SEPARAÇÃO DE

PROTEÍNAS POR
ELETROFORESE:
SDS-PAGE
PERMITE A SEPARAÇÃO DE MISTURAS
COMPLEXAS DE PROTEÍNAS COM BASE
NO TAMANHO MOLECULAR.
 Numa electroforese fazem-se

01.
migrar, por aplicação de um
campo elétrico, partículas com
carga eléctrica.

Podem utilizar-se vários

02.
suportes para a migração
No âmbito desta atividade experimental usámos a electroforética: acetato de
eletroforese, uma técnica crucial para a análise de celulose, gel de agarose, gel de
partículas carregadas eletricamente. poliacrilamida, etc.

Em geral a migração das

03.
partículas (e.g. proteínas)
depende da sua massa
molecular, da sua carga e da sua
conformação.
SDS-PAGE:
SODIUM DODECYL SULFATE – POLYACRYLAMIDE
GEL ELECTROPHORESIS
SDS – SODIUM
DODECYL SULFATE:

O DODECILSULFATO DE SÓDIO É UM
DETERGENTE ANIÓNICO QUE SE LIGA
ÀS PROTEÍNAS CONFERINDO-LHES
UMA CARGA GLOBAL NEGATIVA, AO
MESMO TEMPO QUE DESORGANIZA A
SUA ESTRUTURA (SECUNDÁRIA,
TERCIÁRIA E QUATERNÁRIA).
 2-MERCAPTO-ETANOL:
Também designado β-mercaptoetanol
(HOCH CH SH), é um agente redutor,
usado para romper as ligações
dissulfureto (entre resíduos de
cisteína).
Os objetivos desta atividade
experimental são:1) a separação das
proteínas presentes em amostras
biológicas por SDS-PAGE; 2)
identificação de alterações no perfil
polipeptídico induzidas por diferentes
condições de stress; 3) estimar a massa
molecular das proteínas.
MW Distância log MW

245 2,1 2,389166084

180 2,6 2,255272505

135 3,1 2,130333768

100 3,7 2

75 4,4 1,875061263

63 4,7 1,799340549

48 5,4 1,681241237

35 6,2 1,544068044

25 6,8 1,397940009

20 7,2 1,301029996

17 7,7 1,230448921

11 8,3 1,041392685
GRÁFICO DE CONTROLO
Distância log massa Massa Molecular

2,1 2,35677 227

2,6 2,25362 179

3,1 2,15047 141

3,7 2,02669 106

4,4 1,88228 76

4,7 1,82039 66

5,4 1,67598 47

6,2 1,51094 32

6,8 1,38716 24

7,2 1,30464 20

7,7 1,20149 16

8,3 1,07771 12
OBRIGADO!