Biotecnologia

Conceitos e princípios básicos

 Material Genético → DNA

graças aos conhecimentos

sobre a estrutura, modo de
replicação e mecanismos de
expressão → modificações
no modo de ação dos genes
Definição

É a aplicação de conhecimentos sobre

os seres vivos objetivando a melhoria
das condições de vida humana
Exemplos clássicos
emprego de leveduras na produção de
z pão
z cerveja e chopp
z vinho
emprego de bactérias na produção de
z queijos
z iogurtes
estratégias de melhoramento de plantas
z obtenção do milho híbrido
z obtenção do cultivar Piranão (ESALQ-USP)
Aplicações
Medicina – TERAPIA GÊNICA
MEDICINA VETERINÁRIA – produção de HC
Agronomia – produção de plantas transgências
Geologia – bactérias lixiviadoras na extração de metais
preciosos
Ecologia – bactérias degradadoras de petróleo
Produção de fármacos
z insulina
z interferons
z antibióticos
z etc
 Sistema de proteção do
patrimônio genético
mecanismo que monitora a entrada de
material genético exógeno nas células
vivas (preservação da integridade do DNA)
dois tipos de componentes
z enzimas de restrição (tipos I, II e III)
z enzimas de metilação

alvo → seqüências especiais de nucleotídeos

Restrição em curso
Uso biotecnológico

trata-se de uma maneira de construir

moléculas de DNA recombinantes
usando uma alternativa não
convencional

TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE

Ferramentas de trabalho
Enzimas de restrição (tipo II)
z reconhecem seqüências específicas de
nucleotídeos no DNA - palíndromos
z atuam como verdadeiras tesouras moleculares

Enzimas de metilação
z reconhecem seqüências específicas de
nucleotídeos no DNA - palíndromos
z marcam o patrimônio genético celular
 Conceito de Palíndromo:
“seqüência simétrica de letras”
letras
Exemplos usando o alfabeto:
z SUBINOONIBUS

z ROMAMETEMAMOR
Exemplo usando o alfabeto do DNA:
Tipos de cortes:
Produção de terminais adesivos
Tipos de cortes:
Produção de terminais abruptos (ou cegos)
Exemplo do corte:
Corte de um palíndromo no cromossomo do
vírus SV40
Ação da EcoRI
Resolução dos fragmentos de
restrição
montagem do gel
colocação das
amostras
corrida eletroforética
coloração
observação dos
resultados
Exemplo do λ cortado com
Hind III
padrão de bandas
bem separadas
é muito usado com
referência de
tamanho
Brometo de etidio
corante intercalante
Determinação de tamanho
dos fragmentos
migração em gel
comparação dos RF
Vetores de clonagem
Definição:
z São entidades celulares que carregam
fragmentos de DNA gerados por ação de
enzimas de restrição.

z Em geral são elementos genéticos extra-

cromossomicos, com tamanhos variados e
que apresentam mecanismos próprios de
replicação.
Exemplos de vetores de clonagem

Plasmídio bacteriano denominado

pBR322
Outro vetor de clonagem mais atual

Plasmídio bacteriano denominado

pUC18
Vetor de expressão
plasmideo de expressão
Montagem de mapas físico e genético

Facilita a localização de genes

Elaboração de uma montagem
molecular
 Clonagem
molecular de um
gene de interesse
Exemplo de Engenharia Genética

Pequena planta
transgênica de fumo

z Expressando o gene
da luciferina, uma
proteína típicamente
encontrada em
vagalumes
Novos remédios genéticos: