CENTRO FEDERAL DE EDUCAO TECNOLGICA DE MINAS GERAIS

DEPARTAMENTO DE QUMICA COORDENAO DE ENSINO PROFISSIONAL LABORATRIO DE QUMICA ORGNICA

CROMATOGRAFIA EM COLUNA - SEPARAO DE COMPOSTOS ORGNICOS -

Professor: Rodrigo Verly Turma: QUI3A T2 ALUNOS: Maria Luiza Andrade Aquino e Mariana Gabriela de Oliveira

Belo Horizonte

06 de abril de 2011

I. Introduo A cromatografia em coluna tida como o primeiro procedimento de cromatogrfico e este atribudo ao botnico russo Mikhael S. Tswett, em 1906. Tswett usou colunas de vidro recheadas com vrios slidos finamente divididos e arrastou os componentes dos extratos de plantas e gema de ovo com ter de petrleo. A cromatografia em coluna uma tcnica usada para a separao e purificao de muitos compostos, em um volume maior que os utilizados na cromatografia planar. Essa tcnica fundamenta-se basicamente na polaridade relativa das molculas envolvidas. Adiciona-se coluna de vidro o adsorvente (fase estacionria), geralmente alumina ou slica gel, e a mistura a ser analisada aplicada na parte superior da coluna. O eluente passado atravs da coluna por gravidade. A coluna de vidro a ser utilizada dever conter uma vlvula para controle de fluxo de solvente. Em alguns casos pode-se utilizar uma bureta em substituio a uma coluna propriamente dita. A velocidade na qual um composto eludo da coluna depende de sua polaridade, da polaridade da fase estacionria e da polaridade do solvente utilizado como eluente. Se o composto mais atrado pela fase estacionria do que pelo solvente, ele migrar mais lentamente da coluna. Caso contrrio, se o composto tiver maior afinidade pelo solvente ele migrar mais rapidamente da coluna, gastando menos tempo e solvente. O xito de uma coluna depender ento da escolha de um suporte e solvente adequados para a sua realizao. Em alguns casos possvel visualizar a separao dos componentes de uma mistura observando o desenvolvimento de manchas diferentes na coluna ou acompanhando cm uma luz ultravioleta. Entretanto, na maioria das vezes, torna-se necessrio o acompanhamento da separao dos componentes pela tcnica de cromatografia em camada delgada (CCD). Nessa ltima, coleta-se fraes com volume predeterminados, as quais provavelmente contero os componentes da mistura separados e, para confirmao, utiliza-se a CCD. Como dito anteriormente, os adsorventes mais utilizados so a alumina e a slica gel. Porm, pode-se tambm usar sacarose, inulina, talco, carbonato de sdio, de clcio e de magnsio, fosfato de clcio, xido de magnsio, cal virgem, carvo ativado, xido de clcio. Para que o adsorvente tenha maior eficcia necessrio que suas partculas sejam de tamanho uniforme e tenha uma maior superfcie de contato com a amostra, ou seja, deve estar bem pulverizado.

A escolha do eluente muito importante e feita baseando-se na polaridade e solubilidade entre este e a amostra. A polaridade deve ser, geralmente, menor que a do composto e o ltimo deve ser parcialmente solvel. A cromatografia em coluna tem a vantagem de se poder utilizar vrios solventes, um de cada vez, para separar diferentes componentes. Assim, em separaes simples, utiliza-se apenas um solvente para todo o processo e em separaes mais complexas utiliza-se uma srie de solventes, em ordem crescente de polaridade. As colunas de vidro so simples, variando em comprimento e dimetro. Essa variao de tamanho permite selecionar a melhor coluna para separao, onde uma quantidade maior de amostra requer um dimetro maior da coluna e uma melhor resoluo requer um comprimento maior, para que a amostra caminhe mais e, conseqentemente, se separe mais. Alm da escolha do melhor adsorvente, do melhor eluente e da melhor coluna para a anlise, necessrio ter uma ateno especial preparao da coluna adsorvente. No deve ter bolhas de ar aprisionado, j que podem criar rachaduras na coluna, formando caminho preferencial para a amostra, no ocorrendo, ento, a separao efetiva. Deve-se, tambm, deixar a superfcie superior da coluna coberta pelo eluente, j que esta pode secar e contrair, resultando em erros de anlise. Sendo assim, o objetivo desta prtica aprender a preparar a coluna cromatogrfica e separar o naftaleno e o cido saliclico atravs dessa anlise, verificando os resultados atravs da cromatografia em camada delgada.

II. Materiais, Equipamentos e Reagentes

- 5 Bquers 50 mL - Algodo - Basto de vidro - Capela - Coluna de vidro com torneira e teflon - Cromatoplaca (placa de vidro + camada de slica) - Cuba cromatogrfica - Erlenmeyer 250mL - Esptula - Garra - 40 mL de Acetona - 85 mL de clorofrmio (CHCl3) - cido saliclico P.A. NUCLEAR - Iodo - Naftaleno P.S. C10H8 VETEC - Slica gel 60 VETEC

- Mufa - Provetas 25, 50, 100 mL - Suporte universal III. Metodologia e resultados A separao do naftaleno e cido saliclico foi realizada por meio da cromatografia em coluna. A prtica foi dividida em duas etapas: a etapa de purificao, com a tcnica de cromatografia em coluna e a etapa de avaliao da separao, por meio da cromatografia em camada delgada. Para a realizao da primeira etapa da prtica, fez-se necessrio fazer a montagem de acordo com a figura 01. A coluna cromatogrfica constituda por um tubo de vidro, posicionado verticalmente, com a extremidade superior aberta e a inferior afilada, tendo como terminao uma torneira, com a qual se far o controle da vazo da fase mvel.

Figura 01. Montagem da coluna

A coluna de vidro deve ser lavada com gua e detergente para completa eliminao da gordura e ambientada com acetona. Aps secagem desta, coloca-se um pequeno pedao de algodo no incio do estreitamento da coluna a fim de dar suporte fase estacionria (FE), impedindo sua passagem. Fez-se uma marca de 4 cm na coluna, marcando a altura da coluna e indicando a quantidade de slica (FE) necessria para preenchimento desta altura. Adicionou-se certo volume de clorofrmio a esta slica, num bquer, preparando-se uma pasta fluida de adsorvente (slica) com solvente (clorofrmio). Esta pasta ento vertida na coluna. importante ressaltar que deve-se colocar na coluna um pequeno volume do eluente usado na CC antes de se verter o adsorvente, a fim de evitar a formao de

bolhas, visto que estas dificultam o processo de eluio e podem provocar danos fase estacionrias, interferindo em tal processo j que se tornam, alm de obstculos passagem do eluente, caminhos alternativos mais fceis para a passagem da amostra. Deixa-se o adsorvente depositar e o excesso de solvente escoar pela sada inferior. A superfcie superior da coluna de adsorvente deve permanecer sempre coberta com o lquido (eluente), a fim de evitar sua secagem, contrao e, conseqente, alteraes na natureza das substncias analisadas, assim como e aparecimento de rachaduras e poros. A amostra foi preparada misturando os compostos orgnicos analisados, cido saliclico e o naftaleno, num bquer. Aps montagem da coluna, verteu-se a amostra sobre esta e o eluente, em seguida. A eluio se inicia, ento, recolhendo o volume escoado, na parte inferior, num bquer. Foram realizadas 5 coletas, em 5 bquers diferentes, de 50 mL cada. A primeira coleta terminou aps o escoamento dos primeiros 20 mL. As segunda e terceira coletas foram de 25 mL de lquido escoado cada. Essas trs coletas consistiam na primeira fase da cromatografia em coluna, na qual o eluente foi o clorofrmio. Na segunda fase, o eluente foi a acetona, objetivando-se coletar a parte amarelada presente na amostra e evidenciada na coluna de adsorvente, de forma separada. Nesta fase, foram realizadas 2 coletas (a quarta e quinta coletas), de 25 mL de lquido escoado cada. Estes 5 bqueres foram ento, colocados na capela para evaporao do solvente e consequente aumento da concentrao das substncias presentes em cada. Aps contrao de volume, partiu-se para a segunda etapa da prtica Cromatografia em camada delgada (CCD). Na qual avaliar-se-ia a eficincia da separao por cromatografia em coluna. Numa cromatoplaca, fez-se cinco pontos de aplicao de acordo com a figura 02. Cada um correspondente frao coletada no escoamento da CC. Cada ponto foi aplicado cerca de 10 vezes, a fim de se obter uma concentrao maior de amostra. }} }

} 1,0 cm

} 1,5 cm
Figura 02. Cromatoplaca

 cuba cromatogrfica, adicionou-se 15 mL de clorofrmio (FM da CCD), juntamente com um fragmento de papel poroso umedecido com este eluente e aderido parede da cuba, para criar uma atmosfera mida e favorecer a eluio do clorofrmio. A cromatoplaca foi ento colocada na cuba, esta foi fechada e iniciou-se o processo de eluio. Aps completa eluio e retirada da cuba, o cromatograma secou e pde ser revelado com iodo. A figura 03 expressa os resultados obtidos.

1. 1 coleta (aps 20 mL eludos na CC - FM: CHCl3) 2. 2 coleta (aps 25 mL eludos na CC - FM: CHCl3) 3. 3 coleta (aps 25 mL eludos na CC - FM: CHCl3) 4. 4 coleta (aps 25 mL eludos na CC FM: acetona) 5. 5 coleta (aps 25 mL eludos na CC FM: acetona)

Figura 03. Cromatograma de avaliao da separao do cido saliclico e do naftaleno via cromatografia em coluna

IV.Discusso e concluso A primeira etapa da anlise constituiu a fase de purificao, cujo objetivo era obter, em cada frao coletada, apenas uma substncia da mistura de naftaleno (Figura 04) e cido saliclico (Figura 05).

Figura 04. Frmula estrutural do naftaleno

Figura 05. Frmula estrutural do cido saliclico (C7H6O3)

Nesta prtica utilizou-se a slica como fase estacionria e o clorofrmio, primeiramente, e a acetona, posteriormente, como fases mveis. Sendo a coluna adsorvente polar, conforme observado na figura 06, na cromatografia em coluna espera-se que a substncia que possuir maior afinidade com esta, permanea mais tempo retida. Assim, a substncia polar obtida por ltimo.

Figura 06. Slica gel ativada

A primeira fase mvel, clorofrmio, pouco polar, como observado em sua frmula estrutural na figura 07.

Figura 07. Frmula estrutural do clorofrmio (CHCl3)

O naftaleno, como observado na figura 04, uma substncia apolar, visto que composto por uma cadeia carbnica extensa, com dois anis aromticos. Sendo assim, ele possui uma maior afinidade com a fase mvel e espera-se obt-lo primeiramente. Em contrapartida, o cido saliclico um composto polar, visto que apresenta um grupo carboxila e uma hidroxila ligados cadeia carbnica, conforme observado na figura 05. Desta forma, os grupos responsveis por sua polaridade so capazes de fazer interaes com a slica, do tipo ligao de hidrognio. Como essas interaes so fortes, o cido saliclico ficar retido pela slica, sendo o clorofrmio incapaz de arrast-lo. Assim, necessrio utilizar uma outra fase mvel, mais polar, para que este seja arrastado, possibilitando sua coleta. Ento, a fase mvel utilizada foi a acetona (Figura 08).

Figura 08. Frmula estrutural da acetona (propanona C3H6O)

Para avaliar a separao das substncias via cromatografia em coluna, empregou-se a cromatografia em camada delgada, retirando uma alquota de cada frao para a microanlise. A fase mvel utilizada foi o clorofrmio. O primeiro ponto de aplicao representava a primeira frao e no foi observado nenhuma substncia presente, j que no apresentou nenhum Rf, sendo, ento, apenas solvente. No segundo e no terceiro pontos de aplicao, representando a segunda e terceira fraes, respectivamente, observou-se uma substancia de Rf igual a 0,79. Visto isso, pode-se dizer que esta o naftaleno, j que houve uma maior interao com a fase mvel (pouco polar), sendo mais arrastada por esta. No quarto ponto de aplicao observou-se uma substncia, apenas, de Rf igual a 0,13. No quinto ponto de aplicao observou-se, tambm, apenas uma substncia de Rf igual a 0,24. Pode-se afirmar que a substncia obtida quinto ponto o cido saliclico, j que apresentou maior interao com a fase estacionria e foi a ltima substncia coletada, estando mais pura que a do quarto ponto, j que esta representava uma frao intermediria, de mudana de eluente e de separao de substncias. Somente foi possvel visualizar as substncias no cromatograma aps revelao com iodo, pois o iodo se une fisicamente com as substncias saturadas, em sua maioria, revelando-se sob a forma de manchas marrons, tanto mais escuras quanto maior o tempo de exposio e a concentrao da amostra. A formao desses complexos reversvel (muitas vezes rapidamente), sendo essa a maior vantagem do mtodo j que o iodo pode ser eliminado posteriormente, na maioria dos casos, atravs do aquecimento da placa. Pode-se concluir, ento, que a cromatografia em coluna foi eficiente, visto que as substncias foram obtidas separadamente e de forma pura.

V. Referncias bibliogrficas COLLINS, C. H.; BRAGA, G. L.; BONATO, P. S. Fundamentos de Cromatografia. Campinas, SP: Editora da Unicamp, 2006. Column Chromatography. Disponvel em: <http://orgchem.colorado.edu/hndbksupport/colchrom/colchrom.html> Acesso em: 23 abr. 2011 Column Chromatography. Disponvel em: <http://web.uvic.ca/~berryde/techniques/column %20chrom.pdf> Acesso em: 23 abr. 2011. Cromatografia. Disponvel em: <http://vsites.unb.br/iq/litmo/Cromatografia/cromatografia-aula.pdf> Acesso em: 23 abr. 2011.