Western Blot

Profa. Dra. Charllyany Sabino Custódio

Meus artigos publicados usando Western Blot em 2017
Meus artigos publicados usando Western Blot em 2018
… e continuo usando o blot nos experimentos do meu pós-doutorado
★ Western blot é uma técnica utilizada para DETECTAR PROTEÍNAS
de uma determinada amostra e serve como TESTE
CONFIRMATÓRIO dos resultados obtidos em ensaios
imunoenzimáticos na pesquisa de doenças de origem viral,
bacteriana, parasitária...;

★ Padrão ouro: teste confirmatório do HIV

Vantagem: Confiabilidade - Alta sensibilidade e especificidade

Desvantagem: Teste caro, protocolo demorado

DNA

RNA

Anticorpos
1. PREPARO DA AMOSTRA/EXTRAÇÃO
DAS PROTEÍNAS TOTAIS
2. FRACIONAMENTO/ ELETROFORESE EM SDS-PAGE
2. FRACIONAMENTO/ ELETROFORESE EM
SDS-PAGE
3. TRANSFERÊNCIA das proteínas do gel para a membrana

Membrana
Membrana
3. TRANSFERÊNCIA das proteínas do gel para a membrana
4. BLOQUEIO de ligações inespecíficas
5. DETECÇÃO
 5. DETECÇÃO

Ligações ESPECÍFICAS anticorpo primário e proteínas da amostra do paciente

5. DETECÇÃO

Por quimioluminescência
5. DETECÇÃO

Por fluorescência
6. ANÁLISE
Veja a execução da técnica de Western Blot

Disponível em: https://www.youtube.com/watch?v=QYvJTBktn0o

Na prática:
Não esqueçam!
Vamos racionar
Aplicando o BLOT
1.
Leia em sua apostila e vamos
resolver esse caso clínico
Uma catástrofe natural ocorreu numa cidade,
atingindo uma maternidade e fazendo com que
alguns bebês desaparecessem. Um dos
recém-nascidos foi encontrado sem identificação,
dias depois. Cinco casais alegavam serem os pais
dela. Para esclarecer a dúvida, foi realizado o teste
de “paternidade”. Baseado na figura abaixo,
responda:

Figura 1: membrana de nitrocelulose contendo

fragmentos de DNA dos supostos pais e da criança.
Fonte: adaptado dehttp://tecnologiasrelacionadasaodna.blogspot.com.br

A) Qual a técnica empregada para obtenção das

bandas da imagem?
B) Qual dos casais corresponde aos pais do bebê
desaparecido?
 2. (CESPEUnB-2010). Considerando, ainda, as
metodologias de biologia molecular, assinale a
opção correta.

A) A técnica de Northern blotting é utilizada para

analisar DNA por meio de uma sonda.
B) O método Southern blotting é utilizado para a
análise de mRNAs transferido de um gel para um
suporte específico.
C) O termo clonagem de DNA se refere ao ato de
produzir várias cópias exatas de uma molécula,

QUESTÃO 2
não sendo utilizado na amplificação de
sequências.
D) Ao se cortar o DNA genômico aleatoriamente,
Acompanhe pela sua apostila serão observados genes em todos os fragmentos.
E) A endonuclease de restrição, uma das
principais ferramentas da tecnologia do DNA
recombinante, corta a molécula de DNA em
sequências específicas.
 1. (FIOCRUZ, 2010) Num estudo para verificar se a espécie “A"

QUESTÃO 3
de bactéria apresenta e expressa um gene similar ao gene tox da
espécie “B", seria correto afirmar que:

A) A obtenção de um produto de PCR amplificado a partir de

Acompanhe pela sua apostila iniciadores para tox da espécie “B" comprova a presença de um
gene tox sendo expresso na espécie “A"

B) Uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada

empregando amostras de DNA total da espécie “A", indicaria que de
fato este gene é expresso na espécie “A".

C) Uma hibridação tipo Northern-blot com sonda tox marcada

empregando amostras de RNA total da espécie “A", indicaria que de
fato este gene é traduzido na espécie “A".

D) Uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada com

DNA total, indicaria que um DNA similar a este gene está presente
em “A" sem informação sobre transcrição ou tradução do mesmo.

Uma hibridação tipo Western-blot com sonda tox marcada

empregando amostras de DNA total da espécie “A", indicaria que
um DNA similar a este gene está presente no genoma da espécie
“A".
Bibliografia básica
Muito Obrigada pela
atenção!
charllyany@hotmail.com