FCVA/ UNESP JABOTICABAL

FUNDAMENTOS DE ESPECTROSCOPIA
MOLECULAR UV-VISVEL

Profa. Dra. Luciana Maria Saran

1. Introduo

Espectroscopia qualquer processo que utiliza a luz

para medir as concentraes qumicas. Baseia-se na
anlise da radiao eletromagntica emitida ou absorvida
pelas substncias.

Espectroscopia UV-Visvel: baseia-se em medidas de

absoro da radiao eletromagntica, nas regies visvel
e ultravioleta do espectro.

Mede-se a quantidade de luz absorvida pela amostra e

relaciona-se a mesma com a concentrao do analito.
2. Radiao Eletromagntica

Consiste em campos eltrico e magntico oscilando, que

atravessam o espao vazio a 3,00x108 m/s.

Figura 1: Radiao eletromagntica.

2. Radiao Eletromagntica

composta por: raios X e , radiao ultravioleta (UV),

radiao visvel, infravermelho, microondas e ondas de
rdio.

Propaga-se como uma onda.

Grandezas importantes relacionadas a uma onda:

- Freqncia, ;
- Comprimento de onda, ;
- Amplitude, A.
3. Caractersticas de uma Onda

a) Freqncia ( ): corresponde ao nmero de ciclos de onda

(cristas ou vales sucessivos) que passam em um dado
ponto por unidade de tempo. Unidade: hertz, s-1 (1 Hz = 1
ciclo por segundo).

b) Comprimento de onda ( ): a distncia entre cristas

sucessivas (ou vales sucessivos). Pode ser dado em
metros (m), em nanmetros (nm) ou em qualquer unidade
de comprimento que seja conveniente.

c) Amplitude (A): corresponde a altura de uma crista (ou a

profundidade de um vale).
 (a) Comprimento de onda, ,
longo e baixa freqncia, .

(b) Comprimento de onda, ,

curto e alta freqncia, .

(c) Mesmo comprimento de onda

e mesma freqncia do que
em (b), mas baixa amplitude.
Figura 2: Ondas eletromagnticas.
4. Relaes entre Energia (E), Frequncia ( ) e
Comprimento de Onda ( )

E = h. em que, h = 6,626x10-34 J.s (constante de Planck)

. =c em que, c = 2,998x108 m/s (velocidade da luz no

vcuo)

E = h.c/

Destas equaes conclui-se que:

- Energia Alta freqncia, , alta e pequeno;

- Energia Baixa freqncia baixa e grande.

 Segmento ampliado
do Espectro Visvel

Figura 3: Espectro eletromagntico.

Radiao Ultravioleta: a radiao de freqncia mais
alta do que a da luz violeta. Seu comprimento de onda
inferior a 400 nm.

Radiao Infravermelha: a radiao que conhecemos

como calor, tem uma freqncia mais baixa e um
comprimento de onda maior do que a luz vermelha. Seu
comprimento de onda maior do que 800 nm.

Radiao Visvel: aquela que os nossos olhos

enxergam, ou seja, corresponde a radiao
eletromagntica com comprimentos de onda no intervalo
de 400 800 nm.
Figura 4: Decomposio da luz branca (policromtica) nos seus
componentes monocromticos.
4. Colorimetria

A percepo visual da cor depende da absoro seletiva

de certos comprimentos de onda da luz incidente pelo
objeto colorido.

Os demais comprimentos de onda so refletidos ou

transmitidos de acordo com a natureza do objeto e so
percebidos pelo olho como a cor do objeto.

Objeto branco: reflete igualmente todos os comprimentos

de onda.

Objeto preto: reflete pouca luz de qualquer comprimento

de onda.
4. Colorimetria

Se a luz vermelha for absorvida da luz branca, ento a luz

transmitida ou refletida ser verde.

Entretanto, se a luz verde for removida, a luz que

aparecer ser vermelha.

As cores vermelho e verde so cores complementares,

ou seja, cada uma a cor que permanece depois que a
outra removida.
 Neste crculo de
cores, as cores
complementares
entre si esto
localizadas em
posies opostas.

Figura 5: Roda de cores.

Tabela 1: Cores da Luz Visvel.
Comprimento de Onda de Cor Cor Observada
Mxima Absoro (nm) Absorvida
380 420 Violeta Verde-amarelo
420 440 Violeta-azul Amarelo
440 470 Azul Laranja
470 500 Azul-verde Vermelho
500 520 Verde Roxo
520 550 Amarelo- Violeta
verde
550 580 Amarelo Violeta-azul
580 620 Laranja Azul
620 680 Vermelho Azul-verde
680 780 Roxo Verde
 Exerccio 1: O on Cr(II) em gua, [Cr(H2O)6]2+, absorve
luz com comprimento de onda de 700 nm. Qual a cor da
soluo? Justifique.
4. Colorimetria

A base de uma anlise colorimtrica a variao de

cor da soluo em funo da concentrao do analito.

A cor da soluo , usualmente devida, formao de

de um composto colorido pela adio de um reagente
apropriado ou inerente ao constituinte que se deseja
analisar.

A intensidade da cor comparada com a intensidade

da cor que se obtm com o mesmo procedimento pelo
tratamento de uma amostra cuja quantidade e concen-
trao so conhecidas.
4. Colorimetria

Figura 6: Comparao de cor.

5. Absoro de Luz
A absoro de radiao UV-Visvel se deve ao fato das
molculas apresentarem eltrons que podem ser
promovidos a nveis de energia mais elevados mediante
a absoro de energia.

Em alguns casos a energia necessria proporcionada

pela radiao com comprimentos de onda no visvel e o
espectro de absoro estar na regio visvel.

Em outros casos, necessria energia maior, associada

radiao ultravioleta.
Figura 7: Espectro eletromagntico, mostrando os processos moleculares
que ocorrem quando a luz absorvida em cada regio.
7. Espectros de Absoro
Um espectro de absoro
um grfico mostrando
como A (ou ) varia com o
comprimento de onda, .

Figura 8: Espectros de absoro

de alguns compostos orgnicos.
7. Espectros de Absoro

Figura 9: (a) Espectro visvel projetado da luz branca, dicromato de potssio,

azul de bromofenol e fenoltalena (de cima para baixo). (b) Espectro de absoro
visvel dos mesmos compostos registrados com um espectrofotmetro.
7. Espectros de Absoro
Possibilitam:

Identificar substncias: as curvas de absoro so uma

espcie de impresso digital das substncias e caracte-
rizam a presena desses compostos.

Identificar grupamentos qumicos.

Indicar os comprimentos de onda para a dosagem das

substncias.
Exerccio 2: Uma soluo padro de determinado composto
orgnico exibe o espectro de absoro a seguir.
a) Considere a anlise quantitativa deste composto, por
espectrofotometria e especifique em que comprimento
de onda voc realizaria tal anlise. Justifique sua
resposta.
b) Especifique a cor predominante da luz absorvida e a cor
da luz transmitida pela soluo em questo. Justifique
sua resposta. 1,0

0,9

0,8

0,7

0,6
Absorvncia

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0,0
400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620
Comprimento de Onda (nm)
8. Lei de Beer-Lambert

P0 P
Seletor de Detector
Fonte de Luz Amostra
(Monocromador) de Luz

Figura 10: Diagrama esquemtico de um experimento espectrofotomtrico.

No diagrama acima:

- P0: radiao incidente;

- P: radiao transmitida;
- b ou l: passo ptico ou caminho ptico.
8. Lei de Beer-Lambert

Transmitncia, T: frao da radiao incidente que

transmitida pela amostra.

T = P/P0 EQ. 1

A transmitncia percentual ou porcentagem de

transmitncia simplesmente 100T.

Absorvncia ou Absorbncia (A):

A = - log T EQ. 2

A = a.l.c EQ. 3
8. Lei de Beer-Lambert

Exerccio 3: Qual o valor da absorbncia correspondente

T = 45%? Se uma soluo 0,01 mol/L exibe T = 45%,
qual ser a porcentagem de transmitncia para uma
soluo, do mesmo composto, de concentrao igual a
0,02 mol/L.

Resp.: A = 0,346; %T = 20%

8. Lei de Beer-Lambert

A Eq. 3, conhecida como Lei de Beer-Lambert, a

equao fundamental da espectrofotometria e mostra
que a absorvncia diretamente proporcional a
concentrao da espcie que absorve radiao de um
dado .

A = a.l.c EQ. 3

Na EQ. 3:
A: absorbncia ou absorvncia;
a: absortividade;
l: caminho ptico ou passo ptico;
c: concentrao da espcie absorvente ou
analito.
8. Lei de Beer-Lambert
Na figura abaixo, a absorbncia, como evidenciado
pela cor, proporcional concentrao de ferro.

Figura 11: Bales volumtricos contendo [Fe(fenatrolina)3]2+ com

concentraes de Fe na faixa entre 1 mg/L (esquerda) at 10 mg/L
(direita).
8. Lei de Beer-Lambert

A absortividade, a:

- Depende do comprimento de onda e da natureza do

material absorvente.
- Pode ser expressa, por exemplo, em cm-1 g-1 L ou em
cm-1 mol-1 L, dependendo das unidades da concentrao,
c.
- expressa em cm-1 mol-1 L, quando a concentrao,c,
estiver em mol/L. Neste caso, a absortividade recebe o
smbolo e denominada absortividade molar ou
coeficiente de absoro molar ou ainda, coeficiente
de extino molar (na literatura mais antiga).
8. Lei de Beer-Lambert
Exerccio 4: 15 mg de um composto, que apresenta
massa molar = 384,63 g/mol, foram dissolvidas em gua
preparando-se 5,00 mL de soluo. 1,00 mL dessa
soluo foi diludo 10,0 mL.
a) Qual a concentrao da soluo preparada inicialmen-
te?
b) Qual a concentrao da soluo diluda do composto?
c) Considerando que a soluo diluda foi transferida para
uma cubeta de 0,5 cm de caminho tico e que absorbn-
cia desta soluo foi medida em = 495 nm, sendo
A = 0,634, calcule a absortividade molar, , do composto
no comprimento de onda em questo.

Resp.: 7,80x10-3 mol/L; 7,80x10-4 mol/L ;1626 cm-1 mol-1 L

Em espectrofotometria uv-visvel, l geralmente igual
a 1,00 cm.

Um grfico de A versus c fornece uma reta. A inclinao

desta reta corresponde a absortividade do analito, num
dado . Esse grfico denominado curva analtica ou
curva de calibrao.

Curva Analtica ou
Curva de Calibrao
Quanto maior a absortividade
A
molar, , maior a absorvncia.

)
Canalito (mol/L)
 Exerccio 5:
Fe(III) pode ser determinado espectrofotometricamente por reao com SCN-, para produzir um
complexo vermelho, [Fe(SCN)6]3-, que absorve fortemente em 480 nm. Um litro de soluo padro
estoque de Fe(III) foi preparado a partir de 0,8640 g de sulfato frrico amoniacal, FeNH4(SO4)2.12H2O
(massa molar = 482,19 g mol-1). Trs solues padres foram preparadas por diluio da soluo
estoque de Fe(III), transferindo-se alquotas de 2,5, 3,5 e 4,5 mL de tal soluo para bales volumtricos
de 100 mL e completando-se o volume de cada um, com gua destilada. Uma amostra slida foi transferida
para um balo volumtrico de 100 mL e dissolvida com gua destilada, preparando-se 100 mL de uma
soluo da amostra. Considerando os valores de absorbncia (A) a seguir e l = 1 cm:

a) Construa a curva analtica ou curva de calibrao.

b) Calcule a absortividade molar () do composto, no comprimento de onda em questo;
c) Calcule quantos miligramas de Fe(III) esto presentes na amostra.

Soluo A CFe/ mol L-

1

Padro 1 0,342 4,480x10-5

Padro 2 0,479 6,272x10-5
Padro 3 0,616 8,064x10-5
Amostra 0,463 ?
 Espcie absorvente: [Fe(SCN)6]3-

max 480 nm

Figura 12: Espectros da espcie [Fe(SCN)6]3- , em diferentes

concentraes.
 0,65

0,60

0,55
Absorvncia

0,50

0,45
Y = a + b.X
0,40
Y = -0,0005 + 7645X
R=1

0,35

0,30
-5 -5 -5 -5 -5 -5 -5 -5 -5 -5
4,0x10 4,5x10 5,0x10 5,5x10 6,0x10 6,5x10 7,0x10 7,5x10 8,0x10 8,5x10

CFe (mol/L)
3+

Figura 13: Curva analtica ou curva de calibrao (item a).

Exerccio 5:

b) = 7645 cm-1 mol-1 L

c) Aamostra = 0,463

Eq. da reta: Y = - 0,0005 + 7645X

0,463 = - 0,0005 + 7645X
X = 6,05x10-5 mol L-1
Em 100 mL da soluo da amostra 6,05x10-6 mol de
Fe3+ = 0,339 mg
8. Lei de Beer-Lambert (Desvios)

A lei de Beer descreve o comportamento da absoro

apenas para solues diludas.

Em concentraes acima de 0,01 mol L-1, haver

desvios da relao linear entre a absorvncia e a
concentrao.

Ocorrem desvios quando o soluto colorido ioniza-se,

dissocia-se ou se associa em soluo.

Altas concentraes de eletrlitos leva a um afasta-

mento da lei de Beer.

Ocorrem discrepncias quando a luz usada no

monocromtica.
9. Instrumentao

O instrumento necessrio para uma anlise

espectrofomtrica o Espectrofotmetro.

As partes essenciais de um espectrofotmetro so:

- Fonte de energia;
- Monocromador;
- Clulas (ou cubetas) de vidro, ou de quartzo, para o
branco e para a amostra;
- Detector.
 9. Funcionamento do Espectrofotmetro

A luz proveniente de uma fonte contnua passa por um

monocromador, que seleciona uma estreita faixa de
comprimentos de onda do feixe incidente. Essa luz
monocromtica passa pela amostra de comprimento
b, e a energia radiante da luz emergente medida
(vide diagrama abaixo).

Seletor de P0 P Detector
Fonte de Luz Amostra
(Monocromador) de Luz

Figura 14: Diagrama esquemtico de um experimento espectrofotomtrico.

Espectrofotmetro para a Regio Visvel

Figura 15: Espectrofotmetro modelo Spectronic 20.

Espectrofotmetro de feixe simples.
 Espectrofotmetro para as Regies UV-Visvel

Figura 16: Espectrofotmetro Varian Cary 3E Ultravioleta-Visvel.

Espectrofotmetro de Feixe Duplo.
 Fontes de Radiao

Lmpada de Deutrio Lmpada de Tungstnio

( : 160 380 nm) ( : 350 2200 nm)
Compartimento para a Amostra

Clulas ou Cubetas
10. Precaues
Para uma anlise espectrofotomtrica, geralmente
escolhe-se o comprimento de mxima absorvncia ( max).
Justificativa: a sensibilidade da anlise maior na
absorvncia mxima.

desejvel ajustar a concentrao da amostra de forma

que a sua absorvncia fique dentro seguinte faixa:
0,4 A 0,9, pois a maioria dos espectrofotmetros
exibe o mnimo de incerteza dentro desse intervalo.

O local da amostra deve estar vedado luz.

Todos os recipientes devem ser cobertos para impedir

a entrada de poeira, pois o p dispersa a luz.
10. Precaues

O manuseio das cubetas deve ser feito com um tecido,

para impedir que as pontas dos dedos entrem em contato
com as faces.

Mantenha os dedos longe das faces limpas da cubeta,

pois as impresses digitais dispersam e absorvem a luz.

Para leituras precisas, importante posicionar a cubeta

no espectrofotmetro da maneira mais reprodutvel
possvel. Justificativa: uma variao aleatria na
absorvncia surge de pequenas diferenas da posio
da cubeta no seu suporte.