Translocação e Inserção de

Proteínas
 Translocação de Proteínas
Conhecimentos-base:
• Proteína nascente: proteína a ser formada
• Transcrição: Terminal N  Terminal C
• Cada aminoácido tem grupo amino (N) e grupo carboxilo (C)
• Cada organelo tem recetores que se ligam a sequências sinais específicas
Co-traducional:
Intervenientes:
Sequência sinal: aminoácidos c/ carga positiva adjacentes a resíduos hidrofóbicos; normalmente localizada no terminal N;
SRP: ribonucleoproteína (6 polipéptidos + 300 ribonucleótidos) citosólica que se liga simultaneamente a sequência sinal, ribossoma e ao recetor de SRP; proteínas constituintes de SRP: P54:
possivelmente a proteína que se liga a sequência sinal (região hidrofóbica de P54 liga-se a região hidrofóbica de sequência sinal); P9 e P14: interação com ribossoma; P68 e P72: translocação de
proteína; estrutura cristalina de proteína permite que complexo se ligue a várias sequências (binding site is hydrophobic pocket lined by methionines. Methionines have unbranched, flexible side
chains, the pocket is sufficiently plastic to accommodate different hydrophobic signal sequences)
Ribossoma: 80S: subunidade 40S (+ pequena, a que se liga primeiro a mRNA) subunidade 60S, maior;
Recetor de SRP: – proteína integral composta por 2 subunidades: subunidade alfa e subunidade beta (+ pequena)
Translocão: complexo sec61 (mamíferos e leveduras): sec61 alfa, sec61 beta, sec61 γ; abertura é regulada: abre quando complexo ribossoma/cadeia está ligado (translocão é análogo a canal de iões)
Signal peptidase: protéase; proteína transmembranar associada ao translocão; reconhece terminal C da zona hidrofóbica da sequência sinal
Processo:
Início de tradução de mRNA: tradução de sequência sinal  SRP reconhece sequência sinal : SRP liga-se a SS e ribossoma (RS)  SRP abranda/pausa tradução  SRP encaminha RS e SS para perto de
translocão  complexo SRP-ribossoma-sequência sinal liga-se a recetor de SRP  hidrólise de GTP que está ligado a SRP )P54) e ao recetor de SRP (subunidade alfa) (GTP  GDP)  dissociação de
SRP do seu recetor e do complexo ribossoma-SS (e libertação de GDP): SRP e recetor de SRP libertados ribossoma-sequência sinal encaminhados para translocão  continuação da tradução
(subunidade 60S alinhada com poro de translocão: cadeia não entra em contacto com citosol)  clivagem de SS por peptidase sinal (normalmente aquando da tradução)  libertação de proteína no
lúmen
Energia: proveniente da tradução;
Pós-traducional
Intervenientes:
Ribossoma e sequência-sinal
Chaperonas
BiP (hsp70): POR COMPLETAR ; domínio de péptido e domínio ATPase; residente no lúmen do RE,
associa-se a
Complexo sec63: POR COMPLETAR; em membrana do RE ao lado de translocão
Processo: tradução de mRNA
• Bactérias: Proteína motora de translocação – ATPase SecA – liga-se a lado citosólico de
translocador  SecA liga-se a cadeia  hidrólise de ATP: mudança de conformação de SecA 
cadeia é empurrada ao longo da membrana cadeia para espaço perilásmico no qual há folding da
proteína;
• Eucariontes: Tradução  Chaperonas citosólicas mantém sequência traduzida desenrolada  SS
são reconhecidas por recetores (complexo Sec62/63) associados ao translocão terminal N da
cadeia entra em lúmen  signal peptidase separa SS Interação BiP-ATP com porção luminal de
sec63  hidrólise de ATP: mudança de conformação de BiP  ligação de BiP a cadeia: BiP puxa
cadeia  atravessamento de cadeia  sucessivas ligações BiP-ADP à cadeia resultam no
atravessamento da mesma  troca de ADP ligado a BiP por ATP: libertação de cadeia no lúmen;
Energia: Hidrólise de ATP
 Inserção
internal signal-anchor sequence: grande densidade de aminoácidos com carga positiva adjacentes ao segmento hidrofóbico  lado positivo
tende a fica do lado citosólico
Uni-passe:
• Tipo 1: tem terminal N separável; terminal N: lúmen do RE (face exoplásmica) e terminal C: face citosólica;
• Tipo 2: não tem terminal N separável; terminal C: lúmen do RE e terminal N: face citosólica;
• Tipo 3: não tem terminal N separável; terminal N: lúmen do RE e terminal C: face citosólica;
Processo:
• Tipo 1: sequência sinal terminal N inicia translocação  terminal N entra no lúmen  sequência sinal é separada  continuação
atravessamento de sequência sinal  sequência hidrofóbica interna de cadeia pára transferência de cadeia pelo translocão  movimento
lateral de seq. interna que fica integrada na membrana aquando da tradução terminal C sintetizado fica no lado citosólico  terminação
tradução e libertação de ribossoma

Multi-passe:
• Tipo 1 (IV-A):
• Tipo 2 (IV-B):
F
F
F
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