METODOLOGIA PARA MIC 1 PASSO: adio da substancia teste e da DMSO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Poo 1: 200L do extrato bruto ou do leo essencial.

Poos 2 ao 8: 100L DMSO pura. 11 12 LINHA A (diluio) (ponteiras amarelas)

2 PASSO: diluio da substncia teste. 1 2 3 4 5 6 7 8

10

11

12 LINHA A (diluio)

: retirar 100L do poo 1 e inocular no poo 2, e assim sucessivamente at o poo 8. Trocar de ponteira para misturar. Poo 1 2 3 4 5 6 7 8 Diluies (mg/ml) 100 50 25 12,5 6,25 3,1 1,5 0,75 Teste (mg/ml) 10 5 2,5 1,25 0,62 0,31 0,15 0,075

3 PASSO: adio do meio de cultura (caldo Mueller-Hinton) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 LINHAS TESTE Adicionar 90L de caldo nas linhas teste. (ponteiras amarelas)

4 PASSO: adio das diluies das substncias teste. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

12 LINHAS TESTE

Poo 12: controle de crescimento. Adicionar 10L da substancia teste previamente inoculada e diluda na LINHA A. Mergulhar as ponteiras no caldo. (ponteiras 10L sem barreira)

5 PASSO: adio do inoculo. 1 2 3 4 5 6 7

10

11

12 LINHAS TESTE

Poo 10: controle de esterilidade. O inoculo deve estar diludo at 107UFC/ml.

(ponteira 10L com barreira)

6 PASSO: incubao a 35C por 18-24h.