Lab Biotec: Roteido da primeira aula: 11/03/2022.

Prof. Robert Pogue

14h - Introdução e apresentação do plano de ensino pelo professor. Apresentação sobre biotecnologia,
dando exemplos da presença de biotecnologia no nosso dia-a-dia.

15h - Introdução do primeiro procedimento prático. Professor mostra equipamentos, reagentes etc.
Professor demonstra uso de equipamento para encher pipetador sorológico. Explica conceitos como p/v
e pH

15:30 – 17h: Alunos preparam o tampão

Procedimento: Preparação de 100 ml de tampão CTAB.

(CTAB 1% p/v; NaCl 1,4M; Tris-HCl 120 mM; EDTA 20mM e Metabisulfito de sódio 1% (p/v)

1. Limpa a área de trabalho usando etanol e papel toalha.

2. Você tem um tubo contendo 1g de CTAB, 0,59g de EDTA e 1 g de Metabisulfito de sódio.
Transfere o conteúdo desse tubo para um becker de vidro (capacidade 200 ml)
3. Acrescenta 80ml de água destilada (usando um pouco para lavar o restante dos reagentes do
tubo)
4. Adiciona uma bailarina, e bota o becker em um agitador magnético, ligando o agitador em
velocidade média
5. Acrescenta o Tris (1,214 g), e espera tudo dissolver
6. Pesa 8,18 g de NaCl, acrescenta no tampão e espera dissolver
7. Insere o pH-ômetro, e use HCl (50%) para acertar o pH para 8,0
a. *Muito cuidado com o uso de HCl. Use uma pipeta Pasteur para acrescentar o HCl gota-
por-gota
8. Quando o pH chega a 8,0 completa o volume para 100 ml, e transfere para a garrafa,
identificando o tampão como Tampão CTAB, com a data e seu nome

Tris-HCl: Ajuda a manter o pH

CTAB: Detergente catiónico. Ajude a romper células e separar macromoléculas

NaCl: Ajuda a separar proteínas do DNA

EDTA: Sequestra ions que poderiam atrapalhar procedimentos subsequentes.

Metabisulfito de sódio: Ajuda a separar proteínas, e manter as proteínas dissolvidas