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1. OBJETIVO
O termo doença falciforme se aplica a um grupo de desordens genéticas,
caracterizado pela presença da hemoglobina S: em homozigose (Hb SS) – também
chamada de anemia falciforme; em heterozigose com outras hemoglobinas variantes
(Hb SC, Hb SD-Punjab, etc), ou, ainda, em interação com as talassemias (Hb S/β0
talassemia, Hb S/β+ talassemia, Hb S/α talassemia). É reconhecidamente uma doença
de elevada mortalidade e morbidade, necessitando de identificação e tratamento
precoces.
O Brasil apresenta alta prevalência e o diagnóstico passou a ser obrigatório
em todos os estados, pelos testes de triagem neonatal, desde junho de 2001, com a
criação do Programa Nacional de Triagem Neonatal (PNTN), juntamente com a
triagem do hipotireoidismo congênito, da fenilcetonúria e da fibrose cística.3-5 Desta
maneira, o Ministério da Saúde deu um importante passo no reconhecimento de sua
relevância em saúde pública no Brasil. A mortalidade na doença falciforme,
principalmente por infecção bacteriana ou por seqüestro esplênico, inicia-se após os
dois a três primeiros meses de vida, justificando a importância do diagnóstico precoce.
A adoção de medidas profiláticas comprovadamente aumenta a sobrevida dos
indivíduos afetados e melhora a sua qualidade de vida, apesar de não possibilitar a
cura clínica da doença.

2 . APLICAÇÃO CLÍNICA
O diagnóstico laboratorial da doença falciforme baseia-se na detecção da
hemoglobina S e deve seguir as normas estabelecidas no PNTN (Portaria do
Ministério da Saúde nº 822/01).

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Os métodos utilizados identificam, além da doença falciforme, outras

hemoglobinopatias, bem como as crianças heterozigotas (portadoras de traço para
hemoglobinopatias).

O recém-nascido com doença falciforme é, geralmente, assintomático devido ao efeito

protetor da hemoglobina fetal, que, neste período da vida, representa cerca de 80% do
total
da hemoglobina. Por este motivo, os testes de falcização (pesquisa de drepanócitos) e
os testes de solubilidade não se aplicam durante os primeiros meses de vida. Os
testes usados em triagem populacional devem ser sensíveis e apresentar boa relação
custo-benefício.
As amostras para os testes de triagem devem ser coletadas sempre antes de
qualquer transfusão sanguínea e sempre deve ser questionada a realização de
transfusão intra-uterina. Essas informações facilitam a interpretação dos resultados e,
diante da ocorrência de transfusão prévia, uma nova amostra deve ser solicitada três
meses após a transfusão.
A hemoglobina normal do adulto é denominada hemoglobina A (Hb A) e a
hemoglobina normal do feto é designada hemoglobina fetal (Hb F). Existem mais de
700 hemoglobinas variantes descritas, sendo muitas delas detectadas pelos testes de
triagem.

1. PRINCÍPIO DO MÉTODO
Cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) – VARIANT™nbs Newborn
Automatic Sampler (VNAS)

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2. MATERIAL E EQUIPAMENTOS

Amostra: Sangue em papel filtro

Reagentes:
 Fabricante: BioRad
1. Tampão 1.
2. Tampão 2.
3. Solução de lavagem.

 Controle interno de qualidade:

1. Whole Bloond Prime.
2. Retention Time Marker Set. 1 (FAES) 2(FADC)

 Controle externo de qualidade: Trimestralmente, através do PNCQ, é

realizado um teste de proficiência, cujos resultados são avaliados por aquele
programa e comparados com os resultados de consenso obtidos pelo mesmo.

 PROCEDIMENTO AUTOMATIZADO
O VARIANTnbs utiliza os princípios da cromatografia a líquida de alta
resolução (HPLC) para a separação e determinação das hemoglobinas F, A, S, D, C e
E em eluídos de sangue de recém-nascidos recolhido em papel de filtro.
Duas bombas de duplo pistão localizadas na VNCS distribuem a solução tampão à
coluna analítica e ao detector. As amostras são extraídas de eluídos de manchas de
sangue em poços de microplaca e introduzidas na via de fluxo analítica por injeção
automática. Entre as injeções de amostras, a agulha
de amostras é lavada com uma solução de lavagem para minimizar a mistura de
resíduos das amostras.
A amostra é transportada pelo tampão através da coluna analítica, onde é separada
nos seus componentes individuais. Os componentes separados passam então pelo
detector com duplo comprimento de onda, onde se mede a absorbância dos

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componentes da amostra a 415 nm. O ruído de fundo é reduzido pelo uso de um

comprimento de onda secundário a 690 nm. Os dados de absorbância são
transmitidos do detector para o PC e apresentados pelo GDM como um cromatograma
em tempo real (gráfico do tempo vs. volts).
Os dados processados são incorporados num relatório impresso que contém o
seguinte:
1. Um resumo completo dos componentes detectados das amostras (i.e., identificação
de picos, tempo de retenção, porcentagem relativa, área).
2. O cromatograma das amostras.
3. Data e hora da análise.
4. Número do frasco e identificação da amostra.

1. PROCEDIMENTO TÉCNICO

Procedimento manual:

1. A placa possui 96 wells, sendo picotados 88 pacientes. Ao final gerando o mapa de

trabalho de cada placa, para identificação de cada paciente.
2. 2 wells de cada placa são utilizados para o controle 1 (FAES) e 2 (FADC)
3. Para a reconstituição do Whole Bloond Prime, deve acrescentar 0,5 mL de água
deionizada, deixar eluir por 10 min em temperatura ambiente.
4. Para a reconstituição do retention time maker 1 e 2 deve acrescentar 5 mL de água
deionizada e deixar eluir por 10 min em temperatura ambiente.
5. Fazer a eluição dos pacientes com 250 μl de água deionizada.
6. Colocar a placa para agitar de 10 a 15 min, em 500 rpm.
7. Com o aparelho inativado, deverá checar o esgoto, e os reagentes da máquina.
8. Fazer a troca da coluna analítica, aonde cada coluna tem 500 testes para análise.
Atualizar no sistema a cada troca de coluna.
9. Limpar a agulha com solução de hipoclorito a 6%.
10. Limpar a estação de lavagem com solução de hipoclorito a 6% e água.

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Procedimento automatizado:
1. Abrir o programa GDM.

2. Posicionar as placas.

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3. Criar uma lista de trabalho.

4. Injetar iniciador

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5. Finalizar e colocar para correr as amostras.

6. Verificar resultados da corrida.

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7. Imprimir.

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INTERPRETAÇÃO DE RESULTADOS

Os resultados são anexados ao mapa de trabalho e entregues para conferência

da supervisão.
1. Valor de referência: HbFA - Padrão Normal

Variações de Fenótipos.
HbFAS- Traço Falcêmico
HbFSC – Padrão de Hemoglobinopatia SC
HbFAD – Traço Hemoglobinopatia D
HbFS- Padrão de Anemia Falciforme
HbFC – Padrão de Hemoglobinopatia C
HbFAC – Traço de Hemoglobinopatia C
HbFAE – Traço Hemoglobinopatia E

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