COGNITIVA:
São curtos e se localizam na superfície
vida celular.
Especializações da membrana:
MICROVILOSIDADES:
As microvilosidades estão presentes no
epitélio intestinal delgado, são
colunares, dispostas em camadas
únicas e formam uma camada muito
regular. No rim, são encontradas na
superfície livre da camada única de
células cúbicas que revestem os
túbulos contorcidos proximais. Cada
microvilosidade é uma expansão do
citoplasma recoberta por membrana e
contendo numerosos feixes de
microfilamentos de actina, geralmente
são pequenos e de forma irregular e se
distribuem irregularmente pela
superfície.
↳ Funções:
1. Microfilamentos de actina: São
responsáveis pela manutenção
da forma dos microvilos;
2. No intestino a sua função é
aumentar a área da membrana
a fim de facilitar o transporte
dos nutrientes da cavidade;
3. Alguns microvilos apresentam
membranas que contêm
moléculas especiais. (Algumas
enzimas só existem em
microvilos e são responsáveis
pela etapa final da digestão de
carboidratos e proteínas).
⇁ O glicocálice é mais desenvolvido;
⇁A maioria das células tem
microvilos, embora não tão
numerosos e organizados como os
das células absorventes.
CÍLIOS:
apical de algumas células.
Eles medem de 5 a 10 μm de
comprimento e 0,2 μm de diâmetro.
O movimento ciliar se assemelha a um
chicote, devido ao seu conjunto de
batimentos.
No corpo humano, os cílios estão
presentes na superfície de alguns
epitélios e proporcionam o movimento
de fluidos sobre os mesmos. No sistema
respiratório, por exemplo, as células
ciliares encontram-se associadas a
outras que secretam muco e têm como
função o transporte unidirecional de
uma camada delgada de muco que
reveste a superfície interna dessas
estruturas tubulares. No sistema
reprodutor feminino, o oviduto também
é revestido por células ciliadas. O
batimento ciliar movimenta o fluxo de
muco para o útero, o que facilita o
transporte dos óvulos. Cílios também
estão presentes no revestimento dos
ventrículos cerebrais.
Moléculas de dineína ciliar, com seus
braços internos e externos, formam
pontes entre as duplas de microtúbulos
periféricos, e sua atividade motora
proporciona o movimento de
batimento ciliar. Durante o movimento,
a interação dos braços externos da
dineína com os microtúbulos
adjacentes desliza os pares de
microtúbulos entre si e gera a força
propulsora. Este movimento também
regula a frequência de batimentos.
Porém, este deslizamento é limitado
por proteínas que prendem os pares de
microtúbulos uns aos outros (complexo
regulatório dineína-nexina) e a força
motora é convertida em dobramento
dos cílios, com a provável participação
dos braços internos da dineína.
Nos seres humanos, defeitos hereditários
na dineína axonemal causam uma condição
chamada de discinesia ciliar primária ou
síndrome de Kartagener. Essa síndrome é
caracterizada pela inversão da assimetria
normal dos órgãos internos (sinus inversus)
devido à disrupção do fluxo de fluidos no
embrião em desenvolvimento, pela
esterilidade masculina devido à imotilidade
de espermatozoides e por uma elevada
suscetibilidade a infecções pulmonares,
considerando a incapacidade dos cílios
paralisados de limpar o trato respiratório
dos detritos e das bactérias.
O batimento dos cílios tanto pode
propelir uma célula única através de
um fluido (como é o caso da locomoção
do protozoário Paramecium) quanto
movimentar fluidos sobre a superfície
de um grupo de células em um tecido.
⤹ Dentro de cada cílio, nove pares de
microtúbulos fundidos e um par central
não fundido, possuindo cada um pares
de braços de dineinas.
Cílios primários: muitas células
possuem uma estrutura semelhante
aos cílios e aos flagelos, porém mais
curto e sem motilidade, chamado cílio
primário.
Os cílios primários podem ser vistos
como compartimentos celulares
especializados ou organelas, que
realizam uma ampla gama de funções
celulares, mas compartilham muitas
características estruturais com os cílios
móveis. São encontrados na superfície
de quase todos os tipos de células,
onde eles percebem e respondem ao
ambiente externo, funções mais bem
compreendidas no contexto do olfato e
da visão. No epitélio nasal, os cílios que
protundem a partir dos dendritos de
neurônios olfatórios são os locais da
recepção e da amplificação do sinal
olfatório. Da mesma forma, os
bastonetes e cones da retina dos
vertebrados possuem um cílio primário
equipado com uma extremidade
expandida chamada de segmento
externo, especializada na conversão da
luz em um sinal neural.
As ligações entre a função dos cílios e os
sentidos da visão e olfato são salientadas
pela síndrome de Bardet-Biedl, um conjunto
de distúrbios associados a defeitos no IFT,
no cílio, ou no corpo basal. Os pacientes
com a síndrome de Bardet-Biedl não
possuem olfato e sofrem de degeneração
da retina. Outras características dessa
doença multifacetada incluem a perda da
audição, a doença policística dos rins, o
diabetes, a obesidade e a polidactilia,
sugerindo que os cílios primários
desempenham múltiplas funções em
diversos aspectos da fisiologia humana.
➤ Tanto os cílios móveis quanto
os sem motilidade são gerados
na interfase, em estruturas
associadas à membrana, nos
corpúsculos basais. No núcleo
de cada corpúsculo existe um
centríolo, com 9 grupos de trios
de microtúbulos fusionados com
organização circular. Os
centríolos são multifuncionais,
eles contribuem para a
polimerização do fuso mitótico
em células em divisão, mas
migram para a membrana
plasmática de células em
interfase para induzir a
nucleação do axonema.
A construção do axonema exige
transporte intraflagelar (IFT), um
sistema de transporte descoberto na
alga verde Chlamydomonas, visto que
não há tradução proteica nos cílios.
Nesse processo, motores movem
cargas em ambas as direções
anterógrada e retrógrada, neste caso
mediado pela cinesina-2 e pela dineína
citoplasmática 2, respectivamente.
FLAGELOS:
Movimentam-se em ondulações e
geralmente são únicos e longos em
uma célula individual. Estão presentes
em espermatozoides e em alguns
protozoários.
O movimento flagelar nos
espermatozoides ocorre por um abalo
tipo vaivém, o qual se inicia na base do
flagelo, próximo ao núcleo do
espermatozóide. Esse movimento
permite que o espermatozóide se mova
para a frente em um meio líquido.
Os flagelos bacterianos não contêm
microtúbulos ou dineína e não
ondulam ou batem. Eles são filamentos
helicoidais rígidos, longos, compostos
por subunidades repetitivas da
proteína flagelina.
Os flagelos giram como propulsores,
guiados por um motor rotatório
especial inserido na parede celular
bacteriana.
➤ Na base de cílios e flagelos,
localiza-se o corpúsculo basal e,
em seu centro, está o axonema,
composto de microtúbulos e
proteínas associadas.
O axonema é formado por 9 pares de
microtúbulos em arranjo circular,
juntamente com um par central de
microtúbulos. Os microtúbulos dos
pares periféricos apresentam-se
fundidos uns aos outros, enquanto, no
par central, encontram-se separados.
Esse arranjo é mantido por proteínas
acessórias, como a nexina, que liga
microtúbulos de pares periféricos ao
par adjacente, e outras proteínas
associadas aos filamentos radiais, que
ligam o par central às duplas
periféricas.
⤿ JUNÇÃO ADERENTE/ ZÔNULA DE
ADESÃO:
Forma um cinturão contínuo ao redor
da célula que se une às adjacentes
através de ligações entre moléculas de
adesão dependentes de cálcio
(caderinas). Essas proteínas
transmembranas estão ancoradas aos
microfilamentos de actina através de
moléculas sinalizadoras. Essa junção
circunda toda a célula e contribui para
a aderência entre células adjacentes.
Uma característica importante dessa
junção é a inserção de numerosos
filamentos de actina em placas de
material elétron-denso contidas no
citoplasma subjacente à membrana da
junção. Os filamentos fazem parte da
trama terminal, uma rede de filamentos
de actina, filamentos intermediários e
espectrina existente no citoplasma
apical de muitas células epiteliais Não
apenas controla a passagem de
substâncias através da camada
epitelial, mas também restringe o
movimento das balsas lipídicas que
contêm proteínas específicas dentro da
própria membrana plasmática. As
junções de adesão fornecem adesões
laterais entre as células epiteliais,
usando proteínas que se ligam dentro
do citoesqueleto de células adjacentes.
Dois tipos de junções de adesão
intercelulares podem ser identificados
na superfície lateral da célula: •A
zônula de adesão, que interage com a
rede de filamentos de actina no interior
da célula •A mácula de adesão ou
desmossomo, que interage com os
filamentos intermediários. Além de
possuir hemidesmossomos e adesões
focais. As proteínas transmembrana
conhecidas como moléculas de adesão
celular (CAMs) formam uma parte
essencial de toda junção de adesão da
célula, tanto na superfície lateral
quanto na basal. Caso a ligação ocorra
entre diferentes tipos de CAMs, é
descrita como ligação heterotípica; a
ligação homotípica ocorre entre as
CAMs do mesmo tipo. As CAMs têm
uma adesividade seletiva de resistência
relativamente baixa, o que possibilita a
fácil união e dissociação das células.
As CAMs são capazes de controlar e
regular diversos processos
intracelulares associados à adesão
celular, à proliferação celular e à
migração das células, além de
participarem das comunicações
intercelulares e intracelulares, do
reconhecimento celular, da regulação
da barreira de difusão intercelular, da
geração de respostas imunes e da
apoptose. Elas são classificadas em:
caderinas, nectinas, integrinas,
selectinas e a superfamília das
imunoglobulinas.
1. Caderinas: são representadas
pela família das CAMs
transmembrana dependentes de
Ca2+ localizadas principalmente
dentro da zônula de adesão.
Nesses locais, as caderinas
mantêm interações homotípicas
com proteínas semelhantes das
células vizinhas. Estão
associadas a um grupo de
proteínas intracelulares (as
cateninas) que ligam as
moléculas de caderina aos
filamentos de actina do
citoesqueleto celular. Por meio
dessa interação, as caderinas
transmitem sinais que regulam
os mecanismos de crescimento e
de diferenciação celulares. As
caderinas controlam as
interações intercelulares e
participam do reconhecimento
celular e da migração das
células embrionárias. A epitelial,
ou E-caderina, o membro mais
estudado dessa família, mantém
a junção da zônula de adesão
entre as células epiteliais; além
disso, atua como importante
supressor de células tumorais
epiteliais.
2. Nectinas: são representadas por
uma família de CAMs
imunoglobulina-símiles
Ca2+-independentes. Ao
contrário das caderinas, as
nectinas conseguem estabelecer
interações homofílicas com
membros da mesma família e
heterofílicas com membros de
famílias correlatas de nectina.
As nectinas não conseguem
estabelecer junções de adesão
fortes. Essas junções mais
fracas poderiam ser valiosas
durante o desenvolvimento
embrionário, a remodelagem
tecidual rápida e a regeneração
tecidual.
3. Integrinas: são representadas
por duas subunidades de
glicoproteínas transmembrana,
que consistem em 15 cadeias
alfa e nove cadeias beta. Essa
composição possibilita a
formação de diferentes
combinações de moléculas de
integrina, que são capazes de
interagir com várias proteínas
(interações heterotípicas). As
integrinas interagem com as
moléculas da matriz extracelular
(como colágenos, laminina e
fibronectina) e com os
filamentos de actina e
filamentos intermediários do
citoesqueleto celular. Por meio
dessas interações, as integrinas
regulam a adesão celular,
controlam o movimento e o
formato da célula e participam
do crescimento e diferenciação
celulares.
4. Selectinas: são expressas nos
leucócitos e nas células
endoteliais e medeiam o
reconhecimento entre
neutrófilos e célula endotelial.
Essa ligação heterotípica inicia
a migração de neutrófilos
através do endotélio dos vasos
sanguíneos para dentro da
matriz extracelular. As selectinas
também estão envolvidas no
direcionamento (homing) de
linfócitos para dentro dos
acúmulos de tecido linfático (um
processo denominado
direcionamento de linfócito). 5.
Superfamília das
imunoglobulinas (SFIg): possui
proteínas que desempenham
papéis essenciais na adesão e
diferenciação celulares, no
câncer e nas metástases
tumorais, na angiogênese
(formação de novos vasos), na
inflamação, nas respostas
imunes e na fixação microbiana,
bem como em muitas outras
funções. Tem como função a
coesão entre as células,
formando a camada epitelial
 mais resistente ao atrito, trações
e pressões. Além disso, participa
do estabelecimento e
manutenção da polaridade
celular em associação com a
Zônula de Oclusão.
⤿ JUNÇÕES COMUNICANTES OU GAP:
Elas podem existir praticamente em
qualquer local das membranas laterais
das células epiteliais e se caracterizam
pela grande proximidade (2 nm) das
membranas de células adjacentes. As
junções comunicantes, por exemplo,
participam da coordenação das
contrações do músculo cardíaco.
Possui como finalidade a conexão das
células adjacentes por meio de canais.
Essa conexão permite a transmissão de
informações elétricas ou metabólicas.
As conexinas (proteínas de membrana
de múltipla passagem que contêm
quatro domínios transmembranares,
dois domínios extracelulares e três
domínios intracelulares) são
componentes básicos dessas junções.
Na membrana, associam-se em
hexâmeros para formar um conéxon.
Cada conéxon é a metade de um canal
(hemicanal). O acoplamento entre
conéxons de células adjacentes
estabelece um poro que conecta o
citoplasma de duas células adjacentes.
A formação de uma junção gap
constitui uma comunicação celular e
uma aderência adicional. As junções
gap se aglomeram em regiões da
membrana, formando placas de
comunicação.
➤ As conexinas são codificadas por
cerca de 20 genes em mamíferos,
possibilitando variações nas
associações entre elas. Cada célula
apresenta pelo menos dois tipos
diferentes de conexinas.
Os conéxons podem ser formados por
conexinas do mesmo tipo ou diferentes,
e as junções gap podem ser
estabelecidas por interações
homotípicas ou heterotípicas. Essas
variações estabelecem características
distintas ao canal.
As junções gap transferem íons e
componentes de vias sinalizadoras,
contribuindo com a sincronização
iônica ou bioquímica, mas não
possibilitam a passagem de proteínas
ou ácidos nucleicos. Em células
excitáveis como neurônios e
cardiomiócitos, a transferência iônica
mediada pelas junções gap agiliza e
sincroniza as respostas celulares.
Particularmente nos neurônios, as
junções gap são centrais para as
sinapses elétricas. Em cardiomiócitos, o
acoplamento elétrico é essencial para
a sincronização da contração
cardíaca. Em células não excitáveis
como epitélios, as junções gap
propagam de modo coordenado
segundos mensageiros ativados por
variações ambientais e, portanto,
contribuem também para a
homeostase tecidual. O
compartilhamento de sinalizadores
também torna a resposta tecidual mais
homogênea, reduzindo a
suscetibilidade de flutuações
individuais estocásticas.
De certa maneira, ao acoplar múltiplas
células, age como um sincício funcional
(sin = juntos; cio = células). Ou seja, seu
funcionamento reduz as barreiras
intercelulares presentes em um tecido
multicelular e se assemelha a uma
grande célula formada pela união das
células individuais. O canal das
junções comunicantes não permanece
aberto o tempo todo. Sua cinética de
abertura e fechamento é modulada por
variados fatores, como o potencial
elétrico da membrana, o pH
intracelular ou níveis de cálcio.
⤿ ZÔNULA DE OCLUSÃO:
Região estreita na qual as membranas
plasmáticas de duas células adjacentes
entram em contato estreito para vedar
o espaço intercelular devido a uma
série de fusões focais entre as células,
tais fusões são criadas por proteínas
transmembrana de células adjacentes
que se unem no espaço intercelular.
Classicamente a zônula de oclusão é
descrita como uma estrutura de
contato bicelular porque só veda o
espaço entre duas células adjacentes.
Todavia, como a maioria dos domínios
apicais das células epiteliais têm
formato poligonal, apenas as laterais
dessas células formam uma zônula de
oclusão com esse contato bicelular
clássico de células vizinhas.
Os vértices dessas células formam uma
zônula de oclusão tricelular na qual os
ângulos de três células epiteliais se
encontram. À medida que a zônula de
oclusão se aproxima de uma região de
contato tricelular, extensões apicais
dos filamentos de partículas
intramembrana horizontais se tornam
verticais e correm ao longo do domínio
lateral no ângulo de cada célula
epitelial, formando um par de
filamentos verticais. Esses dois
filamentos verticais são denominados
elementos de vedação central e contêm
proteínas diferentes daquelas
encontradas nos contatos bilaterais.
Os ângulos que contêm os elementos
de vedação central delimitam um
espaço longo e estreito denominado
tubo central, que é uma parte crucial
do espaço extracelular.
Como o tubo central representa um
ponto fraco na barreira epitelial,
proteínas singulares (ou seja,
tricelulina) são necessárias para vedar
essa área e manter a barreira de
permeabilidade epitelial. Os filamentos
da zônula de oclusão correspondem à
localização das fileiras de proteínas
transmembrana. Quatro grupos
principais de proteínas
transmembrana são encontrados na
zônula de oclusão:
1. As claudinas constituem uma
família de proteínas (20 a 27 kDa)
que formam o arcabouço das
zônulas de oclusão e são
componentes integrais dos
filamentos das zônulas de
oclusão. Conseguem formar
canais aquosos extracelulares
para a passagem paracelular de
íons e de outras moléculas
pequenas. As claudinas são
responsáveis pela formação de
canais aquosos extracelulares.
2. A ocludina, uma proteína de 60
kDa, participa da formação e
manutenção da barreira entre
células adjacentes, restringindo
o movimento de lipídios e
proteínas entre os domínios
apical e lateral. É encontrada na
maioria das junções de oclusão.
No entanto, vários tipos de
células epiteliais não têm
ocludina em seus filamentos,
mas ainda assim contêm
zônulas de oclusão bem
desenvolvidas e totalmente
funcionantes.
3. A molécula de adesão juncional
(JAM) pertence à superfamília
das imunoglobulinas. Não forma
só um filamento da zônula de
oclusão, mas está associada às
claudinas, e é responsável pelo
aumento da resistência elétrica
da membrana celular, reduzindo
a permeabilidade paracelular. A
JAM está envolvida na formação
das junções de oclusão nas
células endoteliais, bem como
entre as células endoteliais e os
monócitos que migram do
espaço vascular para o tecido
conjuntivo.
4. A tricelulina está localizada em
áreas específicas da zônula de
oclusão nos contatos
tricelulares. É um componente
da junção e é recrutada para
essa junção pela família
angulina de proteínas
(angulina-1, angulina-2 e
angulina-3) cujos membros
também são expressos nos
ângulos de contato das três
células epiteliais. Possui
participação importante na
manutenção da barreira
epitelial e na organização dos
filamentos de actina nos
contatos tricelulares, formando
pontos cruciais que apoiam as
forças de resistência à tensão
geradas pelo citoesqueleto de
actina. A capacidade dos
epitélios de criar uma barreira
de difusão é controlada por
duas vias distintas para
transporte de substâncias
através dos epitélios:
 - A via transcelular ocorre No processo de produção da cadeia
por meio da membrana polipeptídica, participam o ribossomo
plasmática da célula e as moléculas de DNA e RNA. Outra
epitelial. Na maioria atividade essencial é a respiração
dessas vias, o transporte celular que produz a energia que será
é ativo e requer proteínas utilizada pelas células do corpo, parte
de transporte de desse processo ocorre no citoplasma e
membrana e canais outra parte dentro das mitocôndrias,
especializados como no Ciclo de Krebs.
dependentes de energia.
- A via paracelular ocorre Os filamentos do citoesqueleto são
por meio da zônula de uma espécie de armação ou esqueleto
oclusão entre duas que tem como funções dar forma à
células epiteliais. A célula e permitir movimentos tanto de
quantidade de água, organelas como da célula como um
eletrólitos e outras todo.
moléculas pequenas
transportadas por essa Composição Química:
via depende da tensão O citoplasma é composto em grande
da zônula de oclusão e parte por água, mas também por
da zônula de oclusão moléculas orgânicas, em especial
tricelular. macromoléculas como proteínas e
enzimas. Além disso, também estão
presentes lipídios e polissacarídios. As
↪ CAM: enzimas têm papel essencial
As glicoproteínas da membrana catalisando diversas reações que
responsáveis pela aderência entre as acontecem no citosol.
células são denominadas CAM,
proteínas integrais transmembrana,
com uma extremidade da molécula
exposta na superfície celular e a outra
extremidade da molécula provocando
saliência no lado citoplasmático da
membrana.
↳As CMA são receptores da
superfície especializados em
reconhecer outras células e a elas
aderir, para construir os tecidos e
órgãos. As caderinas constituem outro
grupo de CAM, porém são
dependentes dos íons Ca2+ .
↳Mantêm a adesão celular nas
concentrações normais de cálcio no
meio extracelular.

CITOPLASMA
No citosol acontece a maior parte das
atividades celulares, sempre associado
às organelas. A síntese de proteínas,
por exemplo, é uma das reações mais
importantes.
RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO:
Todas as células eucarióticas possuem
retículo endoplasmático (RE). Sua
membrana em geral constitui mais do
que a metade da membrana total de
uma célula animal, o RE e as regiões chamadas retículo
membranas nucleares formam uma endoplasmático rugoso, ou RE rugoso;
folha contínua envolvendo um espaço regiões do RE sem ribossomos ligados
interno único, chamado de lúmen do são chamadas de retículo
RE ou espaço cisternal do RE, que endoplasmático liso, ou RE liso.
costuma ocupar mais de 10% do volume
celular total.
O RE tem um papel central na
biossíntese de lipídeos e proteínas,
servindo também como um local de
armazenamento intracelular de Ca2+,
que é usado em muitas respostas de
sinalização celular. Além disso,a
membrana do RE é também o local
onde é feita a maioria dos lipídeos
A grande maioria das células possui
para as membranas mitocondriais e
regiões limitadas de RE liso, e o RE é,
peroxissômicas e quase todas as
com frequência, parcialmente liso e
proteínas que serão secretadas para o
parcialmente rugoso
exterior celular – acompanhadas
↳ RE transicional: São áreas do
daquelas destinadas ao lúmen do RE,
RE liso que possui vesículas com
ao aparelho de Golgi ou aos lisossomos
proteínas recém-sintetizadas e
– são enviadas inicialmente ao lúmen
lipídios que se desprendem para
do RE.
serem transportados para o
complexo de golgi.
Em certas células especializadas, o RE
liso é abundante e tem funções
adicionais, que expandido acomoda
enzimas as quais fazem o colesterol e o
modificam para formar os hormônios.
Principal tipo celular no fígado, o
hepatócito também possui uma
quantidade significativa de RE liso. Ele
é o principal sítio de produção de
partículas de lipoproteína, que
carregam lipídeos a outras partes do
corpo via corrente sanguínea. As
➤ O retículo endoplasmático é
enzimas que sintetizam os lipídeos
estrutural e possui funcionamento
estão localizadas na membrana do RE
diverso:
liso, a qual também contém enzimas
↳ Uma das especializações mais
que catalisam uma série de reações
notáveis é RE rugoso!
para destoxificar substâncias
As células de mamíferos começam a
lipossolúveis e vários compostos
importação de proteínas para o RE
danosos produzidos pelo metabolismo.
antes da síntese completa da cadeia
↳ Citocromo P450: Realizam as
polipeptídica. No transporte
reações de destoxificação.
contraducional, o ribossomo que está
sintetizando a proteína está
Outra função crucial do RE na maioria
diretamente aderido à membrana do
das células eucarióticas é sequestrar
RE, permitindo que uma ponta da
Ca2+ do RE para o citosol e sua
proteína seja translocada para o RE
subsequente recaptação estão do
enquanto o restante da cadeia
citosol. A liberação de Ca2+ envolvidas
polipeptídica está sendo sintetizado.
em muitas respostas rápidas a sinais
Esses ribossomos ligados à membrana
extracelulares. Uma bomba de Ca2+
cobrem a superfície do RE, criando
zenamento de Ca2+ que se ligam a para a membrana do RE por uma
Ca2+ transporta Ca2+ do citosol para o sequência-sinal do RE, a qual inicia a
lúmen do RE. O arma-no lúmen do RE é sua translocação por um mecanismo
facilitado pelas altas concentrações de comum. De acordo com a hipótese do
proteínas lá existentes. sinal, a diferença no tamanho reflete a
As células musculares presença inicial de uma
possuem um abundante RE liso sequência-sinal que direciona a
modificado, denominado retículo proteína secretada à membrana do RE
sarcoplasmático. A liberação e a e é, então, clivada por uma
recaptação de Ca2+ pelo retículo peptidase-sinal na membrana do RE
sarcoplasmático disparam, antes que a cadeia polipeptídica tenha
respectivamente, a contração e o sido completada. Os sistemas livres de
relaxamento das miofibrilas, durante células, nos quais as proteínas são
cada ciclo de contração muscular. importadas para os microssomos,
↳ Microssomos: O RE quebra-se em oferecem procedimentos de análise
fragmentos e recompõe-se na forma de eficazes para identificação, purificação
pequenas vesículas. Microssomos são e estudo de vários componentes da
facilmente purificados e representam maquinaria molecular responsável
versões autênticas do Retículo pelos processos de importação do RE.
Endoplasmático (RE), capazes de várias
funções, como translocação de
proteínas, glicosilação proteica,
captação e liberação de Ca2+ e síntese
de lipídeos. Existem microssomos
rugosos (com ribossomos) e lisos (sem
ribossomos), originados de diferentes
partes do RE e outras organelas, sendo
mais fáceis de separar em células
hepáticas e musculares devido à
grande quantidade de RE liso ou
retículo sarcoplasmático. A presença de
ribossomos torna os microssomos
rugosos mais densos, permitindo a
separação por centrifugação de
➤ Uma partícula de reconhecimento de
equilíbrio. Microssomos desempenham
sinal (SRP) direciona a sequência-sinal
um papel crucial na compreensão
do RE para um receptor específico na
molecular da função do RE.
membrana do RE rugoso!
A sequência-sinal do RE é guiada à
➤ As sequências-sinal foram
membrana do RE por, pelo menos, dois
descobertas primeiro em proteínas
componentes: uma partícula de
importadas para o RE rugoso.
reconhecimento de sinal (SRP,
O RE captura proteínas selecionadas
signal-recognition particle), que circula
do citosol assim que elas são
entre a membrana do RE e o citosol e
sintetizadas. Essas
liga-se à sequência-sinal, e um
proteínas são de dois tipos: proteínas
receptor SRP na membrana do RE.
transmembrana, que são apenas
As sequências-sinal do RE variam na
parcialmente translocadas através da
sequência de aminoácidos, mas cada
membrana do RE e tornam-se
uma possui oito ou mais aminoácidos
“embutidas” na membrana, e proteínas
apolares no seu centro.
solúveis em água, que são totalmente
A SRP é uma estrutura do tipo haste,
translocadas através da membrana do
que envolve a subunidade ribossômica
RE e liberadas no lúmen do RE. Todas
maior com uma ponta ligando a
essas proteínas, apesar do seu
sequência-sinal do RE à medida que
subsequente destino, são dirigidas
emerge do ribossomo como parte da
cadeia polipeptídica recém-produzida; receptor traz o complexo
a outra ponta bloqueia o sítio de ribossomo-SRP a um translocador
ligação do fator de elongamento na proteico não ocupado na mesma
interface entre as subunidades grande membrana. A SRP e o receptor SRP são
e pequena do ribossomo. Esse evento então liberados, e o translocador
provoca uma pausa na síntese proteica transfere a cadeia polipeptídica
tão logo o peptídeo-sinal tenha crescente através da membrana.
emergido do ribossomo. A pausa
transitória provavelmente dá tempo
suficiente ao ribossomo para ligar-se à
membrana do RE antes de completar a
síntese da cadeia polipeptídica,
garantindo, desse modo, que a
proteína não seja liberada no citosol.

Os ribossomos ligados à membrana,

ligados ao lado citosólico da
membrana do RE, estão empenhados
na síntese de proteínas que estão
sendo simultaneamente translocadas
para o RE. Os ribossomos livres, não
ligados a membranas, sintetizam todas
as outras proteínas codificadas pelo
genoma nuclear.
➤ A cadeia polipeptídica atravessa um
canal aquoso no translocador
a identificação da proteína
transportadora, que se mostrou capaz
de formar um canal preenchido por
água na membrana, pelo qual a cadeia
polipeptídica cruza a membrana. O
centro do translocador, denominado
complexo Sec61, consiste em três
subunidades que são altamente
conservadas desde bactérias até
células eucarióticas. A estrutura do
complexo Sec61 sugere que a-hélices
da subunidade maior cercam um canal
central através do qual uma cadeia
polipeptídica atravessa a membrana.
Em células eucarióticas, quatro
complexos Sec61 formam um grande
A pausa também assegura que
conjunto de translocadores que podem
grandes porções de proteína, que
ser visualizados nos ribossomos
poderiam enovelar-se em uma
ligados ao RE após a solubilização da
estrutura compacta, não sejam
membrana do RE com detergente. É
originadas antes de chegarem ao
provável que esse conjunto inclua
translocador na membrana do RE.
outros complexos de membrana que se
Quando uma sequência-sinal se liga, a
associam com o translocador, como
SRP expõe um sítio de ligação para o
enzimas que modificam a cadeia
receptor SRP, que é um complexo
polipeptídica crescente, incluindo a
proteico transmembrana na membrana
transferase de oligossacarídeos e a
do RE rugoso. A ligação de SRP ao seu
peptidase-sinal. O conjunto de um
translocador com esses componentes
acessórios é chamado de translócon.
➤ Translocação através da membrana
do RE nem sempre necessita do
alongamento da cadeia polipeptídica
em andamento!
Algumas proteínas são importadas
para o RE depois de completada sua
síntese, demonstrando que o
transporte nem sempre requer
tradução em andamento.
Para atuar na translocação
pós-traducional, o translocador do RE
necessita de proteínas acessórias que
coloquem a cadeia polipeptídica no
poro e sustentem o transporte.
As células eucarióticas utilizam um
conjunto diferente de proteínas
acessórias
que se associam ao complexo Sec61.
Essas proteínas atravessam a
membrana do RE e usam um pequeno
domínio localizado no lado do lúmen
da membrana do RE para depositar
uma proteína chaperona do tipo hsp70
(denominada BiP, de binding protein)
na cadeia polipeptídica, à medida que
esta emerge do poro para o lúmen do
RE.
As proteínas que são transportadas
para o RE por um mecanismo
pós-traducional são primeiramente
liberadas no citosol, onde se ligam a
proteínas chaperonas, evitando o seu
enovelamento por ligação, como
discutido antes para as proteínas cujo
destino são as mitocôndrias e os
cloroplastos.
➤ Em proteínas transmembrana de
passagem única, somente uma
sequência-sinal interna do RE
permanece na bicamada lipídica como
uma a-hélice que atravessa a
membrana!
A sequência-sinal RE da cadeia
polipeptídica crescente parece
disparar a abertura do poro na
proteína translocadora Sec61: depois
que a sequência-sinal é liberada da
SRP e a cadeia crescente tenha
alcançado um tamanho suficiente, a
sequência-sinal liga-se
a um sítio específico dentro do poro,
abrindo dessa maneira o poro. Uma
sequência--sinal do RE é portanto
reconhecida duas vezes: primeiro por
uma SRP no citosol então por um sítio
de ligação no poro da proteína
translocadora, onde serve como um
sinal de início de transferência (ou
peptídeo de início de transferência)
que abre o poro. Quando a cadeia
polipeptídica nascente tiver crescido o
suficiente, a peptidase-sinal do RE cliva
a sequência--sinal e a libera do poro
na membrana, onde é rapidamente
degradada a aminoácidos por outras
proteases na membrana do RE.
O translocador pode então tomar duas
direções: abrir-se para formar um poro
através da membrana a fim de deixar
porções hidrofílicas de proteínas na
bicamada lipídica, e abrir-se
lateralmente dentro da membrana para
deixar porções hidrofóbicas de
proteínas na bicamada lipídica.
A integração de proteínas de
membrana exige que algumas partes
da cadeia polipeptídica sejam
transportadas através da bicamada
lipídica, enquanto outras não.
As sequências internas de início da
transferência podem ligar-se ao
aparato de transporte em uma de duas
orientações; por sua vez, essa
orientação da sequência de início de
transferência determina qual segmento
da proteína (aquele que precede ou o
que segue a sequência de início da
transferência) é movido através da
membrana para o lúmen do RE. Em um
caso, a proteína de membrana
resultante tem sua região C-terminal
no lado do lúmen, enquanto, no outro,
a região N-terminal está situada no
lado do lúmen.
➤As combinações de sinais de início e
de parada da transferência
determinam a topologia das proteínas
transmembrana de passagem múltipla!
Nas proteínas transmembrana de
passagem múltipla, a cadeia
polipeptídica passa
para frente e para trás repetidamente
ao longo da bicamada lipídica como
uma a-hélice hidrofóbica.
Até o translocador encontrar uma
sequência de parada da transferência;
em proteínas transmembrana de duas
passagens, por exemplo, o polipeptídeo
pode, em seguida, ser liberado na
bicamada, uma segunda sequência de
início da transferência reinicia a
translocação mais adiante na cadeia
polipeptídica, até a próxima sequência
de parada do transporte induzir a
liberação do polipeptídeo, e assim por
diante, para posteriores sequências de
início e de parada da transferência.
Uma vez que as proteínas de
membrana sempre estão inseridas no
lado citosólico
do RE dessa maneira programada,
todas as cópias da mesma cadeia
polipeptídica terão a mesma
orientação na bicamada lipídica. Esse
mecanismo gera uma assimetria na
membrana do RE, na qual os domínios
proteicos expostos em um dos lados
são diferentes dos domínios expostos
do outro. Essa assimetria é mantida
durante os muitos eventos de
brotamento e de fusão que
transportam as proteínas sintetizadas
no RE a outras membranas celulares.
Assim, a maneira que uma proteína
recém-sintetizada é inserida na
membrana do RE determina a
orientação da proteína em todas as
outras membranas.
➤ Proteínas ancoradas pela cauda são
integradas na membrana do RE por um
mecanismo especial
Muitas proteínas de membrana
importantes são ancoradas na
membrana por uma a-hélice
hidrofóbica transmembrana C-terminal.
Essas proteínas ancoradas pela cauda
no RE incluem um grande número de
subunidades proteicas SNARE que
dirigem o tráfego vesicular.
Apenas poucos aminoácidos que
seguem a a-hélice transmembrana na
extremidade C-terminal são
translocados para o lúmen do RE,
enquanto a maior parte da proteína
permanece no citosol. Devido à
posição única da a-hélice
transmembrana na sequência proteica,
a tradução termina enquanto os
aminoácidos da porção C-terminal que
irão formar a a-hélice transmembrana
ainda não emergiram do túnel de saída
do ribossomo.
Está claro agora que uma maquinaria
de direcionamento especializada está
envolvida e que é abastecida pela
hidrólise de ATP.
➤ As cadeias polipeptídicas
transportadas enovelam-se e são
montadas no lúmen do RE rugoso:
Muitas das proteínas no lúmen do RE
estão em trânsito, en route a outros
destinos; outras, contudo, residem lá
normalmente e estão presentes em
altas concentrações. Essas proteínas
residentes no RE contêm um sinal de
retenção no RE de quatro aminoácidos
na sua região C-terminal que são
responsáveis pela retenção da proteína
no RE.
Uma importante proteína residente no
RE é a proteína dissulfeto isomerase
(PDI), que catalisa a oxidação de
grupos sulfidrila (SH) livres nas
cisteínas para formar ligações
dissulfeto (S-S).
Outra proteína residente no RE é a
proteína chaperona BiP. Como outras
chaperonas, a BiP reconhece proteínas
enoveladas incorretamente, bem como
subunidades protéicas que ainda não
se agregaram aos seus complexos
oligoméricos finais. Para isso, ela
liga-se à sequência de aminoácidos
exposta, que estaria, de modo normal,
oculta no interior das cadeias
polipeptídicas corretamente
enoveladas ou agregadas.
➤ A maioria das proteínas sintetizadas
no RE rugoso é glicosilada pela adição
de um oligossacarídeo comum ligado
ao N!
Os oligossacarídeos às proteínas é
uma das principais funções
biossintéticas do RE. Cerca de metade
das proteínas solúveis e ligadas à
membrana que são processadas no RE
são glicoproteínas que sofrem
modificações nesse caminho. Muitas
proteínas no citosol e núcleo são
também glicosiladas, mas não com
oligossacarídeos, onde um único grupo
N-acetilglicosamina é adicionado a
uma serina ou treonina da proteína.
Assim, a glicolisação da proteína no RE
rugoso forma uma canídeo precursor é
pré-formado e é transferido em bloco
para proteínas. Esse oligossacarídeo é
transferido ao grupo NH2
da cadeia lateral de um aminoácido
asparagina na proteína, sendo, por
isso, considerado ligado ao N ou ligado
à asparagina.
Essa transferência é catalisada pela
oligossacaril transferase, uma enzima
ligada à membrana como seu sítio
exposto ao lúmen.
O oligossacarídeo precursor é
construído açúcar por açúcar no
lipídeo dolicol ligado à membrana e
então transferido para uma proteína.
Os açúcares são primeiro ativados no
citosol pela formação de um
intermediário açúcar-nucleotídeo (UDP
ou GDP), que, então, doa seu açúcar
(direta ou indiretamente) ao lipídeo em
uma sequência ordenada. Com isso, o
lipídeo é movido ao lado citosólico
para o lado do lúmen da membrana do
RE rugoso.
↳ Os oligossacarídeos ligados
ao N são de longe os mais
comuns encontrados em 90%
das glicoproteínas.
➤ Os oligossacarídeos são utilizados
como “rótulos” para marcar o estado de
enovelamento da proteína !
A glicosilação de proteínas no retículo
endoplasmático (RE) é uma
modificação comum, e algumas
proteínas requerem glicosilação para o
enovelamento adequado no RE. As
proteínas chaperonas, calnexina e
calreticulina, desempenham um papel
crucial nesse processo, ligando-se a
proteínas incompletamente enoveladas
que possuem oligossacarídeos ligados
ao N com uma única glicose terminal.
Elas impedem a agregação irreversível
dessas proteínas e promovem sua
associação com outras chaperonas do
RE, que se ligam a cisteínas ainda não
formadas em ligações dissulfeto.
A distinção entre proteínas enoveladas
e incompletamente enoveladas é
realizada pela glicosil transferase, uma
enzima do RE. Esta enzima continua
adicionando glicose apenas aos
oligossacarídeos associados a
proteínas não enoveladas. Isso faz com
que as proteínas incompletamente
enoveladas mantenham afinidade com
calnexina e calreticulina até que
alcancem seu estado de completo
enovelamento.
➤ As proteínas enoveladas
inadequadamente são exportadas do
RE e degradadas no citosol!
Por mais que haja o auxílio das
chaperonas, muitas moléculas
proteicas transportadas para o RE
falham na tentativa de alcançar seu
enovelamento adequado ou seu estado
oligomérico e elas são exportadas de
volta do RE para o citosol, onde são
degradadas em proteassomos.
A seleção de proteínas do RE para
degradação é um processo desafiador:
proteínas
mal enoveladas ou subunidades
proteicas não montadas devem ser
degradadas, mas intermediários de
dobramento de proteínas
recém-formadas não. Os
oligossacarídeos ligados ao N ajudam
a fazer essa distinção, o que serve
como cronômetro da medida de
quanto tempo uma proteína deve
permanecer no RE.
Além das lectinas no RE que
reconhecem os oligossacarídeos,
chaperonas e proteínas dissulfeto
isomerase se associam a proteínas que
devem ser degradadas. As chaperonas
impedem a agregação de proteínas
mal enoveladas, e as dissulfeto
isomerases quebram ligações
dissulfeto que podem ter sido
formadas incorretamente, e assim uma
cadeia polipeptídica linear pode ser
translocada de volta para o citosol.
➤ As proteínas mal enoveladas no RE
ativam uma resposta à proteína
desenvovelada!
Um acúmulo dessas proteínas no
citosol, por exemplo, desencadeia uma
resposta ao choque térmico que
estimula a transcrição de genes que
codificam chaperonas citosólicas que
auxiliam no reenovelamento das
proteínas.
De modo que o RE dispara uma
resposta à proteína desenovelada, o
que inclui um aumento na transcrição
de genes que codificam proteínas
envolvidas na retrotranslocação e
degradação de proteínas no citosol,
chaperonas do RE e muitas outras
proteínas que ajudam a aumentar a
capacidade de dobramento de
proteínas no RE.
Uma proteína-cinase transmembrana
no RE, chamada de IRE1, é ativada por
proteínas mal enoveladas, que induzem
a sua oligomerização e
autofosforilação.
A oligomerização e autofosforilação
de IRE1 ativa um domínio da
endorribonuclease na porção
citosólica da mesma molécula, que
cliva uma molécula de mRNA citosólica
específica em duas posições:
1. Íntrons;
2. Éxons.
Proteínas mal enoveladas também
ativam uma segunda cinase
transmembrana no RE, PERK, que inibe
um fator de início da tradução pela sua
fosforilação e redução da síntese de
novas proteínas na célula.
Por fim, o terceiro regulador
transcricional, ATF6, é inicialmente
sintetizado como
uma proteína transmembrana do RE.
Uma vez que está incorporada na
membrana do RE, ela não pode ativar a
transcrição de genes no núcleo.
Quando proteínas mal enoveladas
acumulam-se no RE, contudo, a
proteína ATF6 é transportada para o
aparelho de Golgi, onde encontra
proteases que clivam seus domínios
citosólicos, que podem agora migrar
para o núcleo e ajudar a ativar a
transcrição de genes que codificam
proteínas envolvidas na resposta à
proteína desenovelada.
➤ A maioria das bicamadas lipídicas é um grande complexo de Golgi
montada no RER: (plasmócitos, osteoblastos e células do
A membrana do RE é o local de síntese epidídimo) exibem uma área clara
de quase todas as principais classes circundada por ergastoplasma.
de lipídios da célula, incluindo
fosfolipídeos e colesterol necessários à
produção de novas membranas
celulares.
Cada etapa é catalisada por enzimas
na membrana do RE que têm seus
sítios ativos voltados para o citosol,
onde são encontrados todos os
metabólitos necessários.
Como a síntese de fosfolipídio ocorre
no folheto citosólico da bicamada
lipídica do RE, é necessário que exista
um mecanismo que transfira algumas
das moléculas de fosfolipídeos ➘ Fotografia de plasmócitos. Essas
recém-formados para o folheto do lado regiões coradas negativamente (setas)
do lúmen da bicamada. Em bicamadas representam o acúmulo de cisternas
lipídicas sintéticas, lipídeos não se membranosas que pertencem ao
movem da forma flip-flop. No RE, complexo de Golgi.
todavia, os fosfolipídeos equilibram-se As cisternas planas localizadas mais
através da membrana em minutos, o próximas do RER representam a face
que é quase cem mil vezes mais rápido em formação ou rede cis do complexo
do que o flip-flop (retorno) espontâneo. de Golgi (CGN : C = cis), as cisternas
Denominado embaralhador afastadas do RER representam a face
(scramblase) que, de maneira não de amadurecimento ou rede trans do
seletiva, equilibra fosfolipídeos entre os complexo de Golgi (TGN: T = trans). As
dois folhetos da bicamada lipídica. cisternas localizadas entre a TGN e a
Assim, os diferentes tipos de CGN são comumente designadas rede
fosfolipídeos parecem ser igualmente de Golgi medial.
distribuídos entre os dois folhetos da
membrana do RE.

COMPLEXO DE GOLGI
No microscópio eletrônico, aparece
como várias estruturas saculares/
cisternas delimitadas por membrana,
planas e empilhadas e extensões
tubulares inseridas em uma rede de
➘ A rede cis do complexo Golgi (CGN) é
microtúbulos, próximo ao centro
representada pelas vesículas
organizador de microtúbulos.
achatadas na superfície convexa
Pequenas vesículas envolvidas no
externa, enquanto as vesículas planas
transporte vesicular são observadas
na região convexa interna constituem a
em associação com as cisternas.
rede trans do complexo Golgi (TGN). A
O complexo de Golgi é ativo tanto em
partir da TGN, ocorre brotamento de
células que secretam proteínas por
várias vesículas (1). Essas vesículas são
exocitose quanto em células que
liberadas (2) e, por fim, transformam-se
sintetizam grandes quantidades de
em vesículas secretoras (3).
membrana e proteínas associadas à
As vesículas de transporte revestidas
membrana, como as células nervosas.
por COP-II transportam as proteínas
As células secretoras que apresentam
recém-sintetizadas do RER para a CGN.
Então, seguem o seu trajeto dentro das
vesículas de transporte de uma
cisterna para a seguinte.
À medida que passam através das
pilhas de Golgi, as proteínas e os
lipídios sofrem uma série de
modificações pós-tradução, que
envolvem a remodelagem dos
oligossacarídios de ligação N
previamente adicionados no RER.
Proteínas e lipídios sofrem glicosilação
por enzimas de processamento de
carboidratos que adicionam, removem
e modificam os componentes de
açúcares das cadeias de
oligossacarídios. A M-6-P é adicionada
às proteínas destinadas a seguir o seu
trajeto para endossomos maduros e
lisossomos.
A clivagem proteolítica - mecanismo
comum de ativação ou inativação de
enzimas envolvidas principalmente na
digestão e na coagulação sanguínea -
de certas proteínas também é iniciada
nas cisternas.
As proteínas saem do complexo de
Golgi a partir da TGN.
Essa rede e o arranjo tubulovesicular
associado atuam na seleção para o
transporte de vesículas que liberam
proteínas nos seguintes locais:
- Membrana plasmática apical:
muitas proteínas extracelulares
e de membrana são liberadas
nesse local. Muito
provavelmente utiliza vesículas
não revestidas por clatrina e na
maioria das células, possui
sinais de seleção específicos,
que orientam os processos de
seleção na TGN.
- Membrana plasmática
basolateral: as proteínas
direcionadas para o domínio
basolateral também têm um
sinal de seleção específico
ligado a elas pela TGN. Todas as
proteínas integrais de
membrana plasmática
destinadas aos domínios tanto
apical quanto basolateral são
inicialmente transportadas da
TGN para a membrana
plasmática basolateral.
Assim, ambas as proteínas sofrem
endocitose e são selecionadas em
compartimentos endossômicos jovens.
As proteínas basolaterais são
recicladas de volta à membrana
basolateral, enquanto as proteínas
apicais são transportadas através do
citoplasma para a membrana celular
apical por transcitose.
- Endossomos ou lisossomos
- Citoplasma apical
A seleção e o acondicionamento de
proteínas em vesículas de transporte
ocorrem na rede trans do complexo de
Golgi.
As proteínas que chegam à TGN são
distribuídas para diferentes
localizações dentro de vesículas de
transporte. O destino intercelular de
cada proteína depende dos sinais de
seleção incorporados à cadeia
polipeptídica da proteína. A seleção e a
adequação efetiva das proteínas na
TGN baseiam-se principalmente nos
sinais de seleção e nas propriedades
físicas.
- Sinais de seleção: representados
pelo arranjo linear das
moléculas de aminoácidos ou de
carboidratos associados, possui
a finalidade de direcionar a
proteína para dentro da vesícula
de transporte revestida.
- Propriedades físicas: são
importantes para o
 acondicionamento de
complexos proteicos
funcionalmente associados,
esses grupos de proteínas são
inicialmente distribuídos em
balsas lipídicas separadas, que
mais tarde são incorporadas
nas vesículas de transporte
destinadas a uma organela-alvo.
LISOSSOMOS
São organelas digestivas, ricas em
enzimas hidrolíticas, como proteases,
nucleases, glicosidases, lipases e
fosfolipases.
Representa um compartimento
digestivo que degrada macromoléculas
vindas das vias endocíticas, bem como
da própria célula, em um processo
conhecido como autofagia. Os
lisossomos são formados em uma série
de vias que convergem para os
endossomos maduros,
transformando-os em lisossomos.
Essas vias são responsáveis pela
liberação direcionada de enzimas
lisossômicas (são sintetizadas no RER e
selecionadas no complexo de Golgi,
com base na sua capacidade de
ligação aos receptores de M-6-P)
recém-sintetizadas e proteínas
lisossômicas estruturais de membrana
em endossomos maduros.
Contêm uma coleção de enzimas
hidrolíticas e são circundados por uma
membrana singular, que resiste à
hidrólise pelas suas próprias enzimas.
A membrana lisossômica é uma
estrutura fosfolipídica que contém
colesterol e ácido lisofosfatídico, um
lipídio peculiar que atua na restrição
das enzimas hidrolíticas dirigidas
contra a membrana.
As proteínas estruturais da membrana
lisossômica são classificadas, em sua
maioria, em proteínas de membrana
associadas a lisossomos (LAMPs),
glicoproteínas da membrana
lisossômica (LGPs) e proteínas integrais
da membrana lisossômica (LIMPs).
As moléculas de açúcar cobrem quase
toda a superfície luminal dessas
proteínas, protegendo-as, assim, da
digestão pelas enzimas hidrolíticas. Os
lisossomos e os endossomos maduros
contêm bombas de prótons (H+), que
transportam íons H+ para o lúmen
lisossômico, mantendo um pH baixo.
A membrana lisossômica também
contém proteínas de transporte, que
transportam os produtos finais da
digestão (aminoácidos, açúcares,
nucleotídeos) para o citoplasma, nos
quais são usados nos processos de
síntese da célula ou sofrem exocitose.
O tráfego intracelular que leva à
entrega de muitas enzimas
lisossômicas solúveis nos endossomos
maduros e lisossomos envolve o sinal
da M-6-P e seu receptor. Entretanto, as
que não possuem sinais da M-6-P,
devem ser direcionadas para os
lisossomos por um mecanismo
diferente.
O sinal de direcionamento para as
proteínas integrais de membrana é
representado por um domínio
C-terminal citoplasmático curto,
reconhecido por complexos da
proteína adaptina, e acondicionado
dentro de vesículas revestidas por
clatrina.
Essas proteínas alcançam o seu
destino por uma de duas vias:
- Via secretora constitutiva: as
LIMPs saem do complexo de
Golgi em vesículas revestidas e
são liberadas na superfície
celular. A partir daí, sofrem
endocitose e, por meio dos
compartimentos endossômicos
jovem e maduro, alcançam
finalmente os lisossomos.
- Via secretora das vesículas
revestidas derivadas do
complexo de Golgi: as LIMPs,
após seleção e
acondicionamento, saem do
complexo de Golgi em vesículas
revestidas por clatrina.
Essas vesículas de transporte seguem o
seu trajeto e sofrem fusão com
endossomos maduros em decorrência
da interação de componentes
endossômicos específicos das
proteínas de ancoragem v-SNARE e
t-SNARE.
A maior parte do material digerido
provém de processos de endocitose.
No entanto, a célula também utiliza os
lisossomos para digerir suas próprias
partes obsoletas, organelas não
funcionais e moléculas desnecessárias.
Existem três vias para a digestão:
- As partículas extracelulares
grandes (bactérias, restos
celulares e outros materiais
estranhos) sofrem fagocitose.
Um fagossomo, formado
quando o material é
internalizado no citoplasma,
recebe subsequentemente
enzimas hidrolíticas,
transformando-se em
endossomo maduro, que será
amadurecido no lisossomo.
- As partículas extracelulares
grandes, tais como bactérias,
restos celulares e outros
materiais estranhos, são
engolfadas no processo de
fagocitose. Um fagossomo,
formado quando o material é
internalizado no citoplasma,
recebe subsequentemente
enzimas hidrolíticas,
transformando-se em
endossomo maduro, que será
amadurecido no lisossomo
- As partículas extracelulares
pequenas (proteínas
extracelulares, proteínas da
membrana plasmática e
complexo ligante-receptor) são
internalizadas por pinocitose e
por endocitose mediada por
receptor.
Essas partículas seguem a via
endocítica por meio dos
compartimentos endossomais jovem e
maduro e, por fim, são degradadas nos
lisossomos.
- As partículas intracelulares
(organelas inteiras, proteínas
citoplasmáticas) são isoladas da
matriz citoplasmática por
membranas do retículo
endoplasmático, transportadas
para os lisossomos e
degradadas (autofagia).
A degradação hidrolítica do conteúdo
dos lisossomos produz um vacúolo
repleto de resíduos, corpo residual. Nos
neurônios, os corpos residuais são
denominados pigmentos da idade ou
grânulos de lipofucsina. Os corpos
residuais caracterizam o
envelhecimento celular. A ausência de
certas enzimas lisossômicas pode
causar acúmulo patológico de
substrato não digerido nos corpos
residuais. Isso pode levar a vários
distúrbios chamados de doenças de
armazenamento lisossômico.
PEROXISSOMOS
São organelas pequenas e esféricas(0,5
μm de diâmetro), limitadas por
membrana que possui enzimas
oxidativas (catalase e peroxidases).
Quase todas as enzimas oxidativas
produzem peróxido de hidrogênio
(H2O2) como produto da reação de
oxidação.
A catalase regula o conteúdo de H2O2
da célula ao degradá-lo, protegendo,
assim, a célula. Além disso, os
peroxissomos contêm D-aminoácido
oxidases, enzimas de betaoxidação e
numerosas outras enzimas.
As enzimas oxidativas são importantes
nas células hepáticas, hepatócitos,
pois realizam processos relacionados a
desintoxicação, como do álcool
ingerido, convertendo-o em
acetaldeído. E também promove a
betaoxidação dos ácidos graxos.
As proteínas contidas no lúmen e na
membrana do peroxissomo são
sintetizadas nos ribossomos
citoplasmáticos e importadas no
peroxissomo. É necessário que uma
proteína destinada aos peroxissomos
tenha um sinal de direcionamento
peroxissômico ligado à sua
extremidade carboxiterminal. O número
de peroxissomos contidos em uma
célula aumenta em resposta à dieta, ao
uso de fármacos e ao estímulo
hormonal. Na maioria dos animais, mas
não nos seres humanos, os
peroxissomos também contêm urato
oxidase (uricase), que frequentemente
aparece como inclusão cristaloide
(nucleoide) característica.
Vários distúrbios metabólicos humanos
são causados pela incapacidade de
importação de proteínas
peroxissômicas para dentro da
organela, por causa de um sinal de
direcionamento peroxissômico
defeituoso ou um defeito do receptor.
Na doença hereditária mais
comumente relacionada com
peroxissomos disfuncionais, a síndrome
de Zellweger, que resulta em morte
precoce, os peroxissomos perdem a sua
capacidade de funcionar, em virtude da
ausência das enzimas necessárias. Ela
é causada por uma mutação no gene
que codifica o receptor para o sinal de
direcionamento peroxissômico, que não
reconhece o sinal Ser-Lys-Leu na
extremidade carboxiterminal das
enzimas que atuam em peroxissomos.
Até o momento, os tratamentos para os
distúrbios peroxissômicos têm sido
insatisfatórios.
➤ EXPLICAÇÃO ALBERTS:
São envolvidos por uma única camada
de membrana e não possuem DNA ou
ribossomos, logo todas as suas
proteínas são codificadas no núcleo.
Eles obtêm suas proteínas por
importação seletiva do citosol, embora
algumas entrem pelo RE. Possuem um
núcleo cristalóide devido a alta
presença de catalase e urato oxidase
(enzimas oxidativas). Assim como as
mitocôndrias, os peroxissomos são os
principais sítios de ligação de oxigênio.
Possuem uma ou mais enzimas que
utilizam o oxigênio molecular para
remover os átomos de hidrogênio de
substratos orgânicos específicos (‘’R’’)
em uma reação oxidativa que produz
H2O2. RH2 + O2 → R + H2O2
A catalase utiliza o H2O2 gerado por
outras enzimas na organela para
oxidar uma variedade de outros
substratos (ácido fórmico, formaldeído
e álcool) pela reação “peroxidativa”:
H2O2 + R’ H2 → R’ +2 H2O
Esse tipo de reação oxidativa é
importante nas células do fígado e do
rim, nas quais os peroxissomos
destoxificam moléculas tóxicas que
entram na corrente sanguínea. Além
disso, quando um excesso de H2O2
acumula-se na célula, a catalase o
converte em
2 H2O2 → 2 H2O + O2
A principal função das reações
oxidativas realizadas nos peroxissomos
é a quebra de moléculas de ácido
graxo. O processo denominado
b-oxidação encurta as cadeias alquil
dos ácidos graxos em blocos de dois
átomos de carbono por vez,
convertendo assim os ácidos graxos
em acetil-CoA (acetil-coenzima A).
Os peroxissomos exportam acetil-CoA
ao citosol para utilizá-la em reações
biossintéticas.
Nas células de mamíferos, a b-oxidação
ocorre nas mitocôndrias e nos
peroxissomos. Possui, também, a
finalidade de catalisar as primeiras
reações na formação de
plasmalogênios, que são a classe mais
abundante de fosfolipídeos na mielina.
A deficiência de plasmalogênios causa
anomalias profundas na mielinização
dos axônios das células nervosas,
sendo essa uma das razões por que
muitos distúrbios peroxissômicos levam
a doenças neurológicas. Eles podem
conter diferentes conjuntos de enzimas
e também podem adaptar-se de forma
notável a mudanças de condições.
Uma sequência específica de três
aminoácidos (Ser-Lys-Leu) localizados
na região C-terminal de muitas
proteínas dos peroxissomos atua como
um sinal de importação.
Outras proteínas peroxissômicas
contêm uma sequência-sinal próxima à
região N-terminal. Se uma dessas
sequências está ligada a uma proteína
citosólica, a proteína é importada para
peroxissomos.
Os sinais de importação são primeiro
reconhecidos pelos receptores solúveis
de proteínas no citosol.
Várias proteínas distintas, chamadas
de peroxinas, participam no processo
de importação, que é movido por
hidrólise de ATP. Um complexo de pelo
menos seis diferentes peroxinas forma
uma proteína translocadora na
membrana do peroxissomo. Mesmo
proteínas oligoméricas não precisam
ser desdobradas para que sejam
importadas. Acredita-se que o poro
formado pelo transportador seja
dinâmico em suas dimensões,
adaptando seu tamanho às
moléculas-carga a serem
transportadas. Um receptor de
importação solúvel, a peroxina Pex5,
reconhece o sinal de importação
C-terminal peroxissômico. Ela
acompanha sua carga até o interior
dos peroxissomos e, após a liberação
da carga, retorna ao citosol. Após a
entrega de sua carga para o lúmen do
peroxissomo, Pex5 sofre ubiquitinação.
Essa modificação é necessária para
liberar Pex5 no citosol novamente, onde
a ubiquitina é removida.
Uma ATPase composta de Pex1 e Pex6
aproveita a energia da hidrólise do ATP
para ajudar na liberação de Pex5 dos
peroxissomos. Há muito se discute se
novos peroxissomos originam-se de
outros preexistentes por crescimento e
fissão da organela ou derivam-se como
um compartimento especializado do
RE.
➘ Um modelo explica como os
peroxissomos proliferam e como um
novo peroxissomo se forma. Vesículas
precursoras peroxissômicas brotam do
RE. Ao menos duas proteínas de
membrana peroxissômicas, Pex3 e
Pex15, seguem essa via. A maquinaria
que dirige a reação de brotamento e
que seleciona apenas proteínas
peroxissômicas para o empacotamento
nessas vesículas depende de Pex19 e
outras proteínas citosólicas ainda
desconhecidas.
Vesículas precursoras de
peroxissômicas podem então
fusionar-se com outras ou com
peroxissômicas preexistentes.
Muitas proteínas das membranas dos
peroxissomos são feitas no citosol e
inseridas na membrana de
peroxissomos preexistentes, enquanto
outras são primeiro integradas na
membrana do RE, onde são
empacotadas em vesículas precursoras
peroxissômicas especializadas.
Novas vesículas precursoras podem
então se fundir umas com as outras e
começar a importação de proteínas
peroxissômicas adicionais, usando sua
própria maquinaria de importação de
proteínas para tornarem-se
peroxissomos maduros, os quais
podem sofrer ciclos de crescimento e
fissão.
Mitocôndria :
Para manter seu alto grau de
organização em um universo que está
constantemente se dirigindo rumo ao
caos, as células apresentam uma
necessidade contínua de um
suprimento abundante de ATP. Nas
células eucarióticas, a maior parte do
ATP que fornece energia para os
processos vitais é produzida por
organelas conversoras de energia,
estruturas especializadas e delimitadas
por membrana. Existem dois tipos
distintos. As mitocôndrias, que ocorrem
em quase todas as células de animais,
plantas e fungos, “queimam” moléculas
do alimento para produzir ATP pela
fosforilação oxidativa.
Etapa 1: os elétrons de alta
energia (derivados da oxidação de
moléculas do alimento, de pigmentos
excitados pela luz solar ou de outras
fontes descritas adiante) são
transferidos ao longo de uma série de
complexos proteicos transportadores
de elétrons que formam uma cadeia
transportadora de elétrons embebida
em uma membrana. Cada elétron
transferido libera uma pequena
quantidade de energia que é usada
para bombear prótons (H+) e desse
modo gerar um grande gradiente
eletroquímico através da membrana.
Esse gradiente eletroquímico fornece
uma forma de armazenar energia e
pode ser aproveitado para realizar
trabalho útil quando íons fluem de
volta através da membrana.
Etapa 2: os prótons fluem de
volta a favor do seu gradiente
eletroquímico por meio de uma
elaborada máquina proteína de
membrana denominada ATP-sintase,
que catalisa a produção de ATP a
partir de ADP e fosfato inorgânico (Pi).
Essa enzima
ubíqua funciona como uma turbina na
membrana que, impulsionada por
prótons, sintetiza ATP . Desse modo, a
energia derivada do alimento ou da
energia solar na etapa 1 é convertida
em energia química de uma ligação de
um fosfato no ATP.
Os elétrons se movem através de
complexos
proteicos em
sistemas
biológicos por
meio de íons
metálicos
firmemente
ligados ou por
meio de outros
carreadores
que capturam e
liberam
elétrons
facilmente, ou
ainda por
intermédio de
pequenas
moléculas
especiais que
recolhem
elétrons em um
local e os entregam em outro. Para as
mitocôndrias, o primeiro desses
carreadores de elétrons é o NAD+.
O NADH, para o NAD+ tornar-se NADH
precisa de uma molécula hidrossolúvel
que captura dois elétrons e um H+,
transfere esses elétrons de locais onde
as moléculas do alimento são
degradadas para a membrana
mitocondrial interna. Lá, os elétrons do
NADH rico em energia são transferidos
de um complexo proteico de membrana
para o seguinte, sendo transferido, em
cada passo, para um composto com
um nível energético mais baixo, até
alcançar um complexo final no qual ele
se combina com oxigênio molecular
(O2) para produzir água.
Em conjunto, esses complexos geram a
força próton-motriz aproveitada pela
ATP-sintase para produzir ATP que
serve como moeda de energia universal
na célula.
As mitocôndrias ocupam até 20% do
volume citoplasmático de uma célula
eucariótica. Ainda que sejam muitas
vezes representadas como corpos
pequenos semelhantes a bactérias,
com um diâmetro de 0,5 a 1 m, de fato
elas são extremamente dinâmicas e
plásticas, movendo-se pela célula,
mudando constantemente de forma,
dividindo-se e fusionando-se. Porém, as
mitocôndrias também podem
permanecer fixas em locais de alta
demanda energética.
As mitocôndrias também interagem
com outros sistemas de membranas na
célula, sobretudo com o retículo
endoplasmático.
Sem elas, as células dos animais
modernos teriam de produzir todo o
seu ATP por meio da glicólise
anaeróbica. Quando a glicose é
convertida em piruvato pela glicólise,
apenas uma pequena fração de toda a
energia livre potencialmente disponível
é liberada. Nas mitocôndrias, o
metabolismo de açúcares é completo: o
piruvato é importado para dentro da
mitocôndria e em última instância
oxidado pelo O2
em CO2 e H2O, o que possibilita a poros aquáticos através da membrana.
produção de 15 vezes mais ATP do que
o produzido apenas pela glicólise.

Como consequência, o espaço

➥ A mitocôndria tem uma membrana
intermembranas entre a membrana
externa e uma membrana interna:
interna e externa tem o mesmo pH e
composição iônica do citoplasma, e
Assim como as bactérias a partir das não existe um gradiente eletroquímico
quais elas se originaram, as através da membrana externa.
mitocôndrias possuem uma membrana Se mitocôndrias purificadas são
externa e outra interna. As duas suavemente rompidas e então
membranas possuem funções e fracionadas, a composição bioquímica
propriedades distintas, e delineiam das membranas e compartimentos
compartimentos separados dentro da mitocondriais pode ser determinada.
organela. A membrana interna, que ➥ As cristas da membrana interna
delimita o compartimento da matriz contém a maquinaria para o
mitocondrial interna, é altamente transporte de elétrons e a síntese de
enovelada para formar invaginações ATP:
conhecidas como cristas, que contêm
nas suas membranas as proteínas da
Diferentemente da membrana
cadeia transportadora de elétrons.
mitocondrial externa, a membrana
Onde a membrana interna dispõe-se
mitocondrial interna é uma barreira
em paralelo com a membrana externa,
para a difusão de íons e moléculas
entre as cristas, ela é denominada
pequenas, de modo similar à
membrana de limite interno. O espaço
membrana interna bacteriana.
estreito (20 a 30 nm) entre a membrana
Entretanto, íons selecionados, em
de limite interno e a membrana externa
particular prótons e íons fosfato, assim
é conhecido como espaço
como metabólitos essenciais como ATP
intermembranas. As cristas são discos
e ADP, podem passar através dela por
ou túbulos de membrana de 20 nm de
intermédio de proteínas
largura que se projetam
transportadoras especiais.
profundamente na matriz e delimitam o
A membrana mitocondrial interna é
espaço da crista. A membrana da
altamente diferenciada em regiões
crista é contínua com a membrana de
funcionais distintas com diferentes
limite interno, e onde suas membranas
composições proteicas.Nela, supõe-se
se unem, formam-se tubos ou fendas,
que a região de limite de membrana
conhecidos como junções da crista.
interna contenha a maquinaria para
Assim como a membrana externa
importar proteínas, novas inserções de
bacteriana, a membrana mitocondrial
membrana e a montagem dos
externa é livremente permeável a íons e
complexos da cadeia respiratória. As
a moléculas pequenas de até 5 mil
membranas das cristas, que são
daltons. Isso ocorre porque ela contém
contínuas com a membrana de limite
muitas moléculas de porinas, uma
interna, contêm a enzima ATP-sintase
classe especial de proteínas de
que produz a maior parte do ATP
membrana do tipo barril b que cria
celular; elas também contêm os
grandes complexos proteicos da
cadeia respiratória.
Nas junções das cristas,complexos
proteicos especiais fornecem uma
barreira de difusão que se-grega as
proteínas de membrana nas duas
regiões da membrana interna; esses
complexos supostamente ancoram as
cristas à membrana externa,
mantendo, desse modo, a topologia
altamente enovelada da membrana
interna.
➥ O ciclo do ácido cítrico na matriz
produz NADH:

A matriz é a principal parte operante

da mitocôndria. As mitocôndrias
podem utilizar tanto o piruvato quanto
os ácidos graxos como combustível. O
piruvato é derivado da glicose e de
outros açúcares, enquanto os ácidos
graxos são derivados das gorduras.
Ambas as moléculas de combustível
são transportadas através da
membrana mitocondrial interna por
proteínas transportadoras
especializadas, e elas podem ser
convertidas no intermediário
metabólico crucial acetil-CoA por
enzimas localizadas na matriz
mitocondrial.
A oxidação desses átomos de carbono
da acetil-CoA produz CO2, que se
difunde para fora da mitocôndria para
ser liberado no ambiente como resíduo.
E, mais importante, o ciclo do ácido
cítrico captura uma grande parte da
energia de ligação liberada por essa
oxidação na forma de elétrons
carreados pelo NADH. Esse NADH
transfere seus elétrons da matriz para
a cadeia transportadora de elétrons na
membrana mitocondrial interna.
A matriz contém o sistema genético da
mitocôndria, incluindo o DNA
mitocondrial e os ribossomos. O DNA
mitocondrial está organizado em
corpos compactos – os nucleotídeos –
por proteínas de armação especiais
que também funcionam como
reguladores transcricionais.
➥ As mitocôndrias têm muitos papéis
essenciais no metabolismo celular:
As mitocôndrias são críticas para o
tamponamento do potencial redox no
citosol. As células necessitam de
suprimentos constantes do aceptor de
elétrons NAD+ para as reações centrais
da glicólise que convertem
gliceraldeído-3-fosfato em
1,3-bifosfoglice-rato. Esse NAD+
é convertido em NADH no processo, e o
NAD+ precisa ser regenerado pela
transferência dos elétrons de alta
energia do NADH em outro local. Os
elétrons do NADH por fim serão
utilizados para dirigir a fosforilação
oxidativa dentro da mitocôndria.
As mitocôndrias são importantes como
tampões de cálcio, capturando cálcio
do RE e retículo sarcoplasmático em
junções de membrana especiais. Os
níveis de cálcio celulares controlam a
contração muscular, e alterações nesse
processo estão implicadas na
neurodegeneração e apoptose.
Claramente, as células e organismos
dependem das mitocôndrias de muitas
maneiras diferentes.
➥ Um processo quimiosmótico acopla
energia de oxidação à produção de
ATP :
Somente a etapa final do metabolismo
oxidativo consome oxigênio molecular
(O2) diretamente.Quase toda a energia
disponível a partir de carboidratos,
gorduras e outros alimentos
metabolizados nas etapas iniciais é
armazenada na forma de compostos
ricos em energia que fornecem elétrons
para a cadeia respiratória na
membrana mitocondrial interna. Esses
elétrons, a maioria dos quais
carregados pelo NADH, por fim
combinam-se como O2
no final da cadeia respiratória para
formar água. A energia liberada
durante a série complexa de
transferências de elétrons do NADH
para o O2 é aproveitada na membrana
interna para gerar um gradiente
eletroquímico que impulsiona a
conversão de ADP + Pi a ATP.
Por essa razão, o termo fosforilação
oxidativa é usado para descrever esta
série final de reações. Na cadeia
respiratória, a mesma reação
energeticamente favorável H2 n H2O é
dividida em pequenos passos. Esse
processo passo a passo possibilita à
célula armazenar quase metade da
energia total que é liberada em uma
forma útil. A cada passo, os elétrons,
que podemos considerar como tendo
sido removidos de uma molécula de
hidrogênio para produzir dois prótons,
passam por uma série de carreadores
de elétrons na membrana mitocondrial
interna.
Ao final da cadeia transportadora de
elétrons, os elétrons e prótons
recombinam-se com oxigênio molecular
para formar água.
➥ A energia derivada da oxidação é
armazenada como um gradiente
eletroquímico:
Nas mitocôndrias, o processo de
transporte de elétrons inicia-se quando
dois elétrons e um próton são
removidos do NADH. Os elétrons
iniciam em um potencial redox
altamente negativo– ou seja, em um
alto nível de energia – que decai de
modo gradual à medida que eles
passam ao longo da cadeia. As
proteínas envolvidas são agrupadas
em três grandes complexos de enzimas
respiratórias, cada um composto por
subunidades protéicas que se
acomodam na membrana mitocondrial
interna.
O resultado líquido é o bombeamento
de H+ para fora da matriz através da
membrana interna, impulsionado pelo
fluxo de elétrons energeticamente
favorável. Esse movimento
transmembrana de H+ tem duas
consequências principais:
1. Gera um gradiente de pH
através da membrana
mitocondrial interna, com um
pH maior na matriz (próximo a 8)
e um pH mais baixo no espaço
intermembranas. Uma vez que
íons e pequenas moléculas
equilibram-se livremente através
da membrana mitocondrial
externa, o pH no espaço
intermembranas é o mesmo do
citosol (em geral em torno de
7,4).
2. Gera um gradiente de
voltagem através da membrana
mitocondrial interna, criando
um potencial de membrana com
o lado da matriz negativo e o
lado do espaço das cristas
positivo.

Tipos de respirações celulares:
➢ Fermentação:
A fermentação é outra via anaeróbica
para a quebra da glicose, uma via que
é realizada por muitos tipos de
organismos e células. Na fermentação,
a única via de extração de energia é a
glicólise, com uma ou duas reações
extras acrescentadas ao final;
A fermentação e a respiração celular
começam da mesma maneira, com a
glicólise. No entanto, na fermentação, o
piruvato produzido na glicólise não
contínua através da oxidação e ciclo
do ácido cítrico, e a cadeia
transportadora de elétrons não
acontece. Já que a cadeia
transportadora de elétrons não está
funcional, o NADH produzido na
glicólise não pode entregar seus
elétrons para voltar a formar NAD+;
O propósito das reações extras na
fermentação é, portanto, regenerar o
carreador de elétrons NAD+ a partir da
NADH produzido na glicólise. As
reações extras conseguem isso
permitindo que NADH entregue seus
elétrons a uma molécula orgânica (tal
como o piruvato, o produto final da
glicólise). Isso permite que a glicólise
permaneça funcionando pela garantia
de um suprimento constante de NAD+;
- FERMENTAÇÃO DE ÁCIDO
LÁTICO:
Na fermentação do ácido lático, o
NADH transfere seus elétrons
diretamente ao piruvato, gerando o
lactato como subproduto. O lactato,
que é apenas a forma
desprotonada do ácido lático, dá o
nome ao processo. As bactérias que
produzem o iogurte realizam
fermentação do ácido lático, assim
como as hemácias em nossos
organismos, as quais não tem
mitocôndrias, portanto não podem
realizar a respiração celular.
➢ Glicólise:
A glicólise é a primeira fase,
fundamental para os processos de
respiração celular e fermentação.
Através dela, a molécula de glicose (que
possui 6 carbonos) é oxidada, gerando
2 moléculas de ATP e duas moléculas
de piruvato (cada uma com 3
carbonos). Se estivermos falando de
respiração celular, esse piruvato é
convertido em Acetil-CoA e entra no
Ciclo de Krebs. Se estivermos falando
em fermentação, esse piruvato será
convertido em algum subproduto inútil
à célula, mas útil para regenerar as
coenzimas responsáveis pelo
transporte de elétrons nesses
processos de geração de energia (NAD
e FAD).
É o primeiro passo da “regulação da
glicose”. Catalisada pela enzima
Hexocinase (se lê quinase), tem
característica de reação irreversível. É
gasta uma molécula de ATP,
adicionando um grupo fosfato ao
carbono 6 da Glicose, transformando-a
em Glicose 6-fosfato. Pode parecer
contraproducente, para um processo
que visa gerar energia, começar
gastando um ATP, mas esta ligação de
um fosfato ao carbono 6' da glicose
tem intuito de impedir que a glicose
volte ao meio extracelular, pois o
grupamento fosfato tem é altamente
carregado negativamente, logo, não
tem afinidade pela parte apolar da
bicamada lipídica que compõe a
membrana citoplasmática. Vale
observar que toda vez que uma enzima
tiver a terminação "cinase" ou "kinase",
se trata de uma transportadora de
fosfatos.
A Frutose é um monossacarídeo
isômero da glicose (C6H12O6), isto é,
possui a mesma fórmula molecular
(mesmo conjunto de átomos) e
diferentes fórmulas estruturais
(organização desses átomos na
estrutura tridimensional). A ação da
enzima Fosfoglicose Isomerase se
transformará uma em outra, pois a
Frutose é uma molécula mais simétrica
que a Glicose. A Glicose (6C) é repartida
em duas moléculas de piruvato (3C,
cada), então, como a frutose é mais
simétrica, é mais facilmente repartida
ao meio posteriormente (gerando dois
compostos com três carbonos cada).
Como o nome do produto já adianta, é
adicionado um segundo grupo fosfato
à estrutura, gastando uma segunda
molécula de ATP de “investimento”.
Dessa vez, o fosfato é adicionado ao
carbono 1', gerando uma Frutose
1,6-fosfato. Este processo é mediado
pela enzima Fosfofrutocinase e tem o
intuito de tornar a molécula ainda mais
simétrica, pois agora contém fosfatos
nos dois lados (nos carbonos seis e
um). Agora ela está pronta para ser
partida ao meio, o que acontecerá na
próxima reação.
4ª REAÇÃO - Frutose-1,6-bifosfato >
Di-hidroxiacetona fosfato +
Gliceraldeído 3-fosfato
A molécula de Frutose 1,6-bifosfato
seria partida ao meio (o que justificou
os esforços para torná-la mais
simétrica). As duas moléculas
resultantes serão Di-hidroxiacetona
fosfato e Gliceraldeído 3-fosfato, ambas
com três carbonos. A enzima que
catalisa esta reação é a Aldolase. É
uma questão apenas conformacional
que as diferencia, já que são isômeras
(ambas têm fórmula química C3H5O3P).
Quem seguirá o caminho na glicólise
será o Gliceraldeído 3-fosfato, então a
enzima Triose Fosfato Isomerase acaba
por transformar a
5ª Di-hidroxiacetona fosfato em
Gliceraldeído 3-fosfato (5ª reação);
por isso, a partir desta etapa, os
produtos serão em dobro, não em “um”
como vinha sendo antes.
6ª REAÇÃO - Gliceraldeído 3-fosfato>
1,3-bifosfoglicerato
Quando o fosfato provém de um ATP,
ele é extraído de uma molécula
extremamente energética; energia essa
que é utilizada para realizar a ligação.
No caso do fosfato inorgânico (Pi), que
é como um fósforo solto, não ligado à
nenhuma estrutura, não há essa
disponibilidade de energia, por isso a
enzima Gliceraldeído 3-fosfato
desidrogenase realiza a adição do
fosfato inorgânico ao gliceraldeído
3-fosfato em dois passos: no primeiro o
hidrogênio da função aldeído (lá em
cima, na estrutura) é transferido para
um NAD+, transformando-o em NADH.
No lugar do Hidrogênio entra uma
hidroxila (OH-) extraída de uma
molécula de água. O Hidrogênio que
sobra da água termina de compor o
produto NADH + H+. Observação: Como
está tudo duplicado, são produzidas
duas moléculas de NADH + H+! Na
segunda etapa ocorre a fosforilação
do gliceraldeído. A adição da hidroxila
no lugar do hidrogênio é uma reação
de oxidação favorável, pois partiu de
um ponto energético maior para um
menor. A adição do fosfato inorgânico
é uma reação de fosforilação
desfavorável, pois sai de um nível
energético menor para um maior.
Sozinha, a adição de fosfato
inorgânico seria impossível. Ela só é
passível de acontecer quando
combinada com a oxidação favorável
do gliceralderído 3P, pois a energia
para a ligação do Pi é obtida através
da oxidação. Isso justifica o gasto de
uma molécula de água nesse
intercurso. No final, obtemos duas
moléculas de 1,3 bifosfoglicerato a
partir de duas moléculas de
gliceraldeído 3-fosfato.
7ª REAÇÃO - 1,3 Bifosfoglicerato >
3-fosfoglicerato
Nesta etapa, há reposição dos dois ATP
gastos na fase de investimento (já que
a partir da 4ª reação, todos os
produtos estão duplicados). O
grupamento fosfato que acabou de ser
agregado à molécula de
1,3-bifosfoglicerato será desprendido
para compor (junto com dois ADP) duas
novas moléculas de ATP. A enzima que
media esta reação é a fosfoglicerato
cinase. A 6ª e a 7ª reação são
dedicadas a repor os ATPs. Como o
Fosfato inorgânico (Pi) é pobre em
energia, se utiliza da energia da
oxidação para formar uma molécula
onde depois será removido para
integrar o ADP, resultando em duas
moléculas de ATP, devolvendo o que foi
gasto na preparação da frutose para
dividir-se corretamente e da glicose
para que não evadisse do espaço
citosol.
8ª REAÇÃO - 3-fosfoglicerato >
2-fosfoglicerato
Utiliza-se o grupamento fosfato
restante nos dois 3-fosfogliceratos
para produzir mais 2 ATP. A enzima
Fosfoglicerato mutase vai trocar o
grupamento de carbono, passando do
Carbono 3 para o Carbono 2. Isso
ajuda pois deixa o grupo mais próximo
dos oxigênios lá de cima, que assim
como o fosfato, são altamente
eletronegativos. Isso cria uma repulsão,
colocando a situação do fosfato mais
favorável para a saída da estrutura.
9ª REAÇÃO - 2-fosfoglicerato >
Fosfoenolpiruvato
Visa desidratar a molécula de
2-fosfoglicerato, provocando uma
redistribuição dos elétrons na
molécula, tornando a presença do
fosfato na molécula muito desfavorável.
O Carbono 2 que antes possuía dois
hidrogênios, agora não possui nenhum,
tornando-a molécula instável.
10ª REAÇÃO - Fosfoenolpiruvato >
Piruvato
Com a saída do grupo fosfato, há
formação de mais duas moléculas de
ATP e o produto final da Glicólise
aparece: DUAS MOLÉCULAS DE
PIRUVATO. No final, o saldo total da
oxidação total de uma molécula de
glicose foi de 2 Piruvatos, 2 ATP e 2
NADH. Pode parecer pouco o saldo de
energia, mas é que na verdade, o
objetivo da glicólise é fornecer os
precursores para o Ciclo de Krebs
(piruvato), onde será gerado a maior
parte dos NADH, NADPH e FADH2.
Esses sim, são a chave para geração de
energia, nos processos aeróbicos que
vêm depois da glicólise: Ciclo de Krebs
e Cadeia Respiratória. Em resumo,
podemos dividir a glicólise em três
momentos:
- As reações 1, 2 e 3 são chamadas
de FASE DE INVESTIMENTO, pois
são gastas duas moléculas de
ATP para regular e modelar a
molécula de glicose.
- As reações 4 e 5 compõem a
FASE DE CLIVAGEM, pois, a
partir da bipartição da Frutose
1,6-Bifosfato são geradas duas
moléculas de três carbonos
cada.
- As reações a partir da 6
compõem a FASE DE GERAÇÃO
DE ENERGIA, pois são geradas 4
moléculas de ATP, resultando em
um saldo positivo de 2 ATP
➢ Ciclo de krebs:
➔ FORMAÇÃO DE ACETIL-COA:
Antes da glicose e outros açúcares, ác.
graxos e a maioria de aminoácidos,
entrarem no ciclo do ácido cítrico, os
esqueletos de carbono dos açúcares e
dos ácidos graxos são convertidos no
grupo acetila da acetil-CoA, a forma na
qual a maioria dos combustíveis entra
no ciclo. Também há o piruvato gerado
no citosol pela glicólise é um ponto
central no metabolismo dos
carboidratos, das gorduras e das
proteínas. O piruvato que entra na
mitocôndria, após conversão em
acetil-CoA, pode ser oxidado pelo ciclo
do ácido cítrico para gerar energia, ou
pode ser utilizado como precursor
para a síntese de ácidos graxos e
esteróis. Há um terceiro destino
possível para o piruvato: como
precursor para a síntese de
aminoácidos, assim, mesmo que haja
oxigênio disponível para essa via; em
vez disso, o piruvato é simplesmente
reduzido a lactato no citosol,
regenerando o NAD1 para possibilitar a
continuada produção de ATP pela
glicólise. Em células normais (não
tumorais), o piruvato é oxidado na
matriz mitocondrial a acetil-CoA e CO2
pelo complexo da
piruvato-desidrogenase (PDH). Esse
complexo de enzimas altamente
organizado – várias cópias de cada
uma das três enzimas – está localizado
na mitocôndria de todas as células
eucarióticas.
Catabolismo de proteínas, gorduras e
carboidratos durante os três estágios
da respiração celular. Estágio 1: a
oxidação de ácidos graxos, glicose e
alguns aminoácidos gera acetil-CoA.
Estágio 2: a oxidação dos grupos
acetila no ciclo do ácido cítrico inclui
quatro etapas, nas quais os elétrons
são removidos. Estágio 3: os elétrons
carregados por NADH e FADH2
convergem para uma cadeia de
transporte H2O. Estes transportadores
de elétrons mitocondrial – a cadeia
respiratória –, reduzindo, no final, O2
fluxo de elétrons impele a produção de
ATP.
Por fim, o complexo da PDH é o
protótipo para dois outros importantes
complexos
enzimáticos:α-cetoglutarato-desidroge
nase, do ciclo do ácido cítrico, e
desidrogenase dos α-cetoácidos de
cadeia ramificada, das vias de
oxidação de alguns aminoácidos.
➔ O piruvato é oxidado a
acetil-CoA e CO2:
A reação geral catalisada pelo
complexo da piruvato-desidrogenase é
uma descarboxilação oxidativa, que é
basicamente grupo carboxila é
removido do piruvato na forma de uma
molécula de CO2
e os dois carbonos remanescentes são
convertidos no grupo acetila da
acetil-CoA.
O NADH formado nessa reação doa um
íon hidreto para a cadeia respiratória,
que transferirá os dois elétrons ao
oxigênio a um aceptor de elétrons
alternativo. A transferência de elétrons
do NADH ao oxigênio gera, ao final, 2,5
moléculas de ATP por par de elétrons.
➔ O complexo da
piruvato-desidrogenase requer
cinco coenzimas:
A desidrogenação e descarboxilação
do piruvato levando ao grupo acetila
da acetil-CoA requer a ação sequencial
de três enzimas diferentes e cinco
coenzimas ou grupos prostéticos
diferentes – pirofosfato de tiamina (TPP),
dinucleotídeo de flavina-adenina (FAD),
coenzima A (CoA, CoA-SH,¬SH),
dinucleotídeo de nicotinamida-adenina
(NAD) e lipoato.
Quatro vitaminas diferentes essenciais
à nutrição humana são componentes
vitais desse sistema: tiamina (no TPP),
riboflavina (no FAD), niacina (no NAD1) e
pantotenato (na CoA).
Reação geral catalisada pelo complexo
da piruvato-desidrogenase. As cinco
coenzimas participantes dessa reação
e as três enzimas que formam o
complexo são discutidas no texto.
As funções de FAD e NAD como
transportadores de elétrons e
verificou-se que o TPP era a coenzima
da piruvato-descarboxilase.
A coenzima A tem um grupo tiol reativo
(¬SH) que é crucial para a função da
CoA como transportador de acilas em
diferentes reações metabólicas. O
grupo acila unido à coenzima A pode,
portanto, ser considerado “ativado”
para transferência.
O lipoato, tem dois grupos tiol que
podem ser reversivelmente oxidados,
produzindo uma ligação dissulfeto
(¬S¬S¬). O lipoato atua como
transportador de elétrons (hidrogênio)
e como transportador de acilas, como
será visto.
Coenzima A (CoA). Um grupo hidroxila
do ácido pantotênico está unido a uma
molécula de ADP modificada por uma
ligação fosfo-éster, e seu grupo
carboxila está ligado à
β-mercaptoetilamina por uma ligação
amida. O grupo hidroxila na posição 3′
da molécula de ADP tem um grupo
fosfato que não está presente no ADP
livre. O grupo ¬SH da molécula de
mercaptoetilamina forma um tioéster
com o acetato para formar a
acetil-coenzima A (acetil-CoA) (à
esquerda, embaixo).
➔ O complexo da
piruvato-desidrogenase consiste
em três enzimas distintas:
O complexo da PDH contém três
enzimas – piruvato-desidrogenase (E1) e
di-hidrolipoil-desidrogenase (E2),
di-hidrolipoil-transacetilase(E3).
O complexo da PDH isolado de
mamíferos apresenta um diâmetro de
cerca de 50 nm – mais de cinco vezes o
tamanho de um ribossomo inteiro e
grande o suficiente para ser visto por
microscopia eletrônica. O complexo
tem dois e, em E. coli, três . Os domínios
de E2 são separados por conectores,
sequências de 20 a 30 resíduos de
aminoácidos, ricos em Ala e Pro e
intercalados com α-cetoglutarato no
ciclo do ácido cítrico e a oxidação dos
α-cetoácidos derivados da
degradação dos aminoácidos de
cadeia ramificada
valina, isoleucina e leucina.
Ácido
lipóico
(lipoato)
em ligação
amida com
um resíduo
de Lys. A
porção
lipoil-lisina
é o grupo
prostético
da
di-hidrolipo Transacetilase. O grupo
lipoila ocorre na
forma oxidada (dissulfeto) e reduzida
(ditiol) e atua como transportador de
hidrogênio e grupo acetila (ou outro
grupo acila).
O complexo da piruvato-desidrogenase
é responsável por conduzir uma série
de cinco reações consecutivas para
descarboxilar (remover o grupo CO2) e
desidrogenar (remover elétrons) o
piruvato, uma molécula importante no
metabolismo. Vamos detalhar essas
etapas:
1. Primeira Etapa: Nesta etapa, o
complexo realiza uma reação
que é muito semelhante àquela
catalisada pela enzima
piruvato-descarboxilase. O C-1
do piruvato é liberado na forma
de CO2. O C-2, que estava
originalmente no estado de
oxidação de um aldeído, se liga
ao grupo chamado TPP (tiamina
pirofosfato) e forma um grupo
 hidroxietila. Esta primeira etapa
é a mais lenta de todas e,
portanto, limita a velocidade da
reação global. Também é o
ponto em que o complexo da
PDH confirma sua especificidade
em relação ao piruvato.
2. Segunda Etapa: Os resíduos
carregados devido à primeira
etapa, chamados de conectores,
tendem a se estender e manter
os três domínios separados. No
sítio ativo de E1 (uma das partes
do complexo), a TPP ainda está
ligada, enquanto no sítio ativo
de E3-E2-E3, existe uma
molécula de FADH (flavina
adenina dinucleotídeo) ligada.
Duas proteínas reguladoras,
uma proteína-cinase e uma
fosfoproteína-fosfatase, também
estão envolvidas no processo.
novo ciclo de oxidação. Os
elétrons removidos do grupo
hidroxietila derivado do piruvato
são transferidos ao NAD+
através do FAD.
Todas essas etapas são essenciais
para o mecanismo do complexo da
piruvato-desidrogenase, e a
flexibilidade dos braços de lipoil-lisina
de E2 é crucial para receber e
transferir os elétrons e o grupo acetila
entre as várias partes do complexo.
Todas as enzimas e coenzimas
envolvidas estão organizadas de
maneira que os intermediários possam
reagir rapidamente sem se afastarem
da superfície do complexo enzimático.
O resultado é uma sequência de cinco
reações altamente coordenadas e
eficientes, representando um exemplo
de canalização do substrato.

3. Terceira Etapa: O grupo

hidroxietila, que surgiu na
primeira etapa, é oxidado a um
ácido carboxílico, que é o
acetato. Durante essa oxidação,
os dois elétrons removidos são
usados para reduzir a ligação
¬S¬S¬ de um grupo lipoila
Descarboxilação oxidativa do piruvato
presente em E2 a dois grupos
a acetil-CoA pelo complexo da PDH. O
tiol (¬SH). A acetila produzida
destino da molécula de piruvato está
nessa etapa é primeiro
ressaltado em vermelho. Na etapa 1, o
esterificada a um dos grupos
piruvato reage com o pirofosfato de
¬SH do lipoila e depois
tiamina (TPP) ligado à
transesterificada à CoA
piruvato-desidrogenase (E1), sendo
(Coenzima A) para formar o
descarboxilado ao derivado
acetil-CoA. Essa etapa é crucial,
hidroxietila. A piruvato-desidrogenase
pois a energia liberada pela
também processa a etapa 2, a
oxidação é usada para criar um
transferência de dois elétrons e do
tioéster de acetato altamente
grupo acetila a partir do TPP para a
energético.
forma oxidada do grupo lipoil-lisina do
centro do complexo,
4. Etapa Quatro e Cinco: As
di-hidrolipoil-transacetilase (E2 A etapa
reações restantes, catalisadas
3 é uma transesterificação na qual o
por E3, ocorrem nas etapas
grupo ¬SH da CoA substitui o grupo
quatro e cinco. Elas envolvem a
¬SH de E2 duzida (ditiol) do grupo
transferência de elétrons
lipoil. Na etapa 4, a
necessária para regenerar a
di-hidrolipoil-desidrogenase (E3)
forma oxidada (dissulfeto) do
reduzidos de E2 ao grupo prostético
grupo lipoila em E2, preparando
FAD de E3, restaurando a forma
o complexo enzimático para um
oxidada do grupo lipoil-lisina de E2. Na
etapa 5, o FADH2 um íon hidreto ao
NAD1
formando o acetil-tioéster do grupo
lipoil reduzido. , produzindo acetil-CoA
e a forma completamente promove a
transferência de dois átomos de
hidrogênio dos grupos lipoil reduzido
de E3 transfere, formando NADH.O
complexo enzimático está agora pronto
para outro ciclo catalítico.
Reações do ciclo do ácido cítrico:
Para iniciar, a acetil-CoA doa seu grupo
acetila ao composto de quatro
carbonos oxaloacetato, formando o
composto de seis carbonos citrato. O
citrato é, em seguida, transformado em
isocitrato, também uma molécula com
seis carbonos, o qual é desidrogenado
com a perda de CO2 para produzir o
composto de cinco carbonos
α-cetoglutarato (perde uma segunda
molécula de CO2, que ao final irá
originar quatro carbonos succinato).O
succinato é convertido por quatro
etapas enzimáticas ao quatro
carbonos oxalacetato.
Em cada rodada do ciclo entra um
grupo acetila (dois carbonos) na forma
de acetil-CoA, e são removidas duas
moléculas de CO2
Uma molécula de oxaloacetato é
utilizada para a formação do citrato e
uma molécula de oxaloacetato é
regenerada.
Quatro das oito etapas deste processo
são oxidações, nas quais a energia da
oxidação é conservada de maneira
muito eficiente na forma das
coenzimas reduzidas NADH e FADH2.
➔ A sequência das reações do
ciclo do ácido cítrico é
quimicamente lógica:
A acetil-CoA deve ser completamente
oxidada a CO2 para que o máximo da
energia potencial possa ser extraído
desses combustíveis. No entanto, a
oxidação direta do acetato (ou da
acetil-CoA) a CO2 não
bioquimicamente possível.
Nas típicas sequências de oxidação,
estão envolvidos dois grupos metileno
adjacentes (¬CH2
¬CH2 ¬), sendo pelo menos um deles
adjacente a um grupo carbonila, esses
grupos são particularmente
importantes nas transformações
químicas das rotas metabólicas. O
carbono do grupo carbonila tem uma
carga parcial positiva devido à
capacidade de atrair elétrons do
oxigênio da carbonila, e este grupo é,
portanto, um centro eletrofílico.
Para a acetil-CoA ser oxidada de
maneira eficiente, o seu grupo metila
deve estar ligado a alguma coisa.
A primeira etapa do ciclo do ácido
cítrico resolve elegantemente o
problema do grupo metila pouco
reativo por meio da condensação da
acetil-CoA com o oxalacetato.
Como em todas as rotas metabólicas,
existe uma lógica química na
sequência das etapas do ciclo do
ácido cítrico: cada etapa envolve ou
uma oxidação que conserve energia ou
ela é um prelúdio necessário para a
oxidação, colocando grupos funcionais
em posições que facilitem a oxidação
ou a descarboxilação oxidativa.
➔ O ciclo do ácido cítrico tem oito
etapas:
1. Formação do citrato: A primeira
reação do ciclo é a
condensação de acetil-CoA e
oxaloacetato para a formação
 do citrato, catalisada pela
citrato-sintase:
O carbono da metila do grupo acetila é
unido ao grupo carbonila (C-2) do
oxalacetato. Citroil-CoA é o
intermediário transitoriamente
formado no sítio ativo da enzima. Esse
intermediário é rapidamente
hidrolisado em CoA livre e citrato, que
são liberados do sítio ativo. A hidrólise
desse intermediário tioéster de alta
energia torna a reação direta
altamente exergônica.
A CoA liberada nessa reação é
reciclada para participar da
descarboxilação oxidativa de outra
molécula de piruvato pelo complexo
PDH.
Oxalacetato, o primeiro substrato a se
ligar à enzima, induz uma grande
alteração conformacional no domínio
flexível, criando um sítio de ligação
para o segundo substrato, acetil-CoA.
Quando o citroil-CoA é formado no
sítio ativo da enzima, outra alteração
conformacional causa a hidrólise do
tioéster, liberando o CoA-SH. Esse
encaixe induzido da enzima, primeiro
ao substrato e posteriormente ao
intermediário da reação, diminui a
probabilidade de que a clivagem da
ligação tioéster da acetil-CoA seja
prematura e improdutiva.
2. Formação de isocitrato via
cis-aconitato: A enzima
aconi-tase catalisa a
transformação reversível do
citrato em isocitrato, pela
formação intermediária do
ácido tricarboxílico
cis-aconitato, o qual
normalmente não se dissocia do
sítio.
Embora a mistura em equilíbrio a pH
7,4 e 25°C contenha menos de 10% de
isocitrato, na célula a reação é
deslocada para a direita porque o
isocitrato é rapidamente consumido na
próxima etapa do ciclo, o que diminui
sua concentração no estado
estacionário. A aconitase contém um
centro de ferro-enxofre, que atua tanto
na ligação do substrato ao sítio ativo
quanto na adição ou na remoção
catalítica de H2O.
3. Oxidação do isocitrato a
α-cetoglutarato e CO2: Na
próxima etapa, a
isocitrato-desidrogenase
catalisa a descarboxilação
oxidativa do citrato para formar
α-cetoglutarato. O Mn2+
presente no sítio ativo interage
com o grupo carbonila do
oxalosuccinato intermediário,
que é formado transitoriamente,
mas só deixa o sítio ativo
quando a descarboxilação o
converte em α-cetoglutarato. Ele
também estabiliza o enol
formado transitoriamente por
descarboxilação.
A enzima dependente de NAD+
encontra-se na matriz mitocondrial e
participa do ciclo do ácido cítrico. A
principal função da enzima
dependente de NADP+
, encontrada na matriz
mitocondrial e no citosol,
possivelmente seja a produção de
NADPH, essencial para as vias
redutoras anabólicas, como as vias de
síntese de ácidos graxos e de esteróis.
4. Oxidação do α-cetoglutarato a
succinil-CoA e CO2: A etapa
seguinte é outra
descarboxilação oxidativa, na
qual o α-cetoglutarato é
convertido a succinil-CoA e CO2
da
α-cetoglutarato-desidrogenase;
NAD+ pela ação do complexo é o
aceptor de
elétrons e CoA é o transportador
do grupo succinila. A energia da
oxidação do α-cetoglutarato é
conservada pela formação da
ligação tioéster da succinil-CoA:
Reação é essencialmente idêntica à
reação da piruvato-desidrogenase, e
ambos os complexos são certamente
derivados de um ancestral evolutivo
comum.
Os componentes de E1 são estruturas
similares, suas sequências de
aminoácidos diferem e eles apresentam
especificidades diferentes, o
componente da E2 são extremamente
parecido, sendo ambos lipoil ligados
coavalentemente e por fim, o complexo
E3 é igual. O complexo que degrada
α-cetoácidos com cadeias ramificadas
catalisa a mesma sequência de
reações utilizando os mesmos cinco
cofatores:
5. Conversão de succinil-CoA em
succinato: A succinil-Coa, como
a acetil-CoA, tem uma ligação
tioéster com uma energia livre
padrão de hidrólise grande e
negativa (∆G′° de cerca de − 36
kJ/mol). Na próxima etapa do
ciclo do ácido cítrico, a energia
liberada pelo rompimento dessa
ligação é utilizada para impelir
a síntese de uma ligação
fosfoanidrido no GTP ou no ATP,
com um ∆G′° de apenas 22,9
kJ/mol. O succinato é formado
neste processo:
A enzima que catalisa essa reação
reversível é chamada de
succinil-CoA-sintetase, que indica a
participação de um nucleosídeo
trifosfato na reação.
Ela irá poupar energia que envolve
uma etapa intermediária, a qual a
própria molécula da enzima é
fosforilada em um resíduo de His no
sítio ativo. E esse fosfato é transferido
ao ADP (ou GDP) para a formação de
ATP (ou GTP).
(a) Na
etapa 1, a
CoA da
succinil-CoA ligada à enzima é
substituída por um grupo fosfato,
formando um acil-fosfato de alta
energia. Na etapa 2, o succinil--fosfato
doa o grupo fosfato para um resíduo
de His da enzima, originando uma
fosfo-histidil-enzima de alta energia. estado de transição dessa
Na etapa 3, o grupo fosfato é reação é um carbânion:
transferido do resíduo de His ao
fosfato terminal do GDP (ou ADP),
formando GTP (ou ATP). Sítio ativo da
succinil-CoA-sintetase de E. coli. O sítio
ativo inclui parte de ambas as
subunidades, α (em azul) e β (em
marrom). As hélices carregadas (azul,
marrom) posicionam as cargas parciais
positivas do dipolo da hélice próximas
ao grupo fosfato da -His246 na cadeia
α, estabilizando a enzima com a
fosfo-histidina. As enzimas de
mamíferos e bactérias apresentam
sequências de aminoácidos e
estruturas tridimensionais
semelhantes.
Essa enzima é altamente
6. Oxidação de succinato a estereoespecífica; ela catalisa a
fumarato: O succinato formado hidratação da ligação dupla trans do
a partir da succinil-CoA é fumarato, mas não a da ligação dupla
oxidado a fumarato pela cis do maleato.
flavoproteína 8. Oxidação de malato a
succinato-desidrogenase: oxaloacetato: Na última reação
do ciclo do ácido cítrico, a
l-malato desidrogenase catalisa
a oxidação do l-malato a
oxaloacetato, acoplada à
redução do NAD+ a NADH:

A succinato-desidrogenase está
firmemente ligada à membrana
mitocondrial interna. Os elétrons do
succinato passam pelo FAD e pelos
centros de ferro-enxofre antes de
entrarem na cadeia de transporte de
elétrons da membrana mitocondrial
interna. O fluxo dos elétrons do
succinato ao longo desses
transportadores até o aceptor de
elétrons final, O2, é acoplado à síntese
de aproximadamente 1,5 molécula de
ATP por par de elétrons (fosforilação
acoplada à respiração). O malonato,
um análogo do succinato normalmente
ausente nas células, é um forte inibidor
competitivo da
succinato-desidrogenase.
7. Hidratação de fumarato a
malato: A hidratação reversível
do fumarato a l-malato é
catalisada pela fumarase. O
O equilíbrio dessa reação é muito
deslocado para a esquerda sob as
condições termodinâmicas padrão,
porém, nas células intactas, o
oxalacetato é continuamente removido
pela reação altamente exergônica da
citrato-sintase. Isso mantém a
concentração celular de oxalacetato
extremamente baixa, deslocando a
reação da malato-desidrogenase no
sentido da formação de oxaloacetato.
➢ Cadeia respiratória:
A cadeia respiratória é um processo
fundamental no metabolismo celular
que ocorre nas mitocôndrias das
células eucarióticas. Ela desempenha
um papel crucial na produção de
energia na forma de trifosfato de
adenosina (ATP) a partir de substratos
energéticos, como glicose e ácidos
graxos. Vou explicar os principais
passos da cadeia respiratória de
maneira detalhada:
1. Glicólise: O processo começa na
glicólise, que ocorre no citoplasma da
célula. Na glicólise, uma molécula de
glicose é quebrada em duas moléculas
de piruvato, gerando um pequeno
montante de ATP e NADH.
2. Transporte para as mitocôndrias: O
piruvato produzido na glicólise é
transportado para as mitocôndrias,
onde ocorre a maior parte da cadeia
respiratória. Lá, o piruvato é convertido
em acetil-CoA em uma reação
chamada descarboxilação oxidativa.
3. Ciclo de Krebs (ciclo do ácido cítrico):
O acetil-CoA entra no ciclo de Krebs,
que ocorre na matriz das mitocôndrias.
Nesse ciclo, o acetil-CoA é oxidado,
gerando dióxido de carbono, NADH e
FADH2, bem como uma pequena
quantidade de ATP.
4. Transporte de elétrons: A parte
central da cadeia respiratória ocorre
na membrana interna das
mitocôndrias, onde se encontra uma
série de complexos proteicos
conhecidos como complexos I, II, III e IV,
bem como a coenzima ubiquinona (Q) e
a citocromo c.
- Complexo I: NADH é oxidado a NAD+ e,
ao fazê-lo, transfere elétrons para o
complexo I. Nesse processo, prótons
(H+) são bombeados para o espaço
intermembranar.
- Complexo II: FADH2 é oxidado a FAD e
também transfere elétrons para a
cadeia respiratória. Não bombeia
prótons.
- Complexo III: Este complexo recebe
elétrons dos complexos I e II e
transfere-os para o complexo IV.
Durante esse processo, mais prótons
são bombeados para o espaço
intermembranar.
- Complexo IV: O complexo IV recebe
elétrons do complexo III e, ao final do
processo, os combina com oxigênio
(O2) para formar água (H2O). Além
disso, prótons são bombeados para o
espaço intermembranar.
5. Acoplamento quimiosmótico: À
medida que os elétrons fluem através
dos complexos da cadeia respiratória,
prótons são bombeados para o espaço
intermembranar, criando um gradiente
de prótons. Isso gera um potencial de
membrana (força próton-motriz)
através da membrana interna
mitocondrial.
6. ATP sintase: A enzima ATP sintase,
também conhecida como complexo V,
está localizada na membrana interna
das mitocôndrias. Ela utiliza o
gradiente de prótons gerado para
sintetizar ATP a partir de adenosina
difosfato (ADP) e fosfato inorgânico (Pi).
Quando os prótons fluem de volta para
a matriz mitocondrial através da ATP
sintase, a energia liberada é usada
para a síntese de ATP.
Resumindo, a cadeia respiratória é um
processo altamente complexo que
envolve a oxidação de compostos
orgânicos, como NADH e FADH2, a
transferência de elétrons ao longo dos
complexos proteicos e a geração de um
gradiente de prótons. Esse gradiente é,
então, usado para produzir ATP na ATP
sintase. A água é formada na etapa
final da cadeia respiratória quando o
oxigênio é reduzido. Esse processo é
essencial para a produção de energia
nas células e é conhecido como
fosforilação oxidativa.
Envoltório nuclear:
O envoltório nuclear fornece uma
barreira membranosa, seletivamente
permeável entre o compartimento
nuclear e a cromatina, é montado a
partir de duas membranas nucleares
(interna e externa) com um espaço de
cisterna perinuclear entre elas. O
espaço claro de cisterna perinuclear é
contínuo com o espaço de cisterna do
RER. As duas membranas do envoltório
são perfuradas, em intervalos, por
poros nucleares que medeiam o
transporte ativo de proteínas,
ribonucleoproteínas e RNA, entre o
núcleo e o citoplasma. As membranas
do envoltório nuclear diferem quanto à
sua estrutura e funções:
● A membrana nuclear externa é
muito semelhante à membrana
do retículo endoplasmático e, de
fato, é contínua com a
membrana do RER . Os
polirribossomos são
frequentemente fixados às
proteínas de ancoragem
ribossômicas no lado
citoplasmático da membrana
nuclear externa.
● A membrana nuclear interna é
sustentada por uma rede rígida
de filamentos proteicos
intermediários fixados na sua
superfície interna, denominada
lâmina nuclear (fibrosa) . Além
disso, a membrana nuclear
interna contém receptores de
lamina específicos e diversas
proteínas associadas à lâmina
que se ligam aos cromossomos
e assegura a fixação da lâmina
nuclear.
Em numerosos locais, as duas
membranas do envoltório nuclear são
perfuradas por “orifícios”. Esses poros
nucleares são formados pela fusão das
membranas interna e externa do
envoltório nuclear. Com uma MET
comum, uma estrutura semelhante a
um diafragma parece cruzar a
abertura do poro.
Eletromicrografia do envoltório nuclear. Observe os
complexos do poro nuclear (setas) e as duas
membranas que constituem o envoltório nuclear.
Na periferia de cada poro, as membranas externa e
interna do envoltório nuclear parecem ser
contínuas
Oito subunidades proteicas
multidomínio dispostas em uma
estrutura central octogonal, na
periferia de cada poro, formam uma
estrutura semelhante a um cilindro,
conhecida como complexo do poro
nuclear (CPN). O CPN, é composto de
aproximadamente 50 proteínas
diferentes do complexo do poro
nuclear, coletivamente denominadas
nucleoporinas (proteínas Nup). A
estrutura encontra-se aderida entre o
anel citoplasmático e o anel nuclear. O
complexo de anéis nucleoplasmático
ancora uma cesta nuclear montada a
partir de oito filamentos finos, unidas
por um anel terminal. A estrutura
central em formato de cilindro
circunda o poro central do CPN, que
atua como um diafragma de ajuste
firme ou um canal controlado.
o CPN regula a passagem de
proteínas entre o núcleo e o
citoplasma. As proteínas ribossômicas
são parcialmente montadas em
subunidades ribossômicas no núcleo e
transportadas através dos poros
nucleares para o citoplasma. Por outro
lado, as proteínas nucleares, como as
histonas e as laminas, são produzidas
no citoplasma e transportadas através
dos poros nucleares para o núcleo. O
transporte através do CPN depende,
em grande parte, do tamanho das
moléculas:
● As moléculas grandes (como
proteínas grandes) dependem
da existência de uma sequência
sinalizadora, denominada sinal
de localização nuclear (SLN)
para a passagem através dos
poros. As proteínas marcadas
com SLN, destinadas ao núcleo,
ligam-se, em seguida, a um
receptor citosólico solúvel
denominado receptor de
importação nuclear (importina),
que as direciona do citoplasma
até um CPN apropriado. Em
seguida, elas são transportadas
ativamente através do poro por
um mecanismo dependente da
energia do GTP. A exportação de
proteínas e RNA para fora do
núcleo é semelhante ao
mecanismo de importação para
dentro do núcleo. As proteínas
que contêm a sequência de
exportação nuclear (SEN)
ligam-se, no núcleo, à exportina
(proteína que move as moléculas
do núcleo para o citoplasma) e a
uma molécula de GTP. Os
complexos
proteína-exportina-GTP passam
através do CPN para o
citoplasma, onde o GTP é
hidrolisado e a proteína
marcada com SEN é liberada. O
CPN transporta proteínas e
todas as formas de RNA, bem
como subunidades
ribossômicas em suas
configurações completamente
dobradas;
porque a velocidade de
transporte é maior que a com
difusão simples;
Cada poro contém oito subunidades proteicas
dispostas em uma estrutura central octogonal
na periferia do poro. Essas subunidades formam
um complexo do poro nuclear que é inserido
entre dois anéis – o citoplasmático e o nuclear.
Oito fibrilas curtas de proteína projetam-se dos
anéis citoplasmáticos para o citoplasma. O anel
nuclear ancora uma estrutura em formato de
cesta montada com oito filamentos finos, unidos
distalmente dentro do anel terminal. O diâmetro
do anel pode ser ajustado para atender às
exigências de transporte do poro nuclear. A
estrutura cilíndrica central circunda o poro
central, que atua como um diafragma de ajuste
fino.
Lâmina nuclear:
A lâmina nuclear, uma camada de
filamentos intermediários
elétron-densos e finos, semelhante a
uma rede, localiza-se sob a membrana
nuclear. Além de sua função de suporte
ou “nucleoesquelética”, a lâmina
nuclear é essencial para muitas
atividades nucleares, como a
replicação e a transcrição do DNA, e a
regulação dos genes. Se o componente
membranoso do envoltório nuclear for
rompido pela exposição a detergente, a
lâmina nuclear permanece, e o núcleo
mantém o seu formato.

● Os íons e as moléculas
hidrossolúveis menores podem
cruzar os canais repletos de
água do CPN por difusão
simples. Esse processo é
inespecífico e não requer
proteínas de sinal nuclear. No
entanto, até mesmo proteínas
nucleares menores, capazes de
difusão, são seletivamente
transportadas, presumivelmente

Estrutura da lâmina nuclear. A. Este desenho
esquemático mostra a estrutura de lâmina
nuclear adjacente à membrana nuclear interna. A
janela de corte na lâmina nuclear mostra o DNA
dentro do núcleo. Observe que o envoltório
nuclear é perfurado por complexos do poro
nuclear, que possibilitam o transporte
bidirecional seletivo de moléculas entre o núcleo
e o citoplasma.
as laminas nucleares, um tipo
especializado de filamento
intermediário nuclear, e as proteínas
associadas à lamina. A lâmina nuclear
é essencialmente composta das
proteínas lamina A e lamina C, que
formam os filamentos intermediários.
Esses filamentos exibem ligações
cruzadas em uma rede ortogonal, que
é fixada principalmente por meio da
proteína lamina B à membrana nuclear
interna por intermédio de suas
interações com os receptores de
lamina. A família dos receptores de
lamina inclui a emerina, que se liga às
laminas A e B; a nurima, que se liga à
lamina A, e um receptor de lamina B
(LBR), que, como o próprio nome
sugere, liga-se à lamina B.
As laminas se separam durante a
mitose e se reúnem quando a mitose
termina. A lâmina nuclear parece atuar
como um esqueleto para a cromatina,
as proteínas associadas à cromatina,
os poros nucleares e as membranas do
envoltório nuclear. Além disso, ela está
envolvida na organização nuclear, na
regulação do ciclo celular e na
diferenciação e expressão dos genes.
Neoplasma:
Embora inclusões cristalinas, virais e
outras inclusões sejam algumas vezes
encontradas no nucleoplasma, até
recentemente, as técnicas morfológicas
mostravam que ele é amorfo. No
entanto, é preciso presumir que muitas
proteínas e outros metabólitos se
localizam no núcleo ou o atravessam
de acordo com a atividade de síntese e
o metabolismo da cromatina e do
nucléolo. As estruturas que foram
identificadas no nucleoplasma incluem
arranjos de lamina intranuclear, os
filamentos proteicos que emanam para
o interior do núcleo a partir dos
complexos do poro nuclear, e a
transcrição ativa de genes associados
ao RNA e enzimas envolvidas nesse
processo.
Nucléolo:
O nucléolo é uma região não
membranosa do núcleo que circunda
os genes do rRNA de transcrição ativa,
o principal local de produção e
montagem dos ribossomos. O nucléolo
varia de tamanho, mas é especialmente
bem desenvolvido nas células ativas na
síntese proteica. O nucléolo apresenta
três regiões morfologicamente
distintas:
• Os centros fibrilares contêm alças
de DNA de cinco cromossomos
diferentes (13, 14, 15, 21 e 22) com
genes de rRNA, RNA polimerase I e
fatores de transcrição;
•O material fibrilar (parte fibrosa)
contém genes ribossômicos que
sofrem transcrição ativa, e grandes
quantidades de rRNA;
•O material granular (parte
granular) representa o local da
montagem ribossômica inicial e
contém partículas
pré-ribossômicas densamente
acondicionadas.
A rede formada pelos materiais fibrilar
e granular é denominada
nucleolonema. O rRNA está tanto no
material granular quanto no fibrilar e
está organizado, tanto como grânulos
quanto como filamentos extremamente
finos e densamente acondicionados.
Os genes para as subunidades
ribossômicas estão localizados nos
interstícios dessa rede e são
transcritos pela RNA polimerase I. Após
processamento adicional e
modificação do rRNA por pequenos
RNAs nucleolares (snoRNAs), as
subunidades de rRNA são montadas
usando proteínas ribossômicas
importadas do citoplasma. As
subunidades ribossômicas
parcialmente montadas
(pré-ribossomos) são exportadas do
núcleo, através de poros nucleolares,
para montagem completa em
ribossomos maduros no citoplasma.
➔ O nucléolo também está
envolvido na regulação do ciclo
celular.
A relação entre a basofilia e a
metacromasia do nucléolo com os
grupos fosfato do RNA nucleolar é
confirmada pela pré-digestão de
amostras com ribonuclease (RNAse), o
que elimina a coloração. Conforme
mencionado anteriormente, o DNA está
contido no nucléolo; no entanto, a sua
concentração está abaixo da
capacidade de detecção da reação de
Feulgen. Por conseguinte, à
microscopia óptica, os nucléolos são
Feulgen-negativos, com a cromatina
associada ao nucléolo Feulgen-positivo
margeando frequentemente o nucléolo.
Cromatina:
O complexo da cromatina consiste em
DNA e proteínas estruturais. Cada
célula eucarionte contém em torno de
6 bilhões de informações codificadas
dentro de uma estrutura do DNA; E
precisa estar muito bem dobrado e
firmemente acondicionado no núcleo
da célula. Isso é obtido pela formação
de um complexo de nucleoproteína
singular, denominado cromatina.
O dobramento adicional da cromatina,
como aquele que ocorre durante a
mitose, produz estruturas
denominadas cromossomos. Cada
célula humana contém 46
cromossomos. As proteínas da
cromatina incluem cinco proteínas
básicas, denominadas histonas,
juntamente com outras proteínas não
histonas. Uma característica peculiar
do acondicionamento da cromatina é
que ele possibilita que os mecanismos
de transcrição tenham acesso às
regiões dos cromossomos necessárias
para a expressão dos genes.
O genoma humano engloba todo o
comprimento do DNA humano que
contém as informações genéticas
acondicionadas nos 46 cromossomos
O genoma humano contém 2,85 bilhões
de sequências de consenso de pares
de bases de nucleotídios, dispostos em
cerca de 23.000 genes codificadores de
proteínas.
A cromatina não tem aparência
homogênea; em vez disso,
agrupamentos de cromatina
densamente corada estão inseridos em
um fundo de coloração mais suave. O
material de coloração densa é a
cromatina altamente condensada,
denominada heterocromatina;
enquanto o material de coloração
suave (em que muitos genes transcritos
estão localizados) é uma forma
dispersa denominada eucromatina.
São os grupos fosfato do DNA da
cromatina os responsáveis pela
basofilia característica da cromatina.
Dois tipos de heterocromatina:
constitutiva e facultativa. A
heterocromatina constitutiva
contém as mesmas regiões de
sequência de DNA altamente
repetidas e geneticamente
inativas, condensadas e
consistentemente
acondicionadas nas mesmas
regiões do cromossomo, em
comparação com outras células.
A heterocromatina facultativa
também está condensada e não
está envolvida no processo de
transcrição. Não é repetitiva, e
 sua localização no núcleo e nos
cromossomos varia quando
comparada com a de outras
células. A heterocromatina
facultativa pode sofrer
transcrição ativa em
determinadas células. E por fim,
a heterocromatina é a
responsável pela coloração
conspícua do núcleo nas
preparações com hematoxilina e
eosina (H-E).
A eucromatina está localizada
no nucleoplasma nas áreas
“claras” entre e ao redor da
heterocromatina e indica
cromatina ativa, isto é,
cromatina alongada de modo
que a informação genética no
DNA possa ser lida e transcrita.
➔ Ambas têm aspecto granular e
filamentoso, mas a eucromatina
é menos densamente
acondicionada.
Os nucleossomos são encontrados
tanto na eucromatina quanto na
heterocromatina e nos cromossomos.
Essas partículas de 10 nm de diâmetro
representam o primeiro nível de
dobramento da cromatina e são
formadas pela espiralização da
molécula de DNA em torno de um
núcleo proteico. Essa etapa encurta a
molécula do DNA em aproximadamente
sete vezes em relação à molécula do
DNA não dobrada. O centro do
nucleossomo consiste em oito
moléculas de histona (denominadas
octâmero). Duas alças de DNA
(aproximadamente 146 pares de
nucleotídios) são enroladas ao redor
do octâmero central. O DNA estende-se
entre cada partícula como um
filamento de 2 nm que une os
nucleossomos adjacentes. Quando a
cromatina é extraída do núcleo, a
subestrutura nucleossômica da
cromatina é visível à microscopia
eletrônica de transmissão (MET) e é
frequentemente descrita como contas
em um colar .
Na etapa seguinte (dobramento da
cromatina), um longo filamento de
nucleossomos é espiralado até
produzir uma fibrila de cromatina de 30
nm. Seis nucleossomos formam uma
volta na espiral da fibrila de cromatina,
que é aproximadamente 40 vezes mais
curta que o DNA não dobrado. Longos
estiramentos das fibrilas de cromatina
de 30 nm estão ainda organizados em
domínios de alça (contendo 15.000 a
100.000 pares de base), que estão
ancorados em um esqueleto do
cromossomo, ou matriz nuclear,
composto de proteínas não histona. Na
heterocromatina, as fibras de
cromatina estão firmemente
acondicionadas e dobradas umas
sobre as outras; na eucromatina, as
fibrilas de cromatina exibem um
arranjo mais frouxo.
Durante a divisão mitótica, as fibras de
cromatina formadas a partir dos
domínios em alça da cromatina fixada
a uma estrutura proteica flexível sofrem
condensação para formar
cromossomos. Cada cromossomo é
formado por duas cromátides, unidas
em um ponto denominado centrômero .
A natureza dupla do cromossomo é
produzida na fase precedente de
síntese (S) do ciclo celular, durante a
qual o DNA é replicado em preparação
para a divisão mitótica seguinte.
A área localizada em cada extremidade
do cromossomo é denominada
telômero, que se encurta a cada
divisão celular. Estudos recentes
indicam que o comprimento do
telômero constitui um importante
indicador do tempo de vida da célula.
Para sobreviverem indefinidamente (i. e.,
para se tornarem “imortalizadas”), as
células precisam ativar um mecanismo
que mantenha o comprimento do
telômero.
Com exceção dos gametas maduros, o
óvulo e o espermatozóide, as células
humanas contêm 46 cromossomos
organizados em 23 pares homólogos
(cada cromossomo no par tem o
mesmo formato e tamanho). Vinte e
dois pares têm cromossomos idênticos
(i. e., cada cromossomo do par contém
a mesma porção do genoma) e são
denominados autossomos. O 23o par
de cromossomos é constituído pelos
cromossomos sexuais, designados
como X e Y. As mulheres têm dois
cromossomos X (46, XX), enquanto os
homens têm um cromossomo X e um
cromossomo Y (46, XY).
O número de cromossomos, 46, é
encontrado na maioria das células
somáticas do corpo e é denominado
número diploide (2n). Para simplificar a
descrição do número de cromossomos
e as alterações do DNA que ocorrem
durante a mitose e a meiose, usamos a
letra minúscula (n) para o número do
cromossomo e a letra (d) para o
conteúdo de DNA. Os cromossomos
diploides têm uma quantidade (2d) de
DNA imediatamente após a divisão
celular. Eles apresentam duas vezes
essa quantidade (4d) após a fase S.
Acondicionamento
da cromatina dentro
da estrutura
cromossômica. A. As
etapas sequenciais
no
acondicionamento
da cromatina nuclear
são mostradas neste
diagrama,
começando com a
dupla-hélice do DNA
e terminando com a
forma altamente
condensada
encontrada nos
cromossomos.
estrutura e função do DNA:
● Replicação do DNA
Pareamento de bases: DNA-molde -->
reconhecimento de cada nucleotídeo
da fita-molde de DNA por um
nucleotídeo complementar livre (não
polimerizado) e a separação das duas
fitas da hélice de DNA.
- Enzima que polimeriza o DNA:
DNA-polimerase. os nucleotídeos livres
servem como substratos para essa
enzima (trifosfatos de
desoxirribonucleicos).
Cada uma das fitas originais atua
como um molde para a formação de
uma fita nova (replicação) --> isso
significa que a replicação do DNA é
semiconservativa, pois a forquilha de
replicação é assimétrica. Nela, há um
complexo enzimático que contém
DNA-polimerase.
- Direção de polimerização da
DNA-polimerase: 5 3'. Como uma
das linhas é antiparalela (3'5'), ou
seja, há a fita-líder (forma
contínua) no sentido 5 '3' e a
fita-retardada (descontínua), a
qual é contrária ao crescimento
da cadeia de DNA,formando os
Fragmentos de Okazaki, que
estarão unidos após a síntese
de DNA.
● Correção exonucleotídica pela
DNA-polimerase durante a
replicação:
Pode ocorrer o pareamento incorreto
de bases a partir da corporação da
forma tautomérica da base C,
formando par com A (é temporário).
Essa alternância rápida de C* para
citosina normal destrói o pareamento
com A. Assim, a extremidade 3'OH não
pareado do iniciador bloqueia o
alongamento da fita iniciadora pela
DNA-polimerase. A atividade
exonucleotídica 3 '5' volta e remove a C,
criando uma extremidade 3'-OH
pareada a fita iniciadora. Continua o
processo da DNA-polimerase na adição
de nucleotídeos. Portanto, a
DNA-polimerase atua como uma
enzima de "autocorreção", removendo
os próprios erros de polimerização
enquanto realiza o processo.
● DNA-helicase:
Utilizam o princípio de, na hidrólise de
ATP, mudar a conformação de uma
molécula protéica de maneira cíclica,
permitindo o trabalho mecânico
executado pela proteína, de modo que
elas são impulsionadas rapidamente
sobre a fita de DNA, separando os
pares de nucleotídeos.
- SSB (proteínas ligadoras da fita
simples de DNA): De maneira
concomitante a ação da
DNAhelicase, auxilia ela
 estabilizando a conformação
enquanto a helicase “corta”
(impede que a fita una
novamente, já que é a
conformação mais
energeticamente favorável)
- Grampo Deslizante: proteína
acessória que atua como uma
fita reguladora, que mantém a
polimerase firmemente
associada ao DNA. A estrutura
forma um anel ao redor da fita
de DNA. A montagem da cinta
requer hidrólise de ATP, em que
o montador da cinta hidrolisa
ATP enquanto monta a cinta em
uma junção molde-iniciador. Na
fita anti paralela, também há a
cinta reguladora, mas ela se
solta a cada fragmento de
Okazaki criado.
● DNA-primase:
● DNA-ligase:
Quando há a remoção dos primers, a ligase
une os fragmentos.
Sistema de Reparo de pareamento
incorreto:
- Detecta o potencial de distorção
na hélice de DNA que resulta na
interação incorreta entre bases
não-complementares. Isso deve
ocorrer apenas na fita recém
sintetizada, desse modo, esse
sistema tem que reconhecer
essa fita, para que não ocorra o
reparo incorreto e aleatório.
(esse sistema ocorre nas
bactérias, mas é semelhante nos
humanos). Proteínas MultS
ligam-se especificamente em um
par de bases mal pareadas,
enquanto a MultL verifica o DNA
das extremidades, procurando
quebras.
● DNA-topoisomerase:
Nuclease reversível que se liga
covalentemente a um fosfato, clivando uma
ligação fosfodiéster na cadeia de DNA.
- Topoisomerase I: produz a
clivagem temporária na fita
simples → permite que as duas
porções da hélice girem
livremente uma em relação à
outra, usando a ligação
fosfodiéster na fita oposta como
ponto de suporte para a
rotação. → alivia a tensão
- Topoisomerase II: Forma uma
ligação covalente com ambas as
fitas da hélice de DNA ao mesmo
tempo, formando uma quebra
de fita dupla temporária da
hélice. São ativadas por sítios de
cromossomos em que as duas
hélices se entrelaçam. Uma vez
que se liga aos sítios, a proteína
utiliza de Hidrólise de ATP para
executar a o conjunto de
reações:
- 1- clivagem reversível de uma
dupla-hélice, criando uma
“abertura” no DNA.
- 2- passagem da segunda
dupla-hélice, que está próxima,
pela abertura.
- 3- religação da quebra e
dissociação do DNA.
- → topoisomerase II separa dois
círculos de DNA entrelaçados.
- acontece uma vez durante o ciclo
celular, durante a fase S da interfase
 - replicado todo o DNA, a cópia deve
ser fiel, exata
- semiconservativo
- não pode surgir do nada, deve tem
uma fita pré existente
- conserva metade da informação
original
- proteínas conhecem qual é a fita de
origem e a recém sintetizada, sabendo
qual foi danificada e conseguindo
arrumá-la
- centro de origem de replicação
- pontos de origem que se originara a
replicação. há vários, eles começam
simultaneamente
- forquilha de replicação
- “metade da bolha”
- cada vez que a molécula faz mitose,
uma parte do telômero é perdida, e
quando ele “acaba”, começa o
envelhecimento celular
- A origem de replicação normalmente
é onde tem ligações de A e T, pois
essas possuem apenas 2 pontes de
hidrogênio, sendo mais fácil de separar.
1-Complexo de reconhecimento de
origem (ORC)
2- Helicase CDC6 +CDT 1 → adicionadas
ao ORC= complexo pré-replicativo (em
G1) - CDC6 e CDT1 são inibidoras de
helicase.
3- CDK vai fosforilar o complexo para
- a dissociação das proteínas
inibidoras
- ativação da helicase
- impedir a formação de um novo
complexo préreplicativo
Transcrição:
O primeiro passo executado pela célula para
ler a informação necessária a partir de suas
instruções genéticas é a cópia de uma parcela
específica da sequência de nucleotídeos do
DNA, ou seja, de um gene. O gene é copiado
sob a forma de uma sequência de
nucleotídeos de RNA. A esse processo
denomina-se transcrição.
Assim como o DNA, o RNA é um
polímero linear composto de quatro
tipos diferentes de subunidades
nucleotídicas unidas entre si por
ligações fofodiéster. O RNA difere
quimicamente do DNA em dois
aspectos. Os nucleotídeos do RNA são
ribonucleotídeos, isto é, eles contêm o
açúcar ribose em vez de desoxirribose
presente no DNA. Outra diferença é a
existência da base uracila (U) em vez da
timina (T) encontrada no DNA. A apesar
disso, a U, assim como a T, pode formar
pares pelo estabelecimento de ligações
de hidrogênio com a adenina (A). Em
outras palavras, as propriedades de
complementaridade por pareamento
de bases que se aplicam para o DNA
também são aplicáveis para o RNA. A
única peculiaridade do RNA, nesse
sentido, é a presença da U no lugar da
T. A maioria dos genes carreados no
DNA das células especifica a sequência
de aminoácidos de proteínas. As
moléculas que são copiadas a partir
desses genes são chamadas de
moléculas de RNA mensageiro (mRNA).
No entanto, as moléculas de mRNA
representam somente 3 a 5% do peso
seco de uma célula. Existem outras
variadas moléculas RNA, sendo que a
maioria do RNA nas células é
constituída pelo RNA ribossômico
(rRNA). Veja na tabela abaixo os tipos
de RNA produzidos nas células.
Os núcleos eucarióticos têm três:
RNA-polimerase I, RNA-polimerase II e
RNA-polimerase III. As três polimerases
são estruturalmente similares entre si e,
inclusive, à enzima bacteriana, mas
transcrevem diferentes tipos de genes.
As RNA-polimerases I e III transcrevem
os genes que codificam o tRNA, o rRNA
e vários pequenos RNAs. A
RNA-polimerase II transcreve a grande
maioria dos genes, inclusive todos
aqueles que codificam proteínas. Por
isso, essa última enzima se torna o
cerne da descrição dos processos
envolvidos na transcrição em
eucariotos. Vale ressaltar que a
transcrição em eucariotos ocorre no
núcleo da célula.
Apesar de a RNA-polimerase II
eucariótica apresentar muitas
similaridades estruturais em relação à
RNA-polimerase bacteriana, existem
várias diferenças importantes na
maneira como as enzimas bacterianas
e eucarióticas atuam. Por exemplo:
• Enquanto a RNA-polimerase
bacteriana requer uma única proteína
adicional (o fator σ) para que ocorra a
transcrição, as RNA-polimerases
eucarióticas necessitam de diversas
proteínas adicionais, coletivamente
chamadas de fatores gerais de
transcrição.
• A iniciação da transcrição eucariótica
precisa lidar com o DNA empacotado
em nucleossomos e sob outras formas
de estruturação de cromatina,
características ausentes nos
cromossomos bacterianos.
Os fatores gerais de transcrição
ajudam a posicionar a RNA-polimerase
eucariótica corretamente sobre o
promotor, auxiliam na separação das
duas fitas de DNA para permitir que a
transcrição inicie e liberam a
RNA-polimerase do promotor no modo
de extensão, uma vez que a transcrição
tenha iniciado. Esses fatores consistem
em um grupo de proteínas interativas
designadas como TFII (fator de
transcrição para a polimerase II) e
recebem nomes arbitrários, como TFIIB,
TFIID e assim por diante. Em um
sentido amplo, os fatores gerais de
transcrição eucarióticos
desempenham funções equivalentes
àquelas do fator σ em bactérias. O
processo de transcrição tem início com
a ligação do fator geral de transcrição
TFIID a uma pequena sequência de
DNA de dupla-hélice composta por
nucleotídeos T e A. Por esse motivo,
essa sequência é conhecida como
TATA, ou TATA box, e a subunidade de
TDFIID que reconhece é denominada
proteína de ligação a TATA. A
sequência TATA box, geralmente, está
localizada 25 nucleotídeos antes do
sítio de início da transcrição. Outros
fatores são então reunidos, junto à
RNA-polimerase II, para formar um
complexo de iniciação de transcrição
completo.
Após a formação de um complexo de
iniciação de transcrição sobre o DNA, a
RNA-polimerase II deverá ter acesso à
fita molde no ponto inicial da
transcrição. O TFIIH, o qual contém
uma enzima denominada DNA-helicase
como uma de suas subunidades, torna
possível esse passo por hidrólise de
ATP, promovendo a desespiralização do
DNA e consequentemente expondo a
fita-molde. A seguir, a RNA-polimerase II,
da mesma forma que a polimerase
bacteriana, se mantém no promotor,
sintetizando pequenos fragmentos de
RNA até sofrer uma série de alterações
estruturais que permitem sua saída do
promotor e a entrada na fase de
extensão da transcrição. Um evento
importante para essa transição é a
adição de grupos fosfato à “cauda” da
RNApolimerase II, conhecida como CTD,
ou domínio C-terminal. Nesse sentido,
resíduos de serina da “cauda” são
fosforilados pelo TFIID, o qual contém
uma proteína-cinase como uma de
suas subunidades. A polimerase pode
então se separar do agrupamento de
fatores gerais de transcrição. Durante
esse processo, ela sofre uma série de
modificações conformacionais que
fortalecem a sua interação com o DNA
e adquire novas proteínas que lhe
permite transcrever por longas
distâncias, e em muitos casos por
várias horas, sem se dissociar do DNA.
Uma vez que a polimerase II tenha
iniciado a extensão do transcrito de
RNA, a maioria dos fatores gerais de
transcrição é liberada do DNA de
forma que eles estarão disponíveis
para iniciar outro ciclo de transcrição,
com outra nova molécula de
RNA-polimerase. Um fato que ganha
relevância em relação a transcrição em
eucariotos é a forma como o DNA se
encontra nas células. O DNA das
células eucarióticas está empacotado
em nucleossomos, os quais são
posteriormente organizados em
estruturas de cromatina de alta
magnitude. Como resultado, a iniciação
da transcrição nas células eucarióticas
requer uma maquinaria molecular
complexa. Nesse sentido, a presença de
um complexo proteico conhecido como
Mediador se torna relevante. O
complexo Mediador permite que as
proteínas ativadoras se comuniquem
adequadamente com a polimerase II e
com os fatores gerais de transcrição.
Finalmente, a iniciação da transcrição
nas células eucarióticas tipicamente
requer o recrutamento da cromatina e
enzimas modificadoras de histonas.
Ambos tipos de enzimas possibilitam
maior acesso ao DNA presente sob a
forma de cromatina e, assim, facilitam a
montagem da maquinaria de iniciação
da transcrição sobre o DNA.
Splicing do RNA:
As sequências codificantes de genes
eucarióticos são caracteristicamente
interrompidas por sequências
intervenientes não codificantes, os
íntrons. Em outras palavras, os genes
eucarióticos são encontrados sob a
forma de pequenos pedaços de
sequências expressas ou éxons
intercaladas por sequências muito
longas, as sequências intervenientes
ou íntrons. Assim, a porção codificantes
de um gene eucariótico é, em geral,
apenas uma pequena fração do
comprimento do gene. Tanto as
sequências de íntrons quanto de éxons
são transcritas em RNA. As sequências
dos íntrons são removidas do RNA
recentemente sintetizado (pré-RNA) por
meio de um processo denominado
splicing de RNA. Grande parte do
splicing de RNA que ocorre nas células
atua na produção de mRNA. Portanto, o
splicing do precursor de mRNA ganha
grande relevância. Somente após ter
ocorrido o splicing e o processamento
das extremidades 5’ e 3’ esse RNA será
denominado mRNA. Cada evento de
splicing remove um íntron, por meio de
duas reações sequenciais de
transferências de fosforil, conhecidas
como transesterificações, as quais
unem dois éxons, enquanto removem o
íntron sob a forma de um “laço”. Uma
vez que o número de ligações de
fosfato de alta energia permanece o
mesmo, tais reações podem ocorrer, em
princípio, sem hidrólise de trifosfatos
de nucleosídeo. Entretanto, a
maquinaria que catalisa o splicing do
préRNA é complexa, consistindo em
cinco moléculas adicionais de RNA e
até 200 proteínas, e hidrolisa muitas
moléculas de ATP por evento de
splicing. Essa complexidade é
presumivelmente necessária para
assegurar que o splicing seja exato,
sendo ao mesmo tempo
suficientemente flexível para lidar com
a enorme diversidade de íntrons
encontrada em uma célula eucariótica
típica. No contexto de uma escala de
tempo evolutiva, a presença de
numerosos íntrons no DNA permite que
a recombinação genética facilmente
combine éxons de diferentes genes,
possibilitando que genes para novas
proteínas evoluam mais facilmente por
intermédio da combinação de partes
de genes preexistentes.
Outra vantagem que é, atualmente,
observada é o splicing de diferentes
maneiras ou splicing alternativo.
Estima-se que 75% dos genes em
humanos sofram splicing alternativo,
permitindo que um mesmo gene
produza um grupo correspondente de
diferentes proteínas. Dessa forma, esse
processo concede aos eucariotos
incrementar o já enorme potencial
codificante de seus genomas. O
splicing do RNA é realizado pelo
spliceossomo. Cinco moléculas de RNA
(U1, U2, U4 e U5 e U6) relativamente
pequenas, com menos de 200
nucleotídeos cada, constituem o
maquinário molecular envolvido na
principal forma de splicing do
pré-mRNA. Conhecidas como snRNAs
ou pequenos RNAs nucleares, cada
uma é complexada com pelo menos
sete subunidades proteicas para
formar um snRNP (pequena
ribonucleoproteína nuclear). As snRNPs
formam o cerne do spliceossomo, o
grande complexo de moléculas de RNA
e de proteínas que realiza o splicing do
pré-mRNA na célula.
Poliadenilação na extremidade 3’: À
medida que a RNA-polimerase II se
aproxima do final de um gene, um
mecanismo similar ao capeamento da
extremidade 5’ assegura que a
extremidade 3’ do pré-mRNA seja
corretamente processada. Duas
proteínas de subunidades múltiplas,
denominadas fator de estimulação à
clivagem (CstF) e fator de
especificidade de clivagem e
poliadenilação (CPSF) são de especial
importância. Ambas movimentam-se
com a cauda da RNA-polimerase e são
transferidas à extremidade 3’ da
sequência em processamento sobre
uma molécula de RNA, logo que ela
emerge da RNA-polimerase. Uma vez
que CstF e CPSF se ligam a sequências
nucleotídicas específicas sobre a
molécula de RNA que está em
formação, proteínas adicionais
associam-se a elas para criar a
extremidade 3’ do mRNA. Inicialmente, o
RNA é clivado. Logo após, uma enzima
denominada poli-A-polimerase (PAP)
adiciona, um a um, aproximadamente
200 nucleotídeos A (adenina) à
extremidade 3’ produzida pela
clivagem. O nucleotídeo precursor
dessas adições é o ATP, e o mesmo tipo
de ligações 5’ a 3’ utilizado na síntese
convencional de RNA é formado nessa
situação.
Mecanismos de controle da divisão
celular:
A divisão celular normalmente começa
com a duplicação do conteúdo da
célula, seguida da distribuição desse
conteúdo para duas células-filhas. A
duplicação dos cromossomos ocorre
durante a fase S do ciclo celular,
enquanto a maioria dos outros
componentes celulares é duplicada de
forma contínua ao longo do ciclo.
Durante a fase M, os cromossomos
replicados são segregados em núcleos
individuais (mitose), e a célula então se
divide em duas (citocinese). A fase S e a
fase M geralmente são separadas por
fases de intervalo chamadas de G1
e G2, quando vários sinais
intracelulares e extracelulares regulam
a progressão do ciclo celular. A
organização e o controle do ciclo
celular têm sido altamente
conservados durante a evolução, e
estudos em um grande número de
sistemas têm levado a uma visão
unificada do controle do ciclo celular
eucariótico.
Os eventos da divisão celular eucariótica vistos sob o
microscópio. Os processos facilmente visíveis de divisão
nuclear (mitose) e divisão celular (citocinese),
coletivamente chamados de fase M, normalmente
ocupam somente uma pequena fração do ciclo celular. A
outra parte do ciclo, muito mais longa, é conhecida
como interfase, que inclui a fase S e as fases de
intervalo. Os cinco estágios da mitose são apresentados:
uma mudança brusca no estado bioquímico da célula
ocorre na transição da metáfase a anáfase. A célula
pode fazer uma pausa antes desse ponto de transição,
mas, uma vez ultrapassado esse ponto, a célula
continua até o fim da mitose e atravessa a citocinese,
chegando à interfase.
O sistema de controle do ciclo celular
opera de forma muito semelhante a um
cronômetro que aciona os eventos do
ciclo celular em uma sequência
determinada. Em sua forma mais
simples, o sistema de controle é
rigidamente programado para fornecer
uma quantidade fixa de tempo para a
realização de cada evento do ciclo
celular.
 O sistema de controle do ciclo celular
tem como base em uma série
conectada de interruptores
bioquímicos, cada um dos quais inicia
um evento específico:
1. Os interruptores geralmente são
binários (ativo/inativo) e desencadeiam
eventos de maneira completa e
irreversível;
2. O sistema de controle do ciclo
celular é notavelmente intenso e
confiável;
3. É altamente adaptável e pode
ser modificado para se adequar a tipos
celulares específicos e para responder
a sinais intracelulares ou extracelulares
específicos.
O controle do ciclo celular. Um sistema de controle do
ciclo celular desencadeia os processos essenciais do
ciclo – como a replicação do DNA, a mitose e a
citocinese. O sistema de controle é representado aqui
como um braço central – o controlador – que gira no
sentido horário, disparando processos essenciais
quando alcança transições específicas no mostrador
exterior (caixas amarelas). A informação sobre a
realização dos eventos do ciclo celular, assim como os
sinais oriundos do ambiente, pode levar o sistema de
controle a interromper o ciclo nessas transições.
O sistema de controle do ciclo celular
controla a progressão do ciclo celular
em três principais pontos de transição
reguladora:
1. Início (ou ponto de restrição) no
final de G1, onde a célula se
compromete à entrada no ciclo celular
e à duplicação dos cromossomos;
2. Transição de G2/M, onde o
sistema de controle dispara um evento
mitótico precoce que leva ao
alinhamento de cromossomos no eixo
mitótico na metáfase
3. Transição entre metáfase e
anáfase, onde o sistema de controle
estimula a separação das
cromátides-irmãs, levando à conclusão
da mitose e da citocinese.
Se o sistema de controle identifica
problemas na realização da replicação
de DNA, por exemplo, isso manterá a
célula na transição G2/M até que esses
problemas sejam resolvidos.
Similarmente, se as condições
extracelulares não são apropriadas à
proliferação celular, o sistema de
controle bloqueia a progressão ao
Início, impedindo dessa forma a divisão
celular até que as condições se tornem
favoráveis.
Regulação do ciclo celular:
Os componentes centrais do sistema
de controle são membros de uma
família de cinases conhecidas como
cinases dependentes de ciclinas (Cdks).
As atividades dessas cinases
aumentam e diminuem à medida que a
célula avança no ciclo, levando a
mudanças cíclicas na fosforilação de
proteínas intracelulares que iniciam ou
regulam os principais eventos do ciclo
celular.
As mudanças cíclicas na atividade das
Cdks são controladas por um complexo
arranjo de enzimas e outras proteínas.
O mais importante desses reguladores
das Cdks são proteínas conhecidas
como ciclinas. As Cdks, são
dependentes de ciclinas para sua
atividade: a menos que estejam
fortemente ligadas a uma ciclina elas
não têm atividade de cinase.
Quando uma ciclina
forma um complexo
com uma Cdk,a
proteína-cinase é
ativada e
desencadeia eventos
específicos do ciclo
celular. Sem a ciclina,
a Cdk é inativa.
Os níveis de proteínas Cdk, ao
contrário. As modificações cíclicas nos
níveis das proteínas ciclinas resultam
no agrupamento e ativação cíclicos
dos complexos ciclina-Cdk nos estágios
específicos do ciclo celular.
Existem quatro classes de ciclinas,
cada uma definida pelo estágio do
ciclo celular no qual se ligam às Cdks e
em que atuam:
1. As G1/S-ciclinas ativam Cdks no
final de G1 e, com isso, ajudam a
desencadear a progressão ao Início,
resultando no comprometimento à
entrada no ciclo celular. Seus níveis
diminuem na fase S.;
2. As S-ciclinas se ligam a Cdks
logo após a progressão ao Início e
ajudam a estimular a duplicação dos
cromossomos. Os níveis das S-ciclinas
permanecem elevados até a mitose, e
essas ciclinas também contribuem ao
controle de alguns eventos mitóticos
iniciais;
3. As M-ciclinas ativam Cdks que
estimulam a entrada na mitose na
transição G2. Os níveis de M-ciclinas
diminuem na metade da mitose;
4. As G1/M. -ciclinas, ajuda a
regular as atividades das G1/S-ciclinas,
as quais controlam, no final de G1, a
progressão ao Início.
Como diferentes complexos de ciclina-Cdk
desencadeiam diferentes eventos do ciclo
celular? A resposta, ao menos em parte, parece
ser que a proteína ciclina não somente ativa sua
Cdk parceira, mas também a direciona para
proteínas-alvo específicas.
Estudos estruturais em três dimensões
de proteínas Cdk e ciclinas têm
revelado que, na ausência de ciclinas, o
sítio ativo na proteína Cdk é
parcialmente obstruído por uma alça
proteica, como uma pedra bloqueia a
entrada de uma caverna, a ciclina
ligada faz a alça se mover do sítio
ativo, resultando em uma ativação
parcial da enzima Cdk. A ativação total
do complexo de ciclina-Cdk ocorre,
então, quando uma outra cinase, a
cinase ativadora de Cdk (CAK) e
aumenta ainda mais a atividade da
Cdk, permitindo que a cinase fosforila
de maneira eficiente suas
proteínas-alvo e, desse modo, induza
eventos específicos do ciclo celular.
A fosforilação de um par de
aminoácidos na cavidade do sítio ativo
da cinase inibe
a atividade de um complexo de
ciclina-Cdk.
● A fosforilação desses sítios por
uma cinase conhecida como Wee1 inibe
a atividade das Cdks;
● A desfosforilação desses sítios
por uma fosfatase conhecida como
Cdc25 aumenta a atividade das Cdks.
A ligação de proteínas inibidoras Cdk
(CKL’s) inativam complexos de
ciclina-Cdk. A estrutura tridimensional
de um complexo de ciclina-Cdk-CKI
revela que a ligação de CKI estimula um
grande rearranjo na estrutura do sítio
ativo da Cdk1, tornando-o inativo.
 A maioria dos genes era identificada
pelas anormalidades produzidas
quando o gene era mutado.

- E2F
- Fatores de crescimento:
- EPO;
- pdgf;
O rastreamento genético, e, quanto
- egf.
maior o genoma, menor é a
Controlam a taxa celular,
probabilidade de que qualquer gene
pois liberam inibidores;
seja mutado. Os fenótipos simples são
- Complexo de quitina:
mais fáceis de detectar: pode-se
desfosforila CDKS e quitinas.
rastrear vários organismos de forma
- O aumento da nyc (proteína
rápida, por exemplo, para mutações
reguladora de transcrição) leva
que tornam impossível ao organismo
ao aumento de gene.
sobreviver na ausência de um
determinado aminoácido ou nutriente.
Mutações genéticas: Os indivíduos mutantes normalmente
funcionam enquanto as condições
“permissivas” prevalecem, mas
demonstram uma função gênica
anormal quando submetidos a
condições “não permissivas”
(restritivas). O gene sensível a
temperatura em um destes mutantes
normalmente contém uma mutação
pontual que causa uma alteração sutil
no seu produto proteico; por exemplo,
a proteína mutante pode funcionar
normalmente a temperaturas baixas,
porém desnatura a temperaturas mais
altas.
De forma semelhante, rastreamentos
por mutações sensíveis à temperatura
levaram à identificação de várias
proteínas envolvidas na regulação do
ciclo celular, assim como a várias
proteínas envolvidas no movimento de
proteínas através da via secretora em
levedura.

As mutações gênicas geralmente são

classificadas como “com perda de
função” ou “com ganho de função”.
Uma mutação com perda de função
resulta em um produto gênico que não
funciona com baixa atividade; assim,
ela pode revelar a função normal do
gene. A mutação com ganho de função
resulta em um produto gênico que é
muito ativo, é ativo no momento ou
local errado, ou possui uma nova
atividade.
1. determinar se a mutação causa
uma perda ou um ganho de função;
2. é determinar se a mutação é
dominante ou recessiva.
A diferença mais comum entre alelos é
a substituição de um único par de
nucleotídeo, mas alelos diferentes
também podem carregar deleções,
substituições e duplicações. Então,
como podemos dizer se duas mutações
que produzem o mesmo fenótipo
ocorrem no mesmo gene ou em genes
diferentes? Se as mutações são
recessivas, um teste de
complementação pode ser utilizado
para verificar se as mutações estão no
mesmo gene ou em genes diferentes.
Se as duas mutações estão no mesmo
gene, a descendência mostra o
fenótipo mutante, pois elas continuam
não tendo cópias normais do gene em
questão. Caso, ao contrário, as
mutações ocorrerem em genes
diferentes, a descendência resultante
mostra um fenótipo normal, pois elas
retêm uma cópia normal (e uma cópia
mutante) de cada gene; as mutações,
desse modo, complementam-se e
reconstituem um fenótipo normal.
A ordem dos genes é mais fácil de ser
explicada para vias metabólicas, nas
quais, por exemplo, a enzima A é
necessária para produzir o substrato
para a enzima B. Nesse caso, diríamos
que o gene que codifica a enzima A
atua antes (a montante) do gene que
codifica a enzima B na via ( se uma
proteína regula a atividade de outra
proteína, diríamos que o primeiro gene
atua antes do segundo).
Um processo biossintético que consiste
em uma sequência de etapas, de modo
que a realização da etapa B seja
condicional ao término da etapa A
precedente; suponha também que o
gene A seja necessário para a etapa A,
e o gene B seja necessário para a
etapa B. Então uma mutação nula (uma
mutação que abole a função) no gene
A irá interromper o processo na etapa
A, independentemente de o gene B ser
funcional ou não, enquanto uma
mutação nula no gene B causa uma
interrupção na etapa B apenas se o
gene A ainda for ativo. Em tal caso,
diz-se que o gene A é epistático ao
gene B. Comparando-se os fenótipos
das diferentes combinações de
mutações, podemos descobrir a ordem
na qual os genes atuam.
Se o fenótipo foi produzido por
mutagênese de inserção, a localização
do gene interrompido é bastante
simples. Os fragmentos de DNA
contendo a inserção (p. ex., um
transposon ou um retrovírus) são
amplificados por PCR, e a sequência de
nucleotídeos do DNA nas regiões
adjacentes é determinada. O gene
afetado pela inserção pode, então, ser
identificado por uma varredura, com o
auxílio de um computador, da
sequência genômica completa do
organismo.
Rastreamentos genéticos em
organismos-modelo experimentais tem
tido espetacular sucesso na
identificação de genes e seu
relacionamento com vários fenótipos,
incluindo vários que são conservados
entre estes organismos e humanos.
Como a população humana é muito
grande, mutações espontâneas, não
letais, surgiram em todos os genes
humanos, diversas vezes. Uma
proporção substancial permanece no
genoma dos humanos nos dias atuais.
As mais prejudiciais destas mutações
são descobertas quando os indivíduos
mutantes chamam a atenção por
necessitarem de cuidados médicos.
Por meio da comparação de milhares
de genomas humanos de todo mundo,
podemos começar a identificar
diretamente as diferenças de DNA que
distinguem um indivíduo de outro.
Quando comparamos as sequências
de múltiplos genomas humanos,
observamos que quaisquer dois
indivíduos se diferenciarão em
aproximadamente 1 par de
nucleotídeos em 1.000. . Quando duas
variantes de sequências coexistem na
população e ambas são comuns, as
variantes são chamadas de
polimorfismos. A maioria dos
polimorfismos são devidos à
substituição de um único nucleotídeo,
denominados polimorfismos de um
único nucleotídeo ou SNPs, o restante é
devido em grande parte a inserções.
quando a alteração é grande. Embora
estas variantes comuns possam ser
encontradas pelo genoma, elas não
estão espalhadas aleatoriamente – ou
mesmo de forma independente. Em vez
disso, elas tendem a se encontrar em
grupos chamados blocos haplótipos –
combinações de polimorfismos que são
herdados como uma unidade, certos
conjuntos de sequências de DNA – e
seus polimorfismos associados – foram
herdados em grupos ligados, com
poucos rearranjos genéticos ao longo
das gerações. Esses são os blocos
haplótipos. Como genes que existem
em formas alélicas diferentes, os blocos
haplótipos também se apresentam em
um número limitado de variantes que
são comuns na população humana,
cada um representando uma
combinação de polimorfismos de DNA
passada adiante a partir de um
determinado ancestral há muito tempo.
Polimorfismos de um único nucleotídeo (SNPs)
são sítios no genoma onde duas ou mais
variantes de um nucleotídeo são comuns na
população. A maioria destas variações no
genoma humano ocorre em locais onde elas não
afetam de forma significativa a função do gene.
As mutações que dão origem, de forma
reproduzível, a anormalidades raras,
mas claramente definidas, como
albinismo, hemofilia ou surdez
congênita, podem, muitas vezes, ser
identificadas por estudos das famílias
afetadas. Mas para muitas doenças
comuns, as raízes genéticas são mais
complexas. Em vez de um único alelo de
um único gene, tais distúrbios provêm
de uma combinação de contribuições
a partir de múltiplos genes. E, com
frequência, os fatores ambientais têm
influências fortes sobre a gravidade do
distúrbio. Para essas condições
multigênicas, como diabetes ou artrite,
os estudos da população muitas vezes
são úteis no rastreamento dos genes
que aumentam o risco de desenvolver
a doença.
São coletadas amostras de DNA de um
grande número de pessoas que tem a
doença e as comparam com amostras
de um grupo de pessoas que não tem a
doença. Como as sequências de DNA
que estão próximas em um
cromossomo tendem a ser herdadas
juntas, a presença de tais SNPs poderia
indicar que um alelo que aumenta o
risco da doença poderia estar
localizado nas proximidades. Embora,
em princípio, a doença pudesse ser
causada pela própria SNP, é muito mais
provável que o culpado seja uma
alteração que apenas está ligada à
SNP como parte de um bloco haplótipo.
Tais estudos de associação genômica
ampla têm sido utilizados para
identificar genes que predispõem
indivíduos a doenças comuns,
incluindo diabetes, doença da artéria
coronária, artrite reumatoide e mesmo
depressão. Para muitas dessas
condições, os polimorfismos de DNA
identificaram apenas um aumento leve
no risco das doenças. Além disso, os
fatores ambientais (p. ex., dieta,
exercícios) têm um papel importante no
início e gravidade da doença. No
entanto, a identificação dos genes
afetados por estes polimorfismos está
levando ao entendimento do
mecanismo de algumas de nossas
doenças mais comuns.
As variantes genéticas que até agora
nos ajudaram a identificar alguns
genes que aumentam nosso risco por
doenças são comuns.
 esquizofrenia. Muitas destas são
mutações de novo, que surgiram
espontaneamente nas células da
linhagem germinativa de um dos pais.
O fato de que essas mutações surgem
espontaneamente com alguma
frequência poderia ajudar a explicar
por que estes distúrbios comuns – cada
um observado em cerca de 1% da
população – permanecem conosco,
mesmo que os indivíduos afetados
Genes que afetam o risco de desenvolver uma doença deixem poucos ou nenhum
comum muitas vezes podem ser rastreados por meio da
sua ligação às SNPs. Aqui os padrões de SNPs são
descendente. Essas mutações raras
comparados entre os dois conjuntos de indivíduos – um podem surgir em qualquer um de
conjunto de controles saudáveis e um conjunto de centenas de genes diferentes, o que
afetados por uma determinada doença comum. Um
segmento de um cromossomo típico é mostrado. Para a poderia explicar muito sobre a
maioria dos sítios polimórficos nesse segmento, é uma variabilidade clínica do autismo e da
questão aleatória para um indivíduo ter uma variante
SNP (barras verticais vermelhas) ou outra (barras
esquizofrenia. Como eles são mantidos
verticais azuis); essa mesma aleatoriedade é observada raros por seleção natural, a maioria
tanto para o grupo-controle como para os indivíduos
afetados. Entretanto, na parte do cromossomo
dessas variantes com muito efeito
sombreada em cinza-escuro, observa-se uma tendência: sobre o risco seriam perdidas nos
a maioria dos indivíduos normais possuem variantes estudos de associação genômica
SNP azuis enquanto os indivíduos afetados possuem
variantes SNP vermelhas. Isso sugere que esta região ampla. Agora que o sequenciamento de
contém, ou é próxima a, um gene que está DNA se tornou rápido e barato, a
geneticamente ligado a essas variantes SNP vermelhas e
que predispõe os indivíduos à doença. O uso de
maneira mais
controles cuidadosamente selecionados e milhares de eficiente e econômica para identificar
indivíduos afetados, essa abordagem pode ajudar a
rastrear genes relacionados a doenças, mesmo que
essas mutações raras de grande efeito
estes confiram apenas um leve aumento no risco de é sequenciar os genomas dos
dedesenvolver a doença. indivíduos afetados, junto ao dos pais
e irmãos como controle.
Acredita-se que tais polimorfismos
representem 90% das diferenças entre
o genoma de uma pessoa e o de outra.
Mas quando tentamos conectar estas
variantes comuns com as diferenças na
susceptibilidade pelas doenças ou
Fatores de predisposição do câncer:
outras características hereditárias, (Genéticos, ambientais e Hábitos de
como a altura, observamos que elas vida):
não tem todo este poder de previsão
Vamos explorar os fatores de
como esperávamos: dessa forma, por
predisposição ao câncer em termos
exemplo, a maioria confere aumentos
médicos, considerando os aspectos
relativamente pequenos – menos de
genéticos, ambientais e hábitos de
duas vezes – no risco de desenvolver
vida:
uma doença comum. Em contraste com
o polimorfismo, as variantes raras de
1. Fatores Genéticos
DNA – aquelas muito menos
- Mutação Genética: As mutações
frequentes em humanos do que as
genéticas hereditárias podem
SNPs – podem ter grandes efeitos sobre
aumentar a suscetibilidade ao câncer.
o risco de desenvolver algumas
Exemplos incluem mutações nos genes
doenças comuns. Por exemplo, tem sido
BRCA1 e BRCA2 associadas a câncer de
observado que algumas mutações com
mama e ovário, ou as mutações no
perda de função, cada uma rara
gene p53 relacionadas a diversos tipos
individualmente, aumentam bastante a
de câncer.
predisposição ao autismo e à
 - Instabilidade Genômica
Condições que causam instabilidade
no genoma, como a Síndrome de
Lynch, aumentam o risco de câncer
colorretal e outros.
- Oncogenes: Gene negativo, está
relacionado ao câncer, a célula cresce
fora de controle.
2. Fatores Ambientais:
- Exposição a Agentes
Carcinogênicos: Substâncias químicas
presentes no ambiente, como
poluentes industriais, compostos
presentes no tabaco e produtos
químicos agrícolas, podem danificar o
DNA e aumentar o risco de câncer.
- Radiação Ionizante: A exposição
a radiações ionizantes, como raios-X e
radiação nuclear, pode causar danos
ao DNA e predispor ao
desenvolvimento de câncer.
- Infecções: Certas infecções
virais, bacterianas e parasitárias estão
associadas a um maior risco de câncer.
Exemplos incluem o vírus do papiloma
humano (HPV) e o vírus da hepatite B e
C.
3. Hábitos de Vida:
- Tabagismo: O tabagismo é um
importante fator de risco para vários
tipos de câncer, incluindo pulmão,
boca, garganta, esôfago e outros.
- Dieta e Nutrição: Uma dieta rica
em gorduras saturadas, alimentos
processados e pobre em frutas,
vegetais e fibras está associada a um
aumento no risco de câncer.
- Inatividade Física: A falta de
atividade física regular pode contribuir
para a obesidade e aumentar o risco
de câncer.
- Consumo de Álcool: O consumo
excessivo de álcool está associado a
diversos tipos de câncer, incluindo o de
fígado, esôfago e mama.
4. Fatores Hormonais:
- Terapia Hormonal: Alguns
tratamentos hormonais, como a
terapia de reposição hormonal em
mulheres na menopausa, podem
influenciar o risco de câncer de mama
e outros tipos.
- Fatores Reprodutivos: Fatores
relacionados à reprodução, como
idade da primeira menstruação, idade
da menopausa e número de gestações,
podem impactar o risco de câncer de
mama e ovário.
Tradução e a sua relação com a
expressão gênica:
Uma vez que o mRNA tenha sido
produzido por meio da transcrição e
do processamento, a informação
presente em sua sequência de
nucleotídeos é usada para sintetizar
uma proteína. Ocorre, portanto, uma
tradução da informação contida no
RNA para uma linguagem que envolve
uma sequência de aminoácidos que
dará origem a uma proteína. Isso
ocorre por meio da aplicação de regras
que são conhecidas como código
genético. A sequência de nucleotídeos
em uma molécula de mRNA é lida em
grupos consecutivos de três. O RNA é
um polímero linear de quatro diferentes
nucleotídeos, de tal forma que existem
64 combinações (4x4x4) possíveis de
três nucleotídeos: os tripletes AAA, AUA,
AUG, e assim por diante. Entretanto,
somente 20 aminoácidos diferentes
normalmente são encontrados nas
proteínas. Ou alguns tripletes de
nucleotídeos nunca são usados, ou o
código é redundante e alguns
aminoácidos são determinados por
mais de um triplete. Essa segunda
possibilidade é, de fato, a possibilidade
correta, conforme demonstrado pelo
código genético completamente
decifrado. Cada grupo de três
nucleotídeos consecutivos no RNA é
denominado códon, e cada códon
especifica ou um aminoácido, ou a
finalização do processo de tradução. É
importante ressaltar que o código
genético é utilizado universalmente em
todos os organismos conhecidos.
➤ RIBOSSOMOS: A síntese de proteínas
é guiada pela informação presente nas
moléculas de mRNA. Para manter a fase
de leitura correta e para assegurar a
exatidão, a síntese é realizada no
ribossomo, uma maquinaria catalítica
complexa feita a partir de mais de 50
proteínas ribossomais e diversas
moléculas de RNA, os RNAs
ribossômicos (rRNAs). Uma célula
eucariótica típica contém milhões de
ribossomos em seu citoplasma. As
subunidades ribossomais eucarióticas
são montadas nos nucléolos pela
associação de rRNAs recém-transcritos
e modificados com proteínas
ribossomais, as quais foram
transportadas para o interior do
núcleo após sua síntese enocitoplasma.
As duas subunidades ribossomais são
então transportadas para o
citoplasma, onde serão unidas para
realizar a síntese de proteínas. Os
ribossomos eucarióticos e
procarióticos são muito similares tanto
em forma quanto em função. Ambos
são compostos de uma subunidade
grande e de uma subunidade pequena
que se encaixam para formar um
ribossomo completo. A subunidade
pequena fornece uma região sobre a
qual os tRNAs podem ser
eficientemente pareados sobre os
códons do mRNA, enquanto que a
subunidade grande catalisa a
formação das ligações peptídicas que
unem os aminoácidos, formando uma
cadeia polipeptídica. Quando a síntese
de proteínas não está ativa, as duas
subunidades do ribossomo estão
separadas. Elas se unem sobre uma
molécula de mRNA, normalmente
próxima à sua extremidade 5’, para
iniciar a síntese de uma proteína. O
mRNA é então puxado através do
ribossomo. Conforme seus códons
encontram os sítios ativos dos
ribossomos, a sequência nucleotídica
do mRNA é traduzida em uma
sequência de aminoácidos, usando os
tRNAs como adaptadores para
adicionar cada aminoácido na
sequência correta à extremidade da
cadeia polipeptídica em formação.
Quando 61 um códon de terminação é
encontrado, o ribossomo libera a
proteína finalizada, e suas duas
subunidades separam-se novamente.
Essas subunidades podem então ser
utilizadas para iniciar a síntese de
outra proteína sobre outra molécula de
mRNA. Um ribossomo contém quatro
sítios de ligação para moléculas de
RNA: uma para o mRNA e três
denominados sítio A, sítio P e sítio E,
que são para tRNA. Uma molécula de
tRNA adere fortemente aos sítios A e P
apenas se seus anticódons formam
pares de bases com o códon
complementar na molécula de mRNA
que está ligada ao ribossomo. Os sítios
A e P estão suficientemente próximos
para que suas duas moléculas de tRNA
são forçadas a formar pares de base
com códons adjacentes na molécula de
mRNA. Essa característica do
ribossomo mantém a fase de leitura
correta no mRNA.
➤ RNA transportador (tRNAs): A
tradução do mRNA em proteína
depende de moléculas adaptadoras
que podem reconhecer e se ligar ao
códon e, em outra região de sua
superfície, ao aminoácido. Esses
adaptadores consistem em um
conjunto de pequenas moléculas de
RNA conhecido como RNAs
transportadores (tR-NAs), cada um com
tamanho aproximadamente de 80
nucleotídeos. Quatro pequenos
segmentos do tRNA dobrado formam
dupla-hélices, produzindo uma
molécula que se assemelha a uma folha
de trevo quando desenhada
esquematicamente. Essa é a estrutura
do tRNA. Duas regiões de nucleotídeos
não- pareados situadas em cada uma
das extremidades da molécula são
cruciais para a função do tRNA na
síntese de proteínas. Uma dessas
regiões formam o anticódon, um
conjunto de três nucleotídeos
consecutivos que pareiam com o
códon complementar em uma molécula
de mRNA. A outra é uma pequena
região de fita simples na extremidade 3’
da molécula: este é o sítio onde o
aminoácido que corresponde ao códon
é ligado ao tRNA.
➱ Etapas da Tradução: A tradução
ocorre por três etapas subsequentes:
iniciação, alongamento e terminação.
➱Iniciação: A tradução de um mRNA
inicia com um códon AUG, e um tRNA
especial é necessário para iniciar a
tradução. Esse tRNA iniciador sempre
carrega o aminoácido metionina,
portanto todas as proteínas
recém-formadas possuem metionina
como seu primeiro aminoácido em
suas extremidades N-terminal, a
extremidade de uma proteína que é
sintetizada primeiro. O tRNA iniciador
pode ser especificamente reconhecido
pelos fatores de iniciação, pois tem
uma sequência nucleotídica distinta do
tRNA que normalmente carrega a
metionina. Nos eucariotos, o complexo
iniciador metionina (Met-tRNAi) é
inicialmente depositado sobre a
subunidade ribossomal pequena,
juntamente com proteínas adicionais
denominadas fatores de iniciação
eucarióticos ou eIFs. Apenas o tRNA
carregado com metionina é capaz de
se ligar firmemente à subunidade
ribossomal pequena, sem a presença
do ribossomo completo, sendo capaz
de ligar diretamente ao sítio P. A seguir
a subunidade ribossomal pequena se
liga à extremidade 5’ de uma molécula
de mRNA, a qual 62 é reconhecida em
virtude de seu quepe 5’ e de seus dois
fatores de iniciação ligados, o eIF4E e o
eIF4G. A subunidade ribossomal
pequena então se move para frente (5’
para 3’) sobre o mRNA, fazendo uma
varredura e procurando pelo primeiro
AUG. Esse movimento é facilitado pelos
fatores de iniciação adicionais, que
agem como helicases, impulsionados
por ATP. A tradução então se inicia no
primeiro AUG encontrado pela
subunidade pequena. Nesse ponto, os
fatores de iniciação dissociam-se,
permitindo que a subunidade
ribossomal grande se associe ao
complexo e complete o ribossomo. O
tRNA iniciador encontra-se, neste
momento, ligado ao sítio P, deixando o
sítio A livre. A síntese de proteína está,
portanto, pronta para iniciar. Nas
bactérias, o mecanismo para
selecionar o códon de iniciação é
diferente. Os mRNAs das bactérias não
possuem quepe 5’ para iniciar a
procura pelo início da tradução. Em vez
disso, cada mRNA bacteriano contém
um sítio de ligação ao ribossomo
específico denominado sequência
Shine-Dalgarno, o qual está localizado
uns poucos nucleotídeos acima do AUG
em que a tradução deve iniciar. Essa
sequência nucleotídica forma pares de
bases com o rRNA 16S da subunidade
ribossomal pequena para posicionar o
códon de iniciação AUG no ribossomo.
Um grupo de fatores de iniciação da
tradução orquestra essa interação e a
subsequente montagem da
subunidade ribossomal grande para
completar o ribossomo. Diferentemente
de um ribossomo eucariótico, um
ribossomo bacteriano pode facilmente
ligar-se de modo direto a um códon de
iniciação que esteja no interior de uma
molécula de mRNA, desde que um sítio
de ligação ribossomal o preceda por
diversos nucleotídeos. Como resultado,
os mRNAs bacterianos com frequência
são policistrônicos, ou seja, codificam
várias proteínas diferentes, todas
traduzidas a partir da mesma molécula
de mRNA. Em contraste, um mRNA
eucariótico geralmente codifica uma
única proteína (monocistrônico).
➱Alongamento: Uma vez que a síntese
de proteína tenha sido iniciada, cada
novo aminoácido é adicionado à
cadeia em extensão em um ciclo de
reações contendo quatro passos
iniciais: ligação do tRNA, formação da
ligação peptídica, translocação das
subunidades grande e pequena. Como
resultado dos dois passos de
translocação, o ribossomo completo
move-se três nucleotídeos sobre o
mRNA e é posicionado para dar início
ao próximo ciclo. Partindo do princípio
que alguns aminoácidos já foram
ligados entre si e que já existe uma
molécula de tRNA no sítio P no
ribossomo ligada covalentemente à
extremidade da cadeia polipeptídica
em crescimento, no passo 1 do
alongamento, um tRNA carregando o
próximo aminoácido da cadeia liga-se
ao sítio A ribossomal, formando pares
com o códon do mRNA lá posicionado.
Dessa forma, o sítio P e o sítio A contêm
tRNAs adjacentes ligados. No passo 2, a
extremidade carboxila da cadeia
polipeptídica é liberada do tRNA no
sítio P pelo rompimento da ligação
altamente energética entre o tRNA e
seu aminoácido. A carboxila é, então,
ligada ao grupo amino livre do
aminoácido ligado ao tRNA no sítio A,
formando uma nova ligação peptídica.
Essa reação central da síntese de
proteínas é catalisada por uma
peptidiltransferase contida na
subunidade ribossomal grande. No
passo 3, a subunidade grande se move
em relação ao mRNA que está preso à
subunidade pequena, o que interfere
nas hastes aceptoras dos dois tRNAs
que se encontram nos sítios E e P da
subunidade grande. No passo 4, outra
série de modificações conformacionais
move a subunidade pequena e o mRNA
a ela conectado exatamente três
nucleotídeos, reposicionando o
ribossomo de tal forma que ele está
pronto para receber o próximo
aminoacil-tRNA. O passo 1 é então
repetido com a chegada de um novo
aminoacil-tRNA, e 63 assim por diante.
Dois fatores de extensão entram e
saem do ribossomo a cada ciclo, cada
um hidrolisando GTP em GDP e levando
a modificação de conformações no
processo. Esses fatores são
denominados EF-Tu e EF-G em
bactérias, e EF1 e EF2 em eucariotos.
Sob determinadas condições in vitro,
os ribossomos podem ser induzidos a
realizar a síntese proteica sem a ajuda
desses fatores de extensão e da
hidrólise de GTP, mas essa síntese é
muito lenta, ineficiente e inexata. O
acoplamento de alterações mediadas
pela hidrólise de GTP nos fatores de
extensão às transições entre os
diferentes estados do ribossomo
aumenta bastante a velocidade do
processo. Os ciclos de associação dos
fatores de extensão, hidrólise de GTP e
dissociação asseguram que as
mudanças conformacionais ocorram
em um sentido “para a frente” e, dessa
maneira, a tradução pode proceder
com maior eficiência.
➱ Terminação: O final da mensagem
codificadora de uma proteína é
sinalizado pela presença de um de três
códons de terminação: UAA, UAG ou
UGA. Eles são reconhecidos por um
tRNA e não determinam um
aminoácido. Em vez disso, sinalizam
para o ribossomo o final da tradução.
As proteínas conhecidas como fatores
de terminação ligam-se a qualquer
ribossomo que possua um códon de
terminação posicionado no sítio A, e
esta ligação força a
peptidil-transferase no ribossomo a
catalisar a adição de uma molécula de
água em vez de um aminoácido no
peptidil-tRNA. Essa reação libera a
extremidade carboxila da cadeia
polipeptídica em crescimento de sua
conexão a uma molécula de tRNA.
Tendo em vista que apenas essa
conexão normalmente mantém unido o
polipeptídio em crescimento ao
ribossomo, a cadeia de proteína
finalizada é imediatamente liberada no
citoplasma. O ribossomo, então, libera
o mRNA e separa-se nas duas
subunidades grande e pequena, as
quais podem associar-se sobre essa
mesma ou outra molécula de mRNA
para iniciar um novo ciclo de síntese de
proteínas.
➤ POLIRRIBOSSOMOS: A síntese da
maioria das moléculas de proteína leva
entre 20 segundos e alguns minutos.
Porém, mesmo durante esse período
bastante curto, é comum ocorrerem
iniciações múltiplas sobre cada
molécula de mRNA que está sendo
traduzida. Assim que o ribossomo
precedente tenha traduzido o
suficiente da sequência nucleotídica
para mover-se, a extremidade 5’ da
molécula de mRNA é capturada por um
novo ribossomo. As moléculas de mRNA
que estão sendo traduzidas são,
consequentemente, de modo geral
encontradas sob a forma de
polirribossomos, também conhecidos
como polissomos. Estas estruturas
consistem em grandes arranjos
citoplasmáticos 64 compostos de
vários ribossomos separados por cerca
de 80 nucleotídeos sobre uma única
molécula de mRNA. Essas iniciações
múltiplas permitem que a célula
produza muito mais moléculas de
proteína em um espaço de tempo
determinado do que seria possível se
cada ribossomo tivesse que completar
o processo antes que o próximo
ribossomo o iniciasse. Tanto as
bactérias quanto os eucariotos
utilizam polissomos, e ambos
empregam estratégias adicionais para
acelerar ainda mais a taxa de síntese
proteica. Tendo em vista que o mRNA
bacteriano não necessita de
processamento e que ele está acessível
aos ribossomos ao mesmo tempo em
que está sendo produzido, os
ribossomos podem ligar se à
extremidade livre de uma molécula de
mRNA bacteriano e iniciar sua
tradução, mesmo antes que a
transcrição deste RNA esteja finalizada,
seguindo bastante próximos da
RNA-polimerase, à medida que ela se
move sobre o DNA. Em eucariotos as
extremidades 5’ e 3’ do mRNA
interagem. Portanto, assim que um
ribossomo se dissocia, suas duas
subunidades estão em uma posição
ótima para reiniciar a tradução sobre a
mesma molécula de mRNA.
Regulação do ciclo celular e sua
relação com a p53:
Os danos no DNA desencadeiam uma
resposta complexa no ciclo celular,
influenciando diretamente a taxa de
proliferação celular. A progressão do
ciclo celular é controlada por diversos
sinais intracelulares e extracelulares,
sendo os danos no DNA um fator
crucial. Esses danos, resultantes de
reações químicas espontâneas, erros
na replicação do DNA ou exposição a
fatores ambientais, desencadeiam uma
via de sinalização envolvendo
proteínas-cinase como ATM, ATR, Chk1 e
Chk2.
A ativação dessas proteínas-cinase
leva à fosforilação de proteínas-alvo,
incluindo p53, uma proteína reguladora
central. P53 estimula a transcrição de
p21, uma proteína CKI, que inibe as
atividades de complexos G1/S-Cdk e
S-Cdk, impedindo a entrada no ciclo
celular. Além disso, a resposta ao dano
do DNA envolve a inibição da atividade
da fosfatase proteica Cdc25, crucial
para a ativação da M-Cdk no início da
mitose.
Problemas durante a replicação do
DNA, como a depleção de nucleotídeos,
levam à interrupção do ciclo celular,
sendo esses eventos monitorados pelos
mecanismos de reparo do DNA. O
acúmulo de danos no DNA ao longo do
tempo, se não reparado
adequadamente, pode resultar em
mutações genéticas, aumentando o
risco de câncer. A ataxia telangiectasia,
uma doença genética, ilustra a
importância da resposta ao dano do
DNA na prevenção do câncer.
Em casos graves de lesões no DNA, a
resposta varia entre organismos
unicelulares e multicelulares. Enquanto
os unicelulares podem interromper o
ciclo celular para tentar reparar os
danos, às células multicelulares
priorizam a saúde do organismo e
podem induzir a apoptose em células
com danos graves. A p53 desempenha
um papel crucial nesse processo,
sendo ativada para induzir a morte
celular programada.
Além disso, células humanas têm um
número limitado de divisões antes de
entrar em senescência celular
replicativa, associada à diminuição
progressiva dos telômeros. A
telomerase, enzima responsável pela
síntese dos telômeros, é ausente em
muitas células humanas, contribuindo
para a senescência. Em células Mutações nos genes que expressam
cancerosas, a capacidade de produzir
as proteínas reguladoras:
telomerase permite a manutenção da
função dos telômeros, evitando a As mutações nos genes que expressam
senescência. as proteínas reguladoras podem
Anormalidades na sinalização ocorrer de várias maneiras e em
mitogênica, muitas vezes causadas por diferentes níveis do processo genético.
mutações em genes como Ras e Myc, Vamos explorar esse processo
podem levar à interrupção do ciclo detalhadamente:
celular ou apoptose em células
normais. No entanto, em células 1. Origem das Mutações:
cancerosas, esses mecanismos de - Erro de Replicação do DNA:
proteção podem ser inativados por Durante a replicação do DNA, as
mutações em genes essenciais, enzimas responsáveis pela
permitindo a sobrevivência e duplicação podem cometer
proliferação de células mutantes com erros, como a inserção de bases
sinais de proliferação hiperativa. O incorretas.
sistema protetivo é frequentemente - Radiação e Agentes
inativado em células cancerosas por Mutagênicos: Exposição à
mutações em genes que codificam radiação ionizante, produtos
componentes essenciais dos químicos mutagênicos e
mecanismos de bloqueio, como Arf, p53 agentes ambientais podem
e proteínas associadas. causar danos diretos no DNA,
levando a mutações.
- Mecanismos Celulares Internos:
Processos normais dentro da
célula, como reações
metabólicas, podem gerar
radicais livres e substâncias
químicas capazes de danificar o
DNA.

2. Tipos de Mutações:
- Substituição de Bases: Uma
base nitrogenada é substituída
por outra. Pode ser:
- Silenciosa Não afeta a
sequência de aminoácidos.
- Missense:Altera um aminoácido
na proteína resultante.
Quando o DNA é lesionado, várias proteínas-cinase são - Nonsense:Cria um códon de
recrutadas ao local do dano e dão início a uma via de parada prematuro, levando a
sinalização que provoca a interrupção do ciclo celular. A
primeira cinase no local do dano é a ATM ou a ATR,
uma proteína truncada.
dependendo do tipo de dano. Outras proteínas-cinase, - Inserção ou Deleção de Bases
denominadas Chk1 e Chk2, são, em seguida, recrutadas
e ativadas, resultando na fosforilação da proteína
(Indels): Adição ou remoção de
reguladora de transcrição p53. A Mdm2 normalmente se uma ou mais bases no DNA,
liga à p53 e promove sua ubiquitinação e degradação afetando a leitura do códon.
nos proteassomos. A fosforilação da p53 bloqueia sua
ligação à Mdm2; o resultado é o acúmulo de altos níveis
de p53, estimulando a transcrição de vários genes, 3. Mecanismos de Reparo do DNA:
incluindo o gene que codifica a proteína CKI p21. A p21
se liga e inativa os complexos de G1 Cdk e S-Cdk,
- Sistemas de Reparo por
parando a célula em G1 /S-. Em alguns casos, os danos Correspondência: Corrigem
no DNA também induzem a fosforilação da Mdm2 ou um
decréscimo na produção da Mdm2, o que ocasiona um
erros de replicação,
aumento ainda maior da p53 substituindo a base errada.
- Excisão de Nucleotídeos: Remove
segmentos danificados de DNA
e os substitui por novos.
4. Consequências das Mutações
nos Genes Reguladores:
- Proteínas Reguladoras:
Mutações podem afetar a
estrutura ou função das
proteínas reguladoras,
comprometendo sua
capacidade de controlar a
expressão gênica;
Mutação no TSG, que inibe a
PRB;
Deleção da p16;
Alterações no eixo da pRB;
Superexpressão da Aurora
quinase, pode levar a neuploida
que pode demarcar uma
proliferação especifica.
- Vias de Sinalização: Mutações
em genes que participam de
vias de sinalização celular
podem levar a uma ativação ou
inibição inadequada,
influenciando o ciclo celular e
outros processos celulares.
5. Ciclo Celular e Proliferação
Celular:
- p53: Mutações no gene TP53
(que codifica a proteína p53) são
frequentemente encontradas em
cânceres. A p53 atua como um
supressor tumoral, regulando o
ciclo celular e promovendo a
reparação do DNA. Mutações
neste gene podem resultar na
perda da função de supressão
tumoral.
6. Seleção Natural e Câncer:
- Proliferação Descontrolada: As
células com mutações que
conferem vantagens
proliferativas podem ser
selecionadas, contribuindo para
o desenvolvimento do câncer.
- Inibição de Mecanismos
Antitumorais: Mutações podem
desativar mecanismos celulares
que normalmente impediriam o
crescimento descontrolado.
7. Câncer e Genes Oncogênicos:
- Oncogenes: Algumas mutações
podem converter
proto-oncogenes em oncogenes,
promovendo o crescimento
celular descontrolado.
- Inativação de Supressores
Tumorais: Mutações em genes
supressores tumorais, como p53
e BRCA1, podem ocorrer,
removendo os freios normais
sobre a divisão celular.
Predisposição genética ao erro na
divisão celular:
A predisposição genética ao erro na
divisão celular pode ser influenciada
por diversos fatores genéticos que
afetam os processos envolvidos na
replicação e divisão celular. Aqui estão
alguns aspectos relacionados a essa
predisposição genética:
● Integridade do DNA:
Reparo do DNA: Genes envolvidos nos
mecanismos de reparo do DNA são
cruciais para corrigir danos. Mutações
nesses genes podem levar a uma maior
propensão a erros não corrigidos.
Estabilidade do Genoma: Proteínas
envolvidas na manutenção da
estabilidade genômica, como aquelas
associadas aos telômeros e
centrossomos, podem ser influenciadas
geneticamente.
● Regulação do Ciclo Celular:
Genes do Ciclo Celular: Mutações em
genes reguladores do ciclo celular,
como os que controlam a transição
entre fases (G1, S, G2, M), podem levar a
uma divisão celular desregulada.
Supressores Tumorais: Alterações
genéticas nos supressores tumorais,
como p53 e p16, podem afetar a
capacidade de controlar o ciclo celular
e prevenir a replicação defeituosa.
● Checkpoint de Dano ao DNA:
Genes de Checkpoint: Componentes do
checkpoint de dano ao DNA, que
pausam a divisão celular para permitir
reparos, podem ser geneticamente
influenciados.
ATM e ATR: As proteínas cinases ATM e
ATR, que respondem a danos no DNA,
têm predisposição genética associada.
● Sinalização Celular:
Cascata de Sinalização: Mutações em
genes que participam das vias de
sinalização celular podem influenciar a
resposta a sinais que regulam a divisão
celular.
Proteínas Quinases: Mutações em
proteínas quinases envolvidas na
sinalização intracelular podem afetar a
transdução de sinais críticos.
● Expressão Gênica Anômala:
Regulação da Expressão Gênica:
Variantes genéticas que afetam a
regulação da expressão gênica podem
levar a níveis inadequados de
proteínas envolvidas na divisão celular.
Susceptibilidade a Mutagênicos
Ambientais:
Metabolismo de Xenobióticos:
Variações genéticas no metabolismo
de substâncias químicas ambientais
podem influenciar a resposta a
mutagênicos, aumentando a
predisposição a danos no DNA.
● Histórico Familiar de Câncer:
Hereditariedade: Algumas mutações
que aumentam a predisposição a erros
na divisão celular podem ser
Diferenciação celular:
Conjunto de processos que fazem uma
célula indiferenciada se tornar
especializada!
A diferenciação celular irá começar nas
primeiras fases do desenvolvimento
embrionário. De início, o citoplasma é
segmentado, ou seja, sofre clivagens
sucessivas fazendo com que as células
filhas se tornem cada vez menores e o
volume da massa de células total não
aumente. Deste modo, ao final de algumas
divisões o embrião adquire o nome de
mórula. Uma mórula humana, por exemplo,
é formada por uma massa de 16 células ou
blastômeros. Após o estágio de mórula, as
células continuam a se dividir, passando a
produzir um líquido que se acumula no
interior do embrião formando aí uma
cavidade chamada blastocele. O que
converte o embrião em uma esfera oca e o
torna a blástula.
A partir da blástula, o embrião passa
por complexas transformações que
culminam no aparecimento de três
linhagens de células distintas: o
endoderma, o mesoderma e o
ectoderma, o que caracteriza o estágio
de gástrula.
↳ Todas as células que
compõem o embrião são
potencialmente capazes de se
desenvolver em qualquer tipo
celular.
Isto quer dizer que os blastômeros
ainda não estão diferenciados. A
fixação do destino funcional das
células tem início na gastrulação,
quando acontecem modificações nas
células embrionárias que determinam
seu futuro. Por exemplo, se tomarmos
um blastômero de Drosophila e o
implantarmos na porção anterior de
um embrião de Drosophila em fase
mais adiantada de desenvolvimento,
este blastômero irá se dividir e se
transformará em uma célula do sistema
nervoso assim como as que já se
encontravam neste ambiente. Porém, se
esta operação for feita depois da
gastrulação, as células irão se
desenvolver com características
próprias do seu local destinado.
Logo, ainda nas fases iniciais do
desenvolvimento embrionário, antes
que a diferenciação aconteça, ocorre a
chamada determinação celular, que
decide o destino da célula.
Todas as informações necessárias para
a formação de uma célula
encontram-se “impressas” em seus
genes e que as células adquirem sua
identidade à medida que o
desenvolvimento embrionário avança.
No princípio havia duas possibilidades:
1. a perda progressiva de genes
desnecessários ao metabolismo
da célula diferenciada, à medida
que a diferenciação fosse
ocorrendo;
2. a ativação dos genes
necessários acompanhada da
inativação daqueles
desnecessários durante o
processo de diferenciação
celular.
Se a primeira possibilidade fosse
correta, a diferenciação celular seria
consequência da perda de informação
genética e a diferenciação celular não
resulta na perda de informação
genética, como inicialmente sugerido.
Isso é evidenciado pelo fato de que
todas as células de um organismo,
independentemente do tipo, possuem
os mesmos genes. Experimentos de
transplante nuclear em anfíbios na
década de 50 mostraram que ao inserir
o núcleo de uma célula do epitélio
intestinal de um girino em um ovócito
anucleado de rã, o ovócito
transplantado começou a se dividir e
se desenvolveu em um girino normal,
indicando a preservação da
informação genética.
Então a possibilidade que restou seria
a dois, e a correta, assim o caminho
que conduz uma célula desde o estado
embrionário mais inicial até sua total
especialização consiste em uma série
de expressões e expressões gênicas
controladas.
Sabe-se que a determinação celular
pode acontecer de várias maneiras:
1. segregação citoplasmática de
moléculas determinantes no
momento da clivagem do ovo:
Esta segregação ocorre de forma
assimétrica, separando diferentes
componentes citoplasmáticos que
tornarão o citoplasma das células
formadas qualitativamente diferentes.
E isso, faz com que as características à
medida que as clivagens iniciais
ocorrem, os novos blastômeros
recebam diferentes conjuntos destes
componentes citoplasmáticos.
Os componentes determinantes
citoplasmáticos são moléculas capazes
de influenciar diretamente a atividade
dos genes, definindo deste modo, quais
as proteínas que serão produzidas na
célula. Como cada blastômero recebe
um conjunto diferente destes
determinantes citoplasmáticos, em
cada uma destas células um conjunto
diferente de proteínas será produzido.
Assim, s. Uma vez que são as proteínas
que controlam todo o metabolismo
celular, podemos concluir que, a
linhagem celular que derivou daquele
blastômero e que recebeu fatores que
controlam os genes de proteínas
relacionadas.
2. As células também podem sofrer
diferencialmente a influência de
substâncias presentes no meio,
os morfógenos:
Nos embriões de mamíferos, por
exemplo, durante seu translado pela
tuba uterina, suas células podem ser
alcançadas por diferentes
concentrações de substâncias
presentes no meio, a depender de sua
localização na mórula. Esta
diferenciação se deve ao fato de que
altas concentrações do morfógeno
ativariam grupos de genes diferentes
daqueles ativados por baixas
concentrações.
3. À indução embrionária, que
envolve a interação entre
células ou tecidos,
condicionando células próximas
a se especializarem em uma
determinada direção:
Nestes estágios mais adiantados, já é
evidente que as células embrionárias
se distribuem em três diferentes
camadas superpostas. Esta
organização dá lugar a relações de
vizinhança entre os grupos celulares o
que torna 10 possível a influência de
algumas células sobre outras. Este
mecanismo de diferenciação resulta da
ação de células que agem enviando,
por meio de moléculas por elas
produzidas, sinais que estimulam
células vizinhas a se diferenciarem em
determinada direção. Neste caso o
estímulo pode levar a diferenciação de
novas células semelhantes àquelas que
produziram o estímulo.
Com base no que foi visto, antes de se
diferenciarem, as células adquirem um
“compromisso” de se modificarem em
uma dada direção. Portanto, a
diferenciação só se efetiva em um
período após a célula ter sofrido sua
determinação.
Uma outra característica relacionada
ao grau de especialização celular: a
potencialidade, que é a capacidade
que a célula tem de originar outros
tipos celulares. Assim, pode-se concluir
que, em qualquer célula, quanto maior
sua potencialidade, menor seu grau de
diferenciação e vice-versa. Nesse caso,
a célula-ovo, assim como os primeiros
blastômeros da maioria das espécies
de animais, possuem 100% de
potencialidade e apresentam grau zero
de diferenciação. Por isso, podem
originar qualquer tipo celular e são
consideradas células totipotentes.
Estas são as chamadas células tronco
embrionárias.
No outro extremo encontram-se, por
exemplo, as células nervosas, as do
cristalino e as do músculo cardíaco,
que são 100% diferenciadas e têm
potencialidade igual a zero. O grau de
especialização destas células é tão
grande que elas perderam até a
capacidade de divisão mitótica.
Estes exemplos correspondem a casos
extremos visto que a maioria das
células exibe graus intermediários de
diferenciação e potencialidade Esta
variação no grau de diferenciação é
evidenciada em vários tecidos como na
pele, no epitélio intestinal e na medula
óssea, sendo crucial para a
manutenção destes e de boa parte dos
tecidos. O que fornece esta
propriedade a estes tecidos é a
presença de um conjunto de células
tronco, que por serem distintas das
células tronco embrionárias também
são denominadas células fonte ou stem
cells. Este grupo de células, específicas
para cada tipo de tecido, se divide
continuamente durante a vida do
animal, produzindo novas células fonte,
para manter seu estoque, assim como
outras células diferenciadas, que irão
repor aquelas que foram perdidas ou
eliminadas do tecido a que pertencem.
Células Tronco:
O termo célula-tronco, do inglês stem
cell, diz respeito a células precursoras
que possuem a capacidade de
diferenciação e auto-renovação
ilimitadas, podendo dar origem a uma
variedade de tipos teciduais.
Normalmente, entre uma célula-tronco
e sua progênie totalmente diferenciada
existe uma população intermediária
conhecida como células amplificadoras
transitórias, que possuem uma
capacidade proliferativa mais limitada
e um potencial de diferenciação
restrito, isso explica como um tecido
pode manter uma produção elevada de
células diferenciadas a partir de um
pequeno número de células-tronco.
Geralmente, as células-tronco possuem
um ciclo celular lento, muitas das
células em divisão em um determinado
tecido são células amplificadoras
transitórias, que estão destinadas a se
diferenciar após um determinado
número de divisões.
As células-tronco estão presentes no
embrião, quando são designadas
células-tronco embrionárias, mas
podem também ser encontradas em
tecidos adultos, originando as
células-tronco adultas.
Levando-se em consideração algumas
distinções:
1. nível de plasticidade;
2. diferentes vias podem seguir;
3. para qual porção de um
organismo funcional elas podem
contribuir;
Por esses fatores as células-tronco
podem ser classificadas em três:
 1. Totipotentes;
2. Pluripotentes;
3. Multipotentes.
Totipotentes:
Podem originar tanto um organismo
totalmente funcional, como qualquer
tipo celular do corpo, inclusive todo o
sistema nervoso central e periférico.
Entretanto, estas células são efêmeras
e desaparecem poucos dias após a
fertilização.
● embrião recém-formado;
● têm potencial para originar até
mesmo as células do folheto
extra embrionário.
Pluripotentes:
São células capazes de originar
qualquer tipo de tecido sem, no
entanto, originar um organismo
completo, visto que não podem gerar a
placenta e outros tecidos de apoio ao
feto. Formam a massa celular interna
do blastocisto depois dos quatro dias
de vida e participam da formação de
todos os tecidos do organismo.
● utilizadas na criação de animais
transgênicos;
● variedade de aplicações clínicas
e comerciais;
● Presentes em indivíduos adultos;
são oriundas da medula óssea, e
podem gerar células do sangue,
ossos, cartilagem, músculo, pele
e tecido conjuntivo.
● Pluripotente induzida
Multipotentes:
São um pouco mais diferenciadas,
presentes no indivíduo adulto, com
capacidade de originar apenas um
limitado número de tipos teciduais.
Estas células são designadas de
acordo com o órgão de que derivam e
podem originar apenas células
daquele órgão, possibilitando a
regeneração tecidual.
Sua origem pode ser dividida em
células tronco embrionárias e células
germinativas embrionárias.
● Avanços nas pesquisas têm
questionado a existência desta
categoria de células-tronco, pois
células anteriormente vistas
como multipotentes, como as
células-tronco neurais, agora se
revelam pluripotentes.
Unipotentes:
Essas células-tronco, diferentemente
das demais, não apresentam grande
capacidade de diferenciação, sendo
capazes apenas de formar células do
tecido ao qual pertencem.
Bioética em relação às células
tronco:
LEI 11,105/2005:
Com a aprovação da Lei de
Biossegurança, a realização de
pesquisas com células-tronco
embrionárias passa a ser permitida no
Brasil, todavia, a lei estabelece algumas
restrições para pesquisas com
células-tronco embrionárias, como:
… os embriões precisam estar
congelados há pelo menos três anos;
só podem ser usadas por meio de
consentimento dos genitores; não será
permitido o comércio de embriões, nem
sua produção e manipulação genética,
e ainda, são proibidas as clonagens
terapêuticas, para aplicação em
pesquisas e a reprodutiva. As terapias
com o uso de células-tronco ainda
estão em fase de pesquisa, podendo
ser aplicadas somente de forma
experimental por pesquisadores cujo
projeto de pesquisa tenha sido
aprovado previamente nos Comitês de
Ética em Pesquisa (CEPs)
● Existem duas linhas de
pensamento:
1. Pesquisadores;
2. Conservadores.

Reparo acoplado à transcrição:

Reparo do DNA: Há o acoplamento do reparo de uma
lesão de DNA a RNApolimerase.
Reparo por excisão de bases:
Ela vai parar nas lesões no DNA e, por
DNA- glicosilases: capaz de reconhecer
meio de proteínas acopladoras,
um tipo específico de bases alteradas
direciona o reparo nesses sítios.
no DNA e de catalisar sua remoção
(específico para a fita-molde do DNA
hidrolítica. 6 tipos de enzimas que
que está sendo transcrito). Importante
removem: Cs desaminados, As
para os humanos por, sem ela, pode
desaminados, diferentes tipos de bases
gerar a síndrome de Cockayne, em que
alquiladas ou oxidadas, bases com
o indivíduo afetado possui retardo no
anéis rompidos e bases nas quais a
crescimento, retardo mental
ligação dupla C-C foi acidentalmente
progressivo, anormalidades
convertida em ligações simples.
esqueléticas e severa sensibilidade à
DNA-glicosilase vai procurar a lesão em
luz.
todas as faces da base, de modo que,
Desaminação:
uma vez reconhecida a lesão, a enzima
perda de amina e formação de uma
removerá a base. Na ausência de base,
outra base, causando dano.
a AP endonuclease irá clivar a ligação
Polimerase Translesão:
fosfodiéster, removendo e corrigindo a
Quando o DNA está muito danificado e
lesão. Para tal, a DNA-polimerase vai
os reparos anteriores não são
adicionar um novo nucleotídeo, e a
suficientes para corrigí- lo, em
ligase os unirá.
emergências, as células empregam
Reparo por excisão de nucleotídeos:
polimerases de reserva, versáteis,
Qualquer alteração volumosa no DNA,
porém menos precisas para replicar
incluindo aquelas produzidas pela
durante a lesão do DNA.
ligação covalente de bases do DNA
Não são tão precisa quanto as
com grandes hidrocarbonetos, assim
normais, portanto: não possuem
como vários dímeros de pirimidinas
atividade de correção de
causados pela ação solar.
leitura
Complexo multienzimático verifica o
- são menos criteriosas do que as
DNA à procura de distorções na
normais na escolha do nucleotídeo a
dupla-hélice , em vez de alterações em
ser inicialmente
uma única base. Uma vez encontrada
incorporado
uma lesão volumosa, a ligação
Desse modo, são capazes de adicionar
fosfodiéster é clivada nos dois lados da
apenas um ou poucos nucleotídeos
distorção, a DNA-helicase remove o
antes da polimerase replicativa de alta
oligonucleotídeo de fita simples
precisão continuar a síntese de DNA.
contendo a lesão. O intervalo
produzido pela helicase é
corrigido pela DNA-polimerase e pela
DNA-ligase.
Dímeros de pirimidina= T-T, T-C e C-C.

Quando as duas fitas da dupla-hélice
são quebradas, não havendo fita molde
para reparo, são causada por radiação
ionizante, erros de replicação, agentes
oxidantes, há duas formas de reparo:
Ligação de extremidades não
homólogas:
As extremidades da quebra são
simplesmente justapostas e religadas,
geralmente com a perda de um ou mais
nucleotídeos no sítio da junção.
→ As lesões do DNA causam o retardo
do ciclo celular até que seja reparado o
dano.
Recombinação Homóloga:
Além de garantir um reparo preciso das
quebras na fita dupla, ela pode
rearranjar as sequências de DNA,
alterando a versões específicas de
genes presentes no genoma de um
indivíduo, assim como o momento e o
nível de sua expressão.
Troca de fitas do DNA entre um par de
sequências de DNA de duplex
homólogos, ou seja, segmentos de
dupla hélice com sequência
nucleotídica semelhantes ou idênticas.
Isso permite que um segmento do
duplex de DNA atue como um molde
para recuperar uma informação
perdida ou danificada em outro
segmento de um duplex de DNA.
- Mecanismo mais versátil e
preciso.
- Durante a meiose, catalisa o
crossing over.
Ocorrem apenas entre dois duplex de
DNA com extensas regiões de
sequências similares. O pareamento de
bases é responsável por esse
requerimento, e os dois duplex de DNA
testam suas sequências com a do
outro para ver o quão próximo estão
suas sequências de bases
(não precisa estar perfeito, mas o mais
próximo possível)
- sem perda ou alteração de
nucleotídeos no local de
reparação.
Ocorre normalmente logo após a
replicação, uma vez que as duas
moléculas-filhas estão bem próximas e
uma pode atuar como molde da outra.
1- as extremidades do DNA danificado
são removidas (recortadas) por
nucleases especializadas produzindo
uma extremidade de fita simples 3'.
2- troca de fitas (invasão de fitas), em
que uma das extremidades 3' da
molécula de DNA quebrada abre
caminho até o duplex-molde e busca a
sequência homóloga pelo pareamento
de bases.
● Rad51- proteínas que realizam a
troca de fitas (RecA em
procariotos) 1a. -liga-se de
forma cooperativa `fita simples
invasora, formando um
filamento proteína
DNA que força o DNA em uma
conformação não comum:
grupo de 3 nucleotídeos consecutivos
são mantidos unidos de forma como
na dupla hélice convencional, porém
entre triplos adjacentes, à cadeia
principal de DNA é distorcida e
estendida.
2a.- esse ligamento incomum entre
proteína
-DNA liga-se ao duplex de DNA e
estende a
dupla-hélice, que se desestabiliza,
facilitando a separação das fitas.
3a.-fita invasora avalia a sequência do
duplex do pareamento de bases
convencional mantendo-a na forma
estendida de três bases são separados
entre si por uma cadeia principal
distendida e torcida. Na próxima etapa,
a fita simples ligada à RecA, liga-se ao
duplex de DNA e o desestabiliza,
permitindo que a fita simples teste a
sequência pelo pareamento dos
grupos de três bases por vez. Se não
há pareamento, a fita simples de DNA
ligada à RecA dissocia-se rapidamente
e começa uma nova busca. Caso um
pareamento extenso seja encontrado, a
estrutura é desmontada pela hidrólise
do ATP, resultando na
dissociação da proteína RecA e na
troca de uma fita simples de DNA por
outra, formando um heteroduplex.
→ A hidrólise de ATP é necessária para
desmontar a RecA do complexo com as
moléculas de DNA. (antes não precisa,
já que a procura por dano acontece
meramente pela colisão) 3-após o
pareamento das bases, uma
DNA-polimerase com alta precisão
alonga a fita invasora usando a
informação fornecida pela
molécula-molde não danificada,
corrigindo o DNA danificado.
4-Deslocamento da fita, síntese
adicional do reparo e ligação:
regeneram as duas hélices duplas de
DNA originais e completam o processo
de reparo.
Outras funções:
- resgate de forquilhas de
replicação de DNA estacionárias
ou quebradas.
Morte celular:
A morte celular programada, também
conhecida como apoptose, por mais
estranho que possa parecer para você,
também constitui um destino celular, e
por sinal, um destino essencial para o
organismo. Se não fosse pela apoptose,
talvez a cauda dos girinos ainda
persistisse na rã adulta. Com certeza
os dedos de nossas mãos seriam
ligados por membranas interdigitais,
como nos patos e nossos cérebros
estariam cheios de conexões elétricas
desnecessárias. De fato, a maioria das
células geradas durante o
desenvolvimento do cérebro e de
alguns outros órgãos e tecidos, morre
ainda durante a fase embrionária. Mas
o papel da morte celular vai além desta
fase. No indivíduo adulto, se a
multiplicação das células não é
compensada de modo preciso por
perdas, os tecidos e órgãos crescem
sem controle, o que pode levar
inclusive ao desenvolvimento do
câncer. Portanto encerraremos esta
disciplina mostrando que a morte de
algumas células em um dado
organismo constitui um processo
essencial para que o conjunto
sobreviva.
Um fato é que nem sempre a morte das
células é um processo fisiológico
normal, totalmente regulado. As células
também morrem de modo
não-fisiológico, o que causa a maioria
das doenças.
A morte é considerada patológica ou
“acidental” quando a célula é impedida
de manter seus processos vitais por
lesões físicas ou químicas causadas
por fatores externos, como
temperaturas extremas, radiação,
traumas, produtos tóxicos e falta de
oxigênio (como no infarto do miocárdio
e na gangrena). As lesões podem ter
ainda origem biológica, como nas
infecções por bactérias ou vírus. Esse
tipo de morte celular é chamado de
necrose e tem como características:
aumento do volume celular, agregação
da cromatina, desorganização do
citoplasma, perda da integridade da
membrana plasmática e consequente
ruptura celular. A ruptura libera no
tecido vizinho o conteúdo celular, rico
em proteases (enzimas que “cortam”
outras proteínas) e outras substâncias
tóxicas. Além da toxicidade direta para
as células vizinhas, o derrame gera
substâncias que atraem células do
sistema imune, causando intensa
reação inflamatória. A inflamação,
típica da necrose, é importante para
limitar infecções e remover restos de
células, mas a atividade e as secreções
dos glóbulos brancos podem também
danificar tecidos normais vizinhos, às
vezes de maneira devastadora.

● APOPTOSE:
A morte celular fisiológica é totalmente
distinta da necrose. Em primeiro lugar
a célula não incha. Ao contrário,
encolhe-se devido à condensação do
citoplasma e das organelas sem,
contudo, haver alterações em suas
estruturas. Devido à ruptura dos
filamentos do citoesqueleto, a célula
apoptótica torna-se esférica e
destaca-se das células vizinhas e
muitas vezes começa a apresentar
bolhas em sua superfície (processo
chamado de zeiose). As mudanças mais
dramáticas são vistas no núcleo onde a
cromatina, normalmente dispersa,
forma um ou mais aglomerados nas
bordas internas da membrana nuclear.
O DNA nuclear também pode ser
fragmentado por uma endonuclease
que gera cortes entre os nucleossomos,
produzindo fragmentos de tamanhos
diferentes, mas sempre múltiplos de 200
pares de bases. Com a dissociação da
lâmina nuclear o núcleo se fragmenta e
suas partes são englobadas nas
bolhas que surgem e se desprendem
da superfície celular. Estas frações
celulares são denominadas corpos
apoptóticos. Além das diferenças
morfológicas, outra característica
marcante é que a apoptose é
“silenciosa”. Não há, como na necrose,
o “alvoroço” da inflamação. Em geral, as
células apoptóticas são reconhecidas
por macrófagos (um tipo de glóbulo
branco presente em todos os tecidos) e
ingeridas antes que se desintegram.
Isso evita o derrame do conteúdo
celular e, assim, não há inflamação e
lesão do tecido, garantindo o seu
funcionamento normal. Mas nem todas
as células apoptóticas são logo
removidas, podendo continuar no local
às vezes por toda a vida sem, contudo,
causar dano ao tecido. É o caso dos
queratinócitos, células da camada
externa da pele. Ao migrar de camadas
mais profundas para a superfície, eles
morrem por apoptose, mas no
processo, substituem seu conteúdo
pela proteína queratina e ganham uma
“capa” impermeável. Assim, a camada
protetora mais externa da pele é feita
de células mortas, descamadas e
trocadas por outras a cada 21 dias, em
média. O cristalino (a lente) dos olhos
também é formado por células mortas,
que substituíram a maior parte de seu
citoplasma por proteínas denominadas
cristalinas.
A apoptose é um programa de morte
celular extremamente regulado e de
grande eficiência, que requer a célula recebe um sinal de morte celular
interação de inúmeros fatores. Este estes precursores são clivados e
programa pode ser ativado por causas tornam-se ativos. Geralmente as
distintas que desencadeiam diferentes caspases atuam em cascata, de modo
cascatas de eventos moleculares e que uma caspase pode clivar outras e
bioquímicos específicos e esse “corte” parece ser essencial à
geneticamente regulados. A apoptose ativação dessas enzimas. Conforme a
pode ser acionada por vários motivos. posição e o papel que a caspase
A ausência dos sinais químicos que desempenha nesta cascata ela pode
mantêm a célula em atividade e ser considerada uma iniciadora ou
multiplicação (os chamados fatores de uma executora. Assim, ao ser ativada,
crescimento) pode ser um dos uma caspase iniciadora cliva outras,
principais deles. Outra situação pode em sequência, até gerar uma caspase
ser a indução da morte celular executora. Esta destrói proteínas
programada pela ligação de essenciais à célula, ativa proteínas
substâncias apoptóticas a receptores tóxicas ou destrói proteínas que
presentes na membrana das células. protegem a célula da apoptose. Isto
Podemos considerar também como um nos permite localizar a ação das
mecanismo que pode levar a este tipo caspases nas etapas finais das
de morte celular, a ocorrência de danos cascatas de eventos intracelulares que
irreversíveis ao DNA nuclear que produzem as alterações estruturais
possam colocar em risco a viabilidade que levam à morte celular.
de todo o organismo. É importante
frisar que estas situações
desencadeiam cascatas de eventos
intracelulares diferentes entre si, mas
que resultam nas alterações
morfológicas características de uma
célula apoptótica e que foram
descritas no tópico anterior. Antes de
falarmos um pouco mais sobre cada
uma destas situações, é importante
apresentar uma classe de moléculas
que está sempre envolvida na cascata
de eventos que levam à morte celular
por apoptose, seja qual for a via de
indução. As caspases, uma classe de
enzimas proteolíticas que têm a
capacidade de reconhecer e clivar
substratos que possuam resíduos do
aminoácido aspartato, o que inclui
outras caspases. A atividade das
caspases sinaliza para a apoptose,
uma vez que a clivagem de seus
substratos leva à condensação e
fragmentação nuclear além da
sinalização para que estas células
sejam fagocitadas por macrófagos. São
Agora, vejamos como as caspases são
conhecidas 14 caspases humanas,
ativadas por cada uma das três
sendo que destas, seis participam da
principais situações que levam a morte
apoptose (caspases -3, -6, -7, -8, -9, -10).
celular e que foram anteriormente
As caspases são sintetizadas como
mencionadas. Ativação da apoptose
precursores inativos denominados
pela ausência de fatores tróficos Para
zimogênios ou pró-caspases. Quando a
que as células se mantenham vivas e se
proliferando, substâncias
denominadas fatores de crescimento
ou fatores tróficos, produzidos por
células vizinhas, devem se ligar a
receptores específicos expostos em
suas membranas. Esta ligação é o sinal
que desencadeia uma série de eventos
que informa para as células que elas
devem continuar vivas, crescendo e se
dividindo. As principais moléculas que
atuam como fatores tróficos são
glicoproteínas da família dos fatores
estimuladores de colônias – CSF e um
grupo de substâncias chamadas
neurotrofinas. As CFSs estimulam o
crescimento e a diferenciação das
células sanguíneas. Um tipo especial
de CFS, o fator estimulador de colônias
granulocitárias G-CSF), descrito há
mais de vinte anos, é largamente
utilizado para o tratamento de estados
de neutropenia e no transplante de
medula óssea.O G-CSF estimula
células-fonte hematopoéticas e regula
crucialmente a sobrevivência de
neutrófilos maduros, pós-mitóticos,
através da inibição da apoptose. Já as
neurotrofinas são substâncias
secretadas pelos tecidos inervados as
quais têm por função manter vivos os
neurônios e estimular o crescimento de
seus axônios. As neurotrofinas são
moléculas protéicas da família do fator
de crescimento de nervo - NGF (do
inglês nerve growth factor) e são
importantes na formação do sistema
nervoso central e periférico,
proporcionando a forma anatômica e
controlando a população e atividade
celular durante o desenvolvimento
embrionário do sistema nervoso.
Portanto, uma vez que os fatores
tróficos constituem um estímulo crucial
para a sobrevivência e proliferação de
grupos celulares extremamente
importantes para o organismo, quando
estas substâncias sinalizadoras estão
ausentes ou são suprimidas tais
células entram em apoptose. A
presença de um fator trófico no meio
influencia a atividade de duas
proteínas diretamente envolvidas na
sobrevivência celular: uma denominada
Bad e outra Bcl-2. Para que a célula se
mantenha viva, a ligação deste fator
trófico ao seu receptor na membrana
da célula faz com que a Bad
permaneça inativa e a Bcl-2 ativa. O
papel da Bcl-2 ativa é manter fechado
um canal chamado PTPC, presente na
membrana da mitocôndria, o que
previne a morte celular. Quando o fator
trófico está ausente, a proteína Bad se
torna ativa e vai se ligar a Bcl-2,
inativando-a. Na forma inativa, a Bcl-2
é incapaz de manter o canal PTPC
fechado. Este canal por sua vez se abre
e deixa escapar para o citosol o fator
indutor de apoptose AIF (do inglês
apoptosis inducing factor) e o
citocromo c, que antes estavam presos
no espaço intermembrar da
mitocôndria. Uma vez livre no citosol, o
AIF irá produzir alterações na
membrana plasmática que irão atrair
os macrófagos. Além disso, AIF entra no
núcleo e induz a condensação da
cromatina e ativa nucleases que irão
degradar o DNA. Mas, e as caspases,
onde entram nesta longa história?
Neste caso, as caspases são alvos do
cotocromo c. A cascata começa
quando o citocromo c se liga a
pró-caspase-9 quebrando-a. Esta
modificação a converte em caspase-9
que por sua vez atua da mesma forma
sobre a pró-caspase 3 convertendo-a
em caspase-3. Esta última, por ser uma
caspase executora, irá ativar as
enzimas que produzem as mudanças
descritas anteriormente as quais,
juntamente com as modificações
causadas pelo AIF, irão culminar na
morte celular.
Ativação da apoptose pela ligação de
substâncias apoptóticas, Ativação da
apoptose pela ligação de substâncias
apoptóticas Embora a morte celular
possa ocorrer na ausência de fatores
de sobrevivência como os fatores trófi
cos, a apoptose pode também ser
induzida pela presença de
determinados sinais que causam a
morte. Por exemplo, o fator de necrose
tumoral - TNF (do inglês tumor necrosis
factor), que é liberado pelos
macrófagos em algumas doenças infl
amatórias crônicas e que dispara a
morte celular e a destruição do tecido.
Outro importante sinal que induz a
apoptose é a proteína denominada
Fas, que é produzida por algumas
células do sistema imunológico e que
pode iniciar a morte de células
infectadas por vírus, de algumas
células tumorais, assim como células
enxertadas (transplantadas) no
organismo. Tanto TNF quanto o ligante
Fas interagem com receptores específi
cos na superfície celular. Estes
receptores são proteínas
transmembranas que apresentam, em
suas porções citosólicas, uma
sequência de aminoácidos conhecida
como domínio de morte. Quando os
receptores são ativados pela ligação
dos sinais (TNF ou Fas), este domínio
atrai uma série de fatores
citoplasmáticos que inclui o Domínio
de Destruição Associado a Fas – FADD
(do inglês Fas receptor-associated
death domain) que age recrutando a
pro-caspase-8 e convertendo-a em
caspase-8 ativa. Logo esta caspase
iniciadora ativa uma cascata de
caspases que envolve a caspase-9 e a
caspase 3, que, como visto no tópico
anterior, é a caspase executora
responsável pela embora a morte
celular possa ocorrer na ausência de
fatores de sobrevivência como os
fatores tróficos, a apoptose pode
também ser induzida pela presença de
determinados sinais que causam a
morte. Por exemplo, o fator de necrose
tumoral - TNF), que é liberado pelos
macrófagos em algumas doenças
inflamatórias crônicas e que dispara a
morte celular e a destruição do tecido.
Outro importante sinal que induz a
apoptose é a proteína denominada
Fas, que é produzida por algumas
células do sistema imunológico e que
pode iniciar a morte de células
infectadas por vírus, de algumas
células tumorais, assim como células
enxertadas (transplantadas) no
organismo. Tanto TNF quanto o ligante
FAS interagem com receptores
específicos na superfície celular. Estes
receptores são proteínas
transmembranas que apresentam, em
suas porções citosólicas, uma
sequência de aminoácidos conhecida
como domínio de morte. Quando os
receptores são ativados pela ligação
dos sinais (TNF ou Fas), este domínio
atrai uma série de fatores
citoplasmáticos que inclui o Domínio
de Destruição Associado a Fas – FADD
(do inglês Fas receptor-associated
death domain) que age recrutando a
pro-caspase-8 e convertendo-a em
caspase-8 ativa. Logo esta caspase
iniciadora ativa uma cascata de
caspases que envolve a caspase-9 e a
caspase 3, que, como visto no tópico
anterior, é a caspase executora
responsável pela ativação das enzimas
que agem produzindo as alterações
celulares específicas que culminam na
morte celular.
Apoptose ativada por mutações no
DNA Outra condição biológica que
pode levar a apoptose ocorre quando
o DNA sofre alterações irreversíveis em
sua estrutura e que podem
comprometer a viabilidade celular e
acarretar doenças diversas, inclusive o
câncer. Tais condições incluem: (1) o
envelhecimento celular; (2) defeitos no
processo de replicação do DNA; (3) a
ação de agentes ambientais, químicos
e biológicos (raios X, radiação solar UV,
substâncias químicas, vírus, etc) e (4) o
acúmulo na célula de agentes
oxidantes como o peróxido de
hidrogênio (H2O2) e a espécie reativa
do oxigênio (os ânions superóxidos
O2-). Diante da presença destas
alterações, pode intervir a proteína p53
que participa na resposta intracelular
ao dano no DNA, atrasando a
progressão da fase G1 do ciclo celular.
Este atraso pode prover tempo para o
reparo no dano ao DNA. Quando este
reparo não tem êxito, estes danos
podem ser perpetuados como
mutações caso as células entrem na
fase S. Nesta situação, a própria
proteína p53 parece iniciar o processo
apoptótico celular, a fim de evitar a
transferência do DNA danificado às
células filhas. Para isso, a p53 inativa a
Bcl-2, o que desencadeia o mesmo
processo de ativação das caspases
que leva à morte celular, descrito
anteriormente para a situação em que
faltam os fatores tróficos