Exames Andrológicos em

Bovinos e Equinos -
Espermograma
Prof. Luan Ricci Silva

luan.silva@bh.universo.edu.br

Exame andrológico
• Utilização de formulário apropriado
• 4 itens básicos e fundamentais:
• Identificação do animal e proprietário
• Exame clínico
• Espermograma
• Conclusão dos achados

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Exame andrológico – Bovinos

• Espermograma
• Colheita e análise de amostra do sêmen

• Eletroejaculador
• Vagina artificial
• Coleta manual

• Laboratório para avaliação

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 Exame andrológico
• Laboratório • Contador de células
• Microscópio comum • Tubos de centrífuga
• Aumentos de 100 ou 400x
• Platina aquecida • Lâminas e lamínulas
• Mesa aquecedora para • Pipetas e tubos para
vidraria amostras
• Água quente para aquecer o
tubo de colheita • Luvas de palpação
• Equipamento de colheita com • Fita métrica
eletroejaculador completo • Formulário de avaliação
• Corantes para morfologia

Exame andrológico – Bovinos

• Características físicas do ejaculado
• Volume
• Relativo – depende do método de coleta
• Aspecto
• Visual – cor e aparência
• Presença de urina, sangue, células epiteliais, pus
• Turbilhonamento
• Gota de sêmen em lâmina pré-aquecida
• Mede a intensidade da movimentação em massa
• Escala de 0 a 5

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 Exame andrológico – Bovinos
• Características físicas do ejaculado
• Motilidade
• Avaliação subjetiva da % de espermatozoides móveis
• Vigor
• Intensidade da movimentação individual
• Escala de 0 a 5
• Concentração espermática
• Número de espermatozoides por ml
• Câmara de Neubauer

Exame andrológico – Equinos

• Análise do Sêmen
• Colheita
• Vagina artificial

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 Exame andrológico – Equinos
• Análise do Sêmen
• Exames Imediatos
• Volume
• 20 a 100ml
• Cor
• Branco acinzentado a branco leitoso
• Densidade
• Varia de aquoso a leitoso – concentração espermática
• Odor
• “sui-generis”

Exame andrológico – Equinos

• Exames Imediatos
• Motilidade espermática
• Uma pequena gota entre lâmina e lamínula aquecidas a 37º
• Visualização no microscópio
• Escala de porcentagem 0 a 100% (Motilidade Total MT)
• Diluir amostra caso necessário
• Motilidade ideal de ≥ 70%

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 Defeitos Maiores
• 1 Acrossomo
• 2 Patologia da cabeça
• Subdesenvolvida
• Isolada patológica
• Estreita na base
• Piriforme
• Pequena anormal
• Contorno anormal
• “Pouch formation”

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Defeitos Maiores
• 3 Gota proximal
• 4 Formas teratológicas
• 5 Defeito de peça intermediária
• Desfibrilação, fratura, edema, pseudogota
• 6 Patologia da cauda:
• Fortemente dobrada ou enrolada
• Dobrada com gota
• Enrolada na cabeça
• 7 Formas duplas:

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 Defeitos Menores
• 1 Patologia da cabeça:
• Delgada
• Gigante, curta, larga, pequena normal
• Isolada normal
• 2 Patologia da cauda e implantação
• Retro e abaxial, oblíquo
• Dobrada ou enrolada
• 3 Gota citoplasmática distal:

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 Principais causas das patologias espermáticas
• Cabeça
• Acrossomo:
• Forma irregular, enrugado ou destacado – choque térmico, manipulação
indevida ou senilidade
• Grânulo no acrossomo (Knobbed sperm) – hereditário ou degeneração
testicular – infertilidade do animal
• Pouch formation (diadema defect) – presença de vacúolos na região
equatorial da cabeça
• Estreita na base, piriforme, lanciforme, anã – origem testicular –
hipoplasia ou degeneração testicular

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Principais causas das patologias espermáticas

• Colo
• Defeitos de inserção: abaxial, paraxial e retroaxial – presença de
“goteira” – falha na formação do espermatozoide
• Inserção abaxial tende a adaptar com o movimento – pode fertilizar
• Inserções paraxial e retroaxial – infertilidade
• Gotas citoplasmáticas proximais ou distais
• Restos de citoplasma – 3 dias na cabeça, 1 dia no corpo, 6 dias na cauda
• Imaturidade
• Disfunção epididimária (termorregulação)
• Degeneração testicular
• Hipoplasia testicular

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 Principais causas das patologias espermáticas
• Peça intermediária
• Corkscrew defect – defeito em saca rolha
• Degeneração do plasmalema – região de mitocôndria fica rugosa – dificulta
saída da gota
• Cabeça destacada (isolada)
• Goteira rasa – inserção paraxial
• Formas duplas da Peça Intermediária e/ou cauda
• Origem hereditária

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Principais causas das patologias espermáticas

• Cauda
• Enrolada, fortemente enrolada, dobrada e fortemente dobrada
• Diminuição no número de microfibrilas 3 ou 4 (dag defect)
• Alto nível de Zn no sêmen
• Choque osmótico ou térmico e disfunções de epidídimo

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 Principais causas das patologias espermáticas
• Outras anormalidades
• Aglutinação da cabeça (head aglutination)
• Espermatozoides chegam em blocos ao epidídimo – presença de antiaglutininas
• Espermatozoides subdesenvolvidos
• Animais imaturos, processos interferentes, liberação de células jovens no ejaculado
• Medusa
• Restos ciliares do epidídimo – recuperação de degeneração testicular
• Pseudogota
• Semelhante a gota citoplasmática – região média da Peça Intermediária e tamanho
menor que a gota

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 Provas laboratoriais de Integridade da
Membrana Plasmática
• Fator de grande importância pós-descongelação

• Coloração Supra-vital utilizando eosina

• Coloca-se uma gota de sêmen + gota de corante eosina
• Microscópio 400x e conta-se 200 células
• Espermatozoides com coloração vermelha – lesão na membrana

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 Provas laboratoriais de Integridade da
Membrana Plasmática
• Choque osmótico
• Utiliza-se água destilada aquecida a 37º
• Uma gota de sêmen em 19 gotas de água destilada
• Conta-se 200 células
• Dobramento de cauda – íntegras
• Caudas retas – lesadas

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 Avaliações microscópicas de sêmen

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 CASA – Computer-assisted sperm analysis
• Parâmetros Avaliados:
• Motilidade Total (%): é a proporção de células móveis total e representa à
população de células em movimento com uma velocidade mínima
determinada no setup;
• Motilidade Progressiva (%): é referente à porcentagem de células
movendo-se progressivamente;
• Velocidade de Trajeto (VAP, μm/s): é a velocidade média ininterrupta do
trajeto da célula;
• Velocidade Progressiva (VSL, μm/s): é a velocidade média percorrida em
linha reta entre os pontos inicial e final do trajeto;
• Velocidade Curvilinear (VCL, μm/s): é a velocidade média de percurso da
célula;

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CASA – Computer-assisted sperm analysis

• Amplitude do Deslocamento Lateral da Cabeça (ALH, μm): é a largura
média da oscilação da cabeça conforme a célula se move;
• Frequência de Batimentos (BCF, Hz): é a frequência com que a cabeça
do espermatozóide move-se para trás e para frente durante um
trajeto percorrido;
• Retilinearidade (STR, %): é o valor médio da proporção entre
VSL/VAP;
• Linearidade (LIN, %): é o valor médio da proporção entre VSL/VCL;
• Velocidade Rápida (%).

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 CASA – Avaliação automática

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CASA – Boa motilidade

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 CASA – Média motilidade

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CASA – Baixa mobilidade

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 Citometria de fluxo
• Microscopia de Epifluorescência ou Citometria de Fluxo
• Maior acurácia sobre a qualidade do sêmen

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Citometria de fluxo
• Citometria de Fluxo
• Permite contagem, classificação, exame e isolamento de
espermatozoides
• Por meio da Citometria de fluxo, é possível medir a quantidade de
uma ou mais sondas fluorescentes associadas às células, de forma
imparcial, com inigualável precisão, sensibilidade e rapidez

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 Citometria de fluxo
• As sondas fluorescentes monitoram através da coloração a
funcionalidade dos espermatozóides
• Avaliando a integridade da membrana plasmática e acrossomal, o
potencial mitocondrial, a translocação de fosfolipídios de membrana,
o índice de caspase-ativada, o índice de fragmentação de DNA, a
integridade do flagelo, a peroxidação lipídica, a fosforilização da
tirosina e a reação acrossômica

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Citometria de fluxo
• Membrana plasmática é essencial para fecundação e viabilidade
seminal
• A capacitação espermática são mudanças que ocorrem no sistema
reprodutivo feminino.
• Reação acrossomal
• Testes de motilidade e integridade de membrana
• Espermatozoides com DNA lesionado pode ser normais na movimentação –
falha no desenvolvimento embrionário

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 Exames Andrológicos em Bovinos e Equinos -
Espermograma
• Importante coleta adequada

• Avaliação detalhada da fertilidade do animal

• Qualidade do sêmen

• Capacidade fertilizante do reprodutor

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