Pesquisa Brasileira em Odontopediatria e

Clínica Integrada
ISSN: 1519-0501
apesb@terra.com.br
Universidade Federal da Paraíba
Brasil

de Sousa Soares, Diana Gabriela; Braga de Oliveira, Cibele; Leal, Cinira; Ramos Santana Drumond,
Milana Ramos; Nascimento Padilha, Wilton Wilney
Atividade Antibacteriana in vitro da Tintura de Aroeira (Schinus terebinthifolius) na Descontaminação
de Escovas Dentais Contaminadas pelo S. mutans
Pesquisa Brasileira em Odontopediatria e Clínica Integrada, vol. 7, núm. 3, setembro-dezembro, 2007,
pp. 253-527
Universidade Federal da Paraíba
Paraíba, Brasil

Disponível em: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=63770310

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ISSN - 1519-0501 Artigo Original/Original Article

Atividade Antibacteriana in vitro da Tintura de Aroeira (Schinus

terebinthifolius) na Descontaminação de Escovas Dentais
Contaminadas pelo S. mutans

Antibacterial Activity in vitro of the Tincture of Aroeira (Schinus terebinthifolius) in

the Decontamination of Dental Brushs Contamined by S. mutans

Diana Gabriela de Sousa SOARESI

Cibele Braga de OLIVEIRAI
Cinira LEALII
Milana Ramos Santana DRUMONDII
Wilton Wilney Nascimento PADILHAIII

I
Acadêmica do Curso de Odontologia da Universidade Federal da Paraíba, João Pessoa/PB, Brasil.
II
Cirurgiã-dentista formada pela Universidade Federal da Paraíba, João Pessoa/PB, Brasil.
III
Professor Doutor Titular da Disciplina de Clínica Integrada da Universidade Federal da Paraíba, João Pessoa/PB, Brasil.

RESUMO
Objetivo: Avaliar a atividade antibacteriana in vitro da tintura da
casca da aroeira a 20% sobre o Streptococcus mutans e observar
a eficácia deste fitoterápico na descontaminação de escovas
dentais in vitro contaminadas com este microorganismo.
Método: Determinou-se a atividade antibacteriana in vitro sobre a
linhagem padrão de S. mutans (ATCC 2575), através da técnica de
difusão em ágar para determinação da Diluição Inibitória Máxima
(DIM). As placas de Petri contendo o meio de cultura Ágar Mueller
Hinton foram semeadas pela técnica da inundação, sendo realizados
7 poços, de 6mm de diâmetro, onde foram inoculados 50ul da tintura
de aroeira nas formas pura (1:0) e diluída de 1:1 até 1:32. Como
controle positivo utilizou-se a clorexidina a 0,12%. Em seguida
avaliou-se a descontaminação das escovas dentais, in vitro. As
escovas foram contaminadas em meio de cultura BHI contendo o
S. mutans, através da imersão das cerdas por 1min, sendo realizada
a descontaminação com as seguintes soluções sob a forma de
spray: tintura da aroeira, clorexidinha 0,12% (controle positivo) e
água destilada (controle negativo). Para verificação da inibição do
crescimento, observou-se a turvação do meio líquido, após
incubação por 24h em microaerofilia, e realizou-se a semeadura
na concentração de 10 -3 em meio de cultura Mitis-Salivarius
Bacitracina para contagem das UFC/ml.
Resultados: Os resultados referentes à atividade antibacteriana
sobre o S. mutans, demonstraram ação da tintura de aroeira até a
diluição de 1:8, e da clorexidina até a diluição de 1:32. Com relação
à descontaminação das escovas dentárias, verificou-se que o
inóculo da solução de clorexidina a 0,12% foi único totalmente
límpido após as 24 horas. Ao realizar-se a semeadura para contagem
das UFC/ml, observou-se que a clorexidina apresentou UFC/ml igual
a zero, a tintura de aroeira obteve UFC/ml igual a 77 x 10-3, e o
controle negativo apresentou UFC/ml igual a 4432 x 10-3.
Conclusões: A tintura de aroeira a 20% apresentou atividade
antibacteriana in vitro sobre S. mutans e foi eficaz na redução da
contaminação de escovas dentais contaminadas por este
microorganismo.
ABSTRACT
Objective: To evaluate the antibacterial activity in vitro of tincture
from the ring of aroeira to 20% against the Streptococcus mutans
and observe the effectiveness of this phytoterapic in the
decontamination of toothbrush in vitro contamined with this
microorganism.
Method: Firstly it was determinate the antibacterial activity in vitro
against the standard sort of S. mutans (ATCC 2575), by the
technique of agar diffusion to determinate the Maximum Inhibitory
Dilution (MID). The plates of Petri with the culture medium Agar
Mueller Hinton, were sown by the flooding technique being, after
that, it was realized 7 wells, of 6mm of diameter, where were
inoculated 50ul of the tincture of aroeira in the forms pure (1:0) and
diluted of 1:1 from 1:32. As a positive control, it was utilized the
clorexidine to 0,12%. After that, it was evaluated the
decontamination of the toothbrush, in vitro. The toothbrushes were
contaminated in culture medium BHI with S. mutans, by the immersion
of the bristles for 1min, being realized the decontamination with
the following solutions in spray forms: tincture of aroeira, clorexidine
to 0,12% (positive control), distilled water (negative control). To
the verification of inhibition of the growth, it was observed the
turbility of liquid medium, after incubation for 24h in microaerofily,
and it was realized the sowing in the concentration of 10-3 in culture
medium Mitis-Salivarius Bacitracin to counting of UFC/ml.
Results: The results referring to antibacterial activity against S.
mutans had demonstrated the action of the tincture of aroeira until
the dilution of 1:8, and the clorexidine until the dilution of 1:32.
About the decontamination of the toothbrush, it was verified that
the inoculum of the solution of clorexidine to 0,12% was the only
total limpid after 24h. When it was realized the sowing to the counting
of UFC/ml, it was observed that the clorexidine presented UFC/ml
equal zero, the tincture of aroeira got UFC/ml equal to 77 x 10-3, and
the negative control presented UFC/ml equal to 4432 x 10-3.
Conclusions: The tincture of the aroeira to 20% presented
antibacterial activity in vitro against S. mutans, and it was effective
in the reduction of the contamination of toothbrushes contaminated
by this microorganism.

DESCRITORES DESCRIPTORS
Descontaminação; Fitoterapia; Odontologia preventiva. Decontamination; Phytotherapy; Preventive dentistry.
SOARES et al. - Atividade Antibacteriana in vitro da Tintura de Aroeira
INTRODUÇÃO
A cárie é uma doença multifatorial, sendo resultante
da interação de fatores como hospedeiro, dieta, microbiota
e tempo, constituindo a patologia bucal mais prevalente na
população mundial. A formação do biofilme dentário é
caracterizada por uma sucessão microbiana onde ocorre
inicialmente a aderência das bactérias pioneiras, como
Streptococcus sanguis e Streptococcus mitis, que
proporcionam o desenvolvimento de um meio propício para
a colonização de outras bactérias acidúricas e
acidogênicas, como o Streptococcus mutans1,2.
Dentre os procedimentos mais utilizados na
higiene bucal cita-se a escovação regular com dentifrício. A
remoção mecânica do biofilme realizada com o uso correto
da escova e do fio dental constitui um dos métodos mais
seguros, efetivos e acessíveis à população3.
Devido ao baixo poder aquisitivo em que se
encontram inúmeras famílias, torna-se inviável a troca das
escovas dentárias nos períodos recomendados pelos
Cirurgiões-Dentistas, como também se podem encontrar
escovas dos membros de uma família acondicionada no
mesmo recipiente ou o compartilhamento de uma única
escova entre seus membros4,5.
O tratamento inadequado das escovas dentárias
pode transformá-las em um local propício ao crescimento
de vários tipos de microorganismos, inclusive os que estão
presentes na cavidade bucal, permitindo sua proliferação
e reinfecção. Esse crescimento microbiano pode ser
proporcionado por diversos fatores, como a umidade e a
disponibilidade de nutrientes presentes nas escovas
dentárias 4,5.
Para que as escovas dentais atuem de forma eficaz
é necessário que sejam desinfetadas periodicamente.
Dessa forma, faz-se imprescindível voltar à atenção para
as condições em que as escovas estão sendo utilizadas6.
Dentre as substancias utilizadas para
descontaminação das escovas dentárias in vivo, cita-se a
clorexidina, que apresenta alta substantividade, eficiência
e estabilidade. Possui ação sobre as bactérias gram-
positivas, gram-negativas, além de fungos e leveduras,
sendo considerada um anti-séptico de amplo espectro7,8.
Pesquisas envolvendo plantas medicinais têm
crescido significativamente, entretanto muitas são as
espécies vegetais que ainda carecem de estudos. O
desenvolvimento da fitoterapia visando à obtenção de
produtos medicinais de bons resultados tem beneficiado
diversos pacientes. Na literatura são relatadas inúmeras
ações antiinflamatórias e antibacterianas 9,10.
A aroeira (Schinus terebinthifolius) possui ação
antimicrobiana, antiinflamatória e antiulcerogênica, sendo
utilizada como antisséptico e no tratamento de estomatites.
As folhas da planta são comumente utilizadas em diferentes
países no tratamento de doenças venéreas, inflamação do
útero, infecções do aparelho urinário, feridas de pele,
diarréias e úlcera gastroduodenal11,12.
Alves13 avaliou a atividade antimicrobiana in vitro
da aroeira sobre microorganismos da cavidade oral,
observando que o extrato hidroalcoolico desta planta
apresentou atividade bactericida e bacteriostática sobre S.
mutans, S. mitis, S. sobrinus, S. sanguis e L. casei, como
também ação antifúngica sobre C. albicans, C. tropicalis e
C. krusei. Verificou ainda que a aroeira apresentou ação
antiaderente in vitro semelhante à clorexidina 0,12%,
demostrando a capacidade desta planta em inibir a síntese
do glucano pela glicosiltransferase.
Em estudo realizado por Martinez et al.14 observou-
se que o extrato etanólico a 30% da aroeira apresentou
atividade antibacteriana sobre as cepas de Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e
Bacillus subtilis. Guerra et al.15 demonstraram significativa
atividade antibacteriana do extrato etanólico a 80% desta
planta sobre Candida albicans, comprovando a eficácia
desta planta como potente antimicrobiano.
Desta forma, propôs-se avaliar o efeito
antibacteriano in vitro da tintura da aroeira sobre o
Streptococcus mutans, bem como avaliar a eficácia deste
fitoterápico na descontaminação de escovas dentais
contaminadas pelo S. mutans.
METODOLOGIA
Produto Avaliado
A tintura da aroeira foi adquirida em farmácia de
manipulação, sendo um produto comercializado. Sua
preparação foi realizada pela técnica da maceração,
utilizando-se a casca seca da planta e o álcool como líquido
extrator, obtendo-se uma concentração de 20%.
Determinação da Diluição Inibitória Máxima em Meio Sólido
(DIM)
A atividade antibacteriana foi determinada pelo
método de difusão em meio sólido para a determinação
da Diluição Inibitória Máxima (DIM) sobre S. mutans (ATCC
2575), o qual foi cultivado em caldo nutritivo (BHI – Brain
Heart Infusion – DIFCO®) e incubado a 37°C por 24 horas
em microaerofilia através do método da chama da vela.
Após a observação da turvação do meio, procedeu-se a
semeadura da bactéria em placa de Petri contendo o meio
de cultura Ágar Müller Hinton (DIFCO®) pela técnica de
inundação.
Foram realizadas perfurações no meio de cultura
de 6mm de diâmetro. Nos orifícios foram inseridos 50ml
da solução da tintura pura (1:0) e diluída de 1:1 até 1:32. As
placas foram incubadas em estufa bacteriológica a 37°C
por um período de 24 horas. Com o objetivo de controlar o
estudo e assegurar a sua reprodutibilidade, os
experimentos foram realizados em duplicata. Foi
 SOARES et al. - Atividade Antibacteriana in vitro da Tintura de Aroeira

considerada como DIM a maior diluição da tintura que inibiu

o crescimento bacteriano. Como controle positivo utilizou-
se a solução de clorexidina a 0,12%, para a qual foi
realizado o mesmo procedimento descrito anteriormente.

Descontaminação das Escovas Dentárias in vitro

Para avaliar a capacidade de descontaminação das
soluções testadas, as escovas dentárias (Ultra®),
esterilizadas, foram imersas no meio de cultura líquido BHI
(Brain Heart Infusion®) contendo S. mutans, sendo
realizada a padronização do tempo (1 minuto) e da forma
de imersão para todas as escovas.
Em seguida, as escovas foram divididas em 3
grupos para a realização da descontaminação com as
respectivas soluções sob a forma de spray: 1- Tintura da
aroeira (Schinus terebinthifolius), 2- Clorexidinha 0,12% Figura 1. Atividade antibacteriana in vitro da tintura de
aroeira sobre S. mutans.
(controle positivo) e 3- Água destilada esterilizada (controle
negativo).
As cerdas das escovas foram borrifadas duas
vezes de forma análoga em cada face, evitando áreas livres
de solução, sendo assim incubadas em 6ml de meio de
cultura líquido BHI (Brain Heart Infusion - DIFCO®) por 24
horas a 37ºC em microaerofilia.
Os inóculos obtidos que se mostravam turvos
demonstravam a presença de contaminação e foram
semeados na diluição de 10-3 em meio de cultura sólido
(Ágar Mitis Salivarius Bacitracina - DIFCO®) para contagem
das UFC/ml, sendo incubados a 37ºC, por 24 horas em
microaerofilia.

RESULTADOS

Diluição Inibitória Máxima (DIM)

Foi observada presença de halos de inibição, Figura 2. Atividade antibacteriana da clorexidina sobre S.
indicando atividade antibacteriana da tintura de aroeira, mutans.
quando comparado ao controle positivo (Clorexidina 0,12%)
(Tabela 1 e Figuras 1 e 2).
Na etapa I foi verificada a contaminação bacteriana
pela turvação do meio. O inóculo da solução de clorexidina
Descontaminação das Escovas Dentárias.
a 0,12% foi único totalmente límpido após as 24 horas em
Os resultados foram analisados em dois
momentos, o primeiro referente à presença ou ausência microaerofilia (Tabela 2, Figura 3).
Na etapa II foi avaliada a eficácia da
de turvação do meio líquido (Etapa I), demonstrando a
descontaminação das escovas pela contagem das UFC/
presença ou ausência de contaminação, e o segundo
quanto à contagem das UFC/ml nas placas semeadas com ml de S. mutans, onde se pôde observar a diferença entre
as soluções testadas (Tabela 2, Figuras 4, 5 e 6).
os inóculos (Etapa II).

Tabela 1. Halos de inibição, em milímetros, dos produtos

testados sobre o S. mutans após 24 horas.
Tabela 2. Resultados das etapas I e II (médias em UFC/ml)
Diluições Tintura de aroeira Clorexidina
nas três soluções.
1:0 18,0 22,0 Soluções Etapa I Etapa II
1:1 12,0 18,0
1:2 10,0 16,0 Turvação UFC/ml
-3
1:4 8,0 16,0 Aroeira presente 77 x 10
1:8 7,0 16,0 Clorexidina ausente 0
1:16 0,0 14,0
Água estilada presente 4432 x 10-3
1:32 0,0 12,0
SOARES et al. - Atividade Antibacteriana in vitro da Tintura de Aroeira
Figura 3. Observação da turvação do meio de cultura (BHI)
para a tintura de aroeira (A), clorexidina (B) e água
destilada (C).
Figura 4. UFC de S. mutans da tintura de aroeira após 24
horas.
Figura 5. UFC de S. mutans da água destilada (controle
negativo) após 24 horas.
Figura 6. UFC de S. mutans da clorexidina (controle
positivo) após 24 horas.
DISCUSSÃO
Diversos estudos têm demonstrado o elevado
potencial antimicrobiano da aroeira, como observado no
estudo de Martinez et al. 14 onde se verificou atividade
antibacteriana do extrato etanólico a 30% da casca da aroeira
sobre Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus e Bacillus subtilis, nas
concentrações de 50 e 100%. No estudo de Guerra et al.15
observou-se a atividade antimicrobiana do extrato etanólico
a 80% da casca da aroeira sobre Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e
Candida albicans, apresentando ação até a concentração
de 1%.
Neste estudo observou-se que a tintura da casca
da aroeira apresentou atividade antibacteriana sobre o S.
mutans, até a diluição de 1:8. Este resultado corrobora
Soares et al.16 que observaram inibição do crescimento in
vitro, pela técnica da CIM em meio sólido, deste
microorganismo nesta mesma concentração.
Alves 13 analisou a atividade antimicrobiana e
antiaderente in vitro da aroeira sobre microorganismos do
biofilme dental, observando que o extrato hidroalcoolico da
casca da aroeira apresentou ação antibacteriana sobre S.
mutans até a diluição de 1:4, apresentando halos de
inibição de 12mm, pela técnica da CIM, como também ação
bactericida pela técnica da Concentração Bactericida
Mínima, até a diluição de 1:2. Este extrato também mostrou
ação antiaderente até a diluição de 1:16, demonstrando a
capacidade do extrato em inibir a síntese do glucano pela
glicosiltransferase.
O ensaio da atividade antibacteriana realizado com
a clorexidina, demonstrou sensibilidade do S. mutans até
a ultima diluição, corroborando os estudos de Alves 13 e
Pereira17, nos quais o digluconato de clorexidina a 0,12%
 SOARES et al. - Atividade Antibacteriana in vitro da Tintura de Aroeira

apresentou ação antibacteriana in vitro sobre S. mutans
até a diluição de 1:32, pela técnica da CIM, como também
ação na inibição da síntese do glucano verificada por meio
de testes de aderência ao vidro.
Com relação à descontaminação das escovas,
observou-se que a solução à base da tintura da aroeira,
embora não tenha sido capaz de inibir totalmente o
crescimento bacteriano, provocou redução do número de
UFC/ml quando comparado ao controle negativo,
corroborando estudos prévios13,16 que demonstraram seu
potencial como agente antibacteriano in vitro.
Neste estudo a clorexidina foi capaz de inibir
totalmente o crescimento bacteriano in vitro das escovas
dentárias contaminadas, estando de acordo com Nelson
Filho et al.7, os quais avaliaram a ação da clorexidina a
0,12% na descontaminação de escovas dentárias in vivo,
observando eficácia clínica deste antimicrobiano.
CONCLUSÃO
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A tintura de aroeira a 20% apresentou atividade

antibacteriana in vitro sobre S. mutans e foi eficaz na
redução da contaminação de escovas dentais
Recebido/Received: 10/01/07
contaminadas por este microorganismo. Revisado/Reviewed: 23/02/07
Aprovado/Approved: 2105/07

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