A estrutura e a função do peptídeo de fusão da proteína Spike do

SARS-CoV-2 são cálcio-dependentes

Ana Luiza Moreira do Nascimento Valente, Luis Guilherme Mansor Basso

A proteína Spike do SARS-CoV-2 possui um segmento de aminoácidos, conhecido como peptídeo

de fusão (FP), essencial para a fusão do vírus com as membranas celulares. A função do FP tem
sido reportada como cálcio-dependente, mas pouco de sabe sobre os possíveis sítios de ligação e
sobre o efeito deste íon na atividade fusogênica do FP. Com base nisso, nossos objetivos são
entender o efeito dos íons Ca+2 na estrutura e função do FP e determinar seus sítios de ligação. Para
isso, utilizamos o FP nativo e análogos contendo substituições estratégicas de aminoácidos que
possivelmente representam sítios de ligação do Ca +2 (E4Q, D5N, N9D e D15N) em conjunto com
diversas técnicas espectroscópicas. Os resultados de dicroísmo circular mostram que o Ca +2 modula
o conteúdo de α-hélice do FP nativo e dos análogos [D5N]FP e [D15N]FP na presença de modelos
de membranas, mas não dos análogos [E4Q]FP e [N9D]FP. Esses dados sugerem que os resíduos
E4 e N9 são os possíveis sítios de ligação do Ca +2. Adicionalmente, os experimentos de
fluorescência mostram que a atividade fusogênica, ou seja, a capacidade dos peptídeos em
promover a fusão de duas bicamadas lipídicas, de todos os peptídeos diminuiu na presença do Ca +2.
Interessantemente, as substituições E4Q e N9D reduzem a atividade fusogênica de seus análogos
comparativamente ao FP nativo, mostrando que os resíduos E4 e N9 são importantes para a função
do FP. Por outro lado, os dados de ressonância magnética eletrônica indicam que todos os
peptídeos induzem o mesmo nível de ordenamento lipídico em membranas de diferentes
composições lipídicas, porém o efeito dos análogos [E4Q]FP e [N9D]FP não se altera com a adição
de Ca+2, ao passo que aumenta para os demais peptídeos. Analisados em conjunto, nossos
resultados sugerem que os resíduos E4 e N9 são importantes tanto para a ligação de íons Ca +2
quanto para função do FP. No entanto, como a atividade fusogênica do FP é reduzida na presença
de Ca+2, nossa hipótese é que este íon atuaria na etapa inicial do processo de fusão de membranas
induzido pelo SARS-CoV-2, aumentando o efeito de ordenamento lipídico induzido pelo peptídeo,
pré-requisito para a indução de curvatura negativa e de desidratação da membrana.

Instituição do Programa de IC, IT ou PG: UENF

Eixo temático: Ciências Exatas e da Terra
Fomento da bolsa (quando aplicável): IC FAPERJ
 The structure and function of the SARS-CoV-2 fusion peptide are
calcium-dependent
Ana Luiza Moreira do Nascimento Valente, Luis Guilherme Mansor Basso

The SARS-CoV-2 Spike protein contains an amino acid segment known as the fusion peptide (FP),
which is essential for the virus-cell membrane fusion. The function of FP has been reported as
calcium-dependent, but little is known about the possible binding sites and the effect of this ion on the
FP fusogenic activity. Our goal is to understand the effect of Ca 2+ ions on the structure and function of
FP and to determine its binding sites. To do so, we used native FP and analogs containing strategic
amino acid substitutions that possibly represent the Ca 2+ binding sites (E4Q, D5N, N9D, and D15N)
in combination with various spectroscopic techniques. Circular dichroism results show that Ca 2+
modulates the α-helix content of native FP and the [D5N]FP and [D15N]FP analogs in the presence
of membrane models, but not the [E4Q]FP and [N9D]FP analogs. These data suggest that the E4
and N9 residues are the possible Ca2+ binding sites. Additionally, fluorescence experiments show that
the fusogenic activity of all peptides, i.e., the ability of the peptides to promote fusion of two lipid
bilayers, decreased in the presence of Ca2+. Interestingly, the substitutions E4Q and N9D reduce the
fusogenic activity of their analogs compared to native FP, showing that the E4 and N9 residues are
important for the FP function. On the other hand, electron spin resonance data indicate that all
peptides induce the same level of lipid ordering in membranes of different lipid compositions, but the
effect of the [E4Q]FP and [N9D]FP analogs does not change with the addition of Ca 2+, while it
increases for the other peptides. Taken together, our results suggest that the E4 and N9 residues are
important both for Ca2+ binding and for FP function. However, since the fusogenic activity of FP is
reduced in the presence of Ca2+, our hypothesis is that this ion would act in the initial stage of the
membrane fusion process induced by SARS-CoV-2, increasing the effect of lipid ordering induced by
the peptide, a prerequisite for the induction of negative curvature and membrane dehydration.