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Tema:
Função de Proteínas:
Mioglobina e Hemoglobina
SÍTIO DE LIGAÇÃO
→ Interação específica
A His E7 estabiliza o O2
ligado ao Fe2+ por uma
ligação de H;
Evita a formação do
íon superóxido;
- O componente protéico
estabiliza a reatividade do
O2
Interação Proteína-Ligante
pode ser quantificada
k1
P + L PL
k2
Questões apresentadas
k1 k1 [ PL ] 1
P + L PL K eq KA KD
k2 k 2 [ P][ L] KA
k1 e k2 são as constantes de velocidade de associação e dissociação
KA e KD são as constantes de equilíbrio no sentido de associação e dissociação
Quando a [L] é >>> [P] podemos considerar que a formação do PL não altera a [L]
A fração de Sítios de ligação na P frente ao L pode ser descrita pela seguinte equação
[ PL ]
[ PL ] [ P]
[ PL ]
KA [ PL ] K A [ P][ L]
[ P][ L]
Substituindo [PL]
k1 k1 [PLn ]
P + nL PLn K eq K A
k2 k 2 [P ][L]n
n K An [ L]n θ [L]n θ
log n log[L] n logK D
K An [ L]n 1 n θ KD n θ
Equação de Hill
θ
log n logp02 n logP50
n θ
nH representa a cooperatividade
entre os sítios de ligação
nH < n
Ligação de O2 na Hemoglobina
Em exercício, o sangue arterial, após uma passagem pelo pulmão, apresenta ~98% de
saturação da HbA com O2
Após passar pelos tecidos, o sangue venoso apresenta ~32% de saturação de O2
- Portanto, ~66% dos pontos de ligação contribuíram para o transporte de O2
A ação cooperativa da HbA favorece a DESCARGA adequada de O2
- Nestas condições, a Mioglobina permaneceria com 91% de saturação 7% de transporte
A HbA transporta ~10 x mais O2 do que a Mioglobina
A cooperatividade da HbA
A ligação de O2 na HbA resulta em mudanças conformacionais na tetrâmero de HbA-O2
- Um dímero Alfa-Beta sofrem rotação de 15º em relação ao outro
A HbA existe em duas conformações principais:
1) T (Tenso) Estado deoxigenado
2) R (Relaxado) Estado Oxigenado
- O Estado R apresenta maior afinidade por O2 do que o estado T
- Na presença de O2, o estado R é mais estável
O2
A cooperatividade da HbA
Estado T apresenta um intricada rede de pares iônicos na interface α1β2 e α2β1
A ligação de O2 altera a estrutura do grupo Heme que perturba a rede de pares iônicos
- Mudanças no
ambiente do grupo
Heme são
transmitidas para
as outras cadeias
do oligômero
A cooperatividade da HbA
Estado T apresenta um intricada rede de pares iônicos na interface α1β2 e α2β1
A ligação de O2 altera a estrutura do grupo Heme que perturba a rede de pares iônicos
A cooperatividade da HbA
A HbA pura no estado T é muito instável
- Liga avidamente O2 em baixas [O2] e libera apenas 8% de O2 em condições fisiológicas
O 2,3-BPG:
1) Liga-se no centro do Tetrâmero da HbA;
2) É liberado após transição T R;
3) Age mantendo HbA no Estado T;
4) É um Efetor Alostérico.
A cooperatividade da HbA
Estado T Estado R
A Hemoglobina Fetal
- A Hb fetal contem duas cadeia Alfa e duas cadeias Gama
A cadeia Gama é 72% idêntica à cadeia Beta na seqüência de aminoácidos
- A modificação Beta-His143 Gama-Ser143
- Modifica o sítio de interação do 2,3-BPG com a Hb
Consequências:
- Redução da afinidade da Hb Fetal por 2,3-BGP
- Aumento da afinidade da Hb Fetal por O2
Permite que a Hb Fetal receba
eficientemente o O2 transportado pela HbA
maternal
- O feto não “experimenta” pO2 atmosférica
Outros genes
Existem outras 3 cadeias de hemoglobina
expressas em diferentes estágios do
desenvolvimento
Existem ainda: Neuroglobina e citoglobina
(+ similares à mioglobina)
A HbA transporta H+ e CO2
dos tecidos para o pulmão
A HbA é sensível aos níveis de H+ e CO2 nos tecidos
- H+ e CO2 são efetores alostéricos da HbA aumentam a liberação de O2 para os tecidos
O estado T é estabilizado pela redução do pH
- Resultado: descarga de O2 nos tecidos
É chamado de Efeito Bohr (Christian Bohr, pai de Niels Bohr)
Ponte salina na
A Hidratação do interface α2β1
CO2 é catalisada
pela Anidrase
carbônica
A HbA liga H+ e CO2
A HbA transporta CO2 dos tecidos para o pulmão
O CO2 liga-se à aminas terminais
- ~15-20% do transporte ligado à HbA
- Restante é transportado na forma de HCO3- solúvel
Anemia falciforme
- devido à mutação D6V na cadeia
Beta
- Forma a Hemoglobina S
- Forma um contato hidrofóbico com
a F85 e V88 entre as cadeias beta
inter-tetrâmeros
Mutações na HbA
As pontes hidrofóbicas inter-cadeias propicia a fibrilação
Mutações na HbA
As pontes hidrofóbicas inter-cadeias precipitam a HbS não liga O2
Mutações na HbA
A HbS forma fibras que deformam a estrutura das hemácias
HbS aumenta resistência à malária parasita vive dentro das hemácias
-possível fator seletivo positivo da HbS por isto foi “selecionada” e persiste presente