UNIDADE I

Bases Analíticas
do Laboratório Clínico

Profa. Dra. Marília Patrão

Objetivos da disciplina e conteúdo programático

Objetivos da disciplina:
 apresentar ao aluno o funcionamento do laboratório, com ênfase nas técnicas e
nos procedimentos mais utilizados no âmbito da pesquisa e do diagnóstico.
 fornecer a fundamentação teórica necessária para o desempenho das atividades
laboratoriais.

Conteúdo programático:
1. Estrutura física do laboratório
2. Preparo de soluções
3. Principais técnicas experimentais
4. Tópicos de análise laboratorial aplicados à biomedicina
Estrutura do laboratório

 Estrutura básica do laboratório: iluminação; sistema de controle de temperatura;

bancadas; bancos; pias; equipamentos de proteção coletiva;
vidrarias; equipamentos.

 Particularidades de acordo com o tipo de análise realizada (análises físico-

químicas, clínicas, toxicológicas, microbiológicas, bromatológicas, ambientais etc.)

 Requisitos mínimos para o funcionamento dos

laboratórios clínicos: Resolução RDC Nº 302/2005
(portal.anvisa.gov.br).
Vidrarias e demais recipientes

 Vidrarias: utilizadas para acondicionar e transferir as amostras.

 Vidro borossilicato temperado (Pyrex®): maior dureza e resistência mecânica.

Béquer
Fonte: Usberco,
J.; Salvador, E.
Química: volume
único. 5. ed. São
Paulo: Saraiva,
Balões volumétricos Pipetas 2002. p. 22.
Exatidão e precisão das medidas

 Vidrarias apresentam diferentes graus de exatidão e de precisão.

grau de conformidade de uma grau de variação dos

medida ou aferição ao valor de resultados de uma
referência padrão correspondente. medição ou aferição
Fonte: A B C D
<http://www.unityinstrumentos.com.br/voc
e-conhece-a-diferenca-entre-precisao-e-
exatidao/>

Precisão: Não Precisão: Sim Precisão: Não Precisão: Sim

Exatidão: Não Exatidão: Não Exatidão: Sim Exatidão: Sim
Recipientes T.C. (to contain)

 Acondicionamento de amostras

Tubo de ensaio
Fonte: <https://www.lojalab.com.br/produto
_tubo-de-ensaio-em-ps-pct-com-100-pcs_225>
Microtubo
Fonte: <https://www.cirurgicaestilo.com.br
/microtubo-qpcr-0-1-ml-low-profile-c-1000-
kasvi-k7-1021-p13953/>
Béquer
Fonte: <https://www.laborglas.com.br
/produtos/vidrarias-schott/artigos-de-
vidros/becker-forma-alta-graduado-berzelius>
Recipientes T.C. (to contain)

 Acondicionamento de amostras

Fonte: <http://www.alpax.com.br/produtos/vidraria
/balao-varios-tipos/balao-fundo-chato-ou-redondo-gargalo-
curto-com-junta-esmerilhada-intercambiavel>

Balão Erlenmeyer
Fonte: <https://www.laborglas.com.br Fonte: <https://www.indiamart.com
/produtos/vidrarias-laborglas/artigos-de-vidro-em-geral- /proddetail/erlenmeyer-flask-
para-laboratorio/balao-fundo-redondo-com-junta- 15719314033.html>
esmerilhada>
Recipientes T.C. (to contain)

 Acondicionamento de amostras

Balão volumétrico
Fonte: <https://www.laborquimi.com.br/balao-
volumetrico>

Proveta
Fonte: <https://www.labcomercial.com
/ca/material-volumetric/1618-proveta-graduada-
100ml-classe-a.html>
Recipientes T.D. (to deliver)

Transferência de amostras
Pipetas
Micropipetas

Fonte: <https://www.labnetwork.com.br
/especiais/a-importancia-da-pipetagem-nos-
processos-analiticos/>

Fonte: <https://www.globaltradebr.com.br
/pipeta-graduada-classe-a.html>
Bureta
Fonte: <https://www.ibdciencia.com/pt/buretas/1154-
bureta-graduada-de-vidrio.html>
Interatividade

Para a realização de um experimento, você precisa de 500 mL de etanol 70% (v/v).

Qual das vidrarias abaixo é a mais adequada para se obter esse volume de líquido,
por apresentar maior exatidão?

a) Béquer.
b) Tubo de ensaio.
c) Erlenmeyer.
d) Proveta.
e) Balão volumétrico.
Resposta

Para a realização de um experimento, você precisa de 500 mL de etanol 70% (v/v).

Qual das vidrarias abaixo é a mais adequada para se obter esse volume de líquido,
por apresentar maior exatidão?

a) Béquer.
b) Tubo de ensaio.
c) Erlenmeyer.
d) Proveta.
e) Balão volumétrico.

Fonte: <http://www.splabor.com.br/produto/balao-
volumetrico-com-rolha-de-vidro-vidrolabor/>
Amostras experimentais – definição e principais conceitos

 Amostra experimental: porção representativa da espécie ou do composto

a ser analisado.

 Contém analitos: componentes que terão suas propriedades químicas e/ou físicas
determinadas experimentalmente.

Exemplo: determinação da glicemia no sangue.

Amostra: sangue Analito: glicose

Fonte: <https://pixabay.com/pt/sangue-m%C3%A9dica-
mol%C3%A9culas-pesquisa-1297583/>
Amostras experimentais – definição e principais conceitos

 Matéria: tudo aquilo que apresenta massa e ocupa lugar no espaço.

Constituída por átomos: menor partícula que ainda guarda as características de um

elemento químico.
conjunto de átomos que têm o mesmo número de prótons em
seu núcleo atômico, ou seja, o mesmo número atômico (Z).

Próton
Nêutron Núcleo
Elétron
Fonte: <http://www.universiaenem.com.br/sistema/faces
/pagina/publica/conteudo/texto-
html.xhtml?redirect=42094048243626879573852594688>
Amostras experimentais – definição e principais conceitos

 Substância química: cada molécula ou composto iônico, de ocorrência natural ou

artificial, presente em um sistema.
 Molécula: átomos ligados entre si por meio
de ligações covalentes. Ex.: H2O
Fonte: <https://pixabay.com/pt/%C3%A1gua-
3d-qu%C3%ADmica-org%C3%A2nica-
mol%C3%A9culas-2876275/>

 Composto iônico: íons ligados por meio de ligações iônicas. C.l

Ex.: NaCl

 Íons: cátion e ânions. Na+

Fonte: Usberco, J.; Salvador, E. Química:
volume único. 5. ed. São Paulo: Saraiva,
2002. p. 96.
Substâncias puras e misturas

 A matéria pode se apresentar pura ou misturada

uma única substância mais de uma substância

(um único componente) (mais de um componente)

Ex.: água destilada x água com sal.

Fonte: <https://pixabay.com/pt/copo-
qu%C3%ADmica-completo-glasswares-159176/>

 Diferentes propriedades organolépticas.

 Diferentes pontos de fusão e ebulição.
 Diferentes densidades etc.
Substâncias puras e misturas

 Exemplos de substâncias puras

Substâncias puras simples Fonte: Usberco, João

& Salvador, Edgard.
Substâncias puras compostas Química: volume único
5. ed. São Paulo :
 Exemplos de misturas Saraiva, 2002.

Água e sal Água e areia

Mistura homogênea Mistura heterogênea
Propriedades da matéria

Propriedades gerais: são propriedades encontradas em toda espécie de matéria.

 Massa
 Volume
 Inércia, impenetrabilidade,
divisibilidade, compressibilidade,
elasticidade, porosidade.

Compressibilidade do ar
Fonte: <http://educador.brasilescola.com/>.
Propriedades gerais da matéria

 Massa: medida da quantidade de matéria; determinada em balanças.

Valores de massa: expressos em gramas (g),

Balança
analítica
Fonte: <https://www.gehaka.com.br/
produtos/linha-pesagem/balancas-
analiticas/ag200>
seus múltiplos e submúltiplos.
 1 t = 106 g, ou 1.000.000 de gramas.
 1 kg = 103 g, ou 1.000 gramas.
 1 mg = 10-3 g, ou 0,001 gramas.
 1 µg = 10-6 g, ou 0,000001 gramas.
 1 ng = 10-9 g, ou 0,000000001 gramas.
 1 pg = 10-12 g, ou 0,000000000001 gramas.
Propriedades gerais da matéria

 Volume: expressa a extensão de um corpo em três dimensões: o comprimento, a

largura e a altura; determinado com o auxílio de balão volumétrico, pipeta
ou proveta.

 1 L (litro) = 1 dm3
 1 mL = 1 cm3 = 10-3 L
 1 µL = 1 mm3 = 10-6 L

Determinação do volume de sólidos:

princípio de Arquimedes
Fonte: <https://commons.wikimedia.org
/wiki/File:Archimedes-principle.svg>
Propriedades específicas da matéria

 Propriedades específicas: são propriedades individuais de cada tipo particular

de matéria.
 Organolépticas
 Temperaturas de mudanças de estado
 Coeficiente de solubilidade
 Tenacidade, Dureza, Brilho
 Densidade

Fonte: <https://brasilescola.uol.com.br/
quimica/carvao-diamante-que-os-difere.htm>
Propriedades específicas da matéria

 Temperaturas de mudança de estado

Temperatura (ºC)

Estados de agregação
da matéria: grau de
agitação das moléculas P.E = 100ºC Gelo + água
versus frequência de (temperatura
de ebulição) Neste trecho
Trecho de
interações ebulição:
só existe vapor
P.F = 0ºC Gelo + água d´água cuja
intermoleculares (temperatura
coexistem
água e
temperatura
de fusão) está subindo
Trecho de Neste trecho vapor em
fusão: só existe água temperatura
coexistem (líquido), Cuja constante
Neste trecho gelo e água temperatura (100ºC)
só existe gelo em temperatura está subindo
(sólido), cuja constante (0ºC)
temperatura
está subindo.
Tempo
Fonte: FELTRE, R. Química. Vol. 1. São Paulo: Moderna, 2004. p. 17.
Propriedades específicas da matéria

 Densidade: Indica a relação entre a massa e o volume ocupado por determinada

amostra. Expressa em g/cm3 ou em Kg/m3

d = densidade (g/cm3 ou Kg/m3)

m = massa da amostra (g ou Kg)
v = volume da amostra (m3 ou cm3)

Diferença entre a densidade do

algodão e do chumbo
Fonte: <http://www.mundovestibular.com.br>
Identificação da amostra com base em suas propriedades

 Propriedades específicas das substâncias puras, mas não das misturas,

apresentam valores fixos e constantes  constantes físicas das
substâncias puras.
Substâncias puras Misturas
Temperatura
(ºC) Temperatura Líquido
Líquido (ºC)
Vapor e vapor Vapor
e vapor
100
Temperaturas
de mudanças Líquido Sólido e Líquido
Sólido e
de estado líquido
líquido

0
Sólido Sólido
A B

Fonte: USBERCO, J. Química — volume único / João Usberco, Edgard

Salvador. 5. ed. reform. — São Paulo: Saraiva, 2002, p.38.
Interatividade

Uma amostra de líquido foi pesada e seu volume aferido com o auxílio de uma
proveta. Assinale a alternativa que indica corretamente a densidade, em g/cm3,
desse líquido, considerando que 5 L do mesmo apresentam massa de 4000g:

a) 0,08. d) 80.
b) 0,8. e) 800.
c) 8.
Resposta

Uma amostra de líquido foi pesada e seu volume aferido com o auxílio de uma
proveta. Assinale a alternativa que indica corretamente a densidade, em g/cm3,
desse líquido, considerando que 5 L do mesmo apresentam massa de 4000g:

a) 0,08. d) 80.
b) 0,8. e) 800.
c) 8.
Misturas: principais características e classificação

 Misturas: amostras constituídas de mais de uma substância química.

Dispersões: qualquer disseminação

de uma substância (disperso) ao
longo de todo o volume de outra
(dispersante)

Misturas podem ser classificadas em:

 Soluções
 Dispersões coloidais
 Suspensões
Misturas: principais características e classificação

Nome Diâmetro médio Número de Visualização das Separação dos

do disperso fases fases componentes
Soluções Entre 0 e 1 nm Uma ----- destilação
Coloides Entre 1 e 1000 nm Mais de uma Ultramicroscópio Ultrafiltração
ultracentrifugação
Suspensões Acima de 1000 nm Mais de uma Olho nu ou Filtração simples
microscópio óptico Decantação

Fonte:
FELTRE, R.
Soluções
Soluções coloidais Suspensões
Química. Vol. verdadeiras
2. São Paulo:
Moderna, 0 1 nm 1.000 nm Diâmetro das
2004. p. 3. partículas
Misturas: principais características e classificação

 Misturas complexas podem ser, ao mesmo tempo, soluções, coloides e

suspensões.
Exemplo: sangue Íons (HCO3-, Na+, K+, Cl-),
moléculas (C6H12O6 etc.)
estão em solução

Proteínas e outras
Fonte: <https://commons.wikimedia.org
/wiki/Blood#/media/File:Blut-EDTA.jpg>. macromoléculas compõem
uma dispersão coloidal

Células do sangue estão

em suspensão
Soluções

Solução:
 Mistura homogênea
 Soluto (disperso) está dissolvido em um solvente (dispergente)

Ex.: NaCl (soluto) em água (solvente)

Ar atmosférico
Ligas metálicas

Fonte: <http://www.professorinterativo.com.br/aval_on_line/
01_TICs/TIC_20/05_ligacao_metalica.html>.
Soluções

Exemplo de mecanismo de
dissolução: camada de solvatação

Fonte: FELTRE, Ricardo, - Química V.2 — 5. ed. — São Paulo : Moderna, 2004, p. 6
Dispersões coloidais

 Coloides: misturas heterogêneas, com aparência homogênea a olho nu.

Leite visto ao
microscópio
Classificação dos coloides
Disperso Dispersante Nome Exemplos
Líquido Gás Aerossol líquido Nevoeiro, neblina
Fonte: ANDREAS, N. et al. Early Human Sólido Gás Aerossol sólido Poeira, fumaça
Development vol. 91, n. 11, 2015.
Gás Líquido Espuma Espuma de sabão
Líquido Líquido Emulsão Leite
Sólido Líquido Sol Solução de amido
Gás Sólido Espuma sólida Pedra pomes
Líquido Sólido Emulsão sólida Manteiga
Sólido Sólido Sol sólido Ligas e vidros
Dispersões coloidais

 Fase sol: coloides apresentam aspecto líquido.

 Fase gel: coloides apresentam aspecto sólido.
 Pectização ou coagulação: transição sol  gel; adiciona-se disperso.
 Peptização: transição gel  sol; adiciona-se dispersante.

Fonte: <https://commons.wikimedia.org/w/index.php?search=sol+gel&title
=Special%3ASearch&go=Go#/media/File:SolGel4.png
Dispersões coloidais

 Coloides micelares: disperso com característica anfipática (uma mesma molécula

apresenta uma região polar e uma região apolar).

 Grande ocorrência nos organismos vivos

 Novas tecnologias (ex.: medicamentos)

Fonte: <https://pixabay.com/pt/micelas-
lipossomas-35724/>.

Membrana plasmática: bicamada lipídica

Fonte: <https://commons.wikimedia.org/w/index.php?curid=13731628>.
Dispersões coloidais

 Efeito Tyndall: dispersão da luz pelas partículas coloidais, o que permite a

visualização, a olho nu, do trajeto da luz.

Teste de Tyndall 1 2
1. Solução
2. Coloide

Fonte: <http://www.mundoeducacao.com/
Fonte: https://pixabay.com/pt/floresta-
quimica/efeito-tyndall.htm>
raios-de-sol-%C3%A1rvores-56930/
Dispersões coloidais

 Movimento Browniano: movimento aleatório das partículas do disperso, que estão

constantemente se chocando com as partículas do dispersante em uma solução
coloidal. Garante que não haja precipitação espontânea do disperso.

Fonte: http://www.astropt.org/2014/04/09/movimento-browniano/
Suspensões

 Suspensões: mistura heterogênea, fases facilmente identificáveis (olho nu ou ao

microscópio óptico).
 Disperso precipita espontaneamente  potencial zeta: força de repulsão entre as
partículas do disperso. Quanto maior, mais lentamente ocorre a precipitação.

Velocidade de
hemossedimentação
(VHS)

Fonte: <https://pt.wikipedia.org/wiki/Velocidade_de_hemossedimenta%C3%A7%
C3%A3o#/media/File:Esrrack_350px.jpg>.
Interatividade

Um medicamento é constituído por uma mistura heterogênea, na qual as partículas

do disperso são um agregado de macromoléculas com diâmetro entre 10Å e 1000Å.
Sabendo que 1Å (angstrom) corresponde a 10-10 m, o medicamento acima é:

a) Uma substância pura.

b) Uma mistura homogênea.
c) Uma solução.
d) Uma dispersão coloidal.
e) Uma suspensão.
Resposta

Um medicamento é constituído por uma mistura heterogênea, na qual as partículas

do disperso são um agregado de macromoléculas com diâmetro entre 10Å e 1000Å.
Sabendo que 1Å (angstrom) corresponde a 10-10 m, o medicamento acima é:

a) Uma substância pura.

b) Uma mistura homogênea.
c) Uma solução.
d) Uma dispersão coloidal.
e) Uma suspensão.
Processos químicos e físicos no laboratório

 Fenômenos físicos: não há alteração da estrutura íntima da matéria. Exemplo:

mudanças de estado físico da água.

 Fenômenos químicos: ocorre alteração da estrutura íntima da matéria  reações

químicas. Exemplo: reações de hidrólise.

 Existem experimentos que envolvem reações químicas (exemplo: reações

enzimáticas) e outros que envolvem apenas fenômenos físicos (exemplo:
processos de separação de misturas).
Processos químicos

 Reações químicas: transformações nas quais ocorre alteração qualitativa na

composição de uma ou mais espécies químicas.

Fitas reagentes para análise de urina

Fonte: <https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/2/23/Urine_trouble_-_BU_sang_nitrite_leucocyte.jpg>.

 Reações enzimáticas: ocorrem na presença de enzimas

(catalisam a reação).
Processos físicos

 Processos físicos no laboratório: mudanças de estado físico, dissolução, diluição,

separação e leitura de amostras, processos de separação de misturas etc.

conjunto de técnicas utilizadas para se

separar os componentes de uma
mistura  Análise imediata ou
desdobramento.

 Durante o processo, não há alteração dos componentes

(não há alteração da estrutura íntima da matéria).
Processos de separação de misturas

Principais técnicas para a separação dos componentes de uma suspensão:

Suspensão Principais técnicas usadas no laboratório

sólido-sólido catação, ventilação, levigação, flotação, separação magnética, cristalização
fracionada, dissolução fracionada, fusão fracionada e sublimação
sólido-líquido decantação, centrifugação, filtração simples e filtração a vácuo
líquido-líquido decantação
gás-sólido decantação e filtração
Processos de separação de misturas

Principais técnicas para a separação dos componentes de uma solução:

Solução Principais técnicas usadas no laboratório

sólido-líquido evaporação, destilação e cromatografia
líquido-líquido destilação fracionada, cromatografia

gás-gás Liquefação fracionada, adsorção, cromatografia

Principais técnicas para a separação dos componentes de

um coloide: ultracentrifugação, a ultrafiltração, a diálise,
a eletroforese e a floculação.
Processos de separação: suspensões sólido-sólido

Técnicas que não são utilizadas no laboratório:

 Catação: separação de sólidos com as mãos ou com o uso de algum instrumento.

Exemplo: separação de recicláveis do lixo comum.

 Ventilação: separação de componentes com diferentes densidades, a partir da

exposição da amostra a uma corrente de ar. Exemplo: separação das folhas entre
os grãos de café, na lavoura.

 Levigação: separação de componentes com diferentes

densidades, a partir da exposição da amostra a uma
corrente de água. Exemplo: garimpo.
Processos de separação: suspensões sólido-sólido

 Flotação: adição de líquido de densidade intermediária a uma mistura de sólidos.

Exemplo: separação de areia e serragem

Fonte: <https://www.colegioweb.com.br/substancias-e-misturas/separacao-de-misturas.html>.

 Peneiração: separação de sólidos de diferentes diâmetros com uma peneira.

 Separação magnética: separação de metal de uma

mistura de sólidos com um ímã.
Processos de separação: suspensões sólido-sólido

 Cristalização fracionada: separação de sólidos com diferentes coeficientes de

solubilidade. Processo muito utilizado em engenharia química.

 Dissolução fracionada: apenas um componente da mistura de sólidos é solúvel em

determinado soluto. Exemplo: separação de areia e açúcar.

 Fusão fracionada/liquefação fracionada: separação de substâncias com diferentes

temperaturas de fusão.

 Sublimação: quando um dos componentes

da mistura sublima.
Processos de separação: suspensões sólido-líquido

 Decantação sólido-líquido: o componente líquido de uma mistura sólido-líquido é

vertido em outro recipiente.

Fonte: <https://commons.wikimedia.org
/wiki/Category:Decantation#/media/File:Dekantacja_schemat.svg>.

 Sifonação: separação do líquido é feita com o auxílio de

um sifão.
Processos de separação: suspensões sólido-líquido e coloides

 Centrifugação: separação com o uso de uma centrífuga 

aplicação de força centrífuga sobre a amostra,
com sedimentação do disperso.

Fonte: <https://commons.wikimedia.org/wiki/Centrifuge#/media/File:Tabletop_centrifuge.jpg>.

 Ultracentrifugação: utilizada para separar coloides,

promove centrifugação a altas velocidades.
Processos de separação: suspensões sólido-líquido e coloides

 Filtração simples: separação do disperso sólido com o uso de um papel de filtro.

 Filtração a vácuo: sistema de filtração é submetido a vácuo.

Fontes:
<https://commons.wikimedia.org/wiki/
Category:Filtration#/media/File:Cold_
Filtration_(with_stirring_rod).jpg>.
<https://commons.wikimedia.org/wiki/
Category:Vacuum_filtration#/media/Fi
Simples A vácuo le:CNX_Chem_04_05_filter.jpg>.

 Ultrafiltração: utilização de filtros com poros diminutos

(0,1 nm a 1 µm) para a separação de coloides.
Processos de separação: suspensões líquido-líquido

 Decantação líquido-líquido: realizada com

o auxílio de um funil de decantação.

Fonte: https://www.infoescola.com/materiais-de-
laboratorio/funil-de-bromo/
Processos de separação: soluções

 Evaporação: solvente evapora, restando apenas o soluto sólido no recipiente.

Exemplo: salinas.

 Destilação simples: separação baseada nas diferenças da temperatura de ebulição

dos componentes de uma solução de sólido em líquido.
Processos de separação: soluções

Termômetro
Saída de
água

Balão de
destilação Tubo externo
com mistura
Condensador
Fonte: Adaptado de: USBERCO, Tela de
J. Química — volume único / amianto
João Usberco, Edgard Salvador. Entrada de água
5. ed. reform. — São Paulo:
Saraiva, 2002, p.45.
Bico de Erlenmeyer
Bunsen com líquido
Tripé destilado
Processos de separação: soluções

 Destilação fracionada: separação de componentes de uma solução de líquidos de

diferentes temperaturas de ebulição.
Coluna de Termômetro
fracionamento
Saída de
água

Fonte: USBERCO, J. Química —

volume único / João Usberco, Edgard Entrada
Salvador. 5. ed. reform. — São Paulo: de água
Saraiva, 2002, p.45.

Líquido destilado

Aqueci-
mento
Processos de separação: coloides

 Diálise: duas soluções, de concentrações diferentes, atravessam uma membrana

semipermeável que retêm as partículas em diâmetro coloidal.

Fonte: <https://www.thermofisher.com/br/en/home/life-science/protein-
biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-
library/pierce-protein-methods/dialysis-methods-protein-research.html>
Processos de separação: coloides

 Floculação: adição de agentes coagulantes (sulfato de alumínio ou cloreto férrico)

a uma dispersão coloidal faz com que as partículas em diâmetro coloidal
coagulem, formando flocos macroscópicos ao redor do agente coagulante, o que
permite que sejam retirados da amostra.

Água suja Floculação Precipitação

Fonte: <https://www.resumov.com.br/provas/enem-2015/q89/>.
Interatividade

Você precisa obter água pura a partir de uma solução salina. Qual das técnicas
abaixo é a mais adequada para esse fim?

a) Decantação.
b) Filtração.
c) Destilação.
d) Centrifugação.
e) Ultrafiltração.
Resposta

Você precisa obter água pura a partir de uma solução salina. Qual das técnicas
abaixo é a mais adequada para esse fim?

a) Decantação.
b) Filtração.
c) Destilação.
d) Centrifugação.
e) Ultrafiltração.
ATÉ A PRÓXIMA!