DETERMINAO DE LACTOSE NO LEITE (MTODO DE SOMOGY & NELSON)

1. OBJETIVO Quantificar o teor de lactose em amostra de leite pelo mtodo de SomogyNelson.

2. FUNDAMENTO DO MTODO A lactose, dissacardeo redutor, reduz o on cprico do reativo de SOMOGYI a xido cuproso, em meio alcalino e a quente. Em seguida, o xido cuproso reage com o anion arseno-molibdato do reativo de NELSON produzindo um composto de colorao azul (xidos de molibdnio, Mo2O3, com max = 540 nm).

Dentro de certos limites, a intensidade da colorao azul diretamente proporcional quantidade de lactose na amostra. Antes da reao quantitativa, a amostra de leite deve ser desproteinizada e clarificada, mediante precipitao de interferentes com Ba(OH)2 e ZnSO4.

3. MATERIAL E MTODOS 3.1. Equipamentos e vidrarias - Espectrofotmetro - Centrfuga de mesa - Banho-maria (ebulio) - Balo volumtrico de 100 mL - Estante com 8 tubos de ensaio e 2 tubos de centrfuga - Pipetas 3.2. Reagentes - Hidrxido de brio 0,3N - Sulfato de zinco 5% - Reativo de Somogyi: dissolver 28 gramas de fosfato monocido de sdio e 40 gramas de tartarato duplo de sdio e potssio em 700 ml de gua. Adicionar 100 ml de NaOH 1N. Gotejar, sob agitao constante, 80 ml de CuSO4.5H2O a 10%. Adicionar 180 gramas de sulfato de sdio anidro e completar a 1 litro. Deixar em repouso por 2 dias e filtrar. Guardar em frasco escuro a cerca de 37oC. Filtrar antes do uso. - Reativo de Nelson: dissolver 25 gramas de molibdato de amnio em 450 ml de gua destilada. Cuidadosamente, adicionar 26 ml de cido sulfrico concentrado. Adicionar 3 gramas de arseniato dibsico de sdio dissolvido em 25 ml de gua. Manter em repouso em frasco escuro durante 2 dias antes de uso. - Padro de lactose: dissolver 0,100 gramas de lactose pura em um litro de gua. Esta soluo conter 100 g/ml. 33. Reta Padro a) Tomar 6 tubos de ensaio e numer-los de 0 a 5. Adicionar 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 e 1.0 mL da soluo padro de lactose contendo (100 microgramas/mL = 100 g/mL) e completar o volume a 1.0 mL com gua destilada. b) Acrescentar em cada tubo 1.0 mL do REATIVO DE SOMOGYI e agitar. Deixar em banho-maria fervente por 10 minutos. Esfriar em gua corrente. c) Adicionar 1.0 ml do REATIVO DE NELSON e agitar. Completar o volume a 10 mL, adicionando 7 ml de gua destilada. d) Fazer leitura em espectrofotmetro em 540 nm. Preencher a tabela abaixo:

TUBO (No)

GUA (ml)

Lactose (mL)

Conc. Obtida (g/mL)

Reat. Somogy (mL)

Banho Maria (min)

Reat. Nelson (mL)

Compl. Vol. (10 mL)

Transmit. Absorb. (T%)

Absorb.

0 1 2 3 4 5

1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

10 10 10 10 10 10

1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

7 mL 7 mL 7 mL 7 mL 7 mL 7 mL

3.4. Preparo das amostras de leite Cada grupo receber 2 amostras de leite: uma armazenada em geladeira e outra mantida temperatura ambiente. a) Transferir 1 mL (com pipeta volumtrica) da amostra de leite para balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com gua destilada. Agitar bem. b) Transferir 1 mL (com pipeta volumtrica) da soluo diluda de leite para tubo de centrfuga. Efetuar a remoo dos interferentes pela adico de 1,0 mL de ZnS04 a 5% (agitar) e acrescentar 1,0 mL de hidrxido de brio 0,3N. Agitar. Completar a 10 mL adicionado 7 mL de gua destilada. Agitar. Centrifugar a 300 x g durante 5 minutos (3.000 rpm). 3.5. Determinao do teor de lactose no leite Determinar os teores de lactose nas duas amostras de leite, preparando as amostras como segue na tabela abaixo:
TUBO Volume (mL) Reat. Somogy (mL) Banho Maria ( min.) Reat. Nelson (mL) Compl. Vol. Transmit. Absorb. (10 mL) (T%) Absorb.

Concen t.
(g/mL)

Leite Ambiente

1.0 1.0

1.0 1.0

10 10

1.0 1.0

7 mL 7 mL

Leite Geladeira

4. RESULTADOS 4.1. Construir um grfico com as concentraes de lactose nas abcissas (g de lactose por tubo) e as leituras de Absorbncia dos padres (tendo subtrado o valor da leitura da prova em branco, ou seja do tubo no 0), nas ordenadas. 4.2. Determinar os teores de lactose nas duas amostras de leite utilizando os dados de fazendo-se a interpolao na reta padro obtida no item acima. Colocar no grfico os resultados de concentrao de lactose encontrados 4.3. Expressar os resultados em g/100 mL de leite, observar que a amostra de leite analisada foi diluida 1:100.

5. DISCUSSO DOS RESULTADOS a. Discutir os resultados obtidos de acrdo com a concentrao de lactose encontrada nas amostras de leite mantidas em temperatura ambiente e refrigerada. Os resultados obtidos foram os esperados? b. Qual ou quais as razes para que os resultados da concentrao de lactose no leite mantido na temperatura ambiente e refrigerada no so iguais? Como a temperatura afeta a qualidade do leite? 6. BIBLIOGRAFIA USADA
Listar as bibliografias utilizadas para preparar o relatrio