TRANSPORTE DE ELTRONS E FOSFORILAO OXIDATIVA

Professor: Leonardo Araujo de Abreu

14/12/2012

1 - Oxi-redues

Oxi-redues
A transferncia de eltrons tem papel fundamental no metabolismo. O fluxo de eltrons nas reaes de oxi-reduo responsvel direta ou indiretamente por todo o trabalho realizado nos seres vivos. Nos organismos no fotossintticos a fonte de eltrons so compostos reduzidos (ou relativamente reduzidos), comida. As oxidaes biolgicas com frequncia envolvem desidrogenaes!!!!!!

O fluxo de eltrons capaz de realizar trabalho se houver um transdutor apropriado no sistema

Os eltrons se movem no circuito por uma fora proporcional diferena na afinidade por eltrons. Esta fora a Fora Eletromotriz.

Os eltrons podem ser transferidos de uma molcula para a outra numa das seguintes formas:
1 - Diretamente como eltron Fe2+ + Cu2+ Fe3+ + Cu1+

2 - Como tomos de hidrognio (= 1 prton + 1e-) AH2 + B A2- + BH2

3 - Como on hidreto (:H- = 2e-) nas reaes de desisrogenao em que NAD+ participa, por exemplo

4 - Por combinao direta do redutor orgnico com o oxignio R-CH3 + O2 R-CH2-OH

1 eltron em qualquer uma destas formas corresponde a um EQUIVALENTE REDUTOR!

Os combustveis biolgicos geralmente sofrem desidrogenaes/ oxidaes catalisadas por enzimas, perdendo 2 equivalentes redutores de uma vez. As clulas tm enzimas para catalisar a oxidao de centenas de diferentes compostos. Passam eltrons de seus substratos para algum dos carreadores universais de eltrons.

Os carreadores universais de eltrons

1 Nicotinamida (NAD+ ou NADP+)

Transferncia de ons hidreto ( :H-)

AH2 + NAD+ NAD+ + 2 + 2 H+ Obs: Para NADP+ idem. A-2 + NADH + H+ NADH + H+

Os carreadores universais de eltrons

1 Nicotinamida (NAD+ ou NADP+)
Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo (NAD+) e Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo Fosfato (NADP+). Solveis em gua. Se associam reversivelmente a desidrogenases. Assim, NADH carreiam os eltrons de suas reaes catablicas para seu ponto de entrada na cadeia respiratria. A maioria das desidrogenases no catabolismo so especficas para NAD+. J o NADPH geralmente supre eltrons para as reaes anablicas de sntese. Nem NADH ou NADPH atravessam a membrana mitocondrial interna. Os eltrons por eles carregados so enviados atravs da membrana.

Os carreadores universais de eltrons

2 Flavinas (nas flavoprotenas)

Os carreadores universais de eltrons

2 Flavinas (nas flavoprotenas)
Flavina adenina dinucleotdeo (FAD) e Flavina Mononucleotdeo (FMN. No transferem eltrons difundindo de uma enzima para a outra como o NADH faz. Esto fortemente ligadas s enzimas, sendo portanto, grupamentos prostticos. O que fazem prover um meio no qual a flavoprotena um carreador transiente dos eltrons durante a catlise, da a transferncia do doador para o aceptor. Podem aceitar 1 ou 2 eltrons por vez, na forma de hidrognio. Exemplo, quando completamente reduzidos: FAD + 2 + 2 H+ FMN + 2 + 2 H+ FADH2 FMNH2

Outra importante caracterstica a variedade no potencial de reduo padro da flavina, que varia de acordo com a protena que est associada.

2 A Cadeia respiratria:
2.1- Cadeia de transporte de eltrons
O transporte de eltrons e a fosforilao oxidativa promovem a re-oxidao de NADH e FADH2, e transferem a energia liberada para a formao de ATP.

A Cadeia Respiratria ocorre na membrana interna da mitocndria

Carreadores de eltrons na cadeia respiratria, alm de NAD+ e das flavoprotenas 1 - Citocromos

Tipos de heme presentes nos citocromos

Protenas com grupamento prosttico heme Na mitocndria h trs classes de citocromos: a ( 6oonm), b (~560 nm) e c (~550 nm). Distino feita de acordo com o maior comprimento de onda em que ocorre o pico de absoro.

Carreadores de eltrons na cadeia respiratria, alm de NAD+ e das flavoprotenas 2 Ubiquinona, ou coenzima Q
Lipossolvel (hidrofbica) Aceita eltrons como Hidrognio (1 prton + 1 eltron) Assim como as flavoproteinas, pode receber eltrons de dois doadores diferentes e passlos para o um nico aceptor de eltrons (integra) Por ser pequena e hidrofbica difunde-se livremente na bicamada lipdica da membrana interna mitocondrial. Importantssima no acoplamento do fluxo de eltrons ao movimento de prtons, j que aceitando hidrognio carreia tanto prtons quanto eltrons)

Carreadores de eltrons na cadeia respiratria, alm de NAD+ e das flavoprotenas 3 Protenas ferro-enxofre

Ferro associado com tomos de enxofre na forma inorgnica e/ou de resduos de Cys Reaes de transferncia de 1 eltron, nas quais um dos tomos de ferro oxidado ou reduzido (Fe+3 + e- Fe+2) O potencial de reduo destas protenas varia dependendo do microambiente na protena H tambm uma variao em que os tomos de ferro estao ligados a resduos de Histidina ao invs de Cistena - Rieske iron-sulfur protein.

Como saber a ordem dos cerreadores????

Como saber a ordem dos carreadores?

1 - Medindo potencial de reduo

Os eltrons fluem do menor para o maior potencial de reduo.

Como saber a ordem dos carreadores?

2 Efeito de inibidores especficos no estado de oxidao de cada carreador

Os carreadores de eltrons funcionam em complexos multienzimticos...

H fluxo de eltrons entre estes complexos e bombeamento de prtons (para o espao intermembranar) Acoplado.

Carreadores funcionam em complexos Multi-enzimticos -Complexos supramoleculares inseridos na membrana -Podem ser fisicamente separados -Tratamento da membrana interna mitocondrial com detergentes: resoluo de 4 complexos carreadores.

Componentes proteicos da CTE

Os eltrons fluem do menor para o maior potencial de reduo

Complexo I NADH Desidrogenase ou NADH:ubiquinona oxirredutase

Complexo I NADH Desidrogenase ou NADH:ubiquinona oxirredutase

Catalisa dois processos simultneos e acoplados: 1 Transferncia exergnica dos hidretos entregues pelos NADH para a ubiquinona (Coenzima Q). 2 Transferncia endergnica de 4 prtons para o espao entre membranas da mitocndria. Complexo I uma bomba de prtons cuja energia vem da transferncia de eltrons. A reao catalisada vetorial (move os H+ para uma direo especfica)

As reaes de oxido-reduo liberam energia necessria para o bombeamento de H+ da matriz para o espao intermembranar

Grupos redox FMN/FMNH2 Centros Fe-S 1 ponto de entrada de e- na CTE

Complexo II - Succinato desidrogenase

Fluxo de eltrons no complexo II

Succinato desidrogenase a nica enzima do CK ligada membrana Oxida succinato a fumarato, e transfere os e- para (reduz) coenzima Q

Outras vias de transferncia de eltrons convergem para a Coenzima Q

Metabolismo de triglicerdeos (TAG)

Degradao de cidos graxos

2 ponto de entrada de e- na CTE

Grupos redox FAD/FADH2 Centros Fe-S

Complexo III - Complexo citocromo bc1: Transferncia dos eltrons da ubiquinona para Citocromo C

Consome 2 H+ da matriz, enquanto 4 H+ so bombeados para o espao intermembranar

Grupos redox Citocromo c Citocromo b Centros Fe-S

Complexo III - Complexo citocromo bc1 O fluxo de eltrons no Complexo III o Ciclo Q

Complexo IV - Citocromo C Oxidase

Complexo IV - Citocromo C Oxidase

Passo final da cadeia respiratria. Carreia eltrons do Citocromo C para o Oxignio. Para cada 4 eltrons passando pelo complexo, a enzima consome 4 H+ como substrato para converter oxignio gua,. Tambm usa energia da reao redox para bombear um prton para fora por eltron passado.

Transfere os eltrons da CTE para o Oxignio, formando H2O (consumindo H+ da matriz) Energia para bombear H+ para o espao intermembranar

Grupos redox Citocromo a Cu2+/Cu+

O transporte de eltrons est associado transferncia de prtons para o espao inter-membranas

Gradiente de potencial eletroqumico

O complexo II daCTE no contribui para a formao do gradiente de H+

Fora proton motriz e energia livre

2 A Cadeia respiratria:
2.2- Acoplando o transporte de eltrons (consumo de oxignio) e bombeamento de prtons produo de ATP

Acoplamento - transporte de eltrons, bombeamento de prtons, consumo de oxignio e sntese de ATP

Loomis & Lipmann

DNP (dinitrofenol) um desacoplador. DNP e FCCP desacopladores - So cidos fracos com propriedades hidrofbicas. Aps entrar na matriz mitocondrial na forma protonada, podem liberar prtons e assim dissipar o gradiente.

Qual o mecanismo qumico que acopla o fluxo de prtons produo de ATP?

Peter Mitchell: modelo quimiosmtico

Qual o mecanismo qumico que acopla o fluxo de prtons produo de ATP?

Peter Mitchell: modelo quimiosmtico
Energia eletroqumica inerente diferena na concentrao de H+ e separao de cargas atravs da membrana interna fora proton motriz provm energia para a sntese de ATP quando os prtons fluem livremente de volta matriz, desfazendo o gradiente pelo poro associado ATP sintase. Usou a palavra quimiosmtico para descrever reaes enzimticas que envolvem simultaneamente uma reao qumica e transporte.

Demonstrao experimental do acoplamento do fluxo de prtons produo de ATP na mitocndria

Parou consumo de oxignio e produo de ATP

Cianeto (CN) bloqueia passagem de eltrons da citocromo oxidase para o oxignio.

Demonstrao experimental do acoplamento do fluxo de prtons produo de ATP na mitocndria

Desacopladores (DNP e FCCP)

So cidos fracos com propriedades hidrofbicas. Aps entrar na matriz mitocondrial na forma protonada, podem liberar prtons e assim dissipar o gradiente.

OBS: Ionforos tambm agem como desacopladores permitindo a passagem de ions inorgnicos dissipando o componente eltrico.do gradiente eltroqumico.

A inibio da passagem de eltrons na cadeia respiratria (e consumo de oxignio) bloqueia a sntese de ATP.

Bloquear a sntese de ATP bloqueia a passagem de eltrons e consumo de oxignio.

A sntese de ATP

Complexo ATP sintase

Cada subunidade da F1 da ATP sintase pode assumir 3 diferentes conformaes

Catlise rotacional a chave para a alterao na conformao e mecanismo de catlise da ATP sintase

A fora proton motriz fornece energia para a sntese de ATP!

A fora prton-motriz tambm fornece energia para o transporte de vrias substncias importantes para a fosforilao oxidativa

Lanadeiras para enviar equivalentes redutores do NADH citoslico para a matriz mitocondrial
NADH desidrogenase da membrana interna da mitocndria s aceita NADH da matriz. Membrana interna impermevel ao NADH Como o NADH citoslico gerado na gliclise pode ser reoxidado e entregar seus eltrons para a cadeia respiratria?

Lanadeiras para enviar equivalentes redutores do NADH citoslico para a matriz mitocondrial. 1 Lanadeira Malato-aspartato
Fgado Rins Corao

Lanadeiras para enviar equivalentes redutores do NADH citoslico para a matriz mitocondrial. 2 Lanadeira de glicerol-3-fosfato

Controle

Reduo parcial do O2 pode gerar radicais livres (espcies reativas de oxignio)

Saldo de ATP aps a oxidao completa da glicose

Desacoplamento e calor