ANDROLÓGICO -Redução de problemas de parto;

-Avaliação do touro em geral; -Uso de touros após a morte;

-Exame andrológico; -Seleção e reposição de matrizes;
COLETA: FATORES DETERMINANTES PARA O
-Vagina artificial; SUCESSO:
Utilizado p/: Bovinos, ovinos, caprinos, -Manejo reprodutivo;
equinos e suínos. -Manejo da fazenda;
Vantagens: obtenção de um ejaculado de boa -Manuseio adequado do sêmen
qualidade e não causa desconforto ao -Mão de obra;
reprodutor. -Higiene;
Desvantagens: Necessidade de fêmea em -Estresse das matrizes;
cio, para animais não adaptados. -Problemas reprodutivos;
-Eletroejaculação: -Instalações
Utilizados p/: Bovinos, ovinos, caprinos, DETECÇÃO DO CIO:
coelhos, aves e animais silvestres. -Ocorre de 21 em 21 dias (variando de 17 a
Vantagens: Obtenção de ejaculado de 24);
animais impossibilitados de realizar a monta, -Observação deve ser feita de 2 a 3 vezes por
não precisa de femeas ou manequins e dia (mínimo de 40 minutos);
obtenção de sêmen de animais bravos e -Duração de 10 a 18 horas (< zebuínas e >
selvagens. europeias);
Desvantagens: Alterações da concentração - SINAIS: Inquietação, cauda erguida, micção
espermática, causa desconforto ao animal, frequente, vulva edemaciada e brilhante,
necessitar de aparelhos adequados. redução do apetite, redução do leite, mugir
constantemente, cabeça com cabeça, queixo
-Massagem das ampolas e vesículas descansado sobre garupa, fareja e lamber,
seminais; muco cristalino, transparente e semelhante a
-Masturbação; clara de ovos, DEIXAR SER MONTADA.
-Coletor vaginal; -INICIO DO CIO: 8 horas(0-24 h)
Massagem abdominal. -ACEITAÇÃO DE MONTA: 16 horas ( 3-4 h)
-Volume do tubo gradual: Ml -FINAL: 8 horas (2- 24 )
-Concentração espermática: câmera -MELHOR MOMENTO PARA
hematimetria ou refratometria( sptz/ ml); INSEMINAÇÃO: 12 a 18 horas após a
-Motilidade(mot.) subjetiva à análise manifestação do cio.
computadorizada. -OVULAÇÃO: 12 a 16 horas após o fim do cio
-CAPACITAÇÃO ESPERMÁTICA: 7 – 8 horas
PRINCÍPIOS DE INSEMINAÇÃO - VIDA ÚTIL: 30 a 48 horas( espermatozoide)
ARTIFICIAL oócito (24 a 24 horas);
-DEFINIÇÃO: Deposição mecânica do sêmen CIOS NÃO APROVEITADOS:
no aparelho reprodutivo da fêmea. -Cio silencioso
-VANTAGENS: -Cio de animal com infestação uterina
-Melhoramento genético; -Antes de 45 dias pós-parto
-Proporcionar acasalamentos; PALHETAS:
-Cruzamento entre raças; -Médias: 0,5 ml, facilidade de utilização
-Controle de doenças; -Finas: 0,25 ml, descongelamento mais
-Prevenção de acidentes; uniforme e maior cuidado no manuseio.
-Uso de touros incapacitados para
monta; SEQUÊNCIA DE I.A
-Controle zootécnico do rebanho; -1 passo:
 -Observar o cio e verificar a ficha do
animal (parida a mais de 45 dias, se já foi
inseminada);
-Saber o touro a ser utilizado;
-Contenção do animal e limpeza do reto
removendo as fezes;
- Exteriorizar a ponta da bainha;
-Preparar o aplicador e retirar o embolo
metálico;
-Aquecer a água 35- 37 C°;
-Descongelar palheta 30 a 60 s;
- Enxugar e cortar extremidade oposta
a bucha em bisel;
-Introduzir o aplicador na vulva 45°;
SEXAGEM DE ESPERMATOZOIDES
-Aumenta a intensidade de seleção: programa
de melhoramento genético
-Terceira geração- 1983
-Diferença fenotípica
-Antígenos de superfície ( anticorpos)
-Conteúdo de DNA( Centrifugação em
gradiente de densidade e citometria de fluxo)
ANTICORPOS:
-Anti-espermatozoides Y
-Anti-espermatozoides X
- Após a incubação de espermatozoide com
sexo anticorpos anti-proteinas específicas do
sexto feminino- Aflutinação de 50% dos
espermatozoides.
CONTEÚDO DE DNA:
-Diferença de densidade e diferenças
no conteúdo do DNA;
-Cromossomo X apresentação 4%
mais DNA que o Y.
-Centrifugação em gradiente de densidade:
- Albumina, percoll e iodixanol;
- Diferença de densidade entre o X e o
Y é de 0,06% (0,0007g/cm³) que determina
uma velocidade diferencial de sedimentação
(juntamente com o volume e morfologia das
células; viscosidade do meio de diluição).
-Água é lipídeos contidos na cabeça dos
espermatozoides podem mascarar essa
diferença de densidade entre o X e o Y.
-O conteúdo do DNA corresponde a 18% do
volume total da cabeça.
-Etapas: preparação dos gradientes→
colheita do sêmen→ deposição da amostra
sobre o gradiente→ centrifugação→
preparação da fração inferior→ diluição do
sêmen.
-Rendimento- 450 milhos de espermatozoides
(acuidade de 71 %)
-3,5 % dos espermatozoides com danos no
DNA
-Partidas de sêmen aprovadas no controle de
qualidade após descongelação → 58,7% (44
partidas)
-Partidas de sêmen aprovadas após o teste de
termo resistência (TTR) → 17,33% (13
repetições)
-Resultados da produção in vidro:
❖ Número de embriões produzidos →
6.943
❖ Média da taxa de clivagem média →
75,6%
❖ Média da taxa de blastocistos →
34,9%
❖ Média de embriões fêmeas (PCR) →
71,0%
Resultados na inseminação artificial:
❖ Inseminações artificiais → 110 vacas
❖ Taxa de prenhez → 74,5% (82 vacas)
❖ Fêmeas na ultra-sonografia → 74,4%
(61 fetos)
❖ Fêmeas ao nascimento → 70,7% (58
bezerras)
-Citometria de fluxo
- Coloração com Hoechst 33342: 126μM,
37°C, 1 hora;
Exposição a laser que opera em luz
ultravioleta no comprimento de onda de
351, 364 nM a 25/125mW;
-Recuperação → 11 a 18 milhões de
espermatozóides por hora com acuidade de
98 a 77%, respectivamente
-Produção → 7 doses /h com 2,5 - 3 milhões
de espermatozóides
Resultados
-Doses produzidas → 60.000
-Taxa de prenhez → 30%
-Bezerros nascidos → 20.000
- Bezerras avaliadas após a puberdade: 1.169
-Taxa de produção in vitro de embriões:
média de 15%
-50% de espermatozoides com danos no
DNA;
-LIMITAÇÕES:
-Diminuição da eficiência de separação
quanto utiliza-se sêmen congelado- prejudica
a uniformidade de coloração e alguns touros
não ocorre a seleção do sexo;
-Capacitação espermática durante a
separação (desvantagem no caso dos
espermatozoides que serão congelados), mas
quando os espermatozoides são usados para
PIV em embriões logo após a separação.
-Diminuição da motilidade;
- Apesar dos espermatozoides com
danos no DNA produzirem taxas aceitáveis na
PIV de embriões, pode ocorrer diminuição
significativa da taxa de implantação
DESVANTAGENS:
➢ Custo.
➢ ↓ variabilidade genética.
➢ Taxas de gestação inferiores à 50%.
➢ Custo das doses de sêmen 100%
acima da dose sem espermatozoides
sexados
VANTAGENS:
• Escolher o sexo da cria e definir os
rumos do seu negócio.
• Incrementar o número de fêmeas ou de
machos.
• Melhorar o planejamento de reposição
do rebanho com qualidade genética e
sanitária.
• Maior intensidade de seleção.
• Otimização das características
genéticas desejadas.
• Reduzir a incidência de partos
distócicos, com o uso de sêmen sexado
de fêmea que normalmente nascem
mais leves (principalmente
rebanhos de leite).
NECESSIDADES PARA IMPLEMENTAÇÃO
EM ESCALA:
1. Acuidade
2. Não diminuir viabilidade espermática
3. Ser compatível com o congelamento
4. Permitir a sexagem de espermatozoides
descongelados
5. Permitir a produção de várias doses de
sêmen congelado por dia com acuidade
mínima de 70%
6. Máximo de US$ 10 por dose ou US$ 19-
35 por fêmea
7. Permitir utilização de inseminação
artificial convencional
8. Permitir sexagem de 100% dos touros e
raças.
FIV sem ser sexagem tem tenecia de sair a
maioria machos.
O QUE TEM NO DILUIDOR?
Frutose: fonte de energia.
Ácido cítrico: proporciona energia e
controla o pH.
Tris hidroximetil aminometano: utilizado
como solução tampão.
O pH deve estar em 6,8.
Antibióticos como gentamicina ou
estreptomicina (40 mg/100 ml) são
adicionados para evitar a proliferação de
microorganismos no diluidor.
Utiliza-se 20% de gema de ovo de galinha(
de preferência do dia).
Se for congelar, é necessário adicionar um
crioprotetor interno, como 7% de
glicerina/glicerol (dentro do tris).
A osmolaridade deve ser de 300 milimol.
A vedação pode ser feita com álcool
polivinílico, massa de modelar, seladora
térmica ou pinça térmica.
É importante ressaltar que não é permitido
comercializar sêmen de uma propriedade
isolada, apenas sêmen proveniente de uma
central de distribuição, onde são realizados
exames criteriosos.
em FUNÇÃO DO DILUIDOR?
-Ajudar dose inseminante, da aporte
energético(nutrição da célula), proteção
térmica(crioprotetor).
-Cauda enrolada: osmolaridade alterada(fora
de 289-300 milimol)
Dados iniciais:

Diluição: 1/150
Total de espermatozoides: 140 (nos 5 quadrantes)
Motilidade: 75%
Tamanho da paleta: 0,25

Cálculo do número de espermatozoides por ml após a diluição:

1. 140 x 5 = 700 espermatozoides por ml

2. Multiplica o valor encontrado por 10.000

3. Multiplicação pelo fator de diluição total (150 + 1):

700 x 151 = 1.057.000.000 (em notação científica, 1.057 x 10^6)

4. Diluição 1:1 (para sêmen com diluidor):

1.057.000.000 x 2 (1+1) = 2,114,000,000 ou 2.114 x 10^6

5. Multiplicação pelo fator de motilidade (75%):

2,114,000,000 x 0,75 = 1,585,500,000 ou 1.585,5 x 10^6

6. Divisão pelo valor da dose inseminante (2.0000)

1,585,500,000 / 2,0000 = 792,75 doses (não considerando valor após a vírgula)

7. Divisão pelo tamanho da paleta (0,25):

792 / 0,25 = 198 ml

 8. 1 ml de sêmen + 1 ml de diluidor = 2 ml ou seja 198- 2: 196 ml

9. Cálculo do volume de diluente necessário (sem glicerol):

Diluidor do sêmen: 197 ml

Diluidor que precisa colocar no frasco: 196 ml

Menos 0,66 de glicerol (5 % do volume

total):
a. Glicerol (crioprotetor interno): total: 198 ml(1 ml de sêmen )
b.. 5%
c.198 ml( -1 ml de sêmen, - 9,9 ml de glicerol): 187,1
d. 187,1 volume do diluidor sem glicerol, porém só colocar 186,1(1 ml de sêmen)