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Revista Internacional de
Ciências Moleculares
Artigo
Ozônio na Medicina. O conceito de ozônio em baixas doses e seus mecanismos
bioquímicos básicos de ação em doenças inflamatórias crônicas
Renate Viebahn-Haensler 1,* ,† e Olga Sonia León Fernández 2,* ,†
Citação: Viebahn-Haensler, R.; León
Fernández, OS Ozônio em
Medicamento. O ozônio em baixa dosagem
Conceito e sua bioquímica básica
Mecanismos de ação em crônica
Doenças Inflamatórias. Internacional J. Mol.
Ciência. 2021, 22, 7890. https://
doi.org/10.3390/ijms22157890
Editores Acadêmicos: Manuela
Malatesta, Bárbara Cisterna e
Manuela Costanza
Recebido: 21 de junho de 2021
Aceito: 18 de julho de 2021
Publicado: 23 de julho de 2021
Nota do Editor: O MDPI permanece neutro em
relação a reivindicações jurisdicionais em mapas
publicados e afiliações institucionais.
iações.
Direitos autorais: © 2021 dos autores.
Licenciado MDPI, Basileia, Suíça.
Este artigo é um artigo de acesso aberto
distribuído nos termos e
condições do Creative Commons
Licença de atribuição (CC BY) ( https://
creativecommons.org/licenses/by/
4,0/).
Internacional J. Mol. Ciência. 2021, 22, 7890. https://doi.org/10.3390/ijms22157890
1
Sociedade Médica para o Uso do Ozônio na Prevenção e Terapia, Iffezheim, D-76473 Baden-Baden, Alemanha Instituto de
2
Farmácia e Alimentação, Universidade de Havana, Coronela, Lisa, Havana 10 400, Cuba * Correspondência:
renate.viebahn@ozone-association .com (RV-H.); olga@infomed.sld.cu (OSLF) † Ambos os autores contribuíram
igualmente.
Resumo: O ozônio em baixas doses atua como biorregulador em doenças inflamatórias crônicas,
bioquimicamente caracterizadas por alto estresse oxidativo e regulação bloqueada. Durante aplicações
sistêmicas, os “ Peróxidos de Ozônio” são capazes de substituir o H2O2 em sua função específica de regulação,
restaurar a sinalização redox e melhorar a capacidade antioxidante. Dois mecanismos diferentes devem ser
compreendidos. Em primeiro lugar, existe o mecanismo direto, utilizado em tratamentos tópicos, principalmente
por meio de reações radicais. Nos tratamentos sistêmicos, deve-se discutir o mecanismo indireto, iônico: o
“peróxido de ozônio” será reduzido diretamente pelo sistema da glutationa, informando os fatores nucleares
para iniciar a regulação. O balanço GSH/GSSG descreve a dose de ozônio e o fator limitante da concentração.
Os antioxidantes são regulados e, no caso de doenças inflamatórias, regulados positivamente; as citocinas são
moduladas, aqui reguladas negativamente. Artrite reumatóide AR como modelo para inflamação crônica: A AR,
em ensaios pré-clínicos e clínicos, reflete a farmacologia do ozônio de maneira típica: aumento de SOD
(superóxido dismutase), CAT (catalase) e finalmente GSH (glutationa reduzida), seguido por um aumento
redução significativa do estresse oxidativo. As citocinas inflamatórias são reguladas negativamente.
Consequentemente, o estado clínico melhora. Os antecedentes farmacológicos investigados num número
notável de experiências celulares, ensaios pré-clínicos e clínicos estão bem documentados e publicados em
revistas internacionais revisadas por pares. Isto deverá encorajar os médicos a realizar ensaios clínicos com
doenças inflamatórias crónicas, integrando o ozono medicinal como complemento.
Palavras-chave: ozonioterapia; biorregulação; equilíbrio redox; inflamação crônica; medicina
biológica; Medicina complementar
1. Introdução
Os mecanismos básicos de reação do ozônio originam-se de laboratórios de pesquisa e
desenvolvimento no ambiente de tratamento de água: constantes de reação e mecanismos para
uma variedade de substratos inorgânicos e orgânicos, atividade bactericida, fungicida ou antiviral.
Incorretamente, eles são em sua maioria transferidos diretamente para aplicações médicas e
doenças. Aqui, mostraremos que o ozônio medicinal em baixa concentração e dosagem na forma
de “ peróxido de ozônio” substitui o redox biológico e a regulação imunológica do peróxido de hidrogênio.
Isto é de especial interesse em doenças inflamatórias crónicas com elevado stress oxidativo, deficiência de
antioxidantes e desequilíbrio imunitário, uma condição na qual a regulação biológica é largamente perturbada.
A reação específica do ozônio com ligações duplas isoladas de ácidos graxos monoinsaturados com
“peróxidos de ozônio” de cadeia curta (não com ácidos graxos poliinsaturados) induz o evento de reação adicional
em interação com a glutationa. Para demonstrar isto, os autores avaliaram as suas próprias investigações e
publicações essenciais e consultaram as publicações relevantes de outros autores.
https://www.mdpi.com/journal/ijms
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1.1. Ozônio como

Biorregulador A bioquímica da vida é um caleidoscópio de processos dinâmicos, equilíbrios que
interagem dinamicamente em uma rede quase confusa. Se os ciclos individuais, os equilíbrios parciais,
forem perturbados, esta rede biológica ainda é capaz de compensar as perturbações, reparar defeitos e
manter o sistema global “viável” por um longo tempo.
Perturbações duradouras, stress crónico, uma multiplicidade de factores de perturbação diferentes
em vários pontos da nossa rede biológica deixam lesões dentro de equilíbrios bioquímicos dinâmicos
únicos ou múltiplos que já não podem ser compensados e bloqueiam os mecanismos de reparação
biológica. Isso leva principalmente a doenças crônicas.
Reativar processos biológicos e, se possível, reiniciar os mecanismos de reparação é o objetivo da
Medicina Biológica. Nas doenças com stress oxidativo crónico, o ozono medicinal tem um significado
especial: em baixas
concentrações e dosagens, actua como biorregulador, enquanto a regulação é
bloqueado quando altas concentrações são usadas.
Num sistema biológico que ainda pode ser regulado, esse papel cabe ao peróxido de
hidrogênio H2O2, que é um dos mais importantes biorreguladores oxidativos em concentrações
biológicas [1,2]. Quando e se a concentração de H2O2 for demasiado elevada, a regulação é
bloqueada e iniciam-se processos degenerativos, como no caso das doenças inflamatórias crónicas.
Esta posição chave do peróxido de hidrogénio será então provavelmente assumida pelo “
peróxido de ozono” formado a partir do ozono, como visto na Figura 1a,b. Aqui, iremos demonstrar
isto numa base molecular e bioquímica, apoiado por dados pré-clínicos e clínicos, utilizando um
excelente exemplo de uma doença inflamatória crónica, a artrite reumatóide.

Figura 1. (a) Peróxido de hidrogênio como principal regulador redox no sistema biológico modificado de acordo com. para [1,2]. (b). Ozônio em baixas doses
como biorregulador.

1.2. Indicações e aplicações do ozônio administrado sistemicamente Nas

últimas três décadas, a farmacologia e os mecanismos moleculares do ozônio para uso médico
foram amplamente investigados e bem confirmados. Nas décadas de 1980 e 1990, a sua influência no
metabolismo dos glóbulos vermelhos (glóbulos vermelhos) com uma melhoria na libertação de oxigénio
como resultado final [3–5], enquanto o impacto do ozono nas células imunocompetentes foi o principal
tema da investigação do ozono de Bocci na década de 1990. , por exemplo, [6,7], ampliando o
conhecimento e a compreensão da imunomodulação.
O primeiro artigo sobre o ozônio como biorregulador do equilíbrio redox em um sistema biológico
foi publicado por León e seu grupo em 1998, seguido por um programa intensivo de pesquisa em todo o
mundo até hoje [8].
Nesta base e com formas padronizadas de tratamentos com ozônio, como auto-
hemoterapia principal (MAH) e insuflação retal (IR) como aplicações sistêmicas de ozônio de
baixo risco (ver Figura 2a,b), as indicações do ozônio medicinal foram estabelecidas, principalmente crôn
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inflamações ou doenças associadas a condições inflamatórias crônicas [9]. Seguindo o conceito

de ozono de baixa dose, o ozono medicinal pode ser integrado com sucesso num sistema
médico complementar na angiopatia, artrite reumatóide ou doenças intestinais crónicas, como
exemplos, ver Tabela 1. Todos eles têm um fenómeno em comum: elevado stress oxidativo,
medido como ROS (espécies reativas de oxigênio) e uma capacidade antioxidante suprimida,
bem como um desequilíbrio imunológico

Figura 2. (a) [9] Auto-hemoterapia principal. Sistema padronizado acc. às Diretivas de Dispositivos Médicos MDD 93/42EC.
1. Seringa de ozônio (PP, siliconizada). 2. Filtro bacteriano 0,2 µ (germstop). 3. Frasco a vácuo (vidro) com sistema de microbolhas (PP). 4.
Conjunto de transfusão (PE). 5. Plugue sem látex. (b) [9] Conjunto para insuflação retal, sistema padronizado conforme. às Diretivas de
Dispositivos Médicos 93/42 CE. 1. Bomba doseadora (silicone). 2. saco de armazenamento. 3. Braçadeira. 4. Válvula unidirecional. 5. linha de
conexão (PE). 6. cateter (PE).

Tabela 1. Indicações dos tratamentos sistêmicos com ozônio MAH e RI e os mecanismos de ação subjacentes de acordo com. para [9].

Formulários Indicações Mecanismos de Ação

Aplicações sistêmicas
- Ativação de RBC
Distúrbios circulatórios arteriais
metabolismo, aumento de
Processos inflamatórios crônicos
2,3-DPG, de ATP,
1. Auto-hemoterapia principal MAH - Angiopatia, principalmente diabética
- Inflamação crônica em melhora na liberação de
como tratamento de sangue oxigênio
extracorpóreo e reinfusão iv do ortopedia e reumatologia
- Artrite reumatóide AR - Ativação de células imunocompetentes com
próprio sangue do paciente
- Doenças intestinais crônicas regulação da produção de
por meio de infusão gota
a gota citocinas, como interferons e
- Formas crônicas de hepatite interleucinas.
sem pressão 2. Insuflação retal RI BeC
- Regulação negativa do estresse oxidativo
- Oncologia complementar
- Regulação da capacidade antioxidante
- Doenças relacionadas à idade
por transdução de sinal
-
Deficiência de glicose-6-fosfato desidrogenase em hemácias (favismo, anemia hemolítica aguda)
-
Contra-indicações
Hipertireoidismo se não controlado
- Os primeiros 3 meses de gravidez
- MAH não está indicado na leucemia

1.3. Procedimentos

Titular da AIM: 50–100 mL de sangue venoso são retirados do paciente para o frasco a vácuo e, como regra, 50–
100 mL de mistura de ozônio/oxigênio são borbulhados usando citrato de sódio como anticoagulante, para ser
imediatamente reinfundido em sistema fechado sob estrita assepsia
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condições; veja a Figura 2a. Como o ozônio reage em menos de um segundo com os componentes do
sangue, como os ácidos graxos insaturados da membrana celular, nem mesmo uma única molécula de
ozônio entra no sistema vascular. O componente oxigênio da mistura O2/O3 serve apenas como
substância transportadora e, com sua fraca solubilidade no sangue, passa pelo líquido, permanece no
frasco e não é infundido no paciente.

1.4. Concentração e dosagem de ozônio no MAH

Tal como resumido e discutido nas directrizes para o conceito de ozono de baixa dose [9], o
intervalo de concentração de ozono para aplicações sistémicas sob a forma de AIM não deve
exceder 10–40 µg/mL. Acima de 50 µg/mL, um efeito tóxico do ozônio deve ser levado em
consideração, e 80 µg de ozônio por mL de sangue nunca devem ser usados.
A dosagem de ozônio por tratamento cobrirá uma faixa entre 500 e 4.000 µg. Veja a Tabela 2
onde discutimos:

• µg de ozônio por mL de mistura de ozônio/oxigênio que é fornecida pelo gerador de ozônio, •

µg de ozônio por mL de sangue,
ou • a quantidade total de ozônio em µg por quantidade total de sangue, ou a quantidade total de
ozônio em µg por tratamento.

Tabela 2. Procedimento padrão da auto-hemoterapia major MAH [9].

Procedimento Padrão MaH:

50 mL de Sangue + 50 mL de O2/O3 (ou 100 mL de O2/O3 por 100 mL de Sangue)
Concentração de ozônio máximo
10–20 µg/mL de gás 30 µg/mL de gás
por mL de gás 40 µg/mL de gás
Concentração de ozônio
por mL de sangue 10–20 µg/mL de sangue 30 µg/mL de sangue 40 µg/mL de sangue
= concentração biologicamente relevante

Quantidade total de ozônio por 50 (100) mL de sangue 500–1000 µg por tratamento 1500 µg por tratamento 2.000 µg por tratamento

Insuflação retal. A IR é uma alternativa válida à AIM, aplicada principalmente em pacientes idosos nos quais a AIM não pode ser realizada devido a condições venosas
desfavoráveis ou em condições crônicas com longos períodos de tratamento.

Na medicina normalmente utilizamos a unidade 1 µg/mL, idêntica a 1 mg/L = 1 g/m3 usada em

águas residuais e purificação de água potável.
Método. A insuflação retal de ozônio pode ser administrada como um enema intestinal através de
uma seringa de enema de 30, 50 ou 200 mL ou um conjunto retal especial para administrar 150 ou 300
mL consistindo de: um recipiente de fornecimento de ozônio com válvula de bloqueio, bomba dosadora
com válvulas de retorno , tubo de conexão com luer lock ou seringa descartável revestida de silicone de
50 mL e cateter retal; veja a Figura 2b.

1.5.
Dosagem • Sistêmica: 10–25 µg de mistura de ozônio/mL de oxigênio gasoso, volume 150–300 mL;
para crianças: 10–20 µg/mL, volume 10–30 mL; RI é a forma sistêmica preferida de aplicação de ozônio
para crianças.
• Local: na colite ulcerosa, são aplicadas altas concentrações de O3/O2 (70–80–100 µg/mL) e
pequenos volumes (50 mL). Após a cessação da hemorragia, este valor é reduzido para 20–30
µg/mL, seguido de eficácia sistémica: 10–20 µg/mL, volume de 150–300
mL. • A aplicação retal de ozônio é simples, de baixo custo e praticamente livre de reações adversas
quando as dosagens são rigorosamente
respeitadas. • Como terapêutica adjuvante na proctite e na proctocolite, a insuflação rectal está
cientificamente fundamentada e deve ser recomendada. A insuflação retal de O3 é cada vez
mais utilizada em pediatria, medicina esportiva, geriatria e como método complementar em oncologia.
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2. Resultados

2.1. Mecanismos de Ação 2.1.1.

A reatividade e os efeitos do ozônio

De acordo com os seus parceiros de reação, o ozônio segue diferentes mecanismos de reação. Na presença de
reagentes orgânicos, o ozônio tem um conjunto de reações marcadamente seletivo [10]. Em princípio, são possíveis
mecanismos de reação radical e iônica; veja a Figura 3a,b.

Figura 3. (a) Estrutura molecular. Mecanismos de reação radical e iônica do ozônio modificados após [9]. (b)
Reação do ozônio com ligações duplas isoladas, ou seja, ozonólise de acordo com Criegee 1953, 1975 [11,12].
Os hidroxi hidroperóxidos, aqui “peróxidos de ozônio”, são entendidos como as substâncias farmacologicamente
ativas.

A decomposição do ozônio em oxigênio molecular com meia-vida dependente do sistema

(2 O3 ÿ 3 O2) no estado gasoso ocorre, por exemplo, t1/2 = 55 min, uma seringa descartável de
50 mL (polipropileno e pistão siliconizado) ou também em meio aquoso, embora com meia-vida
consideravelmente prolongada, por exemplo, t1/2 = 10 h em água bidestilada com condutividade
de 0,05 µS a 20 ÿC/68 ÿF.
Devido à sua elevada reactividade com ligações duplas isoladas em ácidos gordos insaturados (UFA), o ozono
reage sob condições fisiológicas (MAH ou RI) em menos de um segundo de uma forma altamente específica de acordo
com a ozonólise clássica, nomeadamente o “mecanismo Criegee”, um mecanismo iónico , reação não radical [11,12].
Começando com a adição eletrofílica dipolar 1,3 às ligações duplas C = C isoladas, os hidroxi-hidroperóxidos de cadeia
curta, aqui designados como “peróxidos de ozônio”, são formados como intermediários em pH ÿ 7,4, como mostrado na
Figura 3a, b.
É muito provável que o “peróxido de ozono” assuma o papel de uma substância de segundo mensageiro, induzindo
a maioria dos efeitos farmacológicos através da glutationa como o sistema redox central e altamente eficaz de cada célula.

Ao contrário do pequeno e transitório estresse oxidativo obtido com baixas concentrações de

ozônio e da pequena quantidade de “peróxidos de ozônio” com seu grupo peróxido terminal, o
estresse oxidativo permanente no organismo é produzido por oxigênio e/ou radicais OH com, por
exemplo, poliinsaturados. ácidos graxos (PUFA) formando peróxidos de cadeia longa com um grupo
peróxido central. Esses peróxidos relativamente estáveis e com tendência a desencadear reações
radicais em cadeia são compostos de longa vida e são tomados como substâncias de referência
(medidas como hidroperóxidos totais TH) para uma situação de estresse oxidativo em doenças
inflamatórias crônicas, principal indicação da ozonioterapia.
O próprio ozônio não reage preferencialmente com PUFAs, especialmente com ligações
duplas conjugadas devido à sua estabilidade mecânica quântica. Isso significa que não contribui para
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estresse oxidativo se concentrações e dosagens adequadas forem usadas, conforme experimentado no conceito
de ozônio em baixas doses.

2.1.2. Efeitos diretos: efeitos germicidas e de inativação de vírus em aplicações tópicas de ozônio
Usando o ozônio na medicina, temos estritamente que distinguir entre seus efeitos diretos e
efeitos indiretos.
Os efeitos bactericida e fungicida, bem como de inativação de vírus, bem conhecidos na
purificação de água e no tratamento de água potável, são usados em feridas fortemente infectadas,
como queimaduras, pé diabético e ulcus cruris, e tornando-se cada vez mais importantes em
lesões infectadas com germes resistentes à maioria dos antibióticos como MRSA ( Staphylococcus
aureus resistente à meticilina).
Aqui, utilizamos a faixa de alta concentração por tratamento tópico na forma de “ensaque
de gás” ou o método de tratamento de baixa pressão de acordo com Werkmeister [13] para
desinfecção e limpeza de feridas. A formação de diferentes radicais de oxigênio e, finalmente,
OH- é o mecanismo de ação dominante do ozônio, com impacto direto sobre bactérias,
microorganismos e vírus. Para a cicatrização de feridas, é necessária uma faixa de concentração
baixa para utilização na reação indireta ao ozônio; veja a Figura 4.

Figura 4. Reações diretas e indiretas ao ozônio em tratamento tópico e sistêmico dentro das faixas de
concentração correspondentes.

2.1.3. Efeitos indiretos em tratamentos sistêmicos: transdução de sinal e biorregulação

Em doses baixas, ozônio aplicado sistemicamente na forma de auto-hemoterapia importante
(MAH) e a insuflação retal (IR) atua como um biorregulador, conforme mostrado esquematicamente em
Figura 5: como produto de reação de O3 e ácidos graxos insaturados ( ligações duplas isoladas), os
“peróxidos de ozônio” induzem uma transdução de sinal pela oxidação da glutationa (ou
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resíduos de cisteína), informando os fatores nucleares correspondentes, resultando finalmente em

uma regulação dos antioxidantes via Nrf2 (fator de transcrição: fator nuclear relacionado ao eritróide 2
fator 2), ou uma imunomodulação via NFkB (fator de transcrição: fator nuclear kB).

Figura 5. Os efeitos farmacológicos do ozônio medicinal por meio dos peróxidos produzidos pelo ozônio. Os três efeitos :
1. Melhor liberação de oxigênio pelos glóbulos vermelhos (RBC) através da ativação do metabolismo dos glóbulos vermelhos.
2. Imunomodulação através da ativação dos glóbulos brancos (WBC) e transdução de sinal via
fatores nucleares. 3. Regulação de antioxidantes celulares via sinalização Nrf2 [9].

Além dos parâmetros clínicos relevantes para a indicação, o curso do tratamento pode
ser seguido pelo monitoramento de antioxidantes específicos e citocinas características.

2.1.4. Relação Dose-Resposta

Na sua dose-resposta, o ozono médico segue o princípio da hormese: baixas concentrações
(ou doses) mostram uma elevada eficácia, que diminui com o aumento das concentrações, finalmente.
revertendo para um efeito ineficaz e até tóxico. A Figura 6 mostra a eficácia/concentração
relação para a aplicação sistêmica do ozônio. Aqui, concentrações de 10–40 µg/mL
representam os níveis que são fisiologicamente eficazes e recomendados para aplicação sistêmica.

Figura 6. Resposta à dose: relação eficácia-concentração de medicamentos administrados sistemicamente

ozônio como substância hormética (esquematicamente), modificado após [9].
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Concentrações abaixo de 10 µg/mL têm impacto muito baixo ou nenhum impacto, pois
antioxidantes no soro como Vit. C eliminará completamente o ozônio. Concentrações administradas
sistemicamente ÿ 60 µg/mL são tóxicas. O efeito antibiótico do ozônio na faixa de concentração de 60
a 100 µg/mL fica completamente restrito às formas tópicas de aplicação.

3. Discussão

3.1. “Peróxidos de Ozônio” como Moléculas

Sinalizadoras 3.1.1. Estresse oxidativo

O alto estresse oxidativo e um sistema antioxidante insuficiente são características bioquímicas das doenças
inflamatórias crônicas, nas quais a regulação biológica é sobrecarregada e parcialmente ou completamente inibida.
Aqui, pode-se perguntar se a aplicação sistêmica de ozônio usando “oxigênio ativo” é realmente apropriada. Isso não
aumenta o H2O2, o MDA (malondialdeído ) e o TH (hidroperóxidos totais), produzindo mais um estressor oxidativo,
destruindo finalmente o sistema antioxidante que já funciona além de sua capacidade nessas indicações?

Os hidroperóxidos totais, produto final dos ácidos graxos poliinsaturados (PUFA) mais radicais
OH e/ou oxigênio (autooxidação como reação radical), podem ser considerados um parâmetro
significativo para o estresse oxidativo crônico. Esses peróxidos de cadeia longa com um grupo
hidroperóxido central têm uma meia-vida considerável no sistema biológico e iniciam, por sua vez,
reações radicais em cadeia.

3.1.2. “Peróxidos de ozônio” como moléculas de segundo mensageiro

A autoxidação não deve ser confundida com a ozonólise (Figura 3b): enquanto o ozônio reage
com ligações duplas isoladas de uma maneira altamente seletiva, este não é, ou muito menos, o caso
com ácidos graxos poliinsaturados, isto é, especialmente ligações duplas conjugadas.
Como um peróxido não radical de cadeia curta com o grupo -OOH na posição final, o “peróxido de ozônio” R-
CH(OH)-OOH pertence aos compostos reativos de oxigênio e ainda é um oxidante, mas é menos reativo que o ozônio
em si.

Os “peróxidos de ozônio” associados à membrana poderiam atuar como segundos

mensageiros via resíduos de cisteína e/ou redução através da glutationa GSH de forma menos
agressiva que os radicais superóxido ·OO– e H2O2, e assumir a regulação dos antioxidantes,
ou seja, sem SOD (super óxido dismutase) e demanda de CAT (catalase) como nos processos
de estresse oxidativo de condições patológicas relevantes.
O “peróxido de ozônio” de cadeia curta com sua baixa tendência a reações radicais poderia
iniciar a regulação de mecanismos protetores antioxidantes como sinal redox, por exemplo, através
dos fatores nucleares NFkB e Nrf2 em processos de estresse e inflamação. Sabe -se que o próprio
ozônio regula positivamente o NFkB sob condições especiais, enquanto a cortisona bloqueia esse
fator nuclear [14].
O H2O2 formado a partir de peróxidos de ozônio, conforme proposto por outros autores, por
exemplo, [10], provavelmente não cumprirá esta função, pois o conteúdo de H2O2 é geralmente
patologicamente aumentado nos pacientes em questão. A transdução de sinal correspondente é
insuficiente, resultando em um déficit de enzimas antioxidantes.

3.1.3. Transdução de Sinal e Biorregulação. O papel da glutationa

A Figura 7 apresenta um levantamento esquemático da biorregulação de antioxidantes e

citocinas através do “peróxido de ozônio”, que é diretamente reduzido pela forma ativa da
glutationa GSH, a reação chave que induz a regulação. Em células e órgãos saudáveis, a
reação H2O2 + GSH realiza a tarefa de transdução de sinal para o núcleo através dos fatores
nucleares, ativando ou inativando finalmente segmentos especiais de DNA para a produção de
proteínas específicas da célula.
Nas doenças crónicas de stress oxidativo, esta informação e regulação são completamente
perturbadas, apesar de um teor extremamente elevado de H2O2 e o “peróxido de ozono” adopta
esta função, ver Figura 1a,b.
A oxidação central de GSH em GSSG (glutationa reduzida à forma oxidada em um sistema
saudável 90:10%) na Figura 7 emerge como a concentração de ozônio e “ozônio
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fator limitante da dose de peróxido: o equilíbrio GSH/GSSG não deve ser perturbado em nenhum caso,
ou seja, a forma reduzida de GSH nunca deve cair durante uma série de tratamento sistêmico com ozônio.
A regulação de enzimas antioxidantes pelo ozônio, por exemplo, glutationa peroxidase e
redutase , necessárias para manter ou restaurar o equilíbrio da glutationa, é explicada na Figura 8a: A
transdução de sinal é iniciada através da redução de “peróxidos de ozônio” pelo GSH, induzindo a
translocação de Nrf2 no núcleo, transcrição, tradução e, finalmente, a síntese de proteínas - neste caso
antioxidantes - prossegue, proposta pela primeira vez por Sagai e Bocci [15,16].
Entretanto, isto foi confirmado em diferentes ensaios experimentais e clínicos [17,18] e
recentemente especificado por Togi e colaboradores para sugerir que inicialmente o NFkB é
ativado e o Nrf2, em seguida, numa fase posterior, como mostrado por experiências com células HeLa [ 19]
Em tecidos saudáveis e pré-malignos, a ativação do Nrf2 regula a proteção celular, mantém
a homeostase celular e previne o início e a progressão do câncer. O contrário pode ocorrer em
células cancerosas, onde um alto status antioxidante celular protege a célula das ERO, levando
a um aumento da sobrevivência das células cancerígenas e à resistência à quimioterapia [20].
Na dependência das concentrações de ozônio, este efeito foi explorado por Costanzo e colegas com o
resultado de que não há efeito sobre a motilidade e proliferação de células cancerígenas in vitro nas
concentrações usadas sistemicamente seguindo o conceito de baixa dose de ozônio [21,22 ].

A modulação da resposta imune pode ser compreendida por um mecanismo semelhante através
do fator nuclear NfkB, conforme apresentado esquematicamente na Figura 8b.

Figura 7. Efeitos farmacológicos do ozônio: transdução de sinal via glutationa e “peróxidos de ozônio”. Um equilíbrio GSH/
GSSG intacto é o fator limitante para a concentração de ozônio e a base para a revisão do conceito de ozônio de baixa dose de [23].
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Figura 8. (a) O conceito de ozônio em baixas doses e a regulação de antioxidantes, iniciada através da redução de “ peróxidos de ozônio”
pela forma ativa (reduzida) da glutationa GSH, iniciando a transdução de sinal via Keap 1/Nrf2– complexo
e translocação de Nrf2 para o núcleo. Em estreita ligação com proteínas como Maf e o complexo ARE (antioxidante
elementos de resposta) prosseguem a transcrição dos genes, a tradução e finalmente a síntese antioxidante, ver também [15,17,19].
(b). Levantamento esquemático da indução de citocinas através do ozônio em células mononucleares. Em organismos saudáveis, o H2O2 atua como
substância mensageira na inflamação crônica onde a regulação está desequilibrada. É mais provável que seja “peróxido de ozônio”
substituindo H2O2 e reiniciando a regulação conforme. para [14,19].

3.1.4. Marcadores de estresse específicos de ozônio

Como mostrado acima, a farmacocinética clássica com etapas únicas de reabsorção, liberação,
biotransformação e eliminação do corpo é inadequada para o ozônio medicinal, pois
reage instantaneamente com ácidos graxos insaturados (ligação dupla única) a “peróxidos de ozônio”,
e estes, sendo diretamente reduzidos pela glutationa GSH, induzem a biorregulação. Esses efeitos
são pequenos e mensuráveis, com pelo menos 3, e geralmente após 6–10 tratamentos sistêmicos.
Além dos parâmetros bioquímicos e clínicos relevantes para a indicação, medimos o estresse
marcadores, como antioxidantes e citocinas, como uma resposta específica do corpo ao ozônio
administrado sistemicamente, consulte a Tabela 3. Os ensaios pré-clínicos e clínicos são discutidos em
este aspecto.

Tabela 3. Marcadores de estresse específicos do ozônio durante o tratamento sistêmico com ozônio, recomendados para acompanhar o sucesso do tratamento.

Estresse oxidativo Status antioxidante Citocinas

Hidroperóxidos totais de TH superóxido dismutase SOD total interleucina IL-1, IL-6,

MDA malondialdeído
SEM óxido de nitrogênio
GSH reduziu glutationa Fator de necrose tumoral TNFÿ-ÿ
ÿ-GT ÿ-glutamil transferase

4. Materiais e Métodos
4.1. Artrite reumatóide AR como modelo para doenças inflamatórias crônicas
Nos estágios iniciais da terapia com ozônio, numa época em que os efeitos do ozônio
administrado sistemicamente ainda não eram totalmente compreendidos, os pacientes com artrite
reumatóide recebiam auto-hemoterapia complementar com ozônio em altas doses, de acordo com Wolff, H.
1979 [24].
Erradamente, como se viu, uma dose de 6.000 a 10.000 µg de ozônio na faixa de concentração
entre 60 e 80 µg/mL foi considerado como tendo efeito imunossupressor. No entanto,
neste caso, estamos em uma faixa tóxica com alto índice de hemólise. Os resultados clínicos
eram correspondentemente inúteis, com o resultado de que a AR não era mais considerada um
indicação para ozônio.
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Entretanto, armada com o conhecimento farmacológico de que o ozono é altamente

eficaz como agente anti-inflamatório na gama de doses baixas, a artrite reumatóide
tornou-se uma indicação exemplar para auto-hemoterapia importante e insuflação rectal.
Com faixa de concentração ideal de 20–30, máximo de 40 µg/mL e na dose de 1.000–1.500 µg,
são recomendados no máximo 2.000 µg por tratamento do titular da AIM, ou insuflação retal com
volume de 150–300 mL, respectivamente.
Principalmente, a terapia com ozônio é agora considerada uma terapia complementar na AR, aprimorando
uma terapia convencional com o objetivo de reduzir a terapêutica básica ou torná -la mais tolerável através da
ativação de mecanismos desintoxicantes no fígado [25–28].

4.2. Ensaios pré-clínicos

Em experiências com animais, foi obtida uma melhoria considerável nos parâmetros clinicamente
relevantes com o ozono medicinal. Isto pode ser visto na Figura 9a usando um índice de artrite como
exemplo: sob aplicação de ozônio, o índice de artrite melhora sistematicamente, começando no dia
10, enquanto a administração de oxigênio não produz praticamente nenhuma alteração em
comparação com o controle: o índice de artrite aumenta continuamente e permanece em alto nível.

Figura 9. (a) Desenvolvimento do índice total de artrite (inchaço das articulações) ao longo de 35 dias em um estudo pré-clínico (n = 20)
sobre artrite reumatóide AR em ratos sob tratamento intra-articular com ozônio 3x por semana, 20 µg/mL, 0,2 mL , começando no dia 10.
Controle (n = 5): estresse com agulha intra-articular 3× por semana. Artrite reumatóide induzida por PG/PS (n = 15) (peptidoglicano/polissacarídeo).
PG/PS + ozônio (n = 5): tratamento com ozônio começando no dia 10. PG/PS + oxigênio (n = 5): tratamento com oxigênio (0,2 mL) começando
no dia 10 [25] . (b) A capacidade antioxidante, aqui como superóxido dismutase SOD no baço de ratos com AR após 10 tratamentos intra-
articulares com ozônio em comparação com o tratamento e controle com oxigênio, conforme descrito na Figura 9a [25]. (c) Estresse oxidativo,
medido como NO no baço de rato após 10 tratamentos intra-articulares com ozônio em comparação com oxigênio e controle, conforme descrito
na Figura 9a [25]. (d) Regulação negativa dos parâmetros de estresse inflamatório RNAm de TNF-ÿ e RNAm de IL-1ÿ, medidos em unidades
arbitrárias no baço de rato após 10 tratamentos intra-articulares com ozônio em comparação com oxigênio, conforme descrito na Figura 9a [25].
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Como dirradical, o oxigénio apresenta um comportamento reacional completamente diferente

do do ozono, e tende mais a produzir uma deterioração dos sintomas expressos, entre outros
fatores, por um aumento nos parâmetros de inflamação ARNm de TNF-ÿ e ARNm de IL-1ß ( Figura
9d).
Tanto o estudo pré-clínico quanto o ensaio clínico mostram o efeito do ozônio como regulação
positiva de antioxidantes e regulação negativa do estresse oxidativo, bem como das citocinas
cruciais IL-1, Il-6 e TNF-ÿ. Consulte a Figura 9a-d para o estudo pré-clínico e a Figura 10a-d para
o ensaio clínico.

Figura 10. (a) Ensaio clínico em artrite reumatóide AR (n = 60) após 20 insuflações retais de ozônio com concentração de ozônio: 25–40
µg/mL e 5.000–8.000 µg por tratamento durante 4 semanas. Grupo MTX (n = 30): terapia básica MTX+Ibuprofeno+ Ácido Fólico. Grupo
ozônio (n = 30): básico como grupo MTX mais ozônio por via retal. SOD: superóxido dismutase, CAT: catalase, GSH: glutationa reduzida
[26]. (b). Marcadores de estresse oxidativo NO: monóxido de nitrogênio (µMol), AOOP: proteínas oxidadas avançadas (µMol), TH:
hidroperóxido total (µMol), MDA: malondialdeído (µMol) [26]. (c). Pontuação de atividade da doença seguindo o EUROPEAN LEAGE
AGAINST RHEUMATISM em pacientes com artrite reumatóide tratados com terapia padrão ( grupo MTX, n = 30) e terapia padrão mais
insuflação retal de ozônio (n = 30). DAS-28: baixa atividade y ÿ 3,2; atividade moderada 3,2 < y ÿ 5,1; alta atividade y ÿ 5,1 [26]. (d).
Pontuação de dor em 60 pacientes com AR. Grupo MTX (n = 30) com tratamento básico (ver Figura 10a) e grupo ozônio (n = 30) com
terapia padrão mais ozônio no início e no final do ensaio após 20 insuflações retais [26].

A regulação do mRNA (IL-1 e TNF-ÿ) fortalece novamente os mecanismos de ação

(conceito de ozônio de baixa dose) nos quais se baseiam as “Diretrizes para o Uso do Ozônio
Medicinal”: sendo ele próprio um poderoso oxidante, o ozônio interrompe o círculo vicioso
do processo inflamatório via formação de “peróxidos de ozônio”, redução por resíduos de cisteína
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e/ou glutationa (GSH), contornando o consumo de SOD e CAT, depois sinaliza a

transdução e regulação através de Nrf2 (antioxidantes) e NFkB (imunorregulação).
As concentrações patológicas de parâmetros relevantes para o estresse (H2O2, MDA
malondialdeído , hidroperóxido total de TH etc.) diminuem significativamente, assim como IL-1,
IL-6 e TNF-ÿ. Como consequência, as condições clínicas melhoram e a medicação básica pode
ser reduzida [25].

4.3. Testes clínicos

Os estudos clínicos confirmam o mecanismo de ação descrito do ozônio em baixas
doses com a posição chave especial da glutationa: Os parâmetros determinados nos
estudos pré-clínicos mostram o curso esperado para os estudos clínicos: Indução da
capacidade antioxidante celular, redução do estresse oxidativo , e em particular a mudança
do equilíbrio GSH/GSSG para a forma ativa: GSH.
Isto torna-se particularmente importante no fígado com uma melhoria da biotransformação,
que é muitas vezes muito sublinhada pela medicação clássica na AR, especialmente o
metotrexato (MTX), e o tratamento tem de ser interrompido. O parâmetro crítico aqui é ÿ-GT
(gama-glutamiltransferase), que está significativamente envolvido no equilíbrio GSH/GSSG.

O desenho do estudo é descrito com mais detalhes em [26], aqui apenas os pontos
principais: Ensaio clínico randomizado com 60 pacientes. Todos (n = 60) receberam o tratamento
básico com a terapia padronizada (MTX + Ibuprofeno + ácido fólico), 30 deles apenas (grupo
MTX) e 30 pacientes, grupo ozônio, receberam tratamento complementar com ozônio na forma
de insuflação retal 5 vezes por semana.
Com um incremento de 5 µg/mL por semana, a concentração de ozônio foi aumentada de
25 para 40 µg/mL.
Os parâmetros bioquímicos e clínicos, aqui a título de trecho, antes do início e ao final do
conceito de tratamento, são apresentados na Figura 10a-d.
Em estreita correlação com os achados bioquímicos, os dados clínicos mostram uma melhora
significativa no escore de atividade da doença (DAS) e no escore de dor no grupo do ozônio; veja a
Figura 10c,d.
Para determinar a proteção hepática pela insuflação retal de ozônio em pacientes com AR, foi
realizado um ensaio clínico controlado com 100 pacientes: n = 50 como grupo MTX (MTX + Ibuprofeno
+ ácido fólico) e n = 50 como grupo ozônio recebendo a mesma medicação + insuflações retais de
ozônio conforme descrito acima e detalhadamente em [26–28].
Em comparação com o grupo MTX e conforme mostrado na Figura 11, o ÿ-GT diminui no grupo
ozônio de maneira estatisticamente significativa [27].

Figura 11. A toxicidade hepática de medicamentos anti-reumáticos padrão é reduzida por baixas doses de ozônio,
aqui mostrado como ÿ-GT (ÿ-glutamil transferase) em um ensaio clínico com 100 pacientes com artrite reumatóide.
Grupo MTX (n = 50): Metotrexato + Ibuprofeno + Ácido Fólico. Grupo ozônio (n = 50): grupo MTX + ozônio. 20
insuflações retais de ozônio 200 mL, concentrações 25–40 µg/mL durante 4 semanas [27].
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4.4. Conceito de
tratamento No tratamento da artrite reumatóide, a aplicação sistémica de ozono provou ser
particularmente eficaz, mas apenas na gama de doses baixas: uma combinação com a terapia
padrão produz resultados clínicos e bioquímicos consideravelmente melhores do que a terapia
padrão por si só, e a terapia hepática mecanismos de proteção reduzem simultaneamente a
toxicidade hepática da terapêutica básica.
Recomendação de tratamento: auto-hemoterapia principal MAH ou insuflação retal RI como
complemento à terapia padrão ou básica; consulte a Tabela 4.

Tabela 4. Artrite reumatoide, recomendação de tratamento.

Automóvel principal Ozônio Ozônio Ozônio Tratamento Número de

Hemoterapia Concentração Volume Quantia Frequência Tratamentos

Artrite reumatoide

1.500–1.750 µg
50ml (3.000–3.500 µg
estágio agudo 30–35 µg/mL diário conforme controle
(100ml) por 100 mL de
sangue)

50ml 1× por semana, depois a cada em conformidade com

estágio não agudo 20–25 µg/mL 1000–1250 µg 2 semanas o paciente

Insuflação Retal 3750–9000 Diariamente no início, depois em conformidade com

25–30 µg/mL 150–300 mL
2× ou 1× por semana o paciente

5. Conclusões
O conceito de baixa dose de ozônio com seu estresse oxidativo moderado representa uma
estratégia ideal de hormese. As relações dose-resposta e concentração-efeito no contexto de
aplicações específicas permitem fixar faixas de concentração com benefício terapêutico.
Com base nos mecanismos de reação bem conhecidos do ozônio, com seus efeitos bioquímicos e
farmacológicos parcialmente mostrados aqui, foram definidas diretrizes internacionais relativas a
materiais fisiológicos e resistentes ao ozônio, indicações, aplicações e concentração efetiva e faixa
de dosagem dependendo de indicações específicas. A principal auto-hemoterapia e a insuflação
retal provaram ser formas sistêmicas de aplicação de ozônio baseadas em evidências [23].

Os antecedentes farmacológicos investigados num número notável de experiências com

células , ensaios pré-clínicos e clínicos estão bem documentados e publicados em revistas
internacionais revisadas por pares. Isto deverá encorajar os médicos a realizar ensaios clínicos
que avaliem doenças inflamatórias crónicas, integrando o ozono médico como complemento, a
fim de beneficiarem dos mecanismos biorreguladores para alcançar efeitos sinérgicos e reduzir
os efeitos secundários de terapêuticas e medicamentos básicos, ajudando assim a proteger o
fígado e rins em particular.

Contribuições do Autor: Contribuições do Autor, Redação – rascunho original, RV-H.; Redação – revisão e edição, OSLF
Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.

Financiamento: Esta pesquisa não recebeu financiamento externo.

Conflitos de interesse: Os autores declaram não haver conflito de interesses.

Referências
1. Sies, H. Peróxido de hidrogênio como molécula sinalizadora redox central no estresse oxidativo fisiológico: Eustress oxidativo. Redox Biol.
2017, 11, 613–619. [RefCruz]
2. Marinho, HS; Real, C.; Cyrne, L.; Soares, H.; Antunes, F. Detecção, sinalização e regulação de fatores de transcrição de peróxido de hidrogênio . Redox Biol. 2014, 2,
535–562. [RefCruz] [Pub Med]
3. Washüttl, J.; Viebahn, R. Biochemische Aspekte der Ozon-Sauerstoff Theapie. Ars Med. 1986, 5, 194–199. (Em alemão)
Machine Translated by Google

Internacional J. Mol. Ciência. 2021, 22, 7890 15 de 15

4. Lell, B.; Viebahn, R.; Kremsner, P. A atividade do ozônio contra o plasmodium falciparum. Ciência do Ozônio. Eng. 2001, 23, 89–93.
[RefCruz]
5. Hoffmann, A.; Viebahn, R. Über den Einfluss von Ozon auf die 2,3 Difosfoglyzerat-Synthese in Erythrozyten-Konzentraten.
No Ozon-Handbuch, Grundlagen-Prävention-Therapie; Viebahn-Hänsler, R., Knoch, HG, Eds.; Editora Ecomed: Landsberg, Alemanha, 2002.

6. Bocci, V.; Paulesu, L. Estudos sobre os efeitos biológicos do ozônio. 1. Indução de interferon em leucócitos humanos. Hematológica 1990, 75, 510–515. [Pub
Med]
7. Bocci, V.; Luzzi, E.; Corradeschi, F.; Paulesu, L.; Rossi, R.; Cardaioli, E.; Di Simplicio, P. Estudos sobre os efeitos biológicos do ozônio: 4. Produção de citocinas
e níveis de glutationa em eritrócitos humanos. Biol. Reg. Hom. Agentes 1993, 7, 133–138.
8. Léon, OS; Menendéz, S.; Merino, N.; Castillo, R.; Sam, S.; Pérez, L.; Cruz, E.; Bocci, V. Pré-condicionamento oxidativo com ozônio:
Uma proteção contra danos celulares causados pelos radicais livres. Mediat. Inflamar. 1998, 7, 289–294. [RefCruz]
9. Viebahn-Haensler, R.; León Fernández, OS; Fahmy, Z. Ozônio na medicina: O conceito de ozônio em baixas doses. Diretrizes e
estratégias de tratamento. Ciência do Ozônio. Eng. 2012, 34, 408–424. [RefCruz]
10. Hoigné, J.; Bader, H. Constantes de velocidade de reações do ozônio com compostos orgânicos e inorgânicos na água I/II. Água Res. 1983,
17, 173–194. [RefCruz]
11. Criegee, R. Die Ozonolyse. Liebigs Ann. Química. 1953, 538, 9. [CrossRef]
12. Criegee, R. Mecanismo de Ozônio. Angew. Química. Internacional Ed. 1975, 14, 745–752. [RefCruz]
13. Werkmeister, H. Dekubitalgeschwüre und Die Behandlung Mit der Ozon-Unterdruck-Begasung (alemão) em Ozon-Handbuch, Grundlagen- Prävention-Therapie;
Viebahn-Hänsler, R., Knoch, HG, Eds.; Editora Ecomed: Landsberg, Alemanha, 1995.
14. Haddad, EB; Salmão, M.; Koto, H.; Barnes, PJ; Adcock, I.; Chung, KF Indução de ozônio de quimiotratante de neutrófilos induzido por citocina e fator nuclear-kB
em pulmão de rato: inibição por corticosteróides. FEBS Lett. 1996, 379, 265–268. [RefCruz]
15. Sagai, M.; Bocci, V. Mecanismos de ação envolvidos na terapia com ozônio: a cura é induzida por meio de um estresse oxidativo leve? Med. Gás Res.
2011, 1, 29. [CrossRef]
16. Bocci, V.; Zanardi, I.; Travagli, V. Oxigênio/Ozônio como mistura de gases medicinais. Uma avaliação crítica. Med. Gás Res. 2011, 1, 6.
[RefCruz] [Pub Med]
17. Ré, L.; Martinez-Sánchez, G.; Bordicchia, M.; Malcangi, G.; Pocognoli, A.; Morales-Segura, MA; Rothchild, JA; Rojas, A. O efeito de pré-condicionamento do
ozônio está ligado à via de ativação Nrf2/EpRE in vivo? Um resultado preliminar. EUR. J. Farmacol. 2014, 742, 158–162. [RefCruz] [Pub Med]

18. Delgado-Roche, L.; Riera-Romo, M.; Meta, F.; Hernández-Matos, Y.; Barrios, JM; Martínez-Sánchez, G.; Al-Dalaien, SM
O ozônio medicinal promove a fosforilação do Nrf2, reduzindo o estresse oxidativo e as citocinas pró-inflamatórias em pacientes com esclerose múltipla .
EUR. J. Farmacol. 2017, 811, 148–154. [RefCruz]
19. Togi, S.; Togi, M.; Nagashima, S.; Kitay, Y.; Muromoto, R.; Kashiwakura, J.; Miura, T.; Matsuda, T. Implicação da ativação de NF-kB
na ativação de HO-1 induzida por ozônio. Rep. BPB 2021, 4, 59–63. [RefCruz]
20. Kansanen, E.; Kuosmanen, SM; Leinonen, H.; Levonen, AL A via Keap1-Nrf2: Mecanismos de ativação e desregulação
no câncer. Redox Biol. 2013, 1, 45–49. [RefCruz]
21. Costanzo, M.; Romeu, A.; Cisterna, B.; Calderán, L.; Bernardi, P.; Covi, V.; Tabaracci, G.; Malatesta, M. Ozônio em baixas concentrações
não afeta a motilidade e a proliferação de células cancerígenas in vitro. EUR. J. Histoquímica. 2020, 64, 3119. [CrossRef] [Pub Med]
22. Scassellati, C.; Costanzo, M.; Cisterna, B.; Nodari, A.; Galié, M.; Cattaneo, A.; Covi, V.; Tabaracci, G.; Bonvicini, C.; Malatesta, M.
Efeitos da ozonização suave na expressão genética e na organização dos domínios nucleares in vitro. Toxicol Vitr. 2017, 44, 100–110.
[RefCruz] [Pub Med]
23. Viebahn-Haensler, R.; Leão, FOS; Fahmy, Z. Ozônio em medicina: Avaliação clínica e classificação de evidências das aplicações sistêmicas de ozônio, auto-
hemoterapia principal e insuflação retal, de acordo com os requisitos da medicina baseada em evidências.
Ciência do Ozônio. Eng. 2016, 38, 322–345. [RefCruz]
24. Wolff, H. Livro didático Das Medizinische Ozon (alemão); Verlag für Medizin: Heidelberg, Alemanha, 1979.
25. Dranguet, VJ; Fraga, A.; Diaz, MT; Mallok, A.; Viebahn-Hänsler, R.; Fahmy, Z.; Barberá, A.; Delgado, L.; Menéndez, S.; Leon, O pós-condicionamento oxidativo
com ozônio FOS melhora o dano articular e diminui os níveis de citocinas pró-inflamatórias e o estresse oxidativo na artrite induzida por PG/PS em ratos.
EUR. J. Farmacol. 2013, 714, 318–324. [RefCruz]
26. Leão, FOS; Viebahn-Haensler, R.; López, CG; Serrano, EI; Hernández, MEU; Delgado, RL; Tamargo, SB; Takon, OG; Polo, VJC Medical ozônio aumenta a
resposta clínica do metotrexato e melhora o equilíbrio redox celular em pacientes com artrite reumatóide. EUR. J. Farmacol. 2016, 789, 313–318. [RefCruz]

27. Takon, OG; Viebahn-Haensler, R.; López, CG; Serrano, EI; Tamargo, SB; Polo, VJC; Sánchez, SS; León, FOS Medical Ozone reduz o risco de anormalidades
de GGT e fosfatase alcalina e estresse oxidativo em pacientes com artrite reumatóide tratados com metotrexato. SMJ. Artrite Res. 2017, 1, 1004.

28. Takon Oru, G.; Viebahn-Haensler, R.; García Fernández, E.; Álvarez Almiñaque, D.; Polo Vega, JC; Tamargo Santos, B.; López Cabreja, G.; Serrano Espinosa,
I.; Tabares Nápoles, N.; León Fernández, OS Medical Efeitos do ozônio e memória imunológica inata em pacientes com artrite reumatóide tratados com
metotrexato + ozônio após um segundo ciclo de exposição ao ozônio. Gerenciamento de Dor Crônica . 2019, 2, 114. [CrossRef]