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Universidade Federal de So Joo del-Rei

Engenharia de Bioprocessos
Bioqumica do Metabolismo

Cadeia transportadora de
eltrons e fosforilao oxidativa
Juliano Lemos Bicas

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

Introduo
Catabolismo de carboidratos
Formao de ATP e cofatores reduzidos (NADH, FADH2)
ATP

ATP

2 CO2

Glicose

2Piruvato
2 NADH

ATP ATP
ATP

Saldo (por glicose):


- 4 ATP
- 10 NADH
- 2 FADH2

ATP

2Acetil-CoA

Ciclo de
Krebs

4 CO2
6 NADH
2 FADH2

2 NADH

2 GTP
ATP
ATP

Maior parte da energia = coenzimas reduzidas

Introduo
Cadeia transportadora de eltrons (CTE):
Reoxidao dos cofatores reduzidos (NADH e FADH2);
Eltrons transportados at O2 (aceptor final), que reduzido a H2O;
Gradiente de H+ impulsiona sntese de ATP (fosforilao oxidativa).

Fosforilao oxidativa:
Estgio final da respirao celular (organismos aerbicos);
Etapas oxidativas da degradao CH, aa e AG convergem para ela;
Utilizao da energia de oxidao para sntese de ATP;

Membrana mitocondrial interna (eucariotos)


Membrana citoplasmtica interna (procariotos)

Introduo
Mitocndria:

Stio do metabolismo oxidativo em eucariotos:


- Compl. pir.
desidr.
- CK
- -oxidao
- CTE/FO

Introduo
Mitocndria:
Membrana externa:
- Porinas: difuso livre de molculas de at ~10kDa (no especfico)

Membrana interna:
- Livremente permevel apenas a O2, CO2 e H2O
- Impermevel maioria das substncias hidroflicas
- Protenas de transporte controlam passagem de ATP, piruvato, Ca2+, Pi etc.
- Permite gradientes inicos e compartimentalizao (citossol x mitocndria)
CITOSSOL

Pi

ADP

ATP
MATRIZ

OH

Dicarboxilatos

Tricarboxilatos

Pi ou
Malato
Dicarboxilatos

OH

Piruvato

Ca2+
Glutamato

OH ou
Aspartato

2Na+

Ca2+

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

Entrada do NADH na mitocndria


Membrana mitocondrial interna = impermevel ao NADH
Lanadeira malato-aspartato
Aspartato
aminotransferase

CITOSSOL

MATRIZ

H+ + NADH
Oxalacetato

Malato
desidrogenase

Via glicoltica
NAD+

Aspartato

Glutamato

-Cetoglutarato

Malato

Aspartato

Glutamato

-Cetoglutarato

Malato

Carregador
glutamatoaspartato
Aspartato
aminotransferase

Malato
desidrogenase

Oxalacetato
H+ + NADH

NAD+

Carregador
malato-cetoglutarato

Entrada do NADH na mitocndria


Membrana mitocondrial interna = impermevel ao NADH
Lanadeira glicerol-fosfato (1,5 ATP/NADH)
CITOSSOL

NAD+

H+ + NADH

Via glicoltica

Glicerol-3-fosfato desidrogenase

Glicerol-3-fosfato

Diidroxicetona-fosfato

Flavoprotena desidrogenase

FAD
2+

Fe -S
CoQ

MATRIZ

FADH
2
3+
Fe -S

CoQH2

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

CTE e fosforilao oxidativa


Viso geral

4H+
+

4H+

2H+

H+

Espao
intermembrana
+

I
e

CoQ

II

FADH2
NADH + H

IV

III

+
2H+ 2H

Membrana
interna

Matriz
mitocondrial

2H+ O + 2H+ H O
2
2

2H+
ADP + Pi

ATP
H+

Cadeia transportadora de eltrons


Componetes da CTE e respectivos grupos prostticos
e

Complexo I (NADH-CoQ redutase)


- FMN
- 6 ou 7 centros FeS

Complexo II (Succinato-CoQ redutase)


- FAD
- 3 centros FeS
- Citocromo b560

Coenzima Q (CoQ) ou ubiquinona componente no protico


Complexo III (CoQ-citocromo c redutase)
- Citocromos b (bH e bL) e c1
- Centro Fe-S (centro de Rieske)

Citocromo c
Complexo IV (Citocromo c oxidase)

e
O2

- Citocromos a e a3
- ons cobre

Cadeia transportadora de eltrons


Centros Ferro-Enxofre
Grupo prosttico de protenas ferro-enxofre
Centros de Rieske = 2 His (> pot. reduo)

Cadeia transportadora de eltrons


Espao
intermembrana

Complexo I (NADH desidrogenase)

2H+

2H+

Membrana
interna

Matriz
mitocondrial

CoQ (ox)

2e

FeS (red)
2H+

FeS (ox)

NADH + Q + 5H+matriz
NAD+ + QH2 + 4H+citoplasma

FMN

NADH

FMNH2
NAD+

H+

2H+

CoQH2 (red)

Cadeia transportadora de eltrons


Complexo II
Espao
intermembrana

2e

CoQ (ox)

cit b560
FeS (red)

Matriz
mitocondrial

CoQH2 (red)

FAD
2H+
Succinato

FeS (ox)

FADH2
2H+
Fumarato

Cadeia transportadora de eltrons


Coenzima Q

H+ + e

H+ + e

Cadeia transportadora de eltrons


Citocromos

Protenas com atividade redox

No ocorre em alguns anaerbicos obrigatrios


Grupos heme

Cadeia transportadora de eltrons


Complexo III
Espao
intermembrana

Citocromo
c (ox)

H+

Citocromo
c (red)

cit c1 (red)

cit c1 (ox)

FeS (ox)

QH2
e

2 e

Ciclo Q

FeS (red)
cit bL (ox)
cit bL (red)
cit bH (ox)

Matriz
mitocondrial

H+

cit bH (red)
Centro de Rieske [2Fe-2S]

Cadeia transportadora de eltrons


Ciclo Q
QH

matriz

H+

cit b

III

e
e

QH
e

QH2
H+

H+

cit c1

Citocromo c

Citocromo c

Espao intermembranas
matriz

H+
QH

Q
2

Fe-S

III

cit b

QH
e

QH2
H+

Fe-S
H+

cit c1

Espao intermembranas

Cadeia transportadora de eltrons


Complexo III

2
Citocromo
c (ox)

Espao
intermembrana 4H+

2e
cit c1 (red)

2
Citocromo
c (red)

cit c1 (ox)

FeS (ox)

Qpool
e

2 e

FeS (red)
cit bL (ox)
cit bL (red)
cit bH (ox)

Matriz
mitocondrial

2H+

cit bH (red)

QH2 + 2 cit c (ox) + 2H+matriz Q + 2 cit c (red) + 4H+citoplasma

Cadeia transportadora de eltrons


Complexo IV (citrocromo c oxidase)
Espao intermembrana

2H+

2
Citocromo
c (red)

2
Citocromo
c (ox)

2e

centro CuA
2e

heme a
2e

heme a3 - CuB

Matriz mitocondrial

O2

2H+

2H+

H2O

2 cit c (red) + 4H+matriz + O2 2 cit c (ox) + H2O + 2H+citoplasma

Cadeia transportadora de eltrons


Complexo IV (citrocromo c oxidase)

heme a3

CuB
Tyr

Cadeia transportadora de eltrons


Resumo
4H+
+

4H+

2H+

Espao
intermembrana
+
+

~ 0,1-0,2V

CoQ

II

FADH2
NADH + H

IV

III

+
2H+ 2H

pH ~ 0,75

Matriz
mitocondrial

2H+ O + 2H+ H O
2
2

2H+

Gradiente eletroqumico = fora prton-motriz


sntese de ATP

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

Fosforilao oxidativa
Retorno dos H+ p/ matriz = ATP sintase

H+

H+

++++++++++

ATP sintase

ADP + Pi

H+

H+

H+

+
+
H
H
H
+
+
H
H
+
+
H
H
+

++++++++++

H+
ATP

Fosforilao oxidativa
A ATP sintase (Complexo V)
F1

matriz

citoplasma

Fo

Fosforilao oxidativa
A ATP sintase (Complexo V)
Mecanismo de sntese de ATP

3H+citoplasma Fo (giro) 3H+matriz

1 volta Fo = 3 ATP

Fosforilao oxidativa
Rendimento da oxidao da glicose
3 H+ 1 ATP (ATP sintase)
1 H+ transporte de Pi, ADP e ATP pela membrana mitocondiral
4 H+ = sntese 1 ATP

Razo P/O:
NADHmitocondrial 10 H+ 1 NADH = 10/4 ATP = 2,5 ATP (ou 3?)
FADH2 6 H+ 1 NADH FADH2 = 6/4 ATP = 1,5 ATP (ou 2?)
NADHcitossol (Lanadeira mal.-asp.) 9 H+ 1 NADH = 9/4 ATP ~ 2,3 ATP
NADHcitossol (Lanadeira glic.-fosf.) 6 H+ 1 NADH = 6/4 ATP = 1,5 ATP

Fosforilao oxidativa
Rendimento da oxidao da glicose (estimativa tradicional)
Gliceraldedo-3-P 1,3-bifosfoglicerato

2NADH

6 ou 4 ATP

1,3-Bifosfoglicerato 3-fosfoglicerato

2ATP

2 ATP

Piruvato acetil-CoA

2NADH

6 ATP

Isocitrato -cetoglutarato

2NADH

6 ATP

-Cetoglutarato succinil-CoA

2NADH

6 ATP

Succinil-CoA succinato

2GTP

2 ATP

Succinato fumarato

2FADH2

4 ATP

Malato oxalacetato

2NADH

6 ATP

Glicose + 6O2 6CO2 + 6H2O

36 ou 38 ATP

Fosforilao oxidativa
Rendimento da oxidao da glicose (atualmente)
Gliceraldedo-3-P 1,3-bifosfoglicerato

2NADH

4,6 ou 3 ATP

1,3-Bifosfoglicerato 3-fosfoglicerato

2ATP

2 ATP

Piruvato acetil-CoA

2NADH

5 ATP

Isocitrato -cetoglutarato

2NADH

5 ATP

-Cetoglutarato succinil-CoA

2NADH

5 ATP

Succinil-CoA succinato

2GTP

2 ATP

Succinato fumarato

2FADH2

3 ATP

Malato oxalacetato

2NADH

5 ATP

Glicose + 6O2 6CO2 + 6H2O

31,6 ou 30 ATP

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

Controle da produo de ATP


CTE esta acoplada fosforilao oxidativa
- e no fluem pela CTE sem concomitante ao ATP-sintase

Reao da citocromo c oxidase (COX) irreversvel


- Ponto de controle da fosforilao oxidativa
- [NADH]/[NAD+] ou [ATP]/[ADP][Pi] = COX
Mantida elevada pela combinao da gliclise e ciclo de Krebs

Controle da produo de ATP


Inibidores (interferncia sobre fluxo e)
Algumas drogas (inibidores dos complexos) podem bloquear a
transferncia e
Inibio sntese ATP potencialmente letais
- Rotenona (inseticida) complexo I
- CN, CO, H2S, azida (Na) complexo IV

Desacopladores (interferncia sobre fluxo H+)


Dissociam (desacoplam) transporte de e da fosforilao oxidativa
Transporte de e sem sntese de ATP
Impede gradiente H+ energia dissipada na forma de calor
- 2,4-dinitrofenol (DNF) e carbonilcianeto-p-trifluorometoxifenil-hidrazona (FCCP)
- Proteina desacopladora ou termogenina (UCP) no tecido adiposo marrom

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

CTE em bactrias
Princpios gerais equivalentes aos apresentados
Fornecedores de eltrons (alm das coenzimas reduzidas):
- NH4+
- NO2
- H2S
- H2
-S
- Fe

Aceptor final de eltrons (respirao anaerbica):


- NO3
- NO2
- SO42
- CO32
- Fumarato e outras molculas orgnicas

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

Concluso
Cadeia transportadora de eltrons
Regenera cofatores oxidados (NAD+ ou FAD) e os eltrons
resultantes so transferidos a H2O via 3 ou 4 complexos;
Concomitante formao de fora prton-motriz ( e pH);
NADH = 10H+ e FADH2 = 6H+.

Fosforilao oxidativa
Fora prton-motriz utilizada para sntese de ATP;
1NADH = 2,5ATP; 1FADH2 = 1,5ATP;
velocidade influenciada pela necessidade de ATP.
PRXIMA AULA: Glicognese e glicogenlise

Sumrio
Introduo
Entrada do NADH citosslico na mitocndira
Cadeia transportadora de eltrons (CTE)
Fosforilao oxidativa
Controle da produo de ATP
CTE em bactrias
Concluso
Exerccios

Exerccios
1. Estudar membranas biolgicas e transporte
2. Espcies reativas de oxignio (ROS)
a) Explicar como espcies reativas de oxignio (ROS)
podem ser formadas na CTE?
b) Qual a implicao dos ROS para a sade humana?
c) Quais so as estratgias celulares contra o dano
oxidativo causado por ROS?

3. Como os seguintes compostos interferem na CTE


e fosforilao oxidativa?
a) Cianeto
b) Monxido de carbono
c) Protena desacopladora (UCP) na gordura marrom

Bibliografia
1. Berg, J.M.; Tymoczko, J.L.; Stryer, L. Bioqumica. 6a.
Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2008.
2. Nelson, DL; Cox, MM. Lehninger - Princpios de
bioqumica. Traduzido por Simes, A. A.; Lodi, W. R. N.
3 ed. So Paulo: Sarvier, 2002.
3. Marzzoco, A; Torres, BB. Bioqumica bsica. 2a. Ed.
Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1999.
4. Salway, J.G. Metabolismo passo a passo. 3a. Ed. Porto
Alegre: Artmed, 2009.
5. Voet, D; Voet, JG. Bioqumica. 3a. Ed. Porto Alegre:
Artmed, 2006.