Biotecnologia aplicada à

Imunoterapia: CAR-T cell

Prof Dr Felipe P mesquita

Programação
Mecanismo de terapia celular CAR T
Processo de fabricação
Desafios da expansão da terapia celular CAR T para uma população
maior de pacientes em todo o mundo
• Harmonização de padrões nacional e internacionalmente
Chimeric antigen receptor (CAR)-T cell

• As células T são removidas

do sangue do paciente

• Projetado para expressar um

receptor de antígeno
quimérico

• Reprograma células T para

atingir células tumorais
 30 anos de progresso para trazer CART para o leito

1980-1990: Anos 90: Anos 2000: 2012: 2013: 2017:

Alterar receptor CARTs de Primeira CARTs de Segunda Estudos para 2 crianças com FDA aprova
de células T pode Geração - crescimento Geração – melhor adultos começam a LLA refratário primeiro produto
levar à morte de lento de tumores em morte in vitro e mostrar promessa alcançam CART
células-alvo camundongos persistência em de CD19 CAR remissão
camundongos (Seattle, NCI,
MSKCC, Penn)

Grupp et al. New Eng J Med. 2013 Maude, S et al. New Eng J Med. 2014 4
 CAR T cell therapy – Onde nós estamos?
• Tisagenlecleucel (CTL019) é aprovado pela FDA para pacientes com até 25 anos
de idade com LLA de células B (refratário) e para pacientes com Linfoma de
células B difuso (recaída e refratário)
• KTE-C19/axicabtagene ciloleucel (axi-cel) é aprovado pela FDA para pacientes
com Linfoma não-Hodgkin ou Linfoma de células B difuso (recaídas e refratárias)
• Atualmente sendo investigado em vários tipos de tumoes hematológicos e sólidos
• 144 ensaios clínicos atuais nos EUA,
• 240 na China, Austrália, Áustria, Bélgica, Canadá, França, Alemanha, Israel, Itália,
Japão, Holanda, Noruega, Rússia, Cingapura, Espanha, Suécia, Suíça, Tailândia,
Reino Unido
 Mecanismo da terapia CAR T Cell
• CARs: proteínas de fusão
geneticamente modificadas.

• Domínio de reconhecimento de
antígeno derivado de um anticorpo
monoclonal

• Sinalização celular T intracelular e

domínios costimulatórios

Clinical development of anti ‐CD19 chimeric antigen receptor T ‐cell therapy for B ‐cell non ‐Hodgkin lymphoma, Volume: 108, Issue: 6, Pages: 1109-1118, First published: 16
March 2017, DOI: (10.1111/cas.13239)
 Mecanismo da terapia CAR T Cell

Projetado para expressar um receptor de antígeno quimérico

• Reprograma células T para atingir células tumorais
Clinical development of anti ‐CD19 chimeric antigen receptor T ‐cell therapy for B ‐cell non ‐Hodgkin lymphoma, Volume: 108, Issue: 6, Pages: 1109-1118, First published: 16
March 2017, DOI: (10.1111/cas.13239)
CD19: Alvo para células B
 Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) é a malignidade mais
comum em crianças
Aproximadamente 3.000 novos casos por ano

Apresentação clínica: febre, fadiga, hematomas/sangramento, dor óssea

Categorizado como LLA de precursor de células-B (LLA pré-B) ou LLA de células T

• LLA Pré B
CD19
CD34
CD22
CD10

CD13 TdT

9
Principles and Practice of Pediatric Oncology, Pizzo and Poplack 2015.
https://www.chop.edu/news/five-years-later-first-pediatric-recipient-car-t-cell-therapy- 10
remains-cancer-free
 CART therapy leads to high rates of CR

N=30 crianças e adultos com pré-B ALL

80% dos pacientes tinham leucemia detectável antes da

infusão

90% alcançaram remissão completa

Apenas 7 desses pacientes tiveram uma recaída mais tarde.

• EFS de 6 meses = 67%, OS = 78%

11 Maude, S et al. New Eng J Med. 2014

 Results were validated in an international study
Julgamento internacional

N=75 recebeu infusão de CART

81% dos pacientes alcançaram remissão

59% de recaída de sobrevivência livre em 12mo

• 22 pacientes tiveram recaída, 68% foram CD19
negativos no momento da recaída

Maude et al. NEJM. 2018

Fabricação de Tisagenlecleucel
 Ativação de células T

Células que apresentam antígenos artificiais: contas anti-CD3/anti-CD28

• IL-2
 Fabricação de Tisagenlecleucel

• Transdução: incubação com um vetor viral codificando o CAR

Manufacturing of Tisagenlecleucel

• Expansão cultural leva de 9 a 11 dias e pode chegar até 5L

Processo Clínico para Tisagenlecleucel
Fabricação de Tisagenlecleucel
Desafios da expansão para populações maiores de
pacientes
• Dimensionamento da terapia celular CAR T
Maior gama de indicações
Populações maiores de pacientes
• Processo de fabricação complexo
Alguns aspectos são semi-automatizados
Outros são manuais
• Gerando vetor viral de alta qualidade
• Modificação genética previsível das células
Esterilidade
• O produto celular CAR T final deve ser gerado individualmente para cada paciente
Preocupações regulatórias globais
Desafios da expansão da terapia celular
CART globalmente
A triagem e o teste de doadores, rastreabilidade e rotulagem, confidencialidade do
paciente e requisitos de aferese variam amplamente entre os países
Material inicial do doador e produto final podem ser enviados internacionalmente
Os requisitos para controle de qualidade dos materiais iniciais variam
Requisitos para o soro humano ou animal usado para a cultura celular diferem
• Maior colaboração regulatória global e harmonização é necessária
Harmonização de Normas
O processo de aprovação do ensaio
clínico ainda não está totalmente
harmonizado entre os Estados
membros da União Europeia
• Isso pode mudar em nos próximos
anos, quando um novo
regulamento entra em vigor.
 Harmonização de Normas
As células CAR T são consideradas
organismos geneticamente
modificados (OGM)

Os OGMs são regulados de forma

diferente entre os países
• A legislação e os formulários de
aplicação foram elaborados com os
OGMs da fábrica em mente
 Complicações únicas do CART

• Hipogammaglobulinemia (baixos níveis de IgG)

CD19 é um marcador normal em células B

Pode ser um marcador de persistência cart

Tratamento com imunoglobulina IV

Síndrome de Liberação de Citocinas

Neurotoxicidade (Síndrome neurotoxicidade associada ao efeito

imunológico)