Novas terapias contra a AIDS

baseadas na edição genética

Apresentado pelo Doutorando Renato Bernabé
Introdução

O HIV/SIDA continua a ser um importante problema de saúde pública.

Em 2014, estimou-se que 36,9 milhões de pessoas viviam com HIV
em todo o mundo, incluindo 2,6 milhões de crianças.
Desde o advento da terapêutica anti-retroviral combinada (TARc) na
década de 1990, o tratamento tem sido tão bem sucedido que, em
muitas partes do mundo, o VIH se tornou uma doença crónica em que
a progressão para a SIDA se tornou cada vez mais rara.
Introdução

No entanto, embora as pessoas com HIV possam esperar viver uma

vida normal com a TARc, é necessária medicação ao longo da vida e
ainda são possíveis doenças cardiovasculares, renais, hepáticas e
neurológicas, o que continua a motivar a investigação para uma cura
para o HIV.
Introdução

Células reservatório infectadas, como células T CD4+ e células mielóides,

permitem a persistência do HIV como um provírus de DNA integrado e
servem como uma fonte potencial para o ressurgimento do vírus.
As tentativas de erradicar o HIV destas células concentraram-se
principalmente na chamada abordagem “choque e morte”, onde a
reativação celular é induzida de modo a desencadear a eliminação das
células produtoras de vírus por citólise ou ataque imunológico.
Introdução

Esta abordagem tem várias limitações e a sua utilidade em aplicações

clínicas ainda precisa ser avaliada.
Avanços recentes na tecnologia de edição genética permitiram o uso
desta abordagem para inativar o DNA proviral integrado no genoma de
células infectadas de forma latente ou para eliminar os receptores do
HIV. Aqui revisamos esta estratégia e seu potencial para eliminar a
reserva latente de HIV
Primeiro ponto

Aqui estão três questões a serem consideradas:

● O que é a edição genética e como ela pode ser usada para tratar o
HIV/SIDA?
● Quais são as limitações dos actuais tratamentos do HIV/SIDA e como
pode a edição genética resolver essas limitações?
● Quais são as potenciais preocupações éticas em torno da edição genética
como tratamento para o HIV/SIDA?
Segundo ponto
Células Reservatórias latentes
existem no sangue circulante,
bem como no SNC, na medula
óssea e no tecido linfóide
associado ao intestino, sendo as
células T CD4 + as mais
importantes.
Estima-se que as células T CD4 +
infectadas latentemente podem
viver por muitas décadas, são
resistentes à TARVc e não são
suscetíveis ao ataque do sistema
imunológico
Segundo ponto

Avanços na tecnologia de edição genética tornaram disponível a

possibilidade de utilizar estas abordagens para inactivar o DNA
proviral do HIV integrado no genoma de células infectadas de forma
latente.
Diversas técnicas novas:
1. Recombinase Cre, que é uma recombinase específica do local do
tipo tirosina do bacteriófago P1, recombinação de LoxP .
2. Nuclease dedo de zinco (ZFN), endonuclease inespecífico FokI.
3. A categoria mais poderosa de ferramenta de edição de genes é a
repetição palindrômica curta interespaçada regulatória agrupada
(CRISPR) associada 9 (Cas9), que fornece controle incomparável
sobre a edição de genes [ 32–35 ] .

CRISPR/Cas9 é direto, fácil de usar e flexível, pois pode ser adaptado

a diferentes alvos.
O campo da pesquisa sobre a cura do HIV-1 foi impulsionado pelo caso do
"paciente de Berlim", que aparentemente foi curado do HIV após receber um
transplante de células-tronco hematopoéticas de um doador que possuía uma
mutação chamada CCR5 Δ32. Esse transplante fazia parte do tratamento para
leucemia mieloide aguda do paciente.
A aplicação de abordagens de terapia genética ao HIV em pacientes humanos
poderia ser efetuada por duas abordagens possíveis:
● ex vivo modificam genes virais ou celulares em células cultivadas
coletadas do paciente, que são então readministradas
● in vivo administram o agente de terapia genética diretamente ao paciente.
Etapas propostas para aplicação
clínica da estratégia de edição
genética
A. para eliminação
Abordagem do HIV-1
ex vivo envolvendo
propagação de células
hematopoiéticas para tratamento
com moléculas de edição genética
seguida de triagem e seleção de
células identificadas com genes
celulares geneticamente inativados e
criticamente importantes para
infecção viral, seguida de expansão
celular em laboratório para infusão
na clínica.

B. Administração direta da molécula

de edição genética criada em
laboratório usando um sistema de
distribuição eficiente para pacientes
na clínica.
Esquema das tecnologias de
edição genética
Existem três classes de proteínas de edição
de genes:

A. Nucleases de dedo de zinco (ZFN) são

proteínas de fusão que combinam o
domínio de clivagem da enzima FokI com
uma proteína dedo de zinco personalizada.
Isso confere especificidade à enzima,
permitindo que ela crie quebras de fita
dupla de DNA em locais específicos.

B. Nucleases efetoras semelhantes a

ativadores de transcrição (TALEN)
também são proteínas de fusão com base
na enzima FokI. Elas possuem um
domínio de direcionamento retirado de
proteínas efetoras TAL da bactéria
Xanthomonas.
Esquema das tecnologias de
edição genética
Existem três classes de proteínas de edição
de genes:

C. O sistema CRISPR-Cas9 é composto

por um RNA guia único (gRNA) que,
quando combinado com a enzima Cas9, é
capaz de encontrar e cortar um alvo de
DNA específico determinado pela
sequência do gRNA.

Essas três classes de proteínas de edição

de genes são utilizadas para fazer
modificações precisas no DNA, com
aplicações importantes na pesquisa e
terapia genética.
Embora promissora, a edição genética para combater o HIV enfrenta
desafios.

No entanto, já há progresso em andamento, incluindo um ensaio clínic

para avaliar a segurança da abordagem de modificação do gene ZFN-
CCR5 em pacientes com HIV.

Os experimentos buscam otimizar os parâmetros de tratamento, como a

dose de células e infusões múltiplas.

O futuro reserva um acompanhamento interessante desses avanços.

- Obrigado -