Células CAR T em 24 horas: mais rápidas, baratas e eficiêntes

A terapia com células CAR T (receptor quimérico de antígeno) vem demonstrando

eficácia comprovada em diversos modelos de tumores, sobretudo líquidos, como leucemias
lifóides agudas (ALL) e linfomas; entretanto, ainda enfrenta adversidade no tratamento de
uma parcela dos pacientes submetidos à terapia 1. Neste sentido, diversos grupos de pesquisa
procuram por melhorias no desenvolvimento dessa terapia, seja através de modificações
adicionais na célula CAR T ou no próprio processo de produção.

Um dos principais parâmetros utilizados para avaliar o sucesso destas melhorias é

avaliação da persistência das células CAR T: capacidade dos linfócitos se manterem
responsivos contra o tumor em decorrência do tempo, o que pode refletido pela
caracterização de um fenótipo de memória celular. Células T não ativadas, ou Naíve, possuem
alta capacidade proliferativa e de migração; quando ativadas através do reconhecimento do
antígeno via TCR (receceptor de céulas T) ou CAR, vão se diferenciando em distintos fenótipos
de memória celular e adquirindo maior capacidade citotóxica, porém menor carga proliferativa
(figura 01). Atualmente é reconhecido que a geração de produtos de células CAR T com
fenótipo Naíve ou de memória celular possuem maior capacidade antitumoral, enquanto
células com fenótipo efetor rapidamente acumulam receptores inibitórios e ficam exaustas,
com perda da capacidade citotóxica.

Neste sentido, o trabalho de Ghassemi e colaboradores em 2018 2 demonstrou que a

simples redução do tempo de expansão dos linfócitos CAR T em cultura é uma possibilidade
viável para geração de células menos diferenciadas no momento da infusão. No artigo, os
autores demostram que células CAR T expandidas por até 9 dias apresentam diminuição
progressiva da população de células com fenótipo Naíve e steam cell. Ao tratarem
camundongos imunodeficientes com células CAR T enxertados com modelo de leucemia
linfoide aguda (LLA), células expandidas por 3 dias tiveram capacidade antitumoral elevada,
mesmo com doses 6 vezes menores, comparado aos animais tratados com produto de células
expandidas por 9 dias que tiveram perda da resposta em doses baixas.

Mais recentemente, o mesmo grupo de pesquisa propôs uma nova alteração no

protocolo de geração de células CAR T2. Desta vez os pesquisadores avaliaram linfócitos não
ativados e cultivados somente por 1 dia (D1) até a infusão em animal enxertado com modelo
de LLA. Após adaptações no protocolo de transdução das células por lentivirus, os autores
testaram diferentes doses de células D1 (2, 0.7 e 0.2 milhões), e demonstraram efeito dose
dependente na redução dos tumores. Camundongos tratados com a maior dose apresentaram
remissão completa do tumor, enquanto que doses menores ainda demonstraram efeito
citotóxico, porém de modo mais sucinto. Por outro lado, o tratamento com 3 milhões de
células CAR T ativadas e expandidas por 9 dias (D9), embora tenha induzido diminuição
acelerada do tumor, apresentou recidiva em todos os animais tratados. Ao analisarem células
CD45+ circulantes no sangue periférico, animais tratados com D1 tiveram uma proporção de
células significativamente maior em relação a D9, ainda que com a grande diferença na dose
de tratamento, o que indica a capacidade de persistência das células D1.

Os pesquisadores ainda repetiram a comparação, desta vez utilizando linfócitos T de

pacientes oncológicos, Muitos tumores possuem microambiente imunossupressor, induzindo a
expressão de receptores inibitórios e a consequente exaustão de células T, o que pode ser um
limitante na reprodutibilidade da eficácia na clínica. Entretanto, todos os animais tratados com
células CAR T no tempo D9 de expansão apresentaram recidiva após diminuição do tumor,
enquanto que os tratados com D1 apresentaram redução mais consistente dos tumores e
recidiva??. Ademais, a proporção de células CD45+ circulantes foi consistentemente maior nos
camundongos tratados com D1, até 49 dias após o tratamento.

Dados recentemente publicados pelo nosso grupo demonstraram a possibilidade de

cultivo das células CAR T por até 3 horas anteriores a infusão sem perda na resposta do
tratamento3, o que é extremamente vantajoso por facilitar a produção de células devido à
diminuição de manejo e custos durante o processo de expansão in vitro3. No artigo de
Ghassemi, além da vantagem do custo benefício é destacado a melhora que este tipo de
abordagem pode apresentar, através da geração de células com maior persistência, sendo
capazes de demonstrar efeito antitumoral em doses até 10 vezes menores. No processo de
otimização de células CAR T, diversos fatores, variáveis e possibilidades de combinações
podem influenciar no aumento da eficiência das células CAR T geradas, e e ainda há muito a se
testar. Nesse sentido, uma das possibilidades destacadas pelos autores como próximo passo
será avaliar a melhor estrutura do receptor CAR para o protocolo D1.

Figura 01- Fenótipos de diferenciação de células T Naíves.

Referencias

1. Donnadieu E, Dupré L, Pinho LG, Cotta-de-Almeida V. Surmounting the

obstacles that impede effective CAR T cell trafficking to solid tumors. J Leukoc
Biol. 2020 Oct;108(4):1067-1079. doi: 10.1002/JLB.1MR0520-746R. Epub 2020 Jul
3. PMID: 32620049; PMCID: PMC7586996.
2. Ghassemi S, Nunez-Cruz S, O'Connor RS, Fraietta JA, Patel PR, Scholler J, Barrett
DM, Lundh SM, Davis MM, Bedoya F, Zhang C, Leferovich J, Lacey SF, Levine BL,
Grupp SA, June CH, Melenhorst JJ, Milone MC. Reducing Ex Vivo Culture
Improves the Antileukemic Activity of Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells.
Cancer Immunol Res. 2018 Sep;6(9):1100-1109. doi: 10.1158/2326-6066.CIR-17-
0405. Epub 2018 Jul 20. PMID: 30030295; PMCID: PMC8274631.

3. Ghassemi, S., Durgin, J.S., Nunez-Cruz, S. et al. Rapid manufacturing of non-

activated potent CAR T cells. Nat Biomed Eng 6, 118–128 (2022).
https://doi.org/10.1038/s41551-021-00842-6

4. Abdo L., Barros L. R. C., Viegas M., et al. Development of CAR-T cell therapy for B-ALL
using a point-of-care approach. OncoImmunology, 2020