UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos

Departamento de Ciências Básicas

Relatório da Aula Prática II de Bioquímica

Eletroforese em Gel de Poliacrilamida

Leonardo Furlan Plotegher

Prof. Dr. Marcelo de Cerqueira Cesar

Pirassununga-SP

Junho/2016
 Relatório da Aula Prática de Bioquímica

Sumário
1. Resumo 1

2. Introdução 2

3. Objetivo 4

4. Metodologia 5

5. Resultados e Discussão 7

6. Conclusão 9
7. Referências...............................................................................................10

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1.Resumo

Esta aula prática teve como objetivo determinar e caracterizar os

tipos de proteínas contidas em duas espécies de peixes: a sardinha e o
aruanã. Para isso, utilizou-se o método da eletroforese que consiste na
determinação das proteínas pela separação elétrica. O sistema de
poliacrilamida consiste em dois géis que apresentam composição e
função diferentes: o gel de empilhamento e o gel de corrida. Assim pôde-
se detectar que os peixes continham as proteínas Myosin heavy chain,
Myosin light chain e Actin. Porém, a Tropomyosin só foi encontrada no
aruanã.

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2.Introdução

As proteínas são os compostos mais abundantes presentes em animais,

representando cerca de 50% do peso seco de tecidos. Suas funções e utilidades
são inúmeras, não existindo processos biológicos que não dependa da sua
presença ou atividade, assim, elas podem exercer a função de enzimas,
hormônios, proteínas transportadoras, anticorpos e receptores de células. Elas
são compostas de carbono, hidrogênio, oxigênio, nitrogênio e muitas possuem
enxofre.

Devido à sua grande diversidade, torna-se difícil realizar a separação e,

assim, vários métodos foram desenvolvidos, inclusive o da eletroforese. A
eletroforese em gel de poliacrilamida é uma técnica amplamente empregada
para a separação de biomoléculas, tais como os ácidos nucléicos e as proteínas.
Os géis de poliacrilamida são constituídos pela polimerização da acrilamida e da
N,N’ – metilenobisacrilamida, que é induzida por radicais livres e apresentam
poros de dimensões moleculares, sendo que a separação nessas malhas é
baseada tanto nos princípios da filtração em gel como na mobilidade
eletroforética das moléculas. Assim, nesse tipo de eletroforese, as grandes
moléculas, de maior peso molecular (PM), têm sua migração retardada com
relação às moléculas de menor tamanho (ELETROFORESE, 2012).

O sistema de poliacrilamida consiste em dois géis que apresentam

composição e função diferentes: o gel de empacotamento (concentrador) e o
gel de corrida (separador). O primeiro é constituído por uma malha de grande
porosidade (gel de poliacrilamida a 5%), e sua função é compactar a amostra em
um pequeno volume, depositando-a sobre a superfície-limite do gel separador
como uma “banda estreita”. Já o segundo é constituído de uma malha de poros

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menores (poliacrilamida na faixa de 8% a 20%), com a função de separar as

proteínas ou DNA, em razão de suas massas moleculares (ELETROFORESE,
2012).

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3.Objetivo

Esse experimento teve como objetivo a separação e comparação das

proteínas dos peixes sardinha e aruanã, utilizando o método da eletroforese em
gel de poliacrilamida.

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4.Metodologia

Primeiramente, iniciou-se a preparação das amostras dos pescados. Adicionou-

se, com uma pipeta automática, 26 µL de uma solução tampão de amostra em
dois microtubos com tampa de rosca e, rotulou-se os seus respectivos nomes,
Aruanã e Sardinha. Em seguida adicionou-se 26 µL da amostra Aruaña no
microtubo identificado com seu nome, e o mesmo foi feito com a amostra
Sardinha. Posteriormente, ferveu-se ambos microtubos de pescados com
tampão em banho-maria por dois minutos.

A preparação do gel de separação foi feita pelo técnico.

Inicialmente, misturou-se em um béquer 3,35 mL de água deionizada;
2,50 mL de 1,5 M Tris-HCl (pH 8,8); 100 µL de SDS 10% (estoque); 4 mL de
Acrilamida/Bis (estoque 30%); 50 µL de Persulfato de amônio 10% e 5 µL
de TEMED.

Para a preparação do gel de empilhamento, primeiramente

misturou-se em um béquer 3,04 mL de água deionizada; 1,25 mL de 0,5
M Tris-HCl (pH 6,8); 50 µL de SDS 10% (estoque); 664 µL de
Acrilamida/Bis (estoque 30%); 25 µL de Persulfato de amônio 10% e 5 µL
de TEMED.

Após preparação do gel de separação, transferiu-se o gel

rapidamente para a placa de corrida, com o auxílio de uma pipeta.
Aguardou-se alguns instantes e vedou-se com Álcool Butanol 80%. Em
seguida, após a solidificação, retirou-se a água com um papel de filtro e
com o auxílio da pipeta, adicionou-se o gel de empilhamento até o final
da placa. Logo após, introduziu-se o “pente” e aguardou-se 45minutos
para a solidificação. Depois desse período, foi possível retirar o “ pente”
para a aplicação das amostras.

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Relatório da Aula Prática de Bioquímica

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Para a aplicação das amostras, em cada cavidade formada pelo “pente”,

no gel, aplicou-se os padrões de PM e as amostras de proteínas musculares dos
pecados que se encontravam dissolvidas em tampão para a amostra. A ordem e
a quantidade aplicada em cada cavidade foram, respectivamente: 10 µL de
Padrão de PM 250 KD a 10KD; 20 µL de Amostra muscular de peixe Aruanã; e 20
µL de Amostra muscular de peixe Sardinha .

Por último, realizou-se a corrida no aparelho eletroforético, em que manteu-se

a vontagem constante em 220V por 45minutos á uma temperatura ambiente.
Ápos essa corrida, transferiu-se o gel para 25 Ml DE Coomassie

Depois colocou-se a placa dentro de uma caixa com um campo elétrico e

esperou-se aproximadamente 30 minutos para as proteínas chegarem ao final.
Então, desemplacou-se o gel e o imergiu no corante Commasie, para que depois
fosse lavado e escaneado.

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5.Resultados e Discussão

Os géis obtidos foram escaneados e estão representados a seguir:

Figura 1. Primeiro escaneamento de gel

Figura 2. Segundo escaneamento do gel

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Analisando as imagens podemos dizer que as proteínas Myosin

heavy chain, Myosin light chain e Actin estavam presentes nas duas
espécies de peixes, porém a Tropomyosin foi encontrada apenas no
aruanã.

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6.Conclusão

Foi possível determinar os tipos de proteínas presentes em cada

tipo de peixe e concluir que, por isso, os peixes apresentam texturas e
sabores diferentes.

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7.Referências

ELETROFORESE em gel de poliacrilamida. Portal Educação. Home.

Biologia. Artigos. Biologia Molecular. 06 dez. 2008. Disponível em:
<http://www.portaleducacao.com.br/biologia/artigos/23316/eletrofores
e-em-gelde-poliacrilamida>. Acesso em: 10 jun. 2016

SILVA, R.O.P; LOPES, A. de F; FARIA, R.M.D. de. Eletroforese de

proteínas séricas: interpretação e correlação clínica. 2008. Revista
Médica de Minas Gerais. 18(2). p. 116-122

Lehninger, D., & Cox, M. (2006). Princípios de Bioquímica (4ª ed.).

São Paulo: Sarvier.

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