O Ciclo do Ácido Cítrico

(Ciclo de Krebs ou ciclo dos

ácidos tricarboxílicos)
 VIA CIRCULAR
Ciclo do ácido cítrico ou ciclo de Krebs

-Representa o estágio final da oxidação de

fontes de energia metabólica
(carbohidratos, ácidos graxos e
aminoácidos).

-Oxidacão de combustíveis à CO2 e H20.

-Necessita de O2 molecular para ocorrer.

 Os experimentos de Hans Krebs
- Observando os dados disponíveis na época Krebs destaca os trabalhos de Thumberg
entre 1906 e 1920 usando tecidos musculares. Ele testou a oxidação de cerca de 60
substâncias orgânicas e descobriu que a forma ionizada de vários ácidos como o
lactato (1 carboxila), succinato, fumarato, malato (2 carboxilas), eram rapidamente
oxidadas.
- Krebs então testa outros ácidos dicarboxílicos. Em 1935 descobre que um deles, o
α-cetoglutarato, com 5 carbonos, assim como nos experimentos de Szent-Györgyi,
aceleravam a produção de CO2 e não eram consumidos na reação.

lactato
50 succinato
piruvato +
malato
40 fumarato
30
CO2

piruvato
20

10

0
0 5 10 15 20
tempo
- Em 1937 Krebs testa ácidos tricarboxílicos como citrato, isocitrato e aconitato,
agora com 6 carbonos, e observa que a produção de CO2 também era estimulada
e esses intermediários não eram consumidos.
- Segundo Krebs, outra contribuição significativa para suas descobertas
veio dos estudos de Martius e Knoop, em 1937, que elucidaram a
transformação oxidativa de citrato até α-cetoglutarato.
- Krebs observou nos trabalhos de Shiffield em 1937 que a formação de citrato (C6)
ocorria rapidamente após a adição de oxaloacetato (C4) em diversos tecidos.
Concluiu então que a formação desse composto de 6 carbonos poderia se originar
da ligação de um produto de 4 carbonos (oxaloacetato) mais dois carbonos vindos
provavelmente da degradação da glicose.

- Juntando as seguintes informações:

1- ácidos di e tri carboxílicos aceleravam a formação de CO2 em diversos tecidos

mas não eram consumidos na reação.

2- algum composto de 2 carbonos vindo provavelmente da glicólise se combinava

com oxaloacetato e formava um composto de 6 carbonos (citrato) que iniciava uma
via de interconversão, Krebs conclui e postula um modelo que ele chamou de
“Ciclo do Ácido Cítrico” ou dos “Ácidos Tricarboxílicos”.
 Krebs então postula que:
“O piruvato, ou um derivado vindo da glicólise (acetato), se
condensa com o oxaloacetato e forma citrato. Por uma
sequência de reações que envolvem cis-aconitato,
isocitrato, α-cetoglutarato, succinato, fumarato, malato e
oxaloacetato como intermediários, um ácido acético é
oxidado e o oxaloacetato necessário para a reação inicial de
condensação é regenerado. Isso explica a ação catalítica dos
ácidos di e tricarboxílicos (de 4, 5 e 6 carbonos), bem como
a capacidade que esses ácidos possuem de se oxidar nos
tecidos que oxidam carboidratos.”
 Ciclo do ácido cítrico ou ciclo de Krebs

Lehninger, 1948
 O complexo Piruvato Desidrogenase

Irreversível!

Três tipos de enzimas em cópias múltiplas: E1, E2, E3

Ex: piruvato desidrogenase de E. coli contém 60 s-u
protéicas
 Coenzima A (CoA)

Transportados de acilas em diferentes reações metabólicas.

Grupo acil ativado para transferência.

O complexo Piruvato Desidrogenase
 5 coenzimas são necessárias para formação de Acetil-CoA
Aumenta a velocidade de reações, evita a difusão do substrato,
minimiza reações secundárias, controle coordenado
Ácido nicotínico
(Niacina) =
Vitamina B3

Riboflavina =
Vitamina B2
FAD

NAD+

Ác. Pantotênico Coenzima A

Vitamina B5

TPP
Ác. Lipóico ou tiamina =
lipoato Vitamina B1
Falta de vitamina B1 (tiamina)
Beriberi
Reações do ciclo do ácido cítrico
1° Reação: Ácido tricarboxílico

Baixa concentração

Reação de condensação, torna metil mais reativo. Carbonil do oxalacetato – centro eletrolítico.

Altamente exergônica – hidrólise da ligação tioéster.

Sintase: reação de condensação sem nucleosídeo trifosfato (ATP, GTP...)

ou outra origem de energia
2° Reação:

Isocitrato rapidamente consumido na próxima etapa do ciclo

 Ocorre a primeira
3° Reação: descarboxilação
oxidativa com
conservação de energia
na forma de NADH

Descarboxilação oxidativa
 Ocorre outra descarboxilação oxidativa com
4° Reação: conservação de energia.
A catálise do complexo α-cetoglutarato
desidrogenase é similar ao da piruvato desidrogenase

Perda do grupo carboxila na forma de CO2 e En. de oxidação conservada na ligação tioéster
5° Reação:

En. livre de hidrólise da ligação tioéster do succinil-CoA forte e negativa (-

36 kJ/mol) – promove síntese de GTP ou ATP.

Sintetases – condensação utilizando NTP.

 6° Reação:

Malonato= inibidor competitivo

Ocorre conservação de energia na forma de FAD reduzido.

A succinato desidrogenase é a única enzima do CAT que está ligada à matriz
mitocondrial
7° Reação:

Fumarato hidratase
8° Reação:
Regenerado

- Reação endotérmica -> dirigida pela retirada

do produto.
- [oxaloacetato] é mínima - retirado pela
citrato sintase ΔG < 0 exergônica
Produtos de uma rodada do ciclo do ácido cítrico
Saldo final – Cada molécula de
Acetil-CoA que entra no ciclo gera:

•3 NADH
•1 FADH2
•1 GTP ou ATP
•2 CO2

Grande extração de
energia a partir de
1 Acetil-CoA
 Os dois átomos de carbono que emergem do ciclo como
CO2 não são os mesmos que entraram como acetil

Não há conversão
líquida de acetato a
oxaloacetato
Componentes do TCA são importantes intermediários anabólicos
Papel em outras vias

Via anfibólica
Intermediários são desviados para vias biossintéticas, mas...

Reações anapleróticas repõem os intermediários

Concentração dos intermediários permanece quase constante.

A Regulação do Ciclo de Krebs
3 níveis de regulação:
-Disponibilidade de Substrao
-Inibição por acumulo de P
-Inibição alostérica retroativa
Velocidades da glicólise e do CK são
reguladas de maneira integrada
(NADH, ATP, Citrato)
 Regulação do complexo PDC

• Inibida quando [ATP/ADP], [NADH/NAD+] e [acetilCoA/CoA]

• Inibida por ácido graxos de cadeia longa (mod. alostérica)

• Por modificação covalente (mamíferos):

- piruvato desidrogenase cinase fosforila E1

inativa o PDC (ATP é um ativador alost. desta cinase)

- piruvato desidrogenase fosfatase : reativa o PDC

 A Regulação do Ciclo de Krebs
3 níveis de regulação:
-Disponibilidade de Substrao
músculo -Inibição por acumulo de Produto
-Inibição alostérica retroativa

ΔG<0 Velocidades da glicólise e do CK são

reguladas de maneira integrada
(NADH, ATP, Citrato)

ΔG<0
músculo

ΔG<0

músculo
Citrato é inibidor de PFK-1 da via glicolítica