UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIA

PROGRAMA DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

PRÁCTICA N° 3
DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS POR COLORIMETRÍA
Andrea Lizeth Zuñiga Parra
Cód, 117004043

OBJETIVOS
 Conocer las bases de la colorimetría o espectroscopia visible.
 Aplicar la técnica a la determinación de la glucosa en una muestra problema.
 Adquirir destreza en la aplicación de la espectroscopia.
 Medir la concentración de la glucosa en la muestra problema.

RESULTADOS

T=10− ¿ ¿
||
%T=T*100
Longitud de onda %T T Absorbancia
550 14,8 0,148 0,83
570 78,5 0,785 0,105
590 71,9 0,719 0,143
610 65,9 0,659 0,181
625 63,5 0,635 0,197
630 63,1 0,631 0,200
635 63,0 0,630 0,201
650 65,6 0,656 0,183
670 76,9 0,769 0,114
690 89,5 0,895 0,048
710 95,9 0,959 0,018

Tabla 1. Longitud de onda - absorbancia

CONCENTRACIONES

Tubo 1 Tubo 1’
[
[ ]1=0,2% ]1= 0,004%
V1= 0,1 ml V1= 1ml
[ ]2= ¿? V2= 5ml
[ ]2=?
V 2= 5ml

0,2%∗0,1ml 0,004 %∗1 ml

[ ]2= =0,004 % [ ]2= =0,0008 %
5 ml 5 ml

Tubo 2 Tubo 2’
 [ ]1=0,2% [ ]1= 0,008%
V1= 0,1 ml V1= 1ml
[ ]2= ¿? [ ]2=?
V 2= 5ml V2= 5ml

0,2 %∗0,2 ml 0,008 %∗1ml

[ ]2 =0,008 % [ ]2= =0,0016 %
5 ml 5 ml

Tubo 3 Tubo 3’

[ ]1= 0,2% [ ]1= 0,012%

V1= 0,3 ml V1= 1ml
[ ]2=? V2= 5ml
2= 5ml [ ]2=

0,2%∗0,3 ml 0,012%∗1 ml
[ ]2= =0,012 % [ ]2= =0,0024 %
5 ml 5 ml

Tubo 4 Tubo 4’

[ ]1= 0,2% [ ]1= 0,016%

V1= 0,4 ml V1= 1ml
[ ]2=? V2= 5ml
2= 5ml [ ]2=?

0,2%∗0,4 ml 0,016 %∗1ml

[ ]2= =0,016 % [ ]2= =0,0032 %
5 ml 5 ml

Tubo 5 Tubo 5’

[ ]1= 0,2% [ ]1= 0,02%

V1= 0,5 ml V1= 1ml
[ ]2=? V2= 5ml
2= 5ml [ ]2=

0,2%∗0,5 ml 0,02%∗1 ml
[ ]2= =0,02 % [ ]2= =0,004 %
5 ml 5 ml

PRIMER MÉTODO (GRÁFICO)

 Absorbancia []
B’ 0 0
1’ 0,040 0,0008 %
2’ 0,093 0,0016 %
3’ 0,232 0,0024 %
4’ 0,281 0,0032 %
5’ 0,469 0,004 %
M’ 0,013

Tabla 2. Absorbancia y concentración de los tubos prima.

Absorbancia en mm

TUBO 1’ absorbancia Concentración

30 mm=0,10 40 mm=0,010
X =0,040 X =0,0008

30∗0,040 40∗0,0008
X= =12 mm X= =32 mm
0,10 0,0010

TUBO 2’ Concentración
30 mm=0,10
X =0,093 40 mm=0,010
X =0,0016
30∗0,093
X= =27,9 mm
0,10 40∗0,0016
X= =64 mm
0,0010

TUBO 3’ absorbancia Concentración

30 mm=0,10 40 mm=0,010
X =0,232 X =0,0024

30∗0,232 40∗0,0024
X= =69,6 mm X= =64 mm
0,10 0,0010

TUBO 4’ absorbancia Concentración

30 mm=0,10 40 mm=0,010
X =0,281 X =0,0032

30∗0,281 40∗0,0032
X= =84,3 mm X= =128 mm
0,10
TUBO 1’ absorbancia 0,0010
Concentración

30 mm=0,10 40 mm=0,010
X =0,469 X =0,013

30∗0,469 40∗0,0008
TUBO M’ absorbancia

30 mm=0,10
X =0,013

30∗0,013
X= =3,9 mm
0,10

Figura 1. Gráfica correspondiente a la absorbancia / Concentración de tubos prima

33∗0,0010
x= = 0,000825 %
40
 0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
0.25
Abs

0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0 0 0 0 0 0 0 0
Concentración

absorbancia Linear (absorbancia)

Segundo método (ecuación)

y 2− y 1
m=
x 2−x 1

0,469−0,04
m=
0,004−0,0008

m=134,0625

b=−0,09
0,013−b
x=
m
 0,013−(−0,09)
x=
134,0625

x=¿ 0,0007682%

y=134,0625 x−0,09

Tercer método (Excel)

0.5
Absorbancia-concentración
0.45
0.4 R² ==0.96
f(x) 130.75 x − 0.09
0.35
0.3
0.25
Abs

0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0 0 0 0 0 0 0 0
Concentración

absorbancia Linear (absorbancia)

Linear (absorbancia) Linear (absorbancia)

y−b
x=
m

0,013−(−0,0908)
x= =0,0007938 %
130,75

Método Concentración M
Gráfico 0,000825%
Ecuación 0,000768%
Excel 0,000794%

Muestra problema método gráfico

Tubo M’ TUBO M

[ ]1∗V 1
[ ]2=
V2

0,004125 %∗5,0 ml
[ ]2=
 [ ]1∗V 1
[ ]2=
V2

0,000825 %∗5,0 ml
[ ]2=
1,0 ml

[ M ]=0,004125 %

Muestra problema método ecuación

Tubo M’ TUBO M

[ ]1∗V 1 [ ]1∗V 1
[ ]2= [ ]2=
V2 V2

0,000768 %∗5,0 ml 0,00384 %∗5,0 ml

[ ]2= [ ]2=
1,0 ml 0,3 ml

[ M ]=0,00384 % [ MP ] =0,064 %

Muestra problema método Excel

Tubo M’ TUBO M

[ ]1∗V 1 [ ]1∗V 1
[ ]2= [ ]2=
V2 V2

0,000794 %∗5,0 ml 0,00397 %∗5,0 ml

[ ]2= [ ]2=
1,0 ml 0,3 ml

[ M ]=0,00397 % [ MP ] =0,0661%

Método Muestra problema

Gráfico 0,0687%
Ecuación 0,064%
Excel 0,0661%

ÁNALISIS DE RESULTADOS

La composición de un espectrofotómetro, consta de una fuente de luz

(bombilla) que produce luz blanca. La primera rendija selecciona un rayo que
contiene todas las frecuencias emitidas. Este rayo pasa a través de un prisma
de vidrio que descompone la luz blanca en sus diferentes frecuencias (del rojo
al violeta). Una segunda rendija selecciona una de las frecuencias (luz
monocromática) que incidirá sobre la cubeta que contiene la muestra. Al
conjunto del prisma y segunda rendija se la denomina monocromador. El rayo
monocromático que atraviesa la muestra incide sobre el detector, que transfiere
los datos a un sistema informático donde se genera el espectro. Si la
frecuencia seleccionada en la segunda rendija no es absorbida por la muestra
se produce un punto de la línea base del espectro. Cuando la frecuencia de la
radiación es adecuada para producir una transición (vibracional, electrónica...)
se observa un pico de absorción en el espectro.

El espectro visible o luz visible es la región del espectro electromagnético que

el ojo humano es capaz de percibir y traducir en los distintos colores que
conocemos.
La luz es un conjunto de radiaciones electromagnéticas de muy distinta
frecuencia, de las cuales el ojo humano es capaz de percibir apenas un
segmento: el correspondiente a las longitudes de onda entre 380 y 750
nanómetros, aproximadamente. Dependiendo de la persona, este rango puede
ser ligeramente más amplio, o ligeramente más estrecho.
En tanto luz blanca, el espectro visible contiene absolutamente todos los
colores que son capaces de ver los seres humanos, dependiendo de la longitud
de onda de las radiaciones.

Figura 2. Escala longitud de onda

el blanco y el negro, más que colores, se entienden como valores de la

saturación de la luz: el blanco se corresponde con la suma de todos los
colores, es decir, a la luz en pleno; mientras que el negro se corresponde con
la ausencia de luz, o sea, con la total ausencia de color.

el espectro visible se encuentra entre las longitudes de onda propias de la luz

infrarroja (por encima de 750 nm aprox.) y las de la luz ultravioleta (por debajo
de 400 nm aprox.), ambos extremos ya invisibles para el ojo humano.
 Figura. 3 valores longitud de onda

La utilización de la O-toluidina en la determinación de aldosacáridos en un

medio de ácido acético, fue establecido como método rutinario por Hultman,
procedimiento que ha sido modificado por varios autores y utilizado en métodos
manuales y automáticos. Se fundamenta el procedimiento en una reacción de
condensación de la glucosa y aminas aromáticas primarias en un medio de
ácido acético glacial.[ CITATION KMD \l 9226 ]. La O-toluidina es un método
basado en el poder reductor de los hidratos de carbono.

La ley de Lambert-Beer expresa la relación entre absorbancia de luz

monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en
solución:
A = log I/Io = ε·c·l

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su

concentración: a mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con
ellas; también depende de la distancia que recorre la luz por la solución a igual
concentración, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra más
moléculas se encontrará.

La finalidad de la práctica, es encontrar la concentración desconocida de la

muestra problema, esto se realiza por tres distintos métodos: gráfico, ecuación
y Excel, estos tres procedimientos arrojaron valores con una diferencia mínima,
el primero, se realiza en milímetros y con una regla de tres, se convierte a
unidad de concentración, el segundo, en nanómetros, al cual se le aplica la
regla mencionada anteriormente y el último, se da en las unidades necesarias,
en estos métodos se usan gráficas de dispersión, los resultados arrojados son
0,0687%, 0,064% y 0,0661, al promediarlos, la concentración de la muestra
problema aproximadamente de 0,0662.

CONCLUSIONES

 Se logró obtener un resultado aproximado de la concentración de la

muestra problema usando los tres métodos, gráfico, ecuación y Excel.
  EL espectrofotómetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la
concentración de una sustancia en una solución, permitiendo así la
realización de análisis cuantitativo.
 Realizar de forma adecuada el proceso de colorimetría o espectroscopia
visible implica tener buenos resultados en la práctica, por tanto, es
importante tener las bases teóricas y usar los métodos con la mayor
precisión y exactitud posible para obtener una práctica exitosa.

BIBLIOGRAFÍA

UBOWSKI, K. (s.f.). AN O-Toluidine method for body-fluid glucose determination.

PRÁCTICA, L. D. (2010). German Giraldo, Nelsy Loango, Clara Mejia.