito. Essa reao uma resposta crnica mediada por
clulas aos antgenos solveis liberados pelos ovos do parasito no fgado. Os
macrfagos se acumulam no local e liberam fatores fibrognicos que estimulam
a formao do tecido granulomatoso. Embora essa reao possa ser benfica
para o hospedeiro, no sentido que isola as clulas hepticas das toxinas secretadas
pelos ovos dos helmintos, tambm constitui a maior fonte de dano, provocando alteraes irreversveis no fgado e perda da funo heptica.
Em muitas infeces a distino entre uma resposta mediada por clulas
ou por anticorpo pode ser difcil, dado que ambas atuam em conjunto contra o
parasito. A expulso de alguns nematdeos intestinais ocorre espontaneamente poucas semanas aps a infeco primria. Parece haver dois estgios na
expulso, alcanados por uma combinao de mecanismos T-dependentes e Tindependentes. Clulas T (predominantemente Th2) respondem aos antgenos
do parasito e induzem a produo de anticorpo pelas clulas que sofreram
proliferao. Ocorre proliferao dos mastcitos da mucosa e hiperplasia das
clulas caliciformes secretoras de muco no epitlio intestinal. Os vermes so
danificados por anticorpo e produtos dos mastcitos sensibilizados por IgE,
que desgranulam aps o contato com o antgeno e liberam a histamina que,
por sua vez, aumenta a permeabilidade do epitlio intestinal onde o verme se
encontra. Esses processos no so suficientes para eliminar os vermes; portanto, molculas inflamatrias inespecficas, secretadas pelos macrfagos, incluindo TNF e IL-1, contribuem para a proliferao das clulas caliciformes e
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A IgE das infeces helmnticas pode promover desde efeitos brandos reaes severas no hospedeiro, por meio da liberao de mediadores pelos mastcitos, caracterizados por pruridos, eritemas, dificuldades
respiratrias ou mesmo choque anafiltico.
10. Aplicao e importncia do diagnstico
imunosorolgico das doenas infecto parasitrias
O diagnstico sorolgico das doenas transmissveis consiste na investigao da infeco no indivduo ou na populao, mediante a deteco,
quantificao e caracterizao de variveis (imunoglobulinas, antgenos,
citocinas) presentes no plasma/soro sanguneo ou em outros materiais biolgicos, tais como amostra fecal, urina, saliva, escarro ou tecidos.
O desenvolvimento de novas informaes cientficas est relacionado
com os progressos na metodologia pelo desenvolvimento de novos procedimentos, novas tcnicas ou instrumentos. Os primeiros mtodos de identificao e medida de imunoglobulinas foram desenvolvidos por Von Behring
& Kitasato, influenciados pelos experimentos de Pasteur sobre a Teoria dos
Germes, ao encontrarem no soro de animais imunizados contra difteria e
ttano, substncias neutralizantes e especficas que denominaram anticorpos.
As pesquisas desenvolvidas por vrios cientistas se voltaram imediatamente
para a caracterizao bioqumica dessas substncias neutralizantes e o desenvolvimento de tcnicas capazes de induzir a formao de elevadas concentraes de anticorpos em animais de laboratrio. Este foi o perodo
fundador do diagnstico sorolgico.
Neste tpico, as tcnicas sorolgicas sero abordadas, principalmente, sob o ponto de vista dos profissionais que realizam o diagnstico
sorolgico das doenas infectoparasitrias.
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2-10 horas
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Os testes sorolgicos tambm so utilizados para selecionar doadores e receptores de sangue e de rgos, no s no contexto de quem
desempenha a determinao de grupos sanguneos ou antgenos de
histocompatibilidade, como tambm para quem se compromete na deteco
e preveno de doenas infecciosas transmissveis por meio da transfuso
sangunea e hemoderivados, como tecidos e rgos transplantados. No
Brasil, o Ministrio da Sade estabeleceu estratgias de controle apoiadas
na triagem clnica, epidemiolgica e sorolgica para preveno das doenas
transfusionais, que incluem a doena de Chagas, a sfilis, as hepatites B e
C, a sndrome de imunodeficincia adquirida (SIDA/AIDS), o vrus da
leucemia T do adulto (HTLV-I e II), em todo o territrio nacional, e a
malria, em regies endmicas. As condies que constituem contraindicao
absoluta para doao de rgos, relacionadas s doenas infecciosas, alm
das empregadas na preveno de doenas transmissveis por meio da transfu-
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Nesta tcnica, o anticorpo especfico para determinado antgeno incorporado ao gel e distribudo sobre uma lmina de vidro ou placa de Petri.
Em posies adequadas, so feitos orifcios onde se colocam solues antignicas
a serem testadas, bem como solues padro, com pelo menos trs concentraes conhecidas do antgeno. A partir desse momento, ocorre difuso radial
do antgeno, resultando na opacificao em forma circular (halo ou anel) em
torno do orifcio. O dimetro deste anel de precipitao proporcional
concentrao do antgeno e, deste modo, a quantidade deste pode ser determinada por comparao com os dimetros obtidos por padres conhecidos
por meio de uma curva de referncia.
11.6. Reao de imunoeletroforese (mtodo de
GRABAR e WILLIAMS)
A imunoeletroforese uma tcnica de imunoprecipitao em meio gelatinoso que combina a eletroforese com a imunodifuso radial. A tcnica
realizada em duas etapas: na primeira, os antgenos so fracionados por
eletroforese, enquanto na segunda etapa, ocorre a difuso dos antgenos
contra o antissoro especfico, presente nas canaletas abertas no gel. A reao
antgeno-anticorpo nesse sistema evidenciada pela formao de linhas ou
bandas de precipitao no gel, correspondendo cada banda a um complexo
imune especfico.
11.7. Reao de imunoeletroforese unidimensional simples
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A fixao do complemento ocorre aps a interao antgenoanticorpo. O consumo de complemento in vitro pode ser utilizado como
um teste para detectar e medir concentraes de anticorpos e antgenos. A
reao se manifesta em trs momentos: no primeiro, o antgeno se combina
com o anticorpo. No segundo, se os imunocomplexos estiverem presentes, os componentes do sistema complemento ligam-se, sendo assim consumidos. Finalmente, adiciona-se o sistema revelador que consiste de hemcias
de carneiro sensibilizadas com hemolisina (anticorpo antieritrocitrio). Aps
um perodo de incubao, observa-se se ocorreu ou no lise das hemcias
sensibilizadas e a atividade hemoltica pode ento ser medida, a fim de se
determinar a quantidade do imunorreagente pesquisado (Figura 26).
Ao se pesquisar a presena de anticorpos em fludos biolgicos, a
ausncia de lise do sistema hemoltico indica a sua presena na amostra,
pois como os principais componentes do sistema complemento foram
consumidos na lise do imunocomplexo inicial, no estaro disponveis
para a lise do sistema hemoltico e a reao ser positiva.
Tanto os anticorpos como os antgenos devem ser destitudos de
atividade anti-complementar para no ativar o complemento, independentemente do imunocomplexo. O complemento obtido de soro de
cobaia, colhido e estocado de maneira apropriada para preservar a atividade hemoltica.
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do identificar estruturas fluorescentes entre vrias outras estruturas presentes em cortes de tecidos ou esfregaos.
A tcnica de imunofluorescncia representou um grande avano no
imunodiagnstico, principalmente no que diz respeito sorologia. At a elaborao deste mtodo, as reaes ocorridas entre antgeno e anticorpo s podiam
ser evidenciadas atravs de reaes secundrias, como a precipitao ou a
aglutinao, que geram fenmenos decorrentes da formao de imunocomplexos
em grande quantidade ou utilizando partculas relativamente grandes. Uma das
vantagens da imunofluorescncia foi o fato de ter maior sensibilidade que os
mtodos existentes na ocasio, permitindo distinguir uma nica clula bacteriana
corada por fluorescena entre 107 bactrias no coradas.
S foi possvel o desenvolvimento da tcnica de imunofluorescncia
devido a caractersticas especiais que algumas substncias possuem de armazenar energia luminosa e liber-la mais tarde. A este fenmeno foi dado o nome
de luminescncia. Se a substncia capaz de armazenar e emitir luminescncia
por perodos mais longos, chama-se ento fosforescncia; se o perodo de
emisso da luminosidade mais curto, chama-se a isso fluorescncia. Entre os
corantes fluorescentes mais utilizados destacam-se a rodamina (isotiocianato de
tetrametil rodamina TRICT) e a fluorescena (isotiocianato de fluorescena
FITC), esta ltima supera a primeira por possuir maior eficincia quntica, ou
seja, maior capacidade de absoro e de emisso de luminosidade. Porm,
com a modernizao dos equipamentos, no s de microscpios como tambm de citmetros, foram feitas modificaes para aumentar a eficincia quntica
dos demais corantes para utiliz-los em testes que buscam mais de um marcador
em superfcies celulares.
A intensidade da luz emitida por este corante sofre grande interferncia
do meio em que ele se encontra. O pH um dos fatores que mais interfere,
pois h um mnimo de fluorescncia em pH cido e mxima fluorescncia em
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Os estudos preliminares que tornaram passveis de execuo os mtodos imunoenzimticos foram realizados, simultaneamente, em 1966, por Nakane
e Pierce, nos Estados Unidos, e por Avrameas e Uriel, na Frana, com a
utilizao da peroxidase (horseradish peroxidase - HRP) para a confeco de
conjugados proteicos, tendo como precursor o processo de marcao de
protenas com corantes fluorescentes, criado por Coons, em 1941.
Em 1971, dois grupos de pesquisadores, um holands, formado por
Van Weemen e Schurs, e um sueco, formado por Engvall e Perlmann, idealizaram e introduziram, pioneiramente, o mtodo imunoenzimtico para deteco
e quantificao de antgenos ou anticorpos especficos. Estes grupos observaram que protenas poderiam ser imobilizadas em uma superfcie slida de
poliestireno e a reao imune, ser revelada pela formao de produtos coloridos da reao enzima-substrato, na presena de um componente doador de
eltrons, denominado cromgeno.
O mtodo ELISA, quando efetuado em timas condies (enzimas
altamente ativas, antgenos puros, substratos de alta qualidade, anticorpo e
conjugado), apresenta sensibilidade semelhante ao radioimunoensaio, com a
vantagem de no ser necessrio utilizar material radioativo. Entretanto, esse
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11.19. Imuno-histoqumica
especfico para uma determinada protena e para o anticorpo secundrio, uma anti-imunoglobulina marcada que reconhece o
anticorpo primrio. O corte de tecido incubado com o anticorpo
especfico para determinada protena. Depois de lavado, incubado com o imunoconjugado, que se vai ligar ao anticorpo primrio.
Em seguida, h a observao por microscopia adequada, dependendo do marcador utilizado.
A tcnica de IHQ pode tambm estar associada a um processo
enzimtico de colorao, como ao complexo avidina-biotina-enzimacromgeno (Figura 32). O complexo formado pela ligao de uma
molcula de estreptavidina com vrias de biotina associadas a uma enzima
(peroxidase ou fosfatase alcalina), que tem como funo a converso de
um cromgeno incolor em um produto final colorido. O cromgeno mais
utilizado o DAB (diaminobenzidina), que confere cor marrom-ferruginosa
ao precipitado permanente.
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clorofila), DNA, RNA, anlise e classificao de cromossomas, protenas, antgenos superfcie celular (marcadores CD) e antgenos
intracelulares, entre outras molculas.
A hematologia foi uma das primeiras modalidades biomdicas a se
beneficiar das aplicaes clnicas da citometria de fluxo. Algumas destas
aplicaes so utilizadas regularmente para o diagnstico ou o acompanhamento teraputico de diferentes afeces. Em cancerologia, a deteco da
clula tumoral a aplicao mais desenvolvida. Esta deteco repousa
essencialmente sobre a medio de contedo anormal de DNA no ncleo
da clula tumoral e da expresso proteica dos antgenos tumorais.
Atualmente, a imunologia, a biologia molecular e as anlises clnicas
so as reas da cincia que mais utilizam a citometria de fluxo para a deteco
ou identificao de subtipos de clulas implicadas na imunidade. A contagem
de linfcitos T consiste em classificar e quantificar as subpopulaes desses
linfcitos, pela pesquisa imunofenotpica dos CDs, por meio de conjugados
fluorescentes especficos. Dependendo dos fluorocromos que estaro ligados aos anticorpos monoclonais, as fluorescncias emitidas por eles, quando
excitados pelo laser , tero comprimentos de ondas diferentes e,
consequentemente, cores diferentes. H diversos tipos de fluorocromos,
como o isotiocianato de fluorescena (FITC), a ficoeritrina (PE), a protena
Clorofil peridinina (PerCP) e o Texas Red.
Os sinais eletrnicos so usados para analisar as clulas de acordo
com seus marcadores de superfcie, e esta anlise interpretada atravs de
um grfico de separao dividido em janelas (gates) (Figura 34). O citmetro
fornece o nmero absoluto de linfcitos, por exemplo, linfcitos T CD3+/
CD4+ e de linfcitos T CD3+/CD8+, porque em cada tubo de amostra existe um nmero conhecido de partculas de referncia conjugadas com
fluorocromos (valor padro).
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Para a adequada constituio, necessrio a incluso de amostras provenientes de pessoas infectadas e de pessoas no infectadas. As amostras de
pessoas infectadas, chamadas controles positivos, devem ser pertencentes
s reas endmicas (se a doena possuir tal caracterstica) e vir com diagnstico conclusivo que demonstre o parasito ou por provas que deem tais
indicaes, como, por exemplo, os testes intradrmicos de hipersensibilidade
celular, reao de hibridizao ou a reao polimersica em cadeia ( Polymerase
Chain Reaction - PCR). As amostras de indivduos no infectados, considerados normais e chamados de controles negativos, so selecionadas
mediante a apresentao de resultados negativos obtidos com as mesmas
provas utilizadas para seleo das amostras positivas e, se possvel for,
provenientes de reas no endmicas da modalidade estudada. Se houver
a incluso de soros provenientes de indivduos com outras doenas, para a
verificao de respostas cruzadas, as mesmas provas diagnsticas de certeza
devem ser realizadas. Todo banco de amostras necessita da aprovao de
comisso de tica em pesquisa envolvendo seres humanos, bem como da
aprovao de comisso de tica para uso de animais (CEUA), quando
envolve amostras no humanas.
12.2. Avaliao dos mtodos sorolgicos
Figura 35. Distribuio de frequncias dos ttulos sorolgicos de duas populaes hipotticas, uma normal A e outra infectada B, encontradas com um teste
sorolgico hipoteticamente ideal
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INFECO
PRESENTE
AUSENTE
POSITIVO
NEGATIVO
TOTAL
a + c (P)
b+d
TOTAL
a+b
c+d
n
Apesar de testes sorolgicos produzirem muitos resultados verdadeiros, alguns resultados falsos, como j mencionado, podem ser gerados,
sejam eles positivos ou negativos; e, por conseguinte, comum dizer que
os testes sorolgicos so presuntivos, ou seja, de valor probabilstico.
Estes testes, obrigatoriamente, devem ser avaliados para definir parmetros
importantes quanto s suas qualidades fixas (sensibilidade, especificidade e
acurcia), uma vez que estes valores independem da prevalncia da infeco estudada na populao.
Um teste de triagem sorolgica ideal deve ser capaz de identificar
todos os indivduos com a condio estudada e de excluir todos os indivduos que no apresentem esta condio. A probabilidade do teste em
identificar corretamente, em uma populao, os indivduos que apresentem
a infeco, denomina-se sensibilidade (S) e pode, tambm, ser conceituada como a capacidade de um teste sorolgico proporcionar resultados
positivos nos indivduos infectados ou, ainda, como a capacidade do mtodo sorolgico em detectar quantidades mnimas do material desejado.
Calcula-se a sensibilidade com a seguinte relao:
Sensibilidade = a : (a + c)
De acordo com os dados do quadro 3
Sensibilidade = 300 : 400 = 0,75 ou 75%
Os resultados podem ser apresentados em uma escala de 0 a 1, mas
normalmente so expressos em porcentagem.
A capacidade do teste para excluir aqueles que no so afetados
chamada especificidade (E), que tambm pode ser conceituada como a
qualidade que um teste apresenta em distinguir molculas diferentes, porm,
com elevado grau de homologia. Aproveitando os dados do Quadro 3, a
especificidade calcula-se por:
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Quadro 3 Resultados sorolgicos hipotticos encontrados em duas populaes de indivduos infectados e no infectados
INDIVIDUOS
TESTE
INFECO
PRESENTE
AUSENTE
TOTAL
60
POSITIVO
300 a
NEGATIVO
100 c
540 d
360 a + b
640 c + d
TOTAL
400 a + c (P)
600
1000 n
b+d
O coeficiente de prevalncia (P) pode ser conceituado como a porcentagem de indivduos infectados, parasitologicamente comprovados em uma
populao. Esse conceito difere da soroprevalncia, (SP) que considera a
porcentagem de indivduos soropositivos na populao estudada.
Prevalncia = (a + c) : n
Soroprevalncia = (a + b) : n
Imunologia | 115
980
990
1970
9800
900
10700
20
98010
98030
200
89100
89300
1000
99000
90000
100000
S = 98%
SP = 99%
100000 10000
P = 10%
S = 98%
SP = 99%
sensibilidade = 99%
Prevalncia %
sensibilidade %
70 80 90 95 99
especificidade 99%
70 80 90 95 99
0,5
1,0
5,0
10,0
20,0
2 2 5 9 33
3 5 9 17 50
15 21 34 51 84
27 35 52 69 92
45 55 71 83 96
26
41
79
89
95
29
45
81
90
95
31
48
83
91
96
22
49
83
91
96
33
50
84
92
96
Imunologia | 117
PRESENTE
AUSENTE
POSITIVO
NEGATIVO
TOTAL
a + c (p2)
b + d (q2)
TOTAL
a + b (p1)
c + d (q1)
a+b+c+d
Copositividade = a : (a + c)
Conegatividade = d : (b + d)
Concordncia bruta= (a + d) : ( a + b + c +d)
Kappa = [2 (ad + bc) : (p1q2 + p2q1)]
Pode-se utilizar o seguinte critrio para conceituar os resultados
do controle de qualidade: valores 40,0% so considerados pobres, de
40,1 at 79,9% regulares, valores 80,0 a 89,9% so considerados bons
e 90% so considerados excelentes.
Resumo do captulo
Imunologia | 119
Imunologia | 121
Imunologia | 123
Bibliografia consultada
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