Machine Translated by Google

Abordagem prospectiva de culturas primárias de cerebelo como modelo de

estudo de neuroinflamação

ARTIGO DE REVISÃO
ISSN 1677-5090 ÿ
https://doi.org/10.9771/cmbio.v20i4.45890 2021 Revista de Ciências Médicas e Biológicas

Abordagem prospectiva de culturas primárias de cerebelo como modelo

de estudo de neuroinflamação

Abordagem prospectiva sobre culturas primárias de cerebelo como modelo de estudo

de neuroinflamação

Lúcia Fonseca Santana1 , Fabine Correia Passos2 , Matheus Saliba Franchi3 , Julieta Maria Pereira Borges4 ,
Silvia Lima Costa5 , Victor Diógenes Amaral da Silva5 *

1
M.Sci, Laboratório de Neuroquímica e Biologia Celular, Departamento de Bioquímica e Biofísica, Instituto de Ciências
2
da Saúde, Universidade Federal da Bahia; Doutora, Departamento
Saúde, Universidade
de Bioquímica
Federaleda
Biofísica,
Bahia; Aluno
Instituto
dede
Graduação,
Ciências da
3
Laboratório de Neuroquímica e Biologia Celular, Departamento
Universidadede
Federal
Bioquímica
da Bahia;
e Biofísica, Instituto de Ciências da Saúde,

4
Professor Doutor, Departamento de Ciência e Tecnologia, Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia; 5 Ph.D, Professor,
Laboratório de Neuroquímica e Biologia Celular, Departamento de Bioquímica e Biofísica, Instituto de Ciências da Saúde,
Universidade Federal da Bahia.

Resumo
Introdução: a neuroinflamação é um evento chave na patogênese de várias doenças neurodegenerativas. Para entender as alterações celulares e os mecanismos
moleculares subjacentes à neuroinflamação, modelos experimentais in vitro têm sido empregados. Sendo o cerebelo a região do sistema nervoso central que
contém o maior número de neurônios e células gliais, é um excelente modelo para estudar alterações celulares associadas à neuroinflamação e à neurodegeneração.
A maioria dos modelos de estudo com células cerebelares é desenvolvida em sistemas de cultivo organotípicos. No entanto, esses modelos são caros, demorados
e requerem grande número de animais. Nesse sentido, o uso de culturas primárias surge como uma alternativa interessante. Objetivo: abordar artigos científicos
que utilizaram culturas primárias de células cerebelares para estudar a neuroinflamação. Metodologia: foi realizada uma prospecção científica exploratória
sistemática nas bases de dados LILACS, PubMed, EMBASE (Elsevier), Web of Science e o fórum global de Propriedade Intelectual (WIPO) considerando todas as
publicações, com o objetivo de identificar investigações usando culturas primárias de células cerebelares na literatura científica. Resultado: foram identificados 20
artigos utilizando cultura primária de células cerebelares de ratos ou camundongos filhotes. Dentre eles, 8 artigos eram estudos sobre neuroinflamação. Os artigos
utilizando culturas primárias de células cerebelares foram publicados entre os anos de 2000 a 2020. Conclusão: os estudos falharam em caracterizar a população
de células precursoras de oligodendrócitos ou oligodendrócitos maduros e não mostraram o rendimento de neurônios cultivados, importantes em modelos de
neurodegeneração.

Assim, esta revisão crítica contribui para a construção de estratégias de aprimoramento de protocolos para trabalhos futuros.

Palavras-chave: Neuroinflamação. Neurodegeneração. Cultura de células cerebelares.

Resumo
Introdução: neuroinflamação é um evento chave na patogênese de várias doenças neurodegenerativas. Para entender alterações celulares e mecanismos
adjacentes à neuroinflamação, modelos experimentais in vitro têm sido empregados. Sendo o cerebelo, uma das regiões do sistema nervoso central que contém o
maior número de neurônios e células gliais, um excelente modelo para estudar alterações celulares na neuroinflamação e neurodegeneração. Muitos estudos
estão sendo desenvolvidos a partir de culturas organotípicas. Entanto, este é um modelo caro, demorado e dependente de grande número de animais. O uso de
células primárias surge como alternativa interessante. Objetivo: abordar artigos científicos que utilizaram culturas primárias de células cerebelares para estudo
de neuroinflamação. Metodologia: uma prospecção científica exploratória sistemática foi realizada nas bases de dados LILACS, PubMed, EMBASE (Elsevier),
Web of Science e fórum global de propriedade intelectual, levando em consideração todas as publicações para identificar na literatura, pesquisas científicas com
uso de cultura primária de células cerebelares. Resultados: foram encontrados 20 artigos que utilizaram cultura primária de células cerebelares de ratos recém-
nascidos ou camundongos. Entre eles, 8 artigos eram de estudos sobre neuroinflamação. Os artigos utilizando culturas primárias de células cerebelares foram
publicados entre os anos de 2000 a 2020. Conclusão: os estudos falharam em caracterizar a população de células precursoras de oligodendrócitos ou
oligodendrócitos maduros e não mostraram o rendimento de neurônios em cultura, importantes em modelos de neurodegeneração.

Assim, esta revisão crítica contribui para a construção de estratégias de melhoria do protocolo para trabalhos futuros.

Palavras-chave: Neuroinflamação. Neurodegeneração. Cultura de células cerebelares.

INTRODUÇÃO
Correspondente/Correspondente: *Victor Diogenes Amaral da Silva – Laboratório de
Neuroquímica e Biologia Celular, Departamento de Bioquímica e Biofísica, Instituto de A neuroinflamação é a resposta imune inflamatória no sistema
Ciências da Saúde, Universidade Federal da Bahia endereço: Av. Prof. Reitor Miguel nervoso central (SNC). É um componente comum em várias
Calmon s/n Vale do Canela, Salvador – Bahia, 40110-902, Brasil, – Telefone: +55 (71)
doenças neurodegenerativas, como a doença de Parkinson (DP),
3283-8919 – E-mail: vdsilva@ufba.br
a doença de Alzheimer (AD)

Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021 643

Machine Translated by Google
Lúcia Fonseca Santana et al.
e esclerose múltipla (EM)1 . Também está presente no
,
envelhecimento2 , distúrbios do neurodesenvolvimento, incluindo
autismo3 e distúrbios neuropsiquiátricos, como esquizofrenia4,5. A
resposta neuroinflamatória desempenha um papel crucial na
progressão de distúrbios neurodegenerativos capazes de contribuir
para a morte neuronal6,7. A neuroinflamação pode ser iniciada por
sinalização de neurônios lesados, desequilíbrio entre processos pró-
inflamatórios e antiinflamatórios es8,9, por danos físicos como
traumatismo craniano10, acidente vascular cerebral11, tumores
cerebrais12,13 , infecções14 e outros agentes6,15.
Alguns indutores de neuroinflamação podem ser moléculas
endógenas como alfa-sinucleína (ÿ-Syn) na DP16, proteína tau e
oligômeros de peptídeo ÿ-amilóide (Aÿ)17 presentes na DA e
proteinopatias, inclusive aquelas geradas no envelhecimento2; 18.
Já os indutores extrínsecos são principalmente xenobióticos19,
como as toxinas lipopolissacarídeos (LPS) de Escherichia coli20 e o
tóxico ambiental tolueno21. Além disso, existem indutores mais
específicos, capazes de induzir a neuroinflamação associada à DP,
como 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP)22, 6-
hidroxidopamina (6-OHDA) e rotenona23.
A maioria desses indutores é usada em diferentes sistemas para
estudar a neuroinflamação.
Estudos de neuroinflamação no cerebelo são amplamente
empregados por ser esta a região do SNC que contém o maior
número de neurônios24,25. Essa região é composta principalmente
por neurônios de Purkinje e granulares, além de células gliais
responsáveis pela resposta imune26, tornando o cerebelo um
excelente modelo para estudar a neuroinflamação27.
No entanto, a maioria dos modelos de estudo com células
cerebelares é desenvolvida in vivo ou ex vivo usando cultura
organotípica (fatias de tecido cultivadas). Esses modelos apresentam
alto custo de manutenção e manejo animal, requerem grande
número de animais28 e possuem alto tempo de execução, que pode
variar de uma a duas semanas29. Uma alternativa é o uso de cultura
primária in vitro. Proporcionam tempo reduzido de execução e menor
custo em relação a outros sistemas, contribuindo para o entendimento
das interações neurogliais30 e das bases moleculares e celulares
do desenvolvimento e função neuronal, e também para a descoberta
de fármacos neuroprotetores31. Espera-se que uma cultura primária
de células cerebelares seja composta por neurônios, as células gliais
astrócitos, micróglia, células precursoras de oligodendrócitos (OPC)
ou oligodendrócitos maduros, que podem responder a estímulos
inflamatórios. O presente trabalho teve como objetivo prospectar
estudos utilizando culturas primárias de cerebelo, a fim de contribuir
para o desenvolvimento de estratégias para aprimoramento de
protocolos em futuras investigações sobre neuroinflamação.
METODOLOGIA
Foi realizada uma prospecção científica exploratória sistemática
nas bases de dados LILACS (BVS), PubMed (PMC),
EMBASE (Elsevier), Web of Science e o fórum global de Propriedade
Intelectual (WIPO) levando em consideração
644
todas as publicações, com o objetivo de identificar investigações
utilizando culturas primárias de cerebelo na literatura científica. Não
houve restrições de tempo de publicação. A estratégia de busca
utilizou combinações de termos de indexação para palavras-chave
dos Health Science Descriptors (DeCS), Medical Subject Headings
(MeSH) e EMBASE Subject Descriptors (Emtree). Operadores
booleanos “E; e OR” foram usados para ampliar e restringir a busca.
Para garantir alta especificidade e sensibilidade, a busca foi feita em
modo avançado incluindo sinônimos, termos relacionados e
truncamento. Descrições de pesquisa detalhadas e palavras-chave
estão no Apêndice 1. Estudos originais que usaram apenas métodos
in vitro e de cultura primária foram incluídos. A coleta de dados foi
realizada no mês de dezembro de 2020.
Foram excluídos artigos de revisão e artigos originais que
utilizassem culturas organotípicas in vivo, ex vivo ou outras regiões
cerebrais como córtex, mesencéfalo e hipocampo. Artigos escritos
em idioma diferente do inglês foram excluídos.
Os artigos selecionados foram classificados com base na
relevância de seu conteúdo e fator de impacto no portal da Coorde
nação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – Brasil
(CAPES) e na Plataforma Sucupira. O fluxograma PRISMA foi
utilizado para detalhar as etapas de seleção dos artigos 32. Durante
a leitura completa dos artigos selecionados, os dados avaliados
foram tipos de meio de cultura, tipos de suplementos, idade dos
animais, espécie, dias em cultura e agente de estímulo inflamatório
ou danos. Para garantir a qualidade da busca, dois revisores
avaliaram de forma independente para minimizar o risco de viés,
usando o aplicativo Rayyan33. Neste estudo, uma síntese narrativa
dos achados foi conduzida para detalhar os resultados de estudos
originais projetados para empregar células cerebelares de cultura
primária para estudos sobre neuroinflamação.
RESULTADOS
Seleção prospectiva
Foram encontrados 32 artigos na base de dados Latin American
and Caribbean Health Sciences (LILACS), 105 artigos na US
National Library of Medicine (Pubmed), 240 artigos na base de
dados Biomedical and Pharmacological Bib liographic (Embase), 189
artigos na a Web of Science, que fornece acesso a periódicos com
base no fator de impacto, e 9 artigos na base de dados Patentscope
(WIPO), perfazendo um total de 575 artigos identificados. Destes, 55
deles eram duplicados e foram excluídos. Uma seleção por títulos e
resumos foi então realizada nos 520 registros restantes. 441 foram
excluídos por não atenderem aos critérios de elegibilidade, resultando
em 79 artigos, os quais foram selecionados para leitura na íntegra.
Posteriormente, 52 artigos foram excluídos por envolver cultura de
tecidos e células não dissociadas. 27 artigos foram incluídos para
síntese qualitativa, porém 7 deles foram excluídos (4 artigos utilizaram
cultura de neurônios granulares para compor um sistema de co-
cultura com células gliais do córtex cerebral; 1 artigo utilizando
protocolos enriquecidos de neurônios granulares e neurônios do
hipocampo/ mesencéfalo
Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021
Machine Translated by Google
Abordagem prospectiva de culturas primárias de cerebelo como modelo de
estudo de neuroinflamação

2 artigos usando protocolos apenas para obter neurônios indutor (LPS; IFN-ÿ; IL-1ÿ; TNF-ÿ) e/ ou caracterizado por
granulares). Assim, dentre os 20 artigos que atenderam aos marcador molecular. Detalhes da seleção são ilustrados na
critérios de elegibilidade, 8 foram selecionados por neuroinflamação clássica
Figura 1.

Figura 1 – Fluxograma do Prisma, processo de busca, seleção e inclusão dos estudos, adaptado (Rede, 2015).

Fonte: Dados da pesquisa

Características principais das publicações
As primeiras evidências do uso de cultura primária de
células cerebelares datam do ano 2000, e até 2005 foram cinco
publicações. No entanto, entre os anos de 2005 e 2010 houve
uma redução de 40% no número de publicações em relação aos
cinco anos anteriores. Houve aumento (5 publicações) entre os
anos de 2010
e 2015. Além disso, a partir de 2015, os dados mostram uma leve
tendência de aumento no número de publicações (8 publicações)
desse tipo de estudo (Figura 2).
Os estudos selecionados nesta revisão, de acordo com os
critérios descritos acima, foram publicados em revistas de
objetivos e escopo variados, em farmacologia especial, toxicologia
e patologia e fator de impacto (FI) variando entre 2,74

Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021 645

Machine Translated by Google

Lúcia Fonseca Santana et al.

– 10.74: Brain Research (IF 3.13); Diário de Doenças e
Morte Celular (IF 10.72); Pesquisa atual de Alzheimer (IF
3.89); Jornal Europeu de Química Medicinal (IF 5.57);
Pesquisa de Radicais Livres (IF 3.64); Journal of
Pharmacology and Experimental Therapeutics (3,87);
Imunofarmacologia Internacional (IF 3.94); Journal of
Ethnopharmacology (IF 3.69); Journal of Neurochemistry
(IF 4.87); Journal of Neuroinflammation (IF 5.19); Journal of
Neuroscience (IF 5.67); Journal of Neuroscience Research
(IF 3.87); Ciências da Vida (IF 3.65); Moléculas (4.41); Pesquisaapresentaram
(IF 3.54) PLoS One (IF 2.74); Toxicologia (IF 4.10);
Toxicologia e Farmacologia Aplicada (IF 3.71) (Figura 3).
A maioria dos estudos utilizando cultura primária de
células cerebelares tem como primeiros autores afiliações
do Reino Unido (UK) (5 publicações) e Brasil (4 publicações),
seguidos dos Estados Unidos da América, que publicaram
três artigos científicos, e da Itália, que publicou três artigos
científicos (Figura 4). Os demais países destacados no
mapa, como China, Japão, Uruguai, Turquia e Dinamarca
de Neurotoxicidade
um artigo científico publicado cada um (Figura 4).

Figura 2 – Número de artigos científicos publicados entre os anos de 2000 a 2020 utilizando cultura primária de células cerebelares e modelo de
inflamação.

Fonte: Dados da pesquisa

Figura 3 – Periódicos que publicaram artigos científicos utilizando cultura primária de células cerebelares e seu fator de impacto (relatórios de citação de
periódicos de 2019).

Fonte: Dados da pesquisa

646 Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021

Machine Translated by Google
Abordagem prospectiva de culturas primárias de cerebelo como modelo de
estudo de neuroinflamação

Figura 4 – Países de filiação dos autores correspondentes dos artigos publicados com cultura primária de células cerebelares. O tamanho do
círculo é proporcional ao número de artigos publicados: reino unido (uk) (5 publicações), brasil (4 publicações), estados unidos da américa (3
publicações), itália (3 publicações). Os demais países destacados no mapa, china, japão, uruguai, turquia e dinamarca apresentaram um
artigo publicado cada um.

Fonte: Dados da pesquisa

Estudos in vitro usando cultura primária de células
cerebelares carecem de padronização da idade do animal ou
número de dias in vitro para cultura de células
A idade dos animais roedores (ratos e camundongos)
utilizados para cultura primária de células cerebelares variou de 1
a 8 dias pós-natal (P1 – P8) e o número de dias de cultura celular
in vitro para indução de inflamação e/ ou dano celular variou de 1
a 16 dias. Esses estudos também revelaram que existe uma
variação substancial entre os tempos adotados para ambos os
parâmetros (Tabela 1).
Protocolos usados para cultura primária de células
cerebelares não são padronizados
A avaliação do tipo de meio utilizado para cultura de células
cerebelares revelou que 80% dos protocolos adotaram o Meio
Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM) como meio base e 10%
meio DMEM F12 com alta concentração de glicose e aminoácidos
não essenciais.
No entanto, 10% usaram meios alternativos. Quanto aos
suplementos, 75% do meio base foi suplementado com soro fetal
bovino (FBS), 10% dos protocolos substituíram o FBS por
suplemento neurobasal (B27) ou o utilizaram como
associação com a FBS. Alguns protocolos (30%) utilizaram
concomitantemente FBS e soro equino (ES) na concentração 1:1
e 80% dos protocolos adicionaram alta concentração de cloreto de
potássio (KCl) ao meio base. Outros (65%) suplementaram com L-
glutamina/ GlutaMAX e 10% dos protocolos adicionaram outros
tipos de suplementos. Os valores percentuais dos suplementos
consideraram o número de vezes que apareceram nos estudos
incluídos (Tabela 1).
Cultura primária de células cerebelares tem sido utilizada
para diversas abordagens Esta prospecção dos artigos
demonstrou múltiplas aplicabilidades para cultura primária de
células cerebelares. A maioria dos artigos utilizados em cultura
primária de células cerebelares são relacionados ou
a Neuroinflamação (40%) estudos34-41 neurofarmacologia/
de neuroproteção, que não utilizam indutor inflamatório ou não
avaliam marcadores inflamatórios (35%) 42-48. Outros estudos
usaram cultura primária de células cerebelares para neurotoxicologia
(20%)40, 49 – 52 ou neurofisiologia (5%)53 (Tabela 1; Figura 5).

Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021 647

Machine Translated by Google

Lúcia Fonseca Santana et al.

Diferentes estímulos inflamatórios são empregados para %), seguido por interferon-ÿ (IFN-ÿ) (25%) e fator de necrose
induzir neuroinflamação em cultura primária de células tumoral-ÿ (TNF-ÿ) (25%). Outros estímulos inflamatórios
cerebelares como interleucina-1ÿ (IL1ÿ), ácido lipoteicóico (LTA),
Entre os oito estudos selecionados sobre neuroinflamação, dipeptídeo muramil (MDP), peptídeo ÿ-amilóide, príon (PrP) e
observamos que o LPS é o principal estímulo inflamatório meio condicionado microglia foram utilizados em 12,5% dos
aplicado em cultura primária de células cerebelares (62,5 estudos sobre neuroinflamação ( Tabela 1 ).

Tabela 1 – Resultados relevantes dos estudos incluídos

Campo de Cultura suplementos tipo de indução Idade do Dias in vitro Autores/ano

estudo (pontos-chave) médium animal (dias)/espécie (DIV)

Neurofarmacologia dos canais de DMEM FBS DCUKA ou DCUK P7/rato 7–8 SNELL
42
sódio sensíveis à voltagem. Ome ou e outros 2000

Estudo da Neuroinflamação/ DMEM FBS 5%; SH 5%; KC1 25mM; L- LTA; P7/ rato 8 KINSNER
34
Neurotoxicologia – Mecanismo de glutamina 2mM; HEPES MDP et ai. 2005
morte neural induzida pelo ácido lipoteicóico 0,5mM; glicose 13 mM
(LTA) e dipeptídeo muramil (MDP).

Estudo da Neuroinflamação. DMEM FBS 5%; SH 5%; KC1 25mM; L- LPS? IFN-ÿ; IL-1ÿ; P7/ rato 16 – 18 MANDER e
35
glutamina 2mM; TNF-ÿ MARROM 2005
HEPES 5mM; glicose 38
mM

Estudo da Neuroinflamação. DMEM FBS 5%; SH 5%; KCl 25 LPS; IFN-ÿ P7/ rato 16 – 18 MANDER
36
milímetros; L-glutamina 2mM; e outros 2005
HEPES 5mM; glicose 38
mM

Estudo da Neuroinflamação. sais de Glicose 14 mM; BSA 3 mg/ TNF-a; MGCM P 3–6/ rato 7 TAYLOR
37
Earle mL et ai. 2005
(MEM)
43
Neurofarmacologia – DMEM FBS 10%; KCl 25 mM 6-OHDA; H2O2 P1/ guerra 7–8 Ma et al. 2006
Neuroproteção mediada por CAPE.

Neurotoxicologia. DMEM FBS 5%; SH 5%; KC1 25mM; L- pesticidas P7/ rato 1 – 11 Hogberg e
52
glutamina 2mM; diversificados outros. 2009
HEPES 0,5mM; glicose 13
mM

Neurofarmacologia – DMEM FBS 5%; KCl 25 mM H2O2 _

P7/ 3 FUKUI
44
Neuroproteção induzida por rato et al.2012
Tocotrienóis.

Estudo da Neuroinflamação/ DMEM FBS 10%; KCl 25 mM LPS P 7–8/rato 7–8 FRANCO e
38
Neurofarmacologia – Neuroproteção MARKUS 2014
induzida pela melatonina.

Estudo da Neuroinflamação/ B27 KC1 25mM; GlutaMAX 5% LPS; peptídeo ÿ-amilóide P7/ rato 7 KLEMENTIEV
39
Neurofarmacologia – Propriedades e outros 2014
anti-inflamatórias do antagonista do
receptor de IL-1. .

Neurofarmacologia – DMEM FBS 10%; KC1 25mM; SH 10%; glicose metilmercúrio P5-P7/ rato 8 PAMPLONA
45
Neuroproteção induzida por compostos 5,5 mM e outros 2015
fenólicos das folhas de Swietenia macrophylla.

Neurofarmacologia – DMEM FBS 5%; SH 5%; KC1 25mM; L- peptídeo ÿ-amilóide/ P5-P7/ rato 7–9 VILALTA e
46
Neuroprotecção induzida pela glutamina 2mM; interrupção induzida por MARROM 2014
Desoxiglucose. HEPES 5mM; glicose 13 trauma/hipóxia
mM

Neurofisiologia – Fisiopatologia DMEM FBS 10%; KC1 25mM; frataxina P6/ rato 9 – 10 ABETI
53
mitocondrial na ataxia de Friedreich. B27; L-glutamina; et al. 2016
GlutaMAX

Neurofarmacologia – DMEM FBS 10%; KC1 25mM; H2O2 ; _ glutamato P7/ rato 6–7 TARAM, WINTER e
Neuroproteção induzida pelo ácido L-glutamina LINSEMAN
clorogênico e seus metabólitos. 51 e outros. 2016

Neurofarmacologia – DMEM/ FBS 10%; KC1 25mM; glutamato P8/ serra 3 LIMA PEREIRA
47
Neuroproteção induzida por F12 L-glutamina 2mM; e outros 2017
compostos de sementes de glicose 10%
Amburana cearensis .

Estudo da Neuroinflamação/ DMEM FBS 10%; KC1 25mM; PrP (90-231) P7/ rato 7 PROFUNDO
40
Neurotoxicologia L-glutamina 2 mM e outros 2017

neurotoxicologia DMEM B27 2%; L-glutamina 1%; peptídeo ÿ-amilóide P8/ rato 7 TERZIOGLU
D-glicose USAK
50
e outros 2017

648 Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021

Machine Translated by Google
Abordagem prospectiva de culturas primárias de cerebelo como modelo de estudo
de neuroinflamação

Campo de Cultura suplementos tipo de indução Idade do Dias in vitro Autores/ano

estudo (pontos-chave) médium animal (dias)/espécie (DIV)

neurotoxicologia DMEM FBS 10%; KC1 20 mM; BMK NT1 P8/ serra 7 – 16 SHEN
49
L-glutamina 10mM; e outros 2019
HEPES; glicose 25 mg/mL

Estudo da Neuroinflamação/ DMEM? FBS 10%; KC1 25mM; LPS P6/ rato 3 OLIVEIRA –
Neurofarmacologia – Neuroproteção F12 L-glutamina 2mM; JÚNIOR
41
induzida pelo lupeol. glicose 10% e outros 2019

Neurofarmacologia – DMEM KC1 20 mM; L-glutamina 25 H2O2 _ P6-P8/ serra 6 SANTI

48
Neuroproteção induzida por mM et ai. 2020
flavanonas preniladas.

FBS = soro bovino fetal; DUCKs = 4-ureido-5,7-dicloro-quinolinas N-substituídas; OMe = N,N-(difenil)-4-ureido-5,7-dicloro-2-carboxil metil éster; LTA = ácido lipoteicóico; MDP =
dipeptídeo muramil; HS = soro de cavalo; KCl = cloreto de potássio; HEPES = ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazina tanessulfônico; LPS = lipopolissacarídeo; IL = interleucina; IFN-ÿ
= interferon-ÿ; TNF-ÿ = fator de necrose tumoralÿÿ; IL-1ÿ = Interleucina-1ÿ; MGCM = meio microglial condicionado; CAPE = éster fenetílico do ácido cafeico; 6-OHDA = 6-
hidroxidopamina; H2O2 = peróxido de hidrogênio; NO = óxido nítrico; BSA = albumina sérica bovina; P = pós-natal; DMEM = Meio Eagle modificado por Dulbecco; PrP = príon; B27
= neurobasal suplementado; BMK NT1 = toxina do escorpião.

Fonte: dados da pesquisa

Figura 5 – Percentual de artigos científicos utilizando cultura primária de
células cerebelares para estudo de neuroinflamação ou outros objetivos.
2,74 – 10,74 e com diferentes escopos publicando estudos utilizando
sistema imunológico com o sistema nervoso; As publicações Cell Death
Fonte: Dados da pesquisa
DISCUSSÃO
Nessa prospecção, observamos que o uso da cultura primária de
células cerebelares iniciou-se no século XX . Isso pode ser devido aos
poucos conhecimentos sobre a biologia das células cerebelares e sua
função antes deste século54,55, e também devido ao aprimoramento
das técnicas de culturas primárias do SNC. A maioria dos estudos foi
desenvolvida principalmente na Europa, seguida da América do Norte e
do Sul, com pouca ou nenhuma representação de outros continentes.
Um número crescente de estudos foi publicado a partir de 2015. Esse
crescimento pode estar associado a novos achados sobre o papel do
cerebelo no comportamento cognitivo e emocional56,57, podendo
desenvolver atrofia da substância cinzenta cerebelar associada a
doenças neurodegenerativas58. Esse novo conhecimento o torna um
sistema atraente para estudar doenças neurais e alvos moleculares
para o desenvolvimento de novas terapias59.
citações de artigos publicados nos últimos dois anos em determinado
periódico indexado pelo Clarivate's Web of Science. Nesta prospecção
observamos revistas científicas com fator de impacto variando entre
cultura primária de células cerebelares. A revista Current Alzheimer
Research, por exemplo, cobre pesquisas biomédicas, incluindo
diagnóstico molecular e aspectos clínicos da DA; o Journal of
Neurochemical abrange trabalhos relacionados à neurociência, incluindo
sinalização, inflamação e doenças neurodegenerativas; O Journal of
Neuroinflammation concentra suas publicações nas interações do
& Disease concentram-se em pesquisas nas áreas de biologia molecular,
morte celular e doenças; Brain Research inclui publicações sobre
doenças neurodegenerativas e neuromodulação; a revista Life Sciences
enfoca bases moleculares e celulares; Journal of Neuroscience Research
abrange pesquisas sobre as conexões da estrutura e função do cérebro;
Journal of Neuro science cobre tópicos de interesse geral, especialmente
aqueles que lidam com o sistema nervoso; Toxicologia e Farmacologia
Aplicada abrange produtos químicos e drogas; Neurotoxicity Research
contém estudos em neurotoxicidade e geração de neurode; Toxicologia
apresenta pesquisas em toxicologia com ênfase nos mecanismos de
exposição; O Journal of Ethnopharmacology publica pesquisas
especialmente sobre compostos derivados de plantas e seus efeitos
farmacológicos; A International Immunpharmacology cobre pesquisas
nas áreas de imunologia, farmacologia e imunotoxicologia; a revista
Free Radical Research cobre artigos nas áreas de pesquisa de radicais
livres e espécies reativas; a revista European Journal of Medicinal
Chemistry cobre estudos em química medicinal; A revista Molecules
cobre pesquisas nas áreas de bioquímica e biologia molecular; Journal
of Pharmacology and Experimental Therapeutics cobre aspectos de
farmacologia e terapêutica. Há também perfis voltados para publicações
multidisciplinares como o PLoS One que abrange artigos de diversas
áreas de estudo e pesquisa.

O fator de impacto (FI) das revistas científicas é um índice

calculado que reflete o número médio anual de

Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021 649

Machine Translated by Google

Lúcia Fonseca Santana et al.

Os artigos que utilizaram cultura primária de células (FBS, B27, KCl), embora nenhum detalhasse o rendimento
cerebelares não deixaram claro o rendimento de neurônios na cultura.
celular, impossibilitando avaliar se o uso dos suplementos
A neurogênese no cerebelo do rato ocorre desde o estágio isoladamente ou em combinação confere culturas com bom
embrionário até o pós-natal60. Estudos de desenvolvimento rendimento para o estudo da neuroinflamação 70 .
mostram que os neurônios de Purkinje se diferenciam de Além disso, os achados de nossa prospecção demonstram falta
embriões de
atingindo
dez diasum
(E10)
pico61
máximo
e neurônios
de diferenciação
granulares ede E1559, de abordagens críticas na escolha de suplementos a serem
proliferação quinze dias após o nascimento (P15). Esse processo usados na cultura primária de cerebelo, bem como falta de
ocorre no P24 quando atinge a idade adulta62. Interneurônios padronização de protocolos.
como as células estrela, lugaro e cesta também se diferenciam Diferentes estímulos inflamatórios foram empregados em
na fase embrionária, enquanto a diferenciação das células de artigos sobre neuroinflamação. Dentre eles, o LPS 35,36,38,39,
Golgi ocorre na fase pós-natal63. Nessa prospecção, observamos 41 e as citocinas pró-inflamatórias35-37 foram os mais utilizados.
que os estudos empregaram células cerebelares entre P1 – P8. Os efeitos do LPS de bactérias gram-negativas e pró-citocinas
inflamatórias em células gliais, em especial micróglia e astrócitos,
Essa variabilidade corresponde às etapas da neurogênese é muito semelhante, uma vez que o reconhecimento molecular
descritas acima, empregadas nos diferentes protocolos de LPS por receptores gliais Toll-like resulta na produção de
analisados. Geralmente, esses estudos relatam a cultura primária mediadores pró-inflamatórios, como o óxido nítrico (NO) e
de células cerebelares como “cultura primária de células citocinas pró-inflamatórias como a interleucina IL-1ÿ, TNF-ÿ e
granulares” ou “cultura primária mista de neurônios e células gliais”. IFN-ÿ35 – 37.
Protocolos de cultura celular devem ser bem estabelecidos Abordagens técnicas atuais para estudar a desmielinização
para garantir comparabilidade e reprodutibilidade64. As e proteção de oligodendrócitos têm utilizado cultura organotípica
publicações muitas vezes fornecem informações vagas e tendem de cerebelo 71. Nesses estudos prospectivos, não foram
a ignorar parâmetros essenciais, como volume de troca do meio, identificados artigos caracterizando os oligodendrócitos ou
regime de manutenção e densidade de semeadura celular 65. A células precursoras de oligodendrócitos em cultura primária de
falta de padronização causa inconsistência nos resultados, células cerebelares. Uma vez que oligodendrócitos, micróglia e
principalmente em relação a parâmetros críticos, como taxas de astrócitos podem desempenhar um papel crucial na homeostase
crescimento, metabolismo e células fenótipo65,66. Aqui, cerebral e na função fisiológica 72, caracterizar as diferentes
observamos a predominância de um meio base e alguns subpopulações gliais em cultura primária seria de grande
suplementos na maioria dos estudos incluídos. Isso ocorreu relevância para o estudo de doenças neurodegenerativas.
independentemente do objetivo do estudo, incluindo
Neurofarmacologia / Neuroproteção Neuroexcitotoxicidade42, CONCLUSÃO
expressão gênica 50,52; degeneração e morte neuronal34,36 ;
Embora os modelos in vitro sejam incapazes de reproduzir
caminhos moleculares37,39 ; sinalização celular 30; ensaios de
os sistemas in vivo devido à sua complexidade, os estudos in
organelas 53; estudos de drogas neuroprotetoras45,51 e toxicidade 44,49.
vitro da neuroinflamação permitem a compreensão mecanística
Meios basais como DMEM e DMEM/ F12 devem ser
das doenças neurodegenerativas. Nessa prospecção,
suplementados com vários fatores para manter as células vivas
apresentamos uma diversidade de estudos utilizando cultura
por longos períodos e permitir a avaliação da proliferação,
primária de células cerebelares, demonstrando que há uma
migração e diferenciação celular67. O FBS é o mais empregado,
tendência de ampliar o uso desse sistema simples e de fácil
apesar das controvérsias quanto ao seu uso68.
execução e sua aplicabilidade em estudos de neuroinflamação.
No entanto, serve para a maioria dos propósitos e contém fatores
Além disso, observou-se que faltam estudos que identifiquem a
de crescimento, proteínas, vitaminas, oligoelementos, hormônios,
presença de oligodendrócitos em cultura primária de células
etc., essenciais para o crescimento e manutenção celular 68.
cerebelares e forneçam informações sobre o rendimento celular.
Alguns protocolos têm usado como alternativa o B27, que contém
hormônios esteróides e não esteróides assim como antioxidantes.
Este suplemento demonstrou aumentar a taxa de neurônios 69,
AGRADECIMENTOS
minimizar o estresse oxidativo e evitar o uso de altas
concentrações de KCl, que é comumente empregado em culturas We thank the following funding agencies: the Consel ho
primárias de células cerebelares para aumentar o tempo de Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
sobrevivência celular, principalmente de neurônios granulares. and the Post-graduation Program of immunology.
B27 pode ser usado combinado com soro bovino fetal para V.D.A.S and S.L.C. thank Conselho Nacional de Desenvolvi
otimizar culturas neuronais. A maioria dos protocolos analisados mento Científico e Tecnológico (CNPq E. Universal/ 2018 –
nesta prospecção complementada com FBS e KCl. No entanto, 429127/2018-9; and CNPq – Research Fellowship t 07539/2018-0
alguns protocolos empregaram apenas B27 ou BSA 37,41,50. to S.LC.) for the support.
Acreditamos que esse fato possa estar relacionado à escolha de
uma cultura livre de FBS
um componente
68 , uma vezmal
quedefinido
o soro geralmente
nos meios de
é REFERÊNCIAS
cultura celular. Além disso, pode apresentar concentrações 1 STEPHENSON, J. et al. Inflamação em doenças neurodegenerativas do
variáveis de proteínas e fatores de crescimento. SNC. Immunology, [Sl], v. 154, n. 2, pág. 204-219, junho de 2018. ISSN:
Curiosamente, um estudo associou os três suplementos 0019-2805 (impresso).

650 Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021

Machine Translated by Google
Abordagem prospectiva de culturas primárias de cerebelo como modelo de
estudo de neuroinflamação
2 CURRAIS, A. et al. Agregação de proteína intraneuronal como um gatilho para
inflamação e neurodegeneração no cérebro envelhecido. FASEB j., Betesda, v. 31, n. 1,
pág. 5-10, janeiro de 2017.
3 ALTMANN, DM Neuroimunologia e neuroinflamação em doenças autoimunes,
neurodegenerativas e psiquiátricas. Em: (Ed.). Imunologia: © 2018 John Wiley & Sons
Ltda. 2018. v.154. p.167-168.
4 NAJJAR, S. et al. Neuroinflamação e doença psiquiátrica. J. Neuroin flammation,
Londres, v. 10, p. 43, abril de 2013. ISSN: 1742-2094.
5 THIBAUT, F. Neuroinflamação: novas perspectivas para pesquisa neuropsiquiátrica.
Diálogos Clin. Neurosci., Neuilly-sur-Seine, v. 19, n. 1, pág. 3-4, março de 2017. ISSN:
1294-8322 (impresso).
6 GLASS, CK et al. Mecanismos subjacentes à inflamação na geração de neurônios.
Cell, Londres, v. 140, n. 6, pág. 918-34, 19 de março de 2010. ISSN: 0092-8674
(impresso).
7 KEMPURAJ, D. et al. A neuroinflamação induz a neurodegeneração.
J. Neurol. Neurocirurg. Espinha, [Sl], v. 1, n. 1, 2016.
8 BIBER, K. et al. Os sinais neuronais 'On' e 'Off' controlam a microglia.
Trends Neurosci., Cambridge, v. 30, n. 11, pág. 596-602, novembro de 2007. ISSN:
0166-2236 (impresso).
9 RANSOHOFF, RM Como a neuroinflamação contribui para a geração de neurodos.
Ciência, [Sl], v. 353, n. 6301, pág. 777-83, agosto de 2016. ISSN: 0036-8075.
10 DELIC, V. et al. Ligações biológicas entre traumatismo cranioencefálico e doença de
Parkinson. Acta Neuropathol. Comun., v. 8, n. 1, pág. 45 de abril
2020. ISSN: 2051-5960.
11 JAYARAJ, RL et al. Neuroinflamação: amiga e inimiga do AVC isquêmico. J.
Neuroinflamm., Londres, v. 16, n. 1, pág. 142, julho de 2019. ISSN: 1742-2094.
12 SOWERS, JL et al. O papel da inflamação no câncer cerebral. Adv. Exp.
Med. Biol., Nova York, v. 816, p. 75-105, 2014. ISSN: 0065-2598 (Impresso).
13 NORDEN, DM et al. O crescimento do tumor aumenta a neuroinflamação, fadiga e
comportamento do tipo depressivo antes de alterações na função muscular.
Comportamento cerebral. Immun., San Diego, v. 43, p. 76-85, janeiro de 2015.
ISSN: 0889-1591 (Impresso).
14 TOHIDPOUR, A. et al. Neuroinflamação e infecção: mecanismos moleculares
associados à disfunção da unidade neurovascular. Frente.
Célula. Infectar. Microbiol., [Sl], v. 7, p. 276, 2017. ISSN: 2235-2988.
15 CHEN, WW; ZHANG, X.; HUANG, WJ Papel da neuroinflamação em doenças
neurodegenerativas (revisão). Mol. Med. Rep., [Sl], v. 13, n. 4, pág. 3391-3396, abr.
2016. ISSN: 1791-2997 (Impresso).
16 LEE, Y. et al. Papéis significativos da neuroinflamação na doença de Parkinson:
alvos terapêuticos para a prevenção da DP. Arco. farm. Res., Seul, v. 42, n. 5, pág.
416-425, maio de 2019. ISSN: 0253-6269 (impresso).
17 HENEKA, MT et al. Neuroinflamação na doença de Alzheimer.
Lancet Neurol., Londres, v. 14, n. 4, pág. 388-405, abril de 2015. ISSN 1474-4422
(impresso).
18 JELLINGER, KA Mecanismos básicos da neurodegeneração: uma atualização crítica.
J. Cell. Mol. Med., Bucareste, v. 14, n. 3, pág. 457-487, março de 2010.
ISSN: 1582-1838 (impresso).
19 ZURIQUE, MG; MONNET-TSCHUDI, F. Contribuição dos estudos de neurotoxicologia
in vitro para a elucidação de processos neurodegenerativos. Cérebro Res. Bull.,
Phoenix, v. 80, n. 4-5, pág. 211-216, outubro de 2009. ISSN: 0361-9230.
20 SHEPPARD, O.; COLEMAN, MP; DURRANT, CS A neuroinflamação induzida por
lipopolysaccha ride induz ruptura pré-sináptica por meio de uma ação direta no tecido
cerebral envolvendo a interleucina 1 derivada da micróglia
Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021
beta. J. Neuroinflamm., Londres, v. 16, n. 1, pág. 106, 18 de maio de 2019. ISSN
1742-2094.
21 SHARMA, S. et al. Efeito de tóxicos ambientais nas funções neuronais. Ambiente.
ciência Poluir. Res. Int., [Sl], v. 27, n. 36, pág. 44906-44921, dez. 2020. ISSN:
0944-1344.
22 SANTOS, CC et al. O aminocromo induz a ativação da microglia e dos astrócitos.
Tóxico. In Vitro, Nova York, v. 42, p. 54-60, agosto de 2017. ISSN: 0887-2333.
23 DE MIRANDA, BR; GREENAMYRE, JT Resposta à rotenona e doença de parkinson;
sensibilidade reduzida em mulheres. Tóxico. Sci., Estados Unidos, v.170, 2019. p.563.
24 HERCULANO-HOUZEL, S. A relação glia/ neurônio: como ela varia uniformemente
entre estruturas e espécies cerebrais e o que isso significa para a fisiologia e evolução
do cérebro. Glia, Nova York, v. 62, n. 9, pág. 1377-1391, setembro de 2014. ISSN:
0894-1491.
25 KEEFE, MG; NOWAKOWSKI, TJ Expansão evolutiva das zonas germinais
cerebelares humanas. Trends Neurosci., Cambridge, v. 43, n. 2, pág.
75-77, fevereiro de 2020. ISSN: 0166-2236.
26 GOSHI, N. et al. Um modelo primário de cultura de células neurais para estudar
interações de neurônios, astrócitos e microglia na neuroinflamação. J. Neuroin flamm.,
Londres, v. 17, n. 1, pág. 155, maio de 2020. ISSN: 1742-2094.
27 SEIL, FJ O sistema nervoso mutável: estudos sobre neuroplasticidade em culturas
cerebelares. Neurosci. Biocomportamento. Rev., Nova York, v. 45, p. 212-232,
setembro de 2014. ISSN: 0149-7634.
28 BARBOSA, J. et al. Modelos in vitro para pesquisa em neurotoxicologia.
Tóxico. Res., [Sl], v. 4, p.801-842, 2015.
29 HUMPEL, C. Culturas organotípicas de fatias cerebrais: uma revisão. Neurociência,
[sl], v. 305, p. 86-98, outubro de 2015.
30 FRICKER, M.; OLIVA-MARTÍN, MJ; BROWN, GC A fagocitose primária de neurônios
viáveis pela microglia ativada com LPS ou Aÿ é dependente da sinalização fagocítica
calreticulina/ LRP. J. Neuroinflamm., Londres, v. 9, p. 196, agosto de 2012. ISSN:
1742-2094.
31 SLANZI, A. et al. Modelos in vitro de Doenças Neurodegenerativas. Frente.
Célula. Dev. Biol., [Sl], v. 8, p. 328, 2020.
32 NETWORK, E. PRISMA (2009) lista de verificação para relatar revisões sistemáticas
e metanálises. J. ASEAN Fed. Endocr. Soc., [Sl], v. 30, p. 196, 2015.
33 OUZZANI, M. et al. Rayyan, um aplicativo web e móvel para revisões sistemáticas.
Sist. Rev., [Sl], v. 5, n. 1, pág. 210, dezembro de 2016.
34 KINSNER, A. et al. A neurodegeneração inflamatória induzida pelo ácido lipoteicóico
de Staphylococcus aureus é mediada pela ativação da glia, estresse nitrosativo e
oxidativo e ativação de caspases. J. Neurochem., Oxford, v. 95, n. 4, pág. 1132-1143,
novembro de 2005. ISSN: 0022-3042 (impresso).
35 MANDER, P.; BROWN, GC A ativação da NADPH oxidase microglial é sinérgica com
a expressão iNOS glial na indução da morte neuronal: um mecanismo de chave dupla
da neurodegeneração inflamatória. J. Neuroinflamm., Londres, v. 2, p. 20 de setembro
de 2005. ISSN: 1742-2094.
36 MANDER, P. et al. O óxido nítrico da glia ativada por inflamação sinergiza com a
hipóxia para induzir a morte neuronal. J. Neurosci. Res., Nova York, v. 79, n. 1-2, pág.
208-15, Jan. 2005. ISSN: 0360-4012 (Impresso).
37 TAYLOR, DL et al. A estimulação do receptor de glutamato metabotrópico microglial
mGlu2 desencadeia a neurotoxicidade induzida pelo fator de necrose tumoral alfa em
conjunto com o ligante Fas derivado da microglia. J. Neurosci., Baltimore, v. 25, n. 11,
pág. 2952-2964, março de 2005. ISSN: 0270-6474 (impresso).
651
Machine Translated by Google
Lúcia Fonseca Santana et al.
38 FRANCO, DG; MARKUS, RP O estado celular determina o efeito da melatonina na
sobrevivência da cultura mista de células cerebelares. PLos ONE, São Francisco, v. 9, n. 9,
pág. e106332, 2014. ISSN: 1932-6203.
39 KLEMENTIEV, B. et al. Propriedades anti-inflamatórias de um novo peptídeo antagonista do
receptor da interleucina 1. J. Neuroinflamm., Londres, v. 11, p.
27 de fevereiro de 2014. ISSN: 1742-2094.
40 THELLUNG, S. et al. Diferentes mecanismos moleculares medeiam efeitos neurotóxicos
diretos ou dependentes da proteína príon do fragmento 90-231 da glia em neurônios granulares
cerebelares. Neurotox. Res., [Sl], v. 32, n. 3, pág. 381-397, outubro de 2017. ISSN: 1029-8428.
41 OLIVEIRA-JUNIOR, MS et al. O lupeol inibe a neuroinflamação induzida por LPS em
culturas cerebelares e induz neuroproteção associada à modulação da resposta dos astrócitos
e expressão de fatores neurotróficos e inflamatórios. Int. Immunopharmacol., Amsterdam, v.
70, p. 302-312, maio de 2019. ISSN: 1567-5769.
42 SNELL, LD et al. Nova estrutura com ações antagonistas tanto no sítio de glicina do receptor
N-metil-D-aspartato quanto nos canais neuronais de sódio sensíveis à voltagem: caracterização
bioquímica, eletrofisiológica e comportamental. J. Pharmacol. Exp. Ther., Baltimore, v. 292, n.
1, pág. 215-227, janeiro de 2000.
43 MA, Z. et al. O éster fenetílico do ácido cafeico bloqueia a geração de radicais livres e a
neurotoxicidade induzida por 6-hidroxidopamina. Life Sci., Oxford, v. 79, n. 13, pág. 1307-1311,
agosto de 2006.
44 FUKUI, K. et al. Os tocotrienóis previnem a degeneração axônica e dendrítica induzida por
peróxido de hidrogênio nas células granulares cerebelares. Free Radic Res., Yverdon, v. 46,
n. 2, pág. 184-193, fevereiro de 2012. ISSN: 1029-2470.
45 PAMPLONA, S. et al. In Vitro Efeitos citoprotetores e capacidade antioxidante de compostos
fenólicos das folhas de Swietenia macro phylla. Moléculas, Basel, v. 20, n. 10, pág.
18777-18788, out. 2015. ISSN: 1420-3049.
46 VILALTA, A.; BROWN, GC A desoxiglicose previne a neurodegeneração em cultura ao
eliminar a micróglia. J. Neuroinflamm., Londres, v. 11, p.
58, março. 2014. ISSN: 1742-2094.
47 LIMA PEREIRA É, P. et al. O extrato da semente de Amburana cearensis protege as
mitocôndrias cerebrais do estresse oxidativo e as células cerebelares da excitotoxicidade
induzida pelo glutamato. J. Ethnopharmacol., Limerick, v. 209, pág. 157-166, set. 2017. ISSN:
0378-8741.
48 SANTI, MD et al. Efeitos neuroprotetores de flavanonas preniladas isoladas de espécies
Dalea, estudos in vitro e in silico. EUR. J. Med.
Chem., Paris, v. 206, pág. 112718, nov. 2020. ISSN: 0223-5234.
49 SHEN, L. et al. A neurotoxicidade induzida por BmK NT1 é mediada pela ativação de ERK1/2
e p38 dependente de PKC/ CaMKÿ em células granulares cerebelares cultivadas primárias.
Toxicologia, [Sl], v. 421, p. 22 a 29 de junho de 2019.
50 TERZIOGLU-USAK, S. et al. Modelo Celular da Doença de Alzheimer: O peptídeo Aÿ1-42
induz a deposição de amilóide e uma diminuição na expressão da topoisomerase iiÿ e nurr1.
atual Alzheimer Res., [Sl], v. 14, n. 6, pág. 636-644, 2017. ISSN: 1567-2050.
51 TARAM, F.; INVERNO, UM; LINSEMAN, DA Neuroproteção comparação de ácido
clorogênico e seus metabólitos contra agentes indutores de morte celular mecanisticamente
distintos em neurônios grânulos cerebelares cultivados.
Brain Res., Amsterdam, v. 1648, n. Parte A, pág. 69-80, outubro de 2016.
52 HOGBERG, HT et al. Expressão gênica como um ponto final sensível para avaliar a
diferenciação celular e maturação do sistema nervoso central em desenvolvimento em culturas
primárias de células granulares cerebelares de ratos (CGCs) expostas a pesticidas. Tóxico.
Appl. Pharmacol., New York, v. 235, n. 3, pág. 268-286, março de 2009. ISSN: 0041-008x.
652
53 ABETI, R. et al. 'Desequilíbrio energético mitocondrial e peroxidação lipídica causam morte
celular na ataxia de Friedreich'. Morte Celular Dis, [Sl], v. 7, n. 5, pág. e2237, maio de 2016.
54 WANG, VY; ZOGHBI, HY Regulação genética do desenvolvimento cerebelar. Nat. Rev.
Neurosci., Londres, v. 2, n. 7, pág. 484-91, julho de 2001.
ISSN; 1471-003X (impresso).
55 REEBER, SL; OTIS, TS; SILLITOE, RV Novos papéis para o cerebelo na saúde e na
doença. Front Syst Neurosci., [Sl], v. 7, p. 83, 2013. ISSN: 1662-5137 (impresso).
56 GILL, JS; SILLITOE, RV Resultados funcionais das malformações cerebelares. Front Cell
Neurosci., v. 13, p. 441, 2019. ISSN: 1662-5102.
57 MITOMA, H.; MANTO, M.; GANDINI, J. Avanços recentes no tratamento de distúrbios
cerebelares. Brain Sci., Cambridge, v. 10, n. 1 de dezembro
2019. ISSN: 2076-3425 (Impresso).
58 GELLERSEN, HM et al. Atrofia cerebelar em neurodegeneração - uma meta-análise. J.
Neurol. Neurocirurg. Psychiatry, Londres, v. 88, n. 9, pág.
780-788, setembro de 2017. ISSN: 0022-3050.
59 ESPINOSA, JS; LUO, L. Timing neurogênese e diferenciação: insights de análises clonais
quantitativas de células granulares cerebelares. j.
Neurosci., Baltimore, v. 28, n. 10, pág. 2301-2312, março de 2008.
60 DUSART, I.; FLAMANT, F. Alterações morfológicas e funcionais profundas das células de
Purkinje de roedores entre a primeira e a segunda semanas pós-natal: uma metamorfose?
Frente. Neuroanat., Lausanne, v. 6, p.
11, 2012. ISSN: 1662-5129.
61 HASHIMOTO, M.; MIKOSHIBA, K. A compartimentação mediolateral do cerebelo é
determinada na “data de nascimento” das células de Purkinje.
J. Neurosci., Baltimore, v. 23, n. 36, pág. 11342-11351, dez. 2003. ISSN: 0270-6474 (impresso).
62 HEINSEN, H. Estudos anatômicos quantitativos sobre o desenvolvimento pós-natal do
cerebelo do rato albino. Anat. Embryol., Berlin, v. 151, n. 2, pág. 201-218, outubro de 1977.
ISSN: 0340-2061 (impresso).
63 MARZBAN, H. et al. Comprometimento celular no cerebellum em desenvolvimento. Frente.
Célula. Neurosci., [Sl], v. 8, p. 450, 2014. ISSN: 1662-5102 (Impresso).
64 ESKES, C. et al. Boas práticas de cultura de células e toxicologia in vitro. Tóxico.
Em. Vitro, Nova York, v. 45, n. Parte 3, pág. 272-277, dezembro de 2017. ISSN: 0887-2333.
65 KUSENA, JWT et al. A importância da padronização dos parâmetros da cultura celular: uma
avaliação da robustez da linha celular de referência 2102Ep. Bioengenharia, [Sl], v. 12, n. 1,
pág. 341-357, dezembro de 2021.
ISSN: 2165-5979.
66 SCHILLING, M. et al. Padronização de protocolos experimentais. atual
Opin. Biotechnol., Londres, v. 19, n. 4, pág. 354-359, agosto de 2008. ISSN: 0958-1669
(impresso).
67 YAO, T.; ASAYAMA, Y. Meios de cultura de células animais: história, características e
atualidades. Reprod. Med. Biol., Tóquio, v. 16, n. 2, pág. 99-117, abril de 2017. ISSN:
1445-5781 (impresso).
68 VAN DER VALK, J. et al. Otimização de meios de cultura de células quimicamente definidos
- substituindo o soro bovino fetal em métodos in vitro de mamíferos.
Tóxico. Em. Vitro, Nova York, v. 24, n. 4, pág. 1053-1063, junho de 2010. ISSN: 0887-2333.
69 BREWER, GJ et al. A melhoria do meio NbActiv4 para Neurobasal/ B27 aumenta as
densidades de sinapses neuronais e as taxas de pico de rede em matrizes de múltiplos
eletrodos. J. Neurosci. Métodos, Amsterdam, v. 170, n. 2, pág. 181-187, maio de 2008. ISSN:
0165-0270 (impresso).
Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021
Machine Translated by Google
Abordagem prospectiva de culturas primárias de cerebelo como modelo de
estudo de neuroinflamação

70 AHLEMEYER, B.; BAUMGART-VOGT, E. Protocolos otimizados para a
preparação simultânea de culturas neuronais primárias do neocórtex, hipocampo e
cerebelo de camundongos C57Bl/ 6J recém-nascidos individuais (P0.5). J.
Neurosci. Métodos, Amsterdam, v. 149, n. 2, pág. 110-20, dez.
2005. ISSN: 0165-0270 (Impresso).
a resposta neuroinflamatória microglial e aumenta a remielinização.
Pharmacol. Res., Londres, v. 159, p. 104997, setembro de 2020.
72 YANG, QQ; ZHOU, JW Neuroinflamação no sistema nervoso central: sinfonia
de células gliais. Glia, Nova York, v. 67, n. 6, pág. 1017-1035, junho de 2019.

71 DE ALMEIDA, MMA et al. O flavonoide agatisflavona modula

Apêndice 1
Estratégia de busca na base
de dados ¾ LILACS-BVS: termos DeCS/ MeSH e
categorias (mh:cerebelo or(cerebelo) OR (cerebellum) OR mh:a08.186.211.132.810.428.200* ) AND (mh:”In vitro” OR mh:e05 0,481*)

¾ Pubmed: termos MeSH e sinônimos

((“inflammations”[All Fields]) OR “brain inflamations”[All Fields]) OR Neuroinflammation[All Fields] OR (“nerve de generation”[MeSH Terms]
OR (“nerve”[ Todos os campos] AND “degeneração”[Todos os campos]) OU “degeneração nervosa”[Todos os campos]
OU “neurodegeneração”[Todos os campos])) E (“Cerebelo”[Malha] OU (“cerebelo”[Termos do MeSH] OU “cerebelo”[Todos
Fields] OR “cerebellums”[All Fields]) OR (“cerebellum”[MeSH Terms] OR “cerebellum”[All Fields] OR (“corpus”[All Fields]
E “cerebelo”[Todos os campos]) OU “corpo cerebelo”[Todos os campos]) OU (“cerebelo”[Termos do MeSH] OU “cerebelo”[Todos os campos]
OU (“cerebelo”[Todos os campos] E “corpo”[Todos os campos]) OU “cerebelo, corpo”[Todos os campos]) OU (“cerebelo”[Termos MeSH]
OU “cerebelo”[Todos os campos] OU (“cerebelo”[Todos os campos] E “corpo”[Todos os campos])) OU (“cerebelo”[Termos do MeSH] OU
“cerebelo”[Todos os campos] OU (“corpo”[ Todos os campos] AND “cerebelo”[Todos os campos])) OU (“cerebelo”[Termos MeSH] OU
“cerebelo”[Todos os campos] OU “parencéfalo”[Todos os campos]) OU (“cerebelo”[Termos MeSH] OU “ cerebelo”[Todos os campos])))
E “In vitro” [Malha]

¾ Embase-Elsiever: termos Emtree e sinônimos

(''inflamação/ exp OR (inflamação, AND cérebro) OR neuroinflamação OR neurodegeneração) AND ('cerebelo'/ exp OR (cerebelar AND
organização) OR (cerebelar AND organização)) AND 'em técnicas in vitro'/ exp

¾ Web of Science
(((TS = (Neuroinflamação* OU Neurodegeneração (Cerebelo E (In vitro))))))

¾ Patentscope (WIPO)
FP:(neuroinflamação AND cerebelo AND in vitro)

Rev. Ciênc. Méd. Biol., Salvador, v. 20, n. 4, p. 643-653, 2021 653