Aula Prática

QUANTIFICAÇÃO DE FÓSFORO

Objetivo
 Quantificar teor de fósforo em amostra de alimento
empregando método espectrofotométrico de análise.

1. Introdução
Fósforo é um dos elementos minerais de maior importância na
nutrição humana. Está presente em vários alimentos principalmente
nos cereais, carnes, leite e frutas. A quantificação de fósforo requer
primeiramente a preparação de uma solução mineral livre de matéria
orgânica. Esta etapa por ser feita pela aplicação de calor (via seca) ou
pelo tratamento com ácidos fortes (nítrico, perclórico) a quente (via
úmida). A via seca foi escolhida para aula prática por questões de
segurança.

Uma vez em solução, o fosfato pode ser quantificado

por métodos gravimétricos e espectrofotométricos. Os
métodos gravimétricos são utilizados para amostra com
alto teor de fósforo, como os fertilizantes. Os métodos
espectrofotométricos são aplicados em amostras com
teores de fosfato inferiores a 2% e assim adequados para
as análises bromatológicas.

2. Método espectrofotométrico
O elemento fósforo pode ser determinado como fosfato pelo método
colorimétrico de fosfomolibdato de vanádio (vanadato). Por este método,
o fósforo presente sob a forma de ortofosfato reage com o reagente de
vanadato-molibdato, formando um complexo amarelo-alaranjado, que
apresenta absorção máxima a 420 nm. A partir de uma curva padrão
determina-se a correlação entre absorvância e concentração de fosfato.
As amostras devidamente diluídas são colocadas em contato com o
reagente e feita a leitura de absorvância. A concentração de fosfato é
calculada com base na equação da curva padrão.
3. Materiais e Equipamentos
 Equipamentos
Espectrofotômetro UV-Visível, balança analítica, placa aquecedora.

 Vidrarias e reagentes
Balões volumétricos de 1000 ml (05); pipetas volumétricas de 1, 2, 5 e
10 ml, béquer de 100 ml; tubos de ensaio de 15 ou 20 ml (10); pipetas
graduada de 5 e 10 ml (01). Molibdato de amônia; vanadato de amônia;
ácido nítrico concentrado; fosfato ácido de potássio (KH 2PO4); ácido
sulfúrico 10 M.

Preparo das soluções reagentes

Solução de molibdato de amônia

 Pesar 25 g de molibdato de amônia em um béquer de 500 ml;
 Adicionar 200 ml de água deionizada e aquecer agitando com
bastão de vidro até a dissolução do sal;
 Deixar resfriar e transferir quantitativamente para um balão
volumétrico de 500 ml e completar o volume.
 Tampar o balão e agitar invertendo o balão várias vezes.
 Transferir para um frasco âmbar, rotulado e estocar.

Solução de vanadato de amônia

 Pesar 1,25 g de vanadato de amônia em bequer de 500 ml;
 Adicionar 250 ml de água deionizada fervente e agitar com
bastão de vidro até à dissolução;
 Deixar resfriar e adicionar 175 ml de ácido nítrico
concentrado;
 Transferir quantitativamente para um balão de 500 ml,
completar o volume - com água deionizada e agitar;
 Transferir para um frasco âmbar rotulado e estocar.

Solução estoque de fosfato (1000 ppm de P)

 Colocar cerca de 4 g de KH2PO4 em uma placa de petri sem
tampa e secar a 105 °C por duas horas;
 Retirar, deixar resfriar em dessecador.
 Pesar exatamente 2,1969 g em um béquer de 100 ml.
 Transferir quantitativamente para um balão volumétrico de
500 ml utilizando cerca de 200 ml de água deionizada.
 Adicionar 5 ml de ácido sulfúrico 10 N e completar o volume
com água.
 Transferir para um frasco rotulado e estocar.
4. Procedimento

4.1 Preparo da solução mineral da amostra

Foi realizado na aula anterior a partir das cinzas obtidas da
amostra (solução aquosa de 100 mL das cinzas obtidas).
Importante anotar o peso do alimento utilizado para obter as
cinzas. A solução mineral deve ser diluída para que a
concentração final de fosfato seja compatível com a curva padrão.
Nessa prática recomenda-se uma concentração da ordem de 10
ppm.

4.2 Preparo da solução mista vanadato-molibdato de

amônia
Misture partes iguais da solução de vanadato de amônia e
molibdato de amônia. Esta solução deve ser preparada no
momento da prática devido à instabilidade da mesma.

4.3 Preparação da curva de calibração de

dihidrogeno-fosfato de potássio (fosfato de potássio
monobásico) (KH2PO4)
 A partir da solução estoque de KH2PO4 (1000 ppm de Fósforo)
transferir volumes dessa solução para preparar diluições de 2; 5;
10; 15 e 20 ppm de Fósforo, completando o volume com água.

Em um tubo de ensaio misture 5 ml de cada uma das

soluções diluídas com 2 ml do reagente misto vanadato-
molibdato. Deixe reagir por 10 minutos e faça a leitura da
absorvância a 420 nm.

 Para calibrar o aparelho faça um branco com 5 ml de água

deionizada e 2ml de reagente.
 Faça o gráfico e determine a equação da reta por regressão
linear.

4.4 Determinação do teor de fosfato da amostra

Em tubo de ensaio misture 5 ml da solução mineral da
amostra com 2 ml do reagente misto vanadato-molibdato.
Deixe reagir por 10 min e faça a leitura da absorvância a 420 nm.

 Calcule o teor de fósforo (mg P/100g de alimento) com base na

equação da reta resultante da curva de calibração de dihidrogeno-
fosfato de potássio (KH2PO4).
5. Cálculo
 Com os dados de leitura de absorvância da solução de KH2PO4,
determina-se a equação da reta por regressão linear (método dos
mínimos quadrados). Calcular também o Coeficiente de Correlação (r2)
para atestar a linearidade da reta.

 A partir da leitura de absorvância referente a solução mineral da

amostra, calcula-se o teor de Fósforo, utilizando a equação da reta da
curva de calibração da glicose.

Y = A.X + B

 Encontrado o teor de Fósforo na solução mineral da amostra, faça o

cálculo do teor de Fósforo presente na amostra (mg P/100g de
alimento).