NDICE

1. INTRODUO 2. DESENVOLVIMENTO 2.1. ETAPAS DE PRODUO 3. CURIOSIDADES 3.1. ANLOGO DE INSULINA 3.2. LINHA DO TEMPO 4. CONCLUSO 5. BIBLIOGRAFIA

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1. INTRODUO

A insulina foi descoberta em 1922 e significou um grande avano da cincia, pois naquela poca os mecanismos do metabolismo de nutrientes eram poucos conhecidos. Vrios estudos foram realizados com esse hormnio e descobriram que alm de limitar a utilizao de glicose pelo msculo, ela tambm trabalhava como ativadora de enzimas, com transportadora de glicose, alterava o potencial de membrana e favorecia a entrada de ctions e aminocidos na clula. Em 1978, uma jovem empresa de biotecnologia chamada Genentech produziu a primeira insulina fabricada sinteticamente, que poderia ser produzida em grande quantidade. Usando bactrias ou leveduras como "fbricas" em miniatura, o gene para a insulina humana foi inserido no DNA bacteriano. O resultado foi a insulina humana, chamada de insulina de DNA recombinante, que no provocou os problemas que a insulina animal s vezes provocava. Quando se tornou largamente acessvel no incio dos anos 80, essa nova insulina mudou para sempre o tratamento da diabetes. Hoje, praticamente todos os portadores de diabetes que precisam de insulina usam uma forma de insulina humana recombinante em vez de insulina animal. A insulina recombinante permite que pessoas com deficincia na produo de insulina possam regularizar o funcionamento de seu organismo estimulando a metabolizao da glicose que se acumula no sangue e na urina, destruindo as clulas por falta de abastecimento.

2. DESENVOLVIMENTO

A insulina sintetizada nos humanos e em outros mamferos dentro das clulasbeta das ilhotas de Langerhans (Figura 1), no pncreas. Um a trs milhes de ilhotas de Langerhans formam a parte endcrina do pncreas, que principalmente uma glndula excrina.

Figura 1- ilhotas de Langerhans

A insulina sintetizada a partir da molcula precursora pr-insulina pela ao de enzimas proteolticas conhecidas como pro-hormnio convertases (PC1 e PC2). A insulina ativa tem 51 aminocidos e um polipeptdio (Figura 2). Ela formada por duas cadeias de polipeptdios ligadas por duas pontes dissulfdicas, com uma ligao dissulfdica adicional na cadeia A. A cadeia A consiste de 21, e a cadeia B, de 30 aminocidos. A insulina produzida como uma molcula de pro-hormnio - prinsulina - que mais tarde transformada, por ao proteoltica, em hormnio ativo. A parte restante da molcula de pr-insulina chamada de peptdeo C. Este polipeptdeo liberado no sangue em quantidades iguais da insulina. Como insulinas exgenas no contm peptdeo C, o nvel em plasma desse peptdeo um bom indicador de produo endgena de insulina. Recentemente, descobriu-se que esse peptdeo C

tambm possui atividade biolgica, que est aparentemente restrita a um efeito na camada muscular das artrias.

Figura 2 Polipeptdio

O uso da biotecnologia permitiu o desenvolvimento pela empresa Genentech, em 1978, do primeiro biofrmaco produzido por bactrias que foi a insulina recombinante humana. Em 1982, a Genentech, em parceria com a Eli Lilly Company, produziu a insulina humana recombinante de forma ideal e conseguiu a aprovao para uso humano junto Food and drug administration (FDA) americana. A produo de insulina para uso humano fabricada a partir de tcnicas de engenharia gentica permitiu reduzir de forma significativa os problemas associados impureza da substncia, originalmente purificada a partir do pncreas de animais. A tcnica de produo da insulina recombinante humana baseada na insero de DNA humano em uma clula hspede (E. coli, por exemplo). As clulas crescem e se reproduzem normalmente, e, graas ao cdigo de DNA inserido no hospedeiro, produzem insulina prpria para a teraputica humana. No ano de 1936, a protamina, uma protena de baixo peso molecular, foi utilizada para desenvolver uma insulina de ao mais lenta. Essa protena era associada

 insulina em laboratrio e prolongava o efeito da insulina no organismo. Da, com a protamina e com zinco, a primeira insulina de ao lenta foi produzida. Ela foi chamada de PZI, ou insulina protamina zinco. Seu efeito durava de 24 a 36 horas.

Nos anos 40, foi desenvolvida a insulina protamina neutra Hagerdon (NPH), baseando-se na sua precursora, a PZI. A NPH era nada mais que a insulina protamina cristalizada, que permitia a mistura com a insulina regular em uma mesma seringa. Ela comeou a ser disponvel em 1950. No ano de 1951, foi desenvolvido outro tipo de insulina: a IZS. Nela, a protamina no foi utilizada. Agora era somente o zinco que era associado insulina. O objetivo era um s: buscar uma insulina de ao cada vez mais lenta. Nos anos 70 aconteceram avanos importantes na rea da gentica. Em 1978, foi anunciada, pela primeira vez, a produo da insulina humana em laboratrio. Ela foi feita a partir de DNA recombinante, em que o gene da insulina colocado no material gentico da bactria Escherichia coli ou no fungo Saccharomyces cerevisiae, fazendo com que a insulina seja produzida por esses organismos. Em 1980, essa insulina passou a ser utilizada no tratamento. No era mais necessrio utilizar a insulina animal. Desse modo, as reaes alrgicas associadas ao tratamento deixaram de existir de vez. Os anos 90 levaram a um aperfeioamento ainda mais fino. Os anlogos da insulina tornaram-se disponveis: eles eram resultantes de alteraes na seqencia dos aminocidos da insulina humana. Como exemplo, temos a Insulina Aspart (1999) e a Insulina Lispro (1996). O mais interessante que esses anlogos podem ser de ao rpida, intermediria ou lenta, o que permite ajustes finos da glicemia na situao psprandial (depois das refeies) e durante o jejum.

2.1 ETAPAS DE PRODUO

Em um microorganismo (E.coli) (Figura 3) foi inserido um fragmento de DNA com instrues para expressar uma protena, o precursor de insulina (prinsulina).

Figura 3 - E. coli

Esse microorganismo colocado em um fermentador para reproduzir e, sob determinadas condies, expressar a protena de interesse.

A pr-insulina se precipita na forma de corpos de incluso dentro da clula, que posteriormente rompida. (Figura 4)

Figura 4 - Corpos de incluso

A pr-insulina, uma vez separada dos resduos celulares, ser transformada em insulina e purificada em diversas etapas. Primeiramente, ligaes intramoleculares, pontes de dissulfeto, sero desfeitas para que novamente se liguem nas posies corretas na renaturao.

Em seguida, a pr-insulina renaturada purificada e convertida em insulina, atravs de reaes qumico-enzimticas, e submetida a novas etapas de purificao por troca-inica, RP-HPLC e cristalizao, obtendo-se assim o cristal de insulina, que posteriormente formulado.

3. CURIOSIDADES

3.1 ANLOGO DE INSULINA

Um anlogo de insulina uma forma alterada de insulina, diferente de qualquer que ocorrem na natureza, mas ainda est disponvel para o corpo humano para executar a mesma ao de insulina humana em termos de controle glicmico. Atravs da engenharia gentica do DNA subjacente, a seqncia de aminocidos da insulina podem ser caractersticas alteradas da sua "ADME" (absoro, distribuio, metabolismo e excreo). Oficialmente, a Administrao de Alimentos e Drogas dos EUA (FDA) referiu essa insulina como "ligantes do receptor de insulina", embora sejam mais comumente referido como anlogos de insulina. Estas modificaes tm sido usadas para criar dois tipos de anlogos de insulina: aqueles que so mais facilmente absorvidos no local da injeo e, portanto, agir mais rpido do que a insulina natural injetado por via subcutnea, destina-se a fornecer o nvel de blus de insulina necessria aps uma refeio, e aqueles que so liberado lentamente durante um perodo de entre 8 e 24 horas, destina-se a fornecer o nvel basal de insulina para o dia. Anlogo de insulina foi fabricado pela "Eli Lilly and Company".

3.2 LINHA DO TEMPO

1922 Banting e Best usa extrato de insulina bovina em humanos 1923 Eli Lilly and Company (Lilly) produz quantidades comerciais de insulina bovina

1923 Hagedorn funda a Insulinlaboratorium Nordisk na Dinamarca precursor da Novo Nordisk

1926 Nordisk recebe Carta dinamarqus para produzir insulina como uma organizao sem fins lucrativos

1936 canadenses D.M. Scott e A.M. Fisher formula mistura de insulina zinco e licena de Novo

1936 Hagedorn descobre que a adio de protamina insulina prolonga o efeito da insulina

1946 Nordisk formula insulina isfana suna e insulina protamina neutra Hagedorn ou NPH

1946 Nordisk cristaliza uma mistura de insulina protamina 1950 Nordisk insulina NPH mercados 1953 Novo Lente formula insulinas suna e bovina pela adio de zinco para insulina de durao

1978 Genentech produz insulina humana "Sinttico" em bactrias Escherichia Escheria usando a tecnologia do DNA recombinante

1981 Novo Nordisk qumica e enzimaticamente convertidos insulina suna de 'insulina humana'

1982 Genentech produz "insulina humana sinttico", e aprovada em grande parte graas sua parceria com a Eli Lilly and Company, que guiou o produto atravs da E.U. Food and Drug Administration (FDA) a aprovao processo

1983 Lilly Humulin produz "sintticos e recombinantes" de insulina humana. 1985 Axel Ullrich sequncias do receptor de insulina humana 1988 Novo Nordisk produz sinttica, a insulina recombinante humana " 1996 Lilly Humalog lispro anlogo de insulina aprovado pela Food and Drug Administration E.U.

2003 Aventis Lantus "glargina" anlogo de insulina aprovado em EUA. 2004 Sanofi Aventis insulina Apidra "glulisina" anlogo aprovado para uso clnico no E.U.A..

2006 Novo Nordisk Levemir "insulina detemir" anlogo aprovado em E.U.A.

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4. CONCLUSO

A principal concluso que se pode tirar deste trabalho, que o investimento em tecnologias na rea biotecnolgica, por exemplo, permitiu uma considervel evoluo nos processos industriais. Desde a descoberta da insulina, na dcada de 20 onde a maioria dos processos eram tidos como primitivos, houve grandes avanos tecnolgicos como a descoberta e o mapeamento do cdigo gentico da bactria E. coli, que permitiu aos biocientistas a possibilidade de se chegar a um produto mais eficiente no combate de doenas como o diabetes.,

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5. BIBLIOGRAFIA

http://biomm.com/pt/index.php?p=3,2 Acessado em 22/09/2011

http://www.emtd.com.br/diabetes/diabetes_hist_insulina.htm 22/09/2011

Acessado

em

http://www.online.karger.com/ProdukteDB/Katalogteile/isbn3_8055/_83/_53/Insulin_0 2.pdf Acessado em 23/09/2011

http://www.infoescola.com/hormonios/insulina/ - Acessado em 23/09/2011 http://saude.hsw.uol.com.br/insulina-e-diabetes1.htm Acessado em 24/09/2011

Adams MJ, Blundell TL, Dodson EJ, Dodson GG, Vijayan M, Baker EN, Harding MM, Hodgkin DC, Rimmer B, Sheat S (1969). Structure of rhombohedral 2 Zinc insulin crystals. Nature 224: 491-495.

Albisser AM, Lougheed WD, Chow JC, Ting AK (1982). A modified insulin for pumps. Diabetes 31 (Suppl. 2, parte 2): 67A (abstract).

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