Bioseparações – prof.

Júlio – Exercícios de sala PPT e indicados XTALIZ Parte 1 – Precipitação

1) Considere a produção de uma protease de Chromohalobacter sp., que é uma enzima halotermofílica (sua atividade
ótima é a 75°C com 4,5M de NaCl). A proteína tem 66kDa e pode ser precipitada com etanol. Avalie a sequência de
downstream da tabela abaixo, feita em escala de laboratório, e

a) Determine o volume de etanol que seria necessário usar para precipitar a proteína a partir de 1m 3 de sobrenadante
da cultura,
b) proponha uma forma de remover o etanol que não envolva cromatografia, e
c) avalie qual seria a pureza e atividade esperadas para o produto.
[Essa questão é mais de discussão, os cálculos são simples]

2) Considere uma mistura que possui como principais componentes 3 proteínas A, B e C. B é o produto, e as
concentrações iniciais e os coeficientes de uma equação (tipo Cohn, S (g/L) = e(b-K[C])) são dados na tabela:

Proteína Concentração b K
inicial (g/L)
A 1,2 3,5 1,1
B 13,2 4,2 2,8
C 0,5 4,5 1,5

Na equação, S é a solubilidade de cada proteína, e C é a concentração molar de sulfato de amônio (M = 132 g/mol),
o precipitante usado. Os valores das constantes b e K foram estimados para precipitação com esse sal. A partir
desses dados, determine:

a) A concentração de sulfato de amônio necessária para precipitar 95% da proteína B;

b) A pureza de B no precipitado
c) Se a concentração de proteínas precipitadas na fração sólida for de 190g/L, quantas vezes foi concentrado o
material?
d) Você possui em estoque uma grande quantidade de cloreto de sódio, e considera a possibilidade de usá-lo
como precipitante. Supondo que a eficiência seja a mesma, para soluções com a mesma força iônica de
(NH4)2SO4, qual seria a concentração de cloreto de sódio, em g/L, a testar? Como isso se compara com a massa
de sulfato de amônio usada?
e) Desafio: estime a pureza de B no precipitado, considerando que após um tempo de “descanso” para
adensamento e remoção do sobrenadante, a concentração de B no precipitado seja de 190g/L; que a densidade
da fase sólida (B precipitado) é 1,5g/mL e que a densidade da fase aquosa (água + proteínas dissolvidas + sulfato
de amônio) é 1,1 g/mL.

Respostas: a) 1,65M; b) 100%; c) 14,4 vezes; d) 289,6g/L; e) 43,6% com o sulfato de amônio, e 99,23% sem.
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3) Considere a curva a seguir, que é de solubilidade de sacarose em água:

Considere três misturas de sacarose e água, A, B e C que possuem,

respectivamente, 2.00, 3.00 e 4.00 kg de açúcar em 1 kg de água.

a) Localize as três no gráfico, se a temperatura for de 50C.

b) Qual dessas misturas é uma solução estável?
c) Qual a massa de sacarose que precipitaria de cada mistura
se fosse feito um resfriamento até 20C?
d) Qual é a supersaturação (ln C/C*) para cada solução?
e) Qual das soluções teria uma cristalização mais rápida, se a
velocidade de resfriamento for a mesma para as três soluções e a
velocidade de crescimento dos cristais puder ser considerada alta (o
passo limitante é a velocidade de nucleação)? Dica: leia o livro e
veja o que se sabe sobre velocidade de nucleação x supersaturação.

Respostas: A questão é conceitual. Note que a supersaturação pode ter mais de uma definição (C-C*, C/C*, etc.)

4) Determine correlações ou curvas de solubilidade (em função da temperatura) de 2 solutos selecionados da

lista a seguir. Indique as referências usadas.

A partir dessa curva que você obteve ou plotou, determine condições (temperaturas e concentrações a
atingir) para cristalizar 80% do soluto contido em uma solução com concentração de 1% em soluto.
Resposta: é preciso desenvolver a estratégia para cada caso. O mais importante é achar os dados de
solubilidade, agrega-los e analisa-los. No caso de polímeros (por exemplo, colágeno ou quitosana) há fontes
diferentes e tamanhos diferentes. Prefira fontes comerciais comuns (por exemplo, quitosana de crustáceos é
comum, de fungos não). No caso de enzimas, pode ser qualquer fonte desde que especificada (ex. lisozima de
ovo ou lisozima recombinante)

Para ajudar, vamos distribuir os solutos entre vocês:

Aluno Bioseparações 2023 Soluto 1 Soluto 2

Colágeno Taurina
BSA Triptofano
Albumina de ovo Treonina
Celulase Metionina
Amilase Glutamato monossódico
Papaína Ácido glutâmico
Bromelaína Lisina
Lisozima Lactato de cálcio
Zeína de milho (em EtOH) Citrato de sódio
Proteína de soja Ácido succínico
Quitosana Ácido adípico
Ágar Ácido itacônico
Agarose Ácido cítrico
Alginato (de sódio) Ácido fumárico
Pectina Xilose
Xantana Lactose
Gelana Glicose
Lecitina Sacarose (em etanol)
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5) Ex.: (separação de esteróides da soja). Uma mistura de estigmasterol e sitoesterol pesando 2040 kg é dividida
em duas frações por cristalização. A mistura original contém 86,5% de estigmaesterol; os cristais recuperados
apresentam 96,6% de estigmaesterol e pesam 1137 kg. Os sólidos no licor (filtrado) contém 74,6% de
estigmaesterol, o que foi obtido por secagem. Determine o fator de separação (β) nesse processo.

Resposta: β = 9,675.

6) Exe.: Quantos gramas de cristais semente de um antibiótico, com tamanho de 0,05mm, são necessários para
produzir 160 g/L de cristais com tamanho de 1 mm? Considere que os cristais são, aproximadamente, cúbicos
e possuem uma densidade de 1,04g/cm3. resp: 0,02 g/L.

7) 10 kg de ácido adípico são dissolvidos em 13,1 kg de água e aquecidos até 90°C para solubilizar o ácido. A
solução é, então, filtrada para remover impurezas insolúveis. Durante o aquecimento e a filtração, 10% da
água é evaporada. A solução clarificada é resfriada a 35ºC e filtrada. A solubilidade a 35ºC é de 0,05 kg de
ácido por quilo de água. Determine a massa de cristais recuperados nessa operação.

Resposta: massa de cristais = 9,41 kg

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8) Ácido cítrico produzido por uma fermentação com Aspergillus niger pode ser recuperado por um processo em
quatro etapas. Primeiro, o caldo de fermentação é filtrado para remover os microorganismos. Depois, o ácido
cítrico é precipitado na forma de citrato de cálcio pela adição de cal (CaO). O terceiro passo é o isolamento
dos cristais por filtração, e o quarto passo é a dissolução desses cristais em ácido sulfúrico. Finalmente, os
cristais de ácido cítrico são precipitados em um evaporador a vácuo. Iniciando-se com um volume de 10m3 de
caldo filtrado, a 90ºC, contendo 80g/L de ácido cítrico, responda:

a) Você precipita citrato de cálcio pela adição de CaO. Se a solubilidade do citrato de cálcio é de 1 parte por 1000 partes
de caldo filtrado, de quantos quilos de CaO você precisa? Resp.: 350

b) Quantos quilos de citrato de cálcio são produzidos? (Resp.: 1036 kg)

c) No terceiro passo, a filtração captura 95% dos cristais precipitados. Esses cristais são lavados e, no quarto passo,
dissolvidos com 2% de ácido sulfúrico em excesso. Quanto ácido é necessário? Resp: 593 kg

d) A solução final de ácido cítrico, agora a uma concentração de 250g/100gH2O, é cristalizada a 15ºC em um evaporador
a vácuo. A solubilidade (como gramas de ácido anidro por grama de H2O) é 0,54 a 10ºC, 0,59 a 20ºC e 0,64 a 30ºC. Qual
a porcentagem de água que precisa ser evaporada para obter 90% de recuperação? Resp: 56%

9) (Vogel): Na produção de vitamina C, uma corrente de alimentação contendo monoacetona-sorbose, sais

orgânicos e água deve ser concentrada. A alimentação é de 4000kg/h, e contém 30% de água. Se o produto de
fundo desejado deve ter 97% de sólidos (o ponto de fusão é relativamente baixo e a solubilidade, alta),
quanta água deve ser removida? Estime a energia necessária para evaporar essa água.

(monoacetona-sorbose, MAS, é um precursor na rota de produção de vitamina C, o processo Reichstein. Na última

década a maior parte da vitamina C foi produzida usando um processo chinês, um pouco diferente)

10) Quanto custa, aproximadamente, evaporar uma tonelada de água usando energia elétrica, óleo combustível,
gás natural, ou biomassa?

11) (Earle) Suco de tomate deve ser concentrado de 12% a 28% de sólidos, em um evaporador de filme
ascendente* com 3m de altura e 4 cm de diâmetro. A temperatura máxima aceitável para o suco é de 57°C. O
suco é alimentado ao evaporador a 57°C, e nessa temperatura a entalpia de vaporização é de 2366 kJ/kg.
Vapor é usado como fluido de aquecimento, a uma pressão de 170kPa (absoluta). Se o coeficiente global de
troca térmica é U = 600 J m-2 s-1 °C-1, determine a quantidade de suco de tomate que pode ser alimentada ao
evaporador, por hora. Considere que a superfície de aquecimento é a de 3m de comprimento x 0,04m de
diâmetro (de Earle & Earle, Unit Operations in Food Processing)
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12) Usando o diagrama de Duhring, desenvolva uma expressão para a temperatura de ebulição de NaCl aquoso.
Compare essa expressão com a Lei de Raoult (ΔT = i.K.m), sendo a constante ebulioscópica da água K = 0.512
K.kg.mol-1, i o fator de Van´t Hoff e m a molalidade da solução.

13) Pesquise e ilustre três tipos de sistemas para geração de vácuo, sendo que pelo menos um deles deve ser
aplicável a grandes vazões.