UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR
BIOMEDICINA

Kemilly Paulina de Souza

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA: ELETROFORESE EM SDS-PAGE

Goiânia
2022
 SUMÁRIO

1.INTRODUÇÃO …………………………………………………...…………………...….3
2. RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA: ELETROFORESE EM SDS-PAGE…………..4
2.1 Objetivos…………………………………………………………………………..4
2.2 Materiais e métodos……………………………………………………………….4
2.3 Resultados e discussão…………………………………………………………….5
3.CONCLUSÃO…………..………………………….………………………………………7
4. REFERÊNCIAS…………………………………………………………………………...8

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1 INTRODUÇÃO

A eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) é uma técnica qualitativa e quantitativa

utilizada com o objetivo de separar uma amostra de proteínas para identificar e quantificar
proteínas. Existem vários tipos de técnica de PAGE, mas o mais comum é chamado
SDS-PAGE. No SDS-PAGE, o detergente dodecilsulfato de sódio (SDS) é usado para
desnaturar as proteínas e normalizar sua proporção massa / carga. Sem o SDS, o peso
molecular e a carga da proteína afetariam a separação no gel. Com o SDS, apenas o peso
molecular afeta a velocidade de migração e, portanto, as amostras são separadas de acordo
com o mencionado parâmetro.
O primeiro passo para a realização do procedimento é a preparação do gel de
poliacrilamida que será colocado na cuba eletroforética vertical para a polimerização.
Posteriormente, a amostra controle e a amostra a ser analisada serão adicionadas aos poços
formados, a fonte é ligada à cuba e dá-se início à corrida eletroforética. As moléculas
presentes na amostra migram do polo positivo para o polo negativo com base em seu peso
molecular, sendo que quanto maior o peso molecular menor será a migração da proteína no
gel.
Ao fim do processo, o gel será observado em um transiluminador, onde será possível a
identificação das bandas formadas e a comparação da distância percorrida com a amostra
controle, obtendo-se assim o peso molecular e a abundância das bandas e a identificação da
proteína presente na amostra.
A eletroforese em SDS-PAGE e outras formas de eletroforese em gel de poliacrilamida
são amplamente utilizadas em pesquisas acadêmicas em biologia celular e molecular. A
capacidade de separar, identificar e quantificar os níveis de proteínas em certas células e
ambientes é essencial para entender como os processos celulares funcionam. Devido à
onipresença dessas técnicas, qualquer fluxo de trabalho que envolva proteínas provavelmente
as inclua, desde uma simples verificação do conteúdo total de proteínas até a quantificação
total de proteoma, usando espectrometria de massa.

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2 RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA: ELETROFORESE EM SDS-PAGE

2.1 Objetivos

A técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida SDS- PAGE foi realizada com os

objetivos principais de separação e quantificação de uma determinada amostra de proteínas e
a observação e análise dos resultados obtidos para fins didáticos de compreensão teórica e
prática do procedimento.

2.2 Materiais e métodos

Os materiais utilizados para a realização da técnica em ambiente laboratorial foram o

gel de poliacrilamida preparado nas concentrações de 12% e 4% para uma maior seletividade
das proteínas migrantes, visto que o gel de 12% permite a passagem de proteínas de peso
molecular entre 17 – 65 Kd e o gel de 4%, entre 60 – 220 Kd, e sua composição pode ser
observada na tabela abaixo. Além disso, foi utilizada uma amostra de proteínas a ser
separada, uma cuba eletroforética, uma fonte e tampão de corrida.

Gel 12% Gel 4%

H2O destilada 3,4mL 4,2 mL

Tris 2M 1,5 mL -

Tris 1M - 510µ

Bis-Acrilamida 2,3mL 600µL

SDS 20% 195µL 120µL

Persulfato de amônio 30µL 60µL

TEMED 6µL 9µL

Após a preparação dos géis, ou seja, a adição de todos os componentes citados em

tubos, estes são colocados na montagem das placas da cuba eletroforética vertical para a
polimerização (imagem 1). Posteriormente, o pente é retirado para evidenciar os poços
formados a monta-se a cuba eletroforética com o tampão de corrida e a fonte (imagens 2 e 3).

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 (imagem 1)

(imagens 2 e 3)
Com toda a estrutura preparada, a amostra controle e a amostra de proteínas são
adicionadas aos poços e a fonte é ligada para início da corrida eletroforética. Ao fim da
migração, o gel foi corado com azul de comassie e levado ao transiluminador para a
observação e análise dos resultados.

2.3 Resultados e discussão

A partir das bandas formadas no gel, como é possível observar na imagem abaixo, foi
possível identificar e quantificar as proteínas presentes nas amostras de acordo com a
distância de migração definida pelo seu peso molecular e analisar a quantidade de proteína
presente na amostra.

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 Os fragmentos maiores estão perto da extremidade superior do gel (eletrodo negativo,
onde eles começaram), e os fragmentos menores estão próximos da extremidade inferior
(eletrodo positivo). A relação de migração das proteínas no gel em função de seus respectivos
pesos moleculares foi interpretada conforme o gráfico abaixo.

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3 CONCLUSÃO

A eletroforese de proteínas em gel de poliacrilamida SDS-PAGE é uma técnica

utilizada para a separação de proteínas, bem como a identificação e quantificação dessas
moléculas, observando-se as bandas formadas ao final da corrida eletroforética.
Com a prática em laboratório foi possível alcançar os objetivos propostos e visualizar
como uma técnica tão minuciosa e importante deve ser realizada corretamente em âmbito
clínico.

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4 REFERÊNCIAS

HENEINE, Ibrahim Felippe. Biofísica Básica. São Paulo: Atheneu, 2000.

Referência Bibliográfica: DE ROBERTIS, E. M. F.; HIB, Jose. Biologia celular e

molecular. 16. ed